大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型的建立

目的建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎（NASH）模型。方法16只雄性SD大鼠,适应性饲养1周后随机分为对照组和模型组,每组8只,对照组大鼠给予普通饲料喂养,模型组大鼠给予高脂饲料（在普通饲料内添加100g/L猪油、20g/L胆固醇）,12周后处死实验动物,观察2组大鼠体重量、肝脏质重（湿）、血清生化指标（谷丙转氨酶、谷草转氨酶、三酰甘油、游离脂肪酸、肿瘤坏死因子等）及肝细胞脂肪变性程度。结果模型组肝脏质量（湿）显著高于对照组（P〈0.05）;模型组肝细胞变性程度显著重于对照组（P〈0.05）;模型组谷丙转氨酶、谷草转氨酶、三酰甘油都显著高于对照组（P〈0.05）;2组大鼠游离脂肪酸水平差异无统计学意义（P〉0.05）。结论利用高脂饲料喂养的方法成功复制了NASH单纯脂肪性肝炎期模型。     

大鼠非酒精性脂肪性肝炎常用模型探讨

本文主要阐述大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)常用模型,介绍模型的造模方法、效果及优缺点.由于生活方式的改变,NASH发病率呈明显增加趋势,现代医学证实部分NASH可发展为肝纤维化、肝硬化而导致严重后果,许多学者都在着眼于研究NASH的病因学及治疗和预防等,而建立理想的大鼠NASH模型是非常重要的研究工具,本文旨在对常用大鼠NASH模型,着重大鼠营养失调性脂肪肝模型进行探讨及分析.     

非酒精性脂肪性肝炎

非酒精性脂肪性肝炎（ｎｏｎ－ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ＮＡＳＨ）是指肝组织学改变与酒精性肝炎相类似但无嗜酒史（或每周饮酒量小于４０ｇ）病理学状态。尽管肝病学家对此病早已描述，但直到１９８０年Ｌｕｄｗｉｇ等才正式提出ＮＡＳＨ的概念。在西方国家系列肝活检资料中，ＮＡＳＨ的检出率高达７％～９％，有关ＮＡＳＨ的研究资料日益增多。 病因上，可将ＮＡＳＨ分为原发性和继发性两大类。前者主要与肥胖和遗传因素有关，后者多与某些疾病或糖尿病和高脂血症等致病因素相关。药物及有机溶剂等化学因素…     

豹皮樟总黄酮对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的防治作用

目的研究豹皮樟总黄酮(TFLC)对大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的防治作用。方法SD大鼠48只,随机分为6组(n=8):对照组、模型组、烟酸组及TFLC组(50、100、200 mg.kg-1)。除对照组外,其余各组每天给予脂肪乳剂和相应药物。实验开始后3 d收集72 h的粪便,测定粪便中脂质;于1 wk后断尾取血,测定血清脂质;3 wk后处死动物,测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和肝匀浆TG、TC、MDA、SOD,并行肝脏病理学检查。结果模型组大鼠出现NASH,烟酸组及TFLC组(100、200 mg.kg-1)均能降低血清和肝脏TG,肝脂肪变性程度和炎症均明显减轻;TFLC组(200 mg.kg-1)还能降低血清和肝MDA,提高肝组织SOD活性。结论TFLC可以降低大鼠血和肝组织TG,且能改善NASH大鼠脂肪变,减轻炎症反应。其机制可能是:TFLC抑制TG在肠道的吸收,同时减轻脂质过氧化。     

非酒精性脂肪性肝炎研究概况

随着非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发病逐年增加,对该病的研究越来越受到重视,而非酒精性脂肪性肝炎(NASH)则是NAFLD的最严重的形式,也是一种进行性的纤维化病,它的肝硬化和因肝病病死的发生率在近10年分别在20%和12%以上,NASH相关的肝硬化可以发展成亚急性肝衰竭、肝细胞癌、移植后再移植[1].本文概述NASH的危险因素、发病机制、病理学评估、影像学诊断、疾病诊断以及治疗,以期能为临床医师提供有益的帮助.     

非酒精性脂肪性肝炎

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指与饮酒、嗜肝病毒感染等明确的病因无关的肝脏实质细胞脂肪变性的一大类肝病，包括单纯脂肪变性和伴有炎症、坏死、纤维化或硬化的脂肪变性，后者即NASH。单纯的脂肪变性预后是良好的，不进展至肝硬化；而NASH则可能进展至肝硬化，甚至引起肝癌。     

非酒精性脂肪性肝炎的治疗进展

非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis.NASH)是指组织学改变与酒精性肝炎类似,但无过量饮酒史的一种临床病理综合征,其组织学具有肝细胞脂肪性变、气球样变性和点状坏死以及混合性炎细胞浸润的特征,可伴Mallo-ry小体和不同程度的肝纤维化[1]。该病也是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一种较严重的类型,可进展为肝硬化,被认为是隐源性肝硬化的原因之一[2]。自1980年Ludwig等首次提出NASH以来,对NASH的研究日益受到重视,在其病因、发病机制及治疗等方面均取得了一定进展。现就有关NASH的治疗作一简要综述。     

阿托伐他汀对高脂饮食大鼠非酒精性脂肪性肝炎的影响

目的观察阿托伐他汀对高脂饮食大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的影响。方法将23只SD大鼠随机分为三组:正常对照组(NC组,8只)、高脂饲养模型组(HF组,7只)和高脂饲养+阿托伐他汀组(HF+AT组,8只)。观察大鼠血清及肝脏各指标的变化,RT-PCR分别检测肝组织核转录因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)mRNA表达。结果与HF组相比,HF+AT组大鼠血清相关指标明显改善,肝组织脂肪变性及炎症活动得以减轻,肝脏NF-κB及TNF-αmRNA表达降低,PPARγmRNA表达增加(P<0.05或P<0.01)。结论阿托伐他汀能减轻高脂诱导的模型大鼠NASH。     

二甲双胍对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的防治作用

目的:研究二甲双胍对大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的防治作用。方法:取SD大鼠40只随机分为4组(n=10),即对照组、模型组、烟酸组及二甲双胍组。除对照组外,其余各组分别每天给予脂肪乳剂、烟酸、二甲双胍。实验开始1周后断尾取血,测定血清脂质;3周后处死大鼠,测定血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、游离脂肪酸(FFA)、空腹血糖(FBG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肝匀浆TG、TC、FFA水平,并行肝脏病理学检查。结果:与模型组比较,二甲双胍组能降低大鼠血清TG、ALT、FFA、FBG、TNF-α水平及肝匀浆中TG、FFA水平和肝脂肪变性程度及炎症水平(P<0.05或P<0.01)。结论:二甲双胍对脂肪乳剂诱导的NASH模型大鼠具有防治作用。     

丹酚酸B对ApoE敲除小鼠非酒精性脂肪肝的改善运用及其机制研究

目的探讨丹酚酸B通过调控AMPK诱导自噬对高脂诱导的ApoE敲除小鼠非酒精性脂肪肝病的影响。方法健康8周龄同源C57BL/6J小鼠和ApoE-/-小鼠鉴定后,随机分为对照组、模型组和SalB组,高脂饲料喂养,于第8周Sal B组腹腔注射SalB 15 mg·kg-1·d-1,对照组和模型组等剂量生理盐水。HE染色、油红O染色、Masson染色观察肝组织病理学特征,试剂盒检测血清中生化指标,免疫组化检测肝脏中炎症和氧化应激水平,Western blot法免疫荧光检测肝脏自噬和AMPK水平。结果模型组血清中AST、ALT明显升高,肝脏出现了大量的脂肪空泡和严重的脂质沉积并有胶原纤维增生,SalB干预后肝脏病变明显改善;模型组肝脏中炎症和氧化应激水平明显升高,SalB干预后明显降低;模型组肝脏中自噬和AMPK水平明显降低,SalB干预后明显增加。结论SalB可以改善ApoE-/-小鼠非酒精性脂肪肝病,其机制可能是通过调控ApoE-/-小鼠肝脏AMPK水平,提高自噬有关。     

高效液相色谱法测定乳块消丹中丹酚酸B的含量

目的建立测定乳块消丹中丹参的有效成分丹酚酸B含量的方法。方法采用高效液相色谱法测定。以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)为流动相,检测波长为286nm,柱温为室温。结果丹酚酸B在0.288～2.88μg范围内呈良好线性关系,回归方程为Y=560.78X-18.157(r=0.9996),丹酚酸B的平均回收率为97.76%(RSD=3.67%,n=5)。结论方法简便,分离效果好,结果准确可靠,可以用于乳块消丹的质量控制。     

高效液相色谱法测定保心宁胶囊中丹酚酸B的含量

目的建立高效液相色谱法测定保心宁胶囊中丹酚酸B的含量.方法Hypersil BDS C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(26.25∶8.75∶1.08∶63),检测波长286nm,柱温30℃,流速1ml·min-1.结果丹酚酸B浓度在7.46～149.10μg·ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系.平均回收率为100.8%,RSD为1.0%(n=6).结论本方法简便、灵敏、准确,可作为保心宁胶囊中丹酚酸B的质量控制.     

丹酚酸B预处理对心肌缺血/再灌注损伤能量代谢的影响

目的 观察丹酚酸B预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤（MI/RI）能量代谢的作用。方法 通过结扎冠状动脉30min再灌注2 h建立大鼠MI/RI模型,随机分为4组：假手术组、模型组及丹酚酸B高、低（20、10 mg/kg）组,于建立模型前7 d开始ip给药,每天1次;再灌注结束后,采用比色法测定血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）活力,染色法测定心肌梗死面积（MIA）,定磷法测定心肌组织Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性。结果 与模型组（42.60%）比较,丹酚酸B高、低剂量组的MIA分别缩小至35.93%和37.21%,差异显著（P<0.05）;与模型组比较,丹酚酸B高、低剂量组血清CK、LDH活力均显著降低（P<0.05、0.01）;与模型组比较,丹酚酸B高、低剂量组心肌组织Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性均显著升高（P<0.05、0.01）。结论 丹酚酸B预处理可保护MI/RI所致心肌损伤,作用途径可能与改善心肌组织的能量代谢相关。     

丹酚酸B对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究丹酚酸B对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法：大鼠离体心脏采用Langendorff装置,灌注含氧K．H液30min后,夹闭,停止灌流30min,然后再灌注40min。实验分为模型（空白K_H液）组、葛根素（0．24mmol／1）组与丹酚酸B高、中、低浓度（60、30、15gmol／1）组。灌注含氧K．H液20min后加入相应药物灌注10min。实时测定血流动力学指标、左室舒张末期压（LVEDP）、左室发展压（LVDP）、左室收缩压最大变化速率（＋dP/dtmax）、左室舒张压最大下降速率（-dP／dtmax）。收集灌流液,并测定肌酸激酶（CK）的活力;取部分心肌组织测定丙二醛（MDA）含量与超氧化物歧化酶（sou）活性。结果：与模型组比较,丹酚酸B高、中浓度组大鼠离体心脏在复灌10min后L、厂EDP显著降低,LVDP显著升高,＋dP/dtmax。显著升高,-dP／dtmax显著降低（P〈0．01或P〈0．05）;丹酚酸B高浓度组离体大鼠心脏组织CK活性显著减弱（尸〈O．01）,丹酚酸B高、中浓度组大鼠离体心脏MDA含量显著减少,SOD活性显著增强（P〈0．01）;丹酚酸B高、中、低浓度组大鼠离体心脏复灌5min后灌流液显著增加（P〈O．01或P〈0．05）。结论：丹酚酸B对大鼠离体心脏有保护作用,其机制可能是通过清除氧自由基,抵抗氧化应激发挥治疗作用。     

HPLC法测定复方丹参微丸中丹酚酸B的含量

目的：用高效液相色谱法测定复方丹参微丸中丹酚酸B的含量。方法以乙腈-甲醇-甲酸-水（10∶30∶1∶59）为流动相,色谱柱 Diamon-silTM C18（5μm,4.6＆#215;250mm）,波长286nm、柱温40℃、流速1.0mL＆#183; min -1为色谱条件,对复方丹参微丸中丹酚酸 B含量进行分析。结果丹酚酸B在59.5～1487.5 ng范围内成良好的线性关系（ r＝0.99995）。结论本法简便、准确、重现性好。     

HPLC法测定复方丹七郁胶囊中丹酚酸B的含量

目的：建立高效液相法测定复方丹七郁胶囊中丹酚酸B含量的方法。方法：采用Kromasil 100-5C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱;以甲醇-乙腈-甲酸-水（10∶30∶1∶59）为流动相,波长为286nm;流速为1.0mL·min-1;柱温为30℃;进样量为10μL。结果：丹酚酸B在6.25～249.87μg·mL-1范围内呈良好的线性关系,平均回收率100.51%（RSD为0.3%,n=6）。结论：该法快速,简便易行,结果可靠,专属性强,可作为复方丹七郁胶囊的质量控制指标。     

Evaluation of brain targeting in rats of Salvianolic acid B nasal delivery by the microdialysis technique

The purpose of this study was to investigate the biodistribution of Salvianolic acid B in rats blood and brain after intranasal administration and explore its feasibility and evaluate its brain targeting effect. The concentration of Salvianolic acid B in blood and brain following nasal administration (32?mg?kg^?1) was measured combining with microdialysis sampling and liquid chromatograph-mass spectrometer/MS detection technology. After the microdialysis samples were corrected with in vivo recoveries, the pharmacokinetic parameters were obtained by using non-compartment model and the brain targeting evaluated by the value of drug targeting index (DTI). The C_max in blood and brain by intravenous injection were higher than intranasal administration, but the intranasal administration of MRT_0-∞ significantly prolonged and increased by nearly 2.03 and 1.86 times, respectively. The DTI value of Salvianolic acid B was 5.54 and bioavailability (F) was 43.98%. After nasal administration of Salvianolic acid B, it has a certain brain targeting, which could become a new drug system for the treatment of brain diseases.     

HPLC法测定滑膜炎制剂中丹酚酸B的含量

目的:建立滑膜炎制剂中丹酚酸B的含量测定方法。方法:色谱柱为Alltima C18(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-1.7%甲酸溶液(19∶81)为流动相;检测波长为287 nm。结果:线性范围0.054 1～5.413 7μg(r=0.999 9);平均回收率:滑膜炎颗粒100.3%,RSD为1.2%(n=9);滑膜炎胶囊100.8%,RSD为1.4%(n=9);滑膜炎片101.2%,RSD为0.9%(n=9)。结论:该方法简便、准确,重现性好。     

Salvianolic acid B inhibits autophagy and protects starving cardiac myocytes

Aim:

To investigate the protective or lethal role of autophagy and the effects of Salvianolic acid B (Sal B) on autophagy in starving myocytes.

Methods:

Cardiac myocytes were incubated under starvation conditions (GD) for 0, 1, 2, 3, and 6 h. Autophagic flux in starving cells was measured via chloroquine (3 μmol/L). After myocytes were treated with Sal B (50 μmol/L) in the presence or absence of chloroquine (3 μmol/L) under GD 3 h, the amount of LC3-II, the abundance of LC3-positive fluorescent dots in cells, cell viability and cellular ATP levels were determined using immunoblotting, immunofluorescence microscopy, MTT assay and luminometer, respectively. Moreover, electron microscopy (EM) and immunofluorescent duel labeling of LC3 and Caspase-8 were used to examine the characteristics of autophagy and apoptosis.

Results:

Immunoblot analysis showed that the amount of LC3-II in starving cells increased in a time-dependent manner accompanied by increased LC3-positive fluorescence and decreased cell viability and ATP content. Sal B (50 μmol/L) inhibited the increase in LC3-II, reduced the abundance of LC3 immunofluorescence and intensity of Caspase-8 fluorescence, and enhanced cellular viability and ATP levels in myocytes under GD 3 h, regardless of whether chloroquine was present.

Conclusion:

Autophagy induced by starvation for 3 h led to cell injury. Sal B protected starving cells by blocking the early stage of autophagic flux and inhibiting apoptosis that occurred during autophagy.     

丹酚酸B对肾病综合征大鼠的改善作用

摘 要 目的：研究丹酚酸B对多柔比星致肾病综合征（NS）模型大鼠的改善作用。方法: 采用一次性尾静脉注射多柔比星制备NS模型,造模成功后给予大鼠丹酚酸B（0.2 g·kg-1、0.1 g·kg-1）连续灌胃5周,以醋酸泼尼松为阳性对照,探讨丹酚酸B对NS大鼠的肾脏指数、24 h尿量、24 h尿蛋白含量、腹水量及尿中钠、钾、氯离子的影响;以及对NS大鼠肾脏组织的影响。结果: 与模型组比较,丹酚酸B高剂量能显著提高NS模型大鼠的24h尿量和尿钠含量（P＜0.05）,降低24 h尿蛋白含量、腹水量和肾脏指数（P<0.05或P<0.01）,且上述指标与阳性药比较无差异（P>0.05）甚至更优（P<0.05）。对大鼠血钠、尿钾、尿氯等指标无影响（P>0.05）。丹酚酸B高剂量降低大鼠腹水含量的作用明显优于低剂量（P<0.01）,其他指标高低剂量组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。丹酚酸B可改善NS模型大鼠肾小管蛋白管型。结论: 丹酚酸B具有提高NS大鼠尿量,尿钠排泄,降低尿蛋白,腹水含量及改善肾脏损害的作用。