氯离子通道阻断剂对肺血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究氯离子通道阻断剂在肺血管内皮细胞氧化损伤中的作用。方法：以肉联厂检疫合格的健康小牛为研究对象，过氧化氢(H2O2)诱导体外培养的牛肺动脉内皮细胞损伤，观察Cl^-通道阻断剂对受损细胞细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、三磷酸腺苷(ATP)含量、细胞内钙离子浓度[Ca^2+]i和DNA降解程度的影响。结果：Cl^-通道阻断剂可使受损细胞的细胞活力得到提高．NPPB组和NFA组分别恢复到0．449&;#177;0．015和0．535&;#177;0．023；LDH释放量下降，分别为(12．4&;#177;0．4)％，(6．4&;#177;0．6)％。ATP含量分别回升为18．22nmol／mg蛋白质和21．96nmol／mg蛋白质，[Ca^2+]i下降和DNA降解程度减轻。结论：Cl^-通道参与了氧化剂对肺血管内皮细胞损伤的病理过程，Cl^-通道阻断剂对肺血管内皮细胞的损伤具有保护作用。     

DIM联合顺铂诱导PC-3细胞凋亡机制的研究

目的探讨顺铂(DDP)和3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)联合诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制。方法采用免疫组化技术观察细胞内bcl-2,caspase3和caspase9蛋白的表达,利用RT-PCR和western blot检测bcl-2,caspase3和caspase9基因和蛋白表达变化。结果细胞培养及免疫组化可见:各给药组与对照组比较均有不同程度抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡作用;RT-PCR结果显示:各给药组均能使caspase3和caspase9基因表达上调,bcl-2表达下调;western blot结果表明:各给药组与对照组相比caspase3和caspase9蛋白表达上调,bcl-2表达下调,且0.4mg.L-1DDP 60μmol.L-1DIM联合应用与10倍剂量DDP(4 mgL-1)单独应用效果相同。结论DIM与DDP均可抑制PC-3细胞增殖并诱导其凋亡;其细胞凋亡机制可能与上调caspase3、caspase9基因表达,下调bcl-2表达有关;DIM与DDP联合抗瘤具有明显的减毒增效作用。     

Lactacystin对体外C6胶质瘤细胞超微结构影响的研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂Lactacystin 对体外C6胶质瘤细胞超微结构的影响.方法 Lactacystin处理体外培养的G6胶质瘤细胞,HE染色后光镜观察细胞的死亡情况,锇铀铅染色后透射电镜观察细胞超微结构变化.结果 Lactacystin处理体外C6胶质瘤细胞24 h后,光镜下见胞浆浓缩深染,胞核染色质致密浓缩,透射电镜下见细胞表面微绒毛消失,核皱缩,染色质致密浓缩、边集.结论 蛋白酶体抑制剂Lactacystin可以诱导体外G6胶质瘤细胞凋亡.     

细胞质在顺铂诱导HL—60细胞凋亡中的作用

在建立Bcl-2高表达细胞及其对照细胞株基础上,用无细胞体系研究了细胞质在顺铂诱导HL-60细胞凋亡中的调控作用。实验结果显示,凋亡细胞胞质提取物可引起提取的正常细胞核的固缩及染色质边缘优,类似于完整的细胞凋亡的改变。Bcl-2高表达细胞的胞质提取物具有抗凋亡能力。上述结果说明引起凋亡的物质及对抗凋亡的物质在细胞质中都存在,说明细胞质在顺铂诱导的HL-60细胞凋亡中起着较重要的作用。     

miRNA-21对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗增敏作用的研究

目的探讨microRNA-21 (miRNA-21)对宫颈癌Hela/DDP耐药的影响及其相关机制。方法实时荧光定量PCR(Real-PCR)检测Hela细胞、Hela/DDP、转染后miR-21-siRNA组及miR-21-neg中miRNA-21的表达量。MTT法检测顺铂(DDP)对Hela/DDP增殖的影响;流式细胞仪分析Hela/DDP细胞周期及凋亡率;Western blot检测顺铂处理过的Hela/DDP中PTEN蛋白的表达。结果在Hela/DDP组中miRNA-21明显高于Hela组,差异具有统计学意义(P0.05);转染miRNA-21siRNA后,Hela/DDP中miRNA-21明显低于空白对照组及阴性对照组,差异具有统计学意义(P0.05);与空白对照组及阴性对照组相比,顺铂作用Hela/DDP后,转染miRNA-21 siRNA组细胞增殖抑制率、凋亡率及PTEN蛋白表达水平均升高,并呈现G0/G1期阻滞作用,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-21可抑制Hela/DDP细胞增殖、阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡,进而提高Hela/DDP细胞对顺铂的敏感性,可能与宫颈癌Hela/DDP细胞中PTEN蛋白合成增加有关。     

三氧化二砷与顺铂联用对肝癌HepG2细胞的作用

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）与顺铂（CDDP）联合对肝癌细胞HepG2的作用。方法：应用普通光学显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪分别观察As2O3、CDDP和两者联合应用时对HepG2细胞株的形态学改变和诱发凋亡率。结果：AO／EB荧光染色法显示在联合应用药物后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变。噻唑蓝（MTT）法检测各个浓度的As2O3与CDDP联合应用时,对HepG2细胞的生长抑制率均较单用相应一种药物时增强,而低浓度联合用药组合的生长抑制率增加尤为明显。结论：在体外Aa2O3和CDDP两种化疗药物联合应用具有明显的协同抗肝癌作用,显著抑制人肝癌细胞HepG2的细胞株的生长,并且具有明显的剂量时效关系。两药联用有显著的协同诱导肝癌细胞凋亡的作用。     

17β-雌二醇对C2C12细胞钙离子通道作用的研究

目的研究17β-雌二醇对小鼠成肌细胞C2C12细胞钙离子通道的影响,探讨7β-雌二醇对C2C12细胞的作用。方法应用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的17β-雌二醇作用下C2C12细胞钙离子通道的变化。结果67%的C2C12细胞可记录到钙离子电流。在不同浓度17β-雌二醇的作用下,30 mol.L-1组及20 mol.L-1组可引起C2C12细胞钙离子电流明显增大（P〈0.05）,而10 mol.L-1组则无显著改变。结论17β-雌二醇可通过促进C2C12细胞钙离子通道开放参与对C2C12细胞的调节作用。     

水杨酸钠对顺铂导致的螺旋神经节细胞毒性的保护作用

目的:探讨水杨酸钠对顺铂导致的螺旋神经节细胞(SGNs)毒性的保护作用。方法:体外培养SGNs。分组:空白对照组,不同浓度水杨酸钠组、顺铂组和顺铂+水杨酸钠组(100～900μg/mL),加药48h后,通过显微镜下细胞计数及噻唑蓝(MTT)比色法对SGNs进行药物毒性检测,通过Hoechst33258进行细胞核染色,观察细胞凋亡情况。结果:顺铂(4、6、8μg/mL)对SGNs有明显毒性,促使细胞凋亡,并且随浓度增加,细胞数量明显减少,与空白对照组相比差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论:在体外培养的条件下,水杨酸钠在一定浓度范围内可以拮抗顺铂导致的SGNs毒性,其保护机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

顺铂诱导直肠癌HCT116细胞凋亡及其作用机制的研究

目的 研究顺铂诱导直肠癌HCT116细胞凋亡及其作用机制.方法 采用酶联免疫吸附法M30-ApoptosisTM-ELISA-kits、流式细胞仪测定不同浓度顺铂作用不同时间HCT116细胞的凋亡情况;West-ern-Blotting测定p53、p21、Bcl-2蛋白水平的表达.结果 顺铂可抑制直肠癌HCT116细胞生长,并呈时效(F=1129.383,P=0.000)和量效(F=125.267,P=0.000)关系;2.5、5.0、10.0、15.0 μmol/L顺铂分别作用直肠癌HCT116细胞0、12、24、48、72 h,通过亚G1峰检测其凋亡率,顺铂作用24、48、72 h细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(χ2值分别为5.669、14.110、12.221,P值分别为0.010、0.003、0.000),不同时间顺铂抑制HCT116细胞生长率的差异有统计学意义(χ2=14.008,P=0.003);不同时间顺铂诱导HCT116细胞释放CK18-Asp237-Asp396含量的比较,不同药物浓度结果差异有统计学意义(F=48.667,P=0.000),同时间结果差异有统计学意义(F=1194.394,P=0.000),Western-Blotting结果提示顺铂作用直肠癌HCT116细胞后p53、p21蛋白水平表达随着12、24、48、72 h与0 h比较逐步升高,p53蛋白(t值分别为9.873、-2.906、7.229、2.776,P值分别为0.000、0.007、0.000、0.011);p21蛋白(t值分别为-10.692、-8.867、-15.063、-16.281,P值分别为0.000、0.001、0.000、0.000);Bcl-2蛋白的表达无变化(t值分别为1.429、2.011、2.247、2.001,P值分别为0.178、0.069、0.053、0.062).结论 顺铂通过恢复pS3的功能,诱导肿瘤细胞凋亡,起到抑制肿瘤生长的作用.     

Bm-12促C6胶质瘤细胞生长及凋亡作用的研究

目的探讨Bm-12促C6胶质瘤细胞生长及凋亡的作用。方法显微镜观察不同浓度Bm-12对C6胶质瘤细胞生长的影响,用PBS溶液作为对照组。并用流式细胞仪检测不同浓度Bm-12对C6胶质瘤细胞凋亡的影响。结果不同浓度Bm-12加入C6胶质瘤细胞培养液后,C6胶质瘤细胞生长明显受抑制,细胞形态及数量明显发生变化,且凋亡率均较对照组显著增加(P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 Bm-12可以抑制C6胶质瘤细胞生长,并诱导其凋亡。     

氯离子通道阻断剂对肺血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究氯离子通道阻断剂在肺血管内皮细胞氧化损伤中的作用。方法:以肉联厂检疫合格的健康小牛为研究对象,过氧化氢(H2O2)诱导体外培养的牛肺动脉内皮细胞损伤,观察Cl-通道阻断剂对受损细胞细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、三磷酸腺苷(ATP)含量、细胞内钙离子浓度犤Ca2+犦i和DNA降解程度的影响。结果:Cl-通道阻断剂可使受损细胞的细胞活力得到提高,NPPB组和NFA组分别恢复到0.449±0.015和0.535±0.023;LDH释放量下降,分别为(12.4±0.4)%,(6.4±0.6)%。ATP含量分别回升为18.22nmol/mg蛋白质和21.96nmol/mg蛋白质,犤Ca2+犦i下降和DNA降解程度减轻。结论:Cl-通道参与了氧化剂对肺血管内皮细胞损伤的病理过程,Cl-通道阻断剂对肺血管内皮细胞的损伤具有保护作用。     

金丝桃素对C6胶质瘤细胞周期变化的研究

目的 探讨光活化的金丝桃素对Wistar大鼠胶质瘤株C6的分化诱导作用。方法 应用流式细胞术(FCM)、MIT法和3H—TdR掺入法观察光活化的金丝桃素对C6胶质瘤细胞株的细胞周期动力学变化的影响。结果 光活化的金丝桃素对C6胶质瘤细胞株的细胞呈剂量依赖性抑制，细胞周期的G0／G1期升高，S期、G22／M期相对下降，表明光活化的金丝桃素可抑制C6胶质瘤细胞株增殖，细胞的增殖周期阻滞在G1期。结论 提示光活化的金丝桃素通过诱导C6胶质瘤细胞凋亡而治疗脑胶质瘤具有可期待前景。     

海洛因对大鼠C6胶质瘤细胞的双向电泳图谱比较

目的 比较海洛因对大鼠C6胶质瘤细胞的双向电泳图谱差异,从蛋白质水平初步探索阿片类毒物-海洛因的作用机制。方法 提取对照组与海洛因组C6胶质瘤细胞的蛋白质,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行2-DE。以图像分析软件ImageMaster V 5.0分析电泳图谱。结果 将对照组与海洛因组C6胶质瘤细胞的2-DE图谱匹配后,检测到570个蛋白点,差异大于1.5倍的斑点有29个,其中20个下调,9个上调。结论 初步建立了大鼠C6胶质瘤细胞的蛋白质组学分析方法;差异点的发现为深入理解海洛因的分子机制提供了线索。     

L—精氨酸对实验性急性肾功能衰竭大鼠的治疗作用观察

目的：探讨Ｌ精氨酸（ＬＡｒｇ）对实验性急性肾功能衰竭（ＡＲＦ）大鼠的治疗作用。方法：ＳＤ大鼠随机分为３组，即蒸馏水组（Ｃ组）、顺铂组（ＣＰ组）和ＬＡｒｇ加顺铂组（Ａ组），静脉给药，观察一氧化氮（ＮＯ）合成底物ＬＡｒｇ对顺铂所致ＡＲＦ大鼠肾功能及肾组织形态学的影响。结果：①Ａ组用药后第４日、６日、８日和１０日的血肌酐（ＳＣｒ）及血尿素氮（ＢＵＮ）均显著低于同期ＣＰ组的ＳＣｒ和ＢＵＮ（Ｐ均＜０．０５）；②Ａ组肾组织形态学改变较ＣＰ组明显改善。结论：ＬＡｒｇ对实验性ＡＲＦ有明显保护作用，可能主要与其促使ＮＯ合成增加、改善肾血流动力学有关。     

6r,a novel oxadiazole analogue of ethacrynic acid,exhibits antitumor activity both in vitro and in vivo by induction of cell apoptosis and S-phase arrest

This study investigated the in vitro and in vivo antitumor effects of 5-[2,3-Dichloro-4-(2-methylene-1-oxobutyl) phenoxymethyl]-3-methyl-1,2,4- oxadiazole (6r), a novel ethacrynic acid (EA) derivative. The in vitro effect of 6r on cell proliferation of human colon, leukemia, prostate, lung, breast, ovarian and cervical tumor cell lines was assessed using MTT assay and the in vivo effect was determined with an SW620 xenografts nude mice model. The effect of 6r on expressions of GST P1-1 and apoptosis-related proteins were measured by western blotting and the effect on cell apoptosis was analysed by Hoechst 33258 nuclear staining as well as by cell surface staining of annexin V/propidium iodide. The effect on cell cycle was assessed by flow cytometry. Results showed that 6r inhibit proliferation of a range of human cancer cells in vitro and growth of SW620 tumor xenografts in vivo. The anti-proliferative effect of 6r is associated with cell apoptosis as a result of increased ratio of cellular Bax/bcl-2 expression and subsequent cytochrome-c and caspase-3 activation. Unlike EA, 6r did not show any influence on cellular GST P1-1 expression and its anti-proliferative action was associated with cell cycle arrest in G1/S-phase. In conclusion, 6r has the potential to be developed as a chemotherapeutic agent by induction of cell apoptosis but not regulating GST P1-1.     

磷肌酰脂醇特异性磷脂酶C对内毒素介导枯否细胞激活的抑制作用

目的 研究磷肌酰脂醇特异性磷脂酶C（PI-PLC）对内毒素介导的肝Kupffer细胞（枯否细胞，KCs）激活及其CDl4表达的抑制作用。方法 Wistar大鼠20只，分为PI-PLC组和LPS组，测定细胞培养液中TNF-α和IL-6含量变化，用免疫组化观察KCs膜CD14和核NF-κB的相对活性，测定KCs中CD14、TNF-α和IL-6的mRNA表达和KCs膜CD14蛋白含量变化。结果 不同浓度的LPS刺激60min后，PI-PLC组培养液中TNF-α与IL-6的含量随LPS浓度的增高而增加，但明显低于LPS组（P〈0．01）；CD14抗体染色显示，PI-PLC组部分KCs为弱阳性，而LPS组KCs为阳性细胞；NF-κB P65抗体染色显示，PI-PLC组部分KCs为弱阳性细胞，而LPS组KCs为强阳性细胞；PI-PLC组NF-κB活性在10μg／mL以上LPS刺激下才有升高，其相对光密度值显著低于LPS组（P〈0．01）；在相同浓度LPS刺激后，PI-PLC组CD14、TNF-α和IL-6的mRNA表达显著低于LPS组（P〈0．01）；PI-PLC组在相同浓度LPS刺激120min后CD14蛋白表达才明显，LPS组在100μg／mL LPS刺激后30min CD14蛋白开始升高，两者有显著性差异（P〈0．01）。结论 PI-PLC对LPS介导的KCs激活有明显的抑制作用，其机制可能与抑制KCs中CD14蛋白的表达有关。     

Investigation of the effect of sugammadex on glutamate-induced neurotoxicity in C6 cell line and the roles played by nitric oxide and oxidative stress pathways

This experiment was intended to evaluate the effect of sugammadex on the cytotoxicity induced by glutamate, involving the nitric oxide and oxidative stress pathways. C6 glioma cells were used in the study. Glutamate was given to cells in the glutamate group for 24 h. Sugammadex at different concentrations was given to cells in the sugammadex group for 24 h. Cells in the sugammadex + glutamate group were pre-treated with sugammadex at various concentrations for 1 h and then exposed to glutamate for 24 h. XTT assay was used to assess cell viability. Levels of nitric oxide (NO), neuronal nitric oxide synthase (nNOS), total antioxidant (TAS), and total oxidant (TOS) in the cells were calculated using commercial kits. Apoptosis was detected by TUNEL assay. Sugammadex at concentrations of 50 and 100 μg/mL significantly enhanced the cell viability in C6 cells after the cytotoxicity induced by glutamate (p < 0.001). Moreover, sugammadex considerably decreased the levels of nNOS NO and TOS and the number of apoptotic cells and increased the level of TAS (p < 0.001). Sugammadex has protective and antioxidant properties on cytotoxicity and could be an effective supplement for neurodegenerative diseases such as Alzheimer and Parkinson if further research in vivo supports this claim.     

Genetic polymorphisms of drug-metabolizing enzymes CYP2D6, CYP2C9, CYP2C19 and CYP3A5 in the Greek population

The aim of the present study was to determine the prevalence of the most common allelic variants of the polymorphic cytochrome P450 (CYP) enzymes CYP2D6, CYP2C9, CYP2C19 and CYP3A5 and to predict the genotype frequency for each polymorphism in the Greek population. DNA isolated from peripheral blood samples derived from 283 non-related Greek ethnic subjects was used to determine the frequency of CYP2D6*3, CYP2D6*4, CYP2C9*2, CYP2C9*3 and CYP3A5*3 allelic variants by the polymerase chain reaction (PCR)-restriction fragment length polymorphism method, CYP2C19*2 and CYP2C19*3 with allelic specific amplification (PCR-ASA), and CYP2D6*2 (gene duplications) by long PCR analysis. The allelic frequencies (out of a total of 566 alleles) for CYP2D6*3 and CYP2D6*4, were 2.3% and 17.8%, respectively, while gene duplications (CYP2D6*2) were found in 7.4% of the subjects tested. For CYP2C9*2 and CYP2C9*3 polymorphisms the allelic frequencies were 12.9% and 8.13% respectively. For CYP2C19, the *2 polymorphism was present at an allelic frequency of 13.1%, while no subjects were found carrying the CYP2C19*3 allele. Finally, the CYP3A5*3 allele was abundantly present in the Greek population with an allelic frequency of 94.4%. Overall our results show that the frequencies of the common defective allelic variants of CYP2C9, CYP2C19 and CYP3A5 in Greek subjects are similar to those reported for several other Caucasian populations. Finally, a high prevalence of CYP2D6 gene duplication among Greeks was found, a finding that strengthens the idea that a South/North gradient exists in the occurrence of CYP2D6 ultrarapid metabolizers in European populations.     

PI3K-AKT通路对脑缺血损伤神经干细胞的增殖作用

目的:利用低氧干预分离的小鼠神经干细胞,通过构建腺病毒载体将腺病毒5-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶3(Ad5-AKT3)基因和丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶3小干扰RNA(AKT3 si RNA)干扰转染至缺血神经干细胞,探索磷酸肌醇三磷酸激酶-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)通路对缺血性神经干细胞的增殖作用。方法:取新生24h昆明小鼠海马,分离培养原代神经干细胞,并采用巢蛋白(Nestin)免疫荧光检测和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)渗入实验对其进行鉴定;将所培养的传代神经干细胞随机分组:正常组、缺血模型组、低氧组(低氧+缺血模型组)、Lip2000组(低氧+缺血模型组+Lip2000空转染组)、AKT转染组(低氧+缺血模型组+Ad5-AKT3转染组)、AKT干扰组(低氧+缺血模型组+Lip2000+AKT3 si RNA干扰组)。建立脑缺血损伤的体外模型,低氧干预,构建腺病毒Ad5-AKT3载体和AKT3 si RNA后,各组行MTT检测;RT-q PCR检测AKT3 m RNA表达情况;Werstern Blot检测PI3K、AKT3、PCNA。结果:通过免疫荧光检测Nestin鉴定神经干细胞球,在荧光显微镜下观察到绿色明亮且典型的细胞球,球内可见清晰结构;渗入Brdu免疫荧光检测可见整个着色细胞球。MTT OD值和RT-q PCR检测AKT3 m RNA均显示,与正常组相比,模型组和AKT干扰组下降(P0.05),其余各组均升高(P0.05),其中低氧组和Lip2000组之间无明显差异(P0.05)。与模型组相比,除AKT干扰组下降外(P0.05),其余各组均升高(P0.05)。Western Blot检测PI3K、AKT3、PCNA蛋白表达与正常组相比,模型组和AKT干扰组表达量减少(P0.05),低氧组、Lip2000组和AKT转染组均增加(P0.05),其中AKT转染组差异最明显(P0.01)。结论:PI3K-AKT信号通路在低氧干预下有效促进神经干细胞的增殖过程。     

尿酸减轻6-OHDA介导PC12细胞SOD活性下降和损伤的实验研究

目的 探讨尿酸对6-羟基多巴(6-OHDA)介导的PC12细胞氧化损伤的作用.方法 采用高分化PC12细胞制作帕金森病细胞模型,实验分为对照组、6-OHDA组、尿酸(Uric acid,UA)组和6-OHDA+UA组.药物作用6 h、12 h和24 h,采用比色法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性和乳酸脱氢酶(LD...