多形核白细胞对血管内皮细胞的毒性作用

本文利用体外培养血管内皮细胞的方法,观察了酵母多糖活化的多形核白细胞(PMN)对内皮细胞的影响。本研究发现:将活化的PMN与内皮细胞孵育,10h内皮细胞出现核固缩等变化,培养液中LDH升高;24h内皮细胞变化更为明显,细胞变性坏死,培养液中LDH和6-酮-PGF_1α含量均明显升高。予先向培养液中分别加入超氧化物歧化酶(SOD)或过氧化氢酶(CAT),内皮细胞仍有损害,将SOD和CAT予先联合加入,可保护内皮细胞免受PMN的损害。据此认为:活化PMN引起的内皮细胞损伤可能主要系羟自由基(OH·)所致。     

人周围血多形核白细胞的制备

<正> 制备人周围血多形核白细胞,是目前在生物化学、生理学、免疫学、病理学等多学科中应用范围较广的一项技术。本文作者现在瑞典卡罗林斯卡医学院生理化学部进修,正使用这项技术。它具有操作简便,纯度较高,可较大量制备,不需要特殊设备和装置等优点,特在这里作一介绍。     

单纯疱疹病毒感染对大鼠脑毛细血管内皮细胞和多形核白细胞黏附力特性的影响

目的 探讨细胞间黏附分子在单纯疱疹病毒感染中的作用.方法 成年雄性Wistar大鼠20只,随机分为两组,即对照(伪手术)组,单纯疱疹病毒感染组,每组为10只大鼠.分离培养大鼠脑毛细血管内皮细胞(cerebral capillary vessel endothe-lial cell,CCEC)和多形核白细胞(polymorphism nuclear leucocyte,PMN),利用微管吸吮技术,观察各组CCEC和PMN间黏附力特性的变化.结果 HSV感染后各时间点CCEC和PMN的黏附力和黏附应力均明显高于对照组(P<0.01).结论 单纯疱疹病毒感染中存在细胞间黏附特性的变化.     

多形核白细胞血栓素B2的测定

血栓素A_2(TXA_2)主要由血小板膜磷脂的花生四烯酸代谢产生释放,能强烈地致血小板聚集和血管收缩,其稳定代谢产物是血栓素B_2,测定TXB_2的含量可以了解TXA_2量的变化,已发现白细胞亦是产生TXA_2的场所之一。多形核白细胞(PMNL)TXB_2的测定需要解决以下问题:(1)PMNL的分离;(2)PMNL之TXA_2诱导释放;(3)PMNL之TXB_2的测定。作者对此进行了一     

慢性间歇低氧大鼠中性多核白细胞与内皮细胞间接共培养炎症因子水平变化及抗氧化剂的干预作用

目的研究慢性间歇低氧(CIH)大鼠中性多核白细胞(PMNs)与内皮细胞间接共培养C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平的变化,探讨炎症因子水平的改变对内皮细胞的影响及抗氧化剂4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶(Tempol)的干预作用。方法 36只雄性Wistar大鼠采用随机数字表法分为常氧对照组(NC组)、间歇低氧组(IH组)、间歇低氧Tempol干预组(IHT组)和间歇低氧盐水干预组(IHN组),每组9只。除NC组外均给予间歇低氧环境,IHT组低氧暴露前给予100 mg/(kg·d)的Tempol腹腔注射,生理盐水稀释,IHN组同时给予等体积生理盐水腹腔注射。暴露6周后处死大鼠,分离纯化PMNs。PMNs与正常大鼠主动脉内皮细胞Transwell间接共培养4 h,酶联免疫吸附法(ELISA)测定间接共培养上、下室上清中CRP、TNF-α和ICAM-1的水平。结果 NC组、IH组、IHT组和IHN组上、下室CRP、TNF-α和ICAM-1水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);与NC组下室相比,IH组和IHN组下室CRP、TNF-α和ICAM-1水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与IH组和IHN组下室比较,IHT组下室CRP、TNF-α和ICAM-1水平均明显降低,差异有统计学意义(均P<0.05);IHT组下室与NC组下室相比,CRP、TNF-α和ICAM-1水平差异均无统计学意义(均P>0.05);IH组下室与IHN组下室比较,以上指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 CIH大鼠体内的PMNs与内皮细胞间接共培养,可上调CRP、TNF-α和ICAM-1等炎症因子水平,可能在CIH引起内皮损伤中发挥重要作用;抗氧化剂Tempol可能阻断炎症反应,干预CIH引起的内皮功能障碍的发生。     

酒精性肾损害时核转录因子KB的表达及复方中药的干预作用

目的：探讨核转录因子KB（NF-KB）在酒精性肾损害时的表达及复方中药的干预作用。方法：63只大鼠随机分为正常组、酒精组及中药组，按本室方法用乙醇及抗纤复方Ⅰ号直接灌胃，于4，8，12周末处死大鼠，HE染色、透射电镜观察病理改变；免疫组化方法检测肾组织中NF-KB的表达。结果：中药组同酒精组比较，肾0小球系膜增殖、间质局灶性炎性细胞浸润、肾小管上皮扁平化和肾小管扩张等病理改变出现延迟且明显减轻。随着造模时间的延长，酒精组NF-KB表达进行性增强；中药组与酒精组比较明显减弱（P〈0．05）。结论：抗纤复方Ⅰ号能够抑制酒精性肾损害时NF-KB的表达。     

糖基化终产物对内皮细胞核转录因子NF-κB表达的影响

目的：探讨糖基化终产物（AGEs)的细胞损伤机理。方法：用葡萄糖与牛血清白蛋白在体外共同孵育制备AGEs-BSA，并以荧光光谱法检测其纯度，以体外培养的内皮细胞系ECV－304为研究对象，观察不同浓度糖基化终末产物对内皮细胞核转录因子NF－κBmRNA表达的影响。结果：制备的糖基化终产物具有360nm激发峰和450nm发射峰的特性，ECV－304核转录因子NF－κB的表达水平与糖基化终产物之间存在剂量依赖关系，AGEs可使核转录因子NF－κB的mRNA表达上调，结论：分子荧光分析法是检测AGEs的有效手段，AGEs可诱导内皮细胞NF－κB的表达上调。     

核转录因子NF—κB在血管内皮细胞组织因子表达中的作用

目的：探讨核转录因子NF－κ在肿瘤坏死因子α（TNF－α）,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管内皮细胞组织因子（TF）表达中的作用。方法：用发色底物法测定血管内皮细胞表面TF活性。分别采用凝胶电泳迁移率改变法（EMSA）和Western 鲩迹法检测血管内皮细胞核转录因子NF－κB的DNA结合活性和含量。结果：100U／ml TNF-α,^-6mol/l Ang II作用下,内皮细胞表面TF活性明显增高。分别较对照增高1＝65倍和1．61倍,TNF－α,AngⅡ处理后细胞核内NF－κB含量明显增加,分别为正常对照组的1．77倍和1．52倍。结论：TNF－α,AngⅡ可增强内皮细胞TF活性,这可能与其促进内皮细胞核转录因子NF－κB的核转位和DNA结合活性有关,进一步证实NF－B在内皮细胞TF诱导表达中的重要作用。     

褪黑素对间歇低氧大鼠海马损伤保护作用的研究

目的 探讨褪黑素(melatonin,MEL)对间歇低氧(intermittent hypoxia,IH)大鼠海马损伤的保护作用.方法 30只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成对照组(CON组)、间歇低氧组(IH组)、MEL治疗组(MEL组),每组10只.采用化学比色法测定海马组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,并采取RT-PCR方法检测海马组织中铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、组织过氧化氢酶(CAT)的mRNA水平.结果 IH组MDA水平显著高于对照组,SOD活性、Cu/ZnSOD、GPx、CAT的mRNA水平显著低于对照组;MEL组MDA水平明显低于IH组,SOD活性、Cu/ZnSOD、GPx、CAT的mRNA水平明显高于IH组.结论 褪黑素能抑制间歇低氧导致的氧化应激,从而对间歇低氧大鼠海马损伤具有保护作用.     

间歇性缺氧及睡眠剥夺建立大鼠睡眠呼吸暂停模型

目的建立睡眠呼吸暂停综合征（SAS）大鼠模型。方法选取雄性SD大鼠32只,随机分为4组,分别是常氧正常睡眠对照组,常氧睡眠剥夺组,间歇性低氧正常睡眠组,间歇性低氧睡眠剥夺组,每组8只。实验期间每周测定鼠尾收缩压1次,在缺氧、睡眠剥夺终点测定有创动脉压、心脏重量（CW）,左心室重量（LVW）,并计算出心脏质量指数（CMI）;取大动脉、肺、肾组织石腊包埋,病理切片光镜观察。结果随时间的延长,睡眠剥夺组、间歇性低氧组、间歇性低氧睡眠剥夺组鼠尾压逐步升高,并出现左室重量、心脏重量增加,以间歇性低氧睡眠剥夺组最为明显;组织病理显示低氧睡眠剥夺组大鼠动脉壁不规则增厚,肾小管上皮细胞肿胀,可见蛋白管型;肺小动脉管壁增厚,管腔变窄。结论通过模拟间歇性缺氧及睡眠剥夺机制建立了大鼠睡眠呼吸暂停综合征动物模型。     

银杏内酯B对内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨银杏内酯B(GB)对TNFα刺激内皮细胞引起的氧化应激性损伤的保护作用及机制。方法用分子探针2,7-DCF测定细胞内ROS的产生量以及用Western blot测定ERK2激酶和转录因子AP-1的蛋白表达。结果TNFα(5ng/ml)作用24h后,脑血管内皮细胞(BVEC)中ROS的产生量明显增加(P<0.05),细胞内AP-1、ERK2的蛋白表达显著增强;但GB(50mg/L)和NAC(20mM)能显著性抑制TNFα诱导的细胞内ROS的产生和AP-1、ERK2的表达(P<0.05)。结论GB能抑制TNFα诱导的BVEC内ROS的水平,此作用可能是通过抑制ROS介导的ERK2激酶及转录因子AP-1的表达而实现。     

Pyrrolidine dithiocarbamate Inhibits NF- κB Activation and Enhance TNFα- Induced Apoptosis in Human Breast Cancer Cells

Objective: Tumor necrosis factor α(TNFα) induced apoptosis is limited by its coactivation of nuclear factor kappa B(NF- κB) -dependent antiapoptosis genes. We examined whether pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) enhance TNFα - induced apoptosis in cultured breast cancer cells and explored the role of NF - κB in TNFα - induced apoptosis. Methods: Human breast cancer cell lines MCF-7 and MDA - MB -435s were treated with TNFα、 PDTC and combination therapy . Induction of apoptosis was detected by TUNEL staining and flow cytometry. NF- κB DNA binding activity was detected using electrophoresis mobility shift assay(EMSA) . Western blots of cytoplasmic lysates were performed to demonstrate IκBα (Inhibitor protein of nuclear factor κB) phosphorylation and degradation. Results:TNFα-induced IκBo phosphorylation and degradation, which was inhibited by PDTC in both cell lines. TNFα-induced apoptosis (TUNEL) increased significantly when both cells were pretreated with PDTC. Flow cytometry also confirmed this. EMSA showed that PDTC continuously inhibited TNFo-induced NF- κB DNA binding activity . Conclusions:PDTC enhances TNFo-induced apoptosis whileinhibiting IκBα phosphorylation and degradation in human breast cancer cells. NF - κB has a protective role on TNFα-induced apoptosis.     

三七总皂苷对大鼠肝移植中胆管细胞缺血再灌注损伤保护的实验研究

目的探讨胆管上皮细胞缺血再灌注损伤的机制及三七总皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）在大鼠肝移植中胆管细胞I/R损伤中的作用。方法采用吻合肝动脉的大鼠原位肝移植模型。分三组观察在不同条件下胆管细胞的病理形态变化及PNS对此缺血再灌注损伤的影响。结果缺血再灌注的胆管细胞损伤更重,氧自由基生成更多,NF-κB表达更多,PNS预处理保护组胆管细胞损伤明显减轻。结论缺血再灌注损伤能加重胆管细胞的损伤,PNS预处理可减轻该损伤,其机制可能为抑制氧自由基生成,减少NF-κB的表达。     

人脐静脉内皮细胞分离培养及不同消化酶效力比较

目的采用酶消化法进行人脐静脉内皮细胞分离培养,并比较不同消化酶获得细胞数量及细胞存活率的差别。方法分别用0.125%、0.25%胰蛋白酶和0.1%I型胶原酶消化获取脐静脉内皮细胞,比较三种酶液消化的结果,在倒置相差显微镜下观察细胞形态特点,同时用Ⅷ因子免疫荧光法和DiI-acLDL摄取实验对所得细胞进行鉴定。结果0.125%、0.25%胰蛋白酶和0.1%I型胶原酶的最佳消化时间分别为15min、12min、15min,倒置相差显微镜下观察所得细胞呈典型内皮细胞形态,免疫荧光法检测Ⅷ因子相关抗原阳性,且细胞具有DiI-acLDL摄取能力。结论采用酶消化法分离培养脐静脉内皮细胞简便易行,但需严格掌握消化时间以减少细胞损伤,0.1%I型胶原酶是最理想的内皮细胞消化酶。     

核转录因子κB p65在子宫颈鳞癌中的表达及意义

目的:探讨核转录因子κB(NF-κB)p65蛋白在人宫颈鳞癌组织中的表达及意义.方法:32例人宫颈鳞状细胞癌为实验组,慢性宫颈炎及正常宫颈组织各30例为对照组.应用免疫组织化学方法检测NF-κB p65蛋白在组织中的表达水平.结果:免疫组织化学方法显示32例宫颈癌组织中NF-κB p65蛋白阳性表达率为68.7.%,慢性宫颈炎组织中NF-κB p65蛋白阳性表达率为6.66%,而30例正常组织中无表达,实验组与对照组之间差异显著(P＜0.05).结论:NF-κB活化与宫颈癌的发生有关,NF-κB p65可能成为人宫颈癌治疗的新靶点.     

不同缺氧阶段大鼠肺血管核因子-κB活性的变化及其与缺氧性肺血管重建的关系

目的探讨缺氧不同阶段大鼠整体水平肺血管蛋白激酶C（PKC）和核因子-κB（NF-κB）活性的变化，以及这种变化与缺氧性肺血管重建的关系。方法雄性Wistar大鼠60只，随机分为常氧对照组（C组），缺氧1周组（H1组）、2周组（H2组）、3周组（H3组）和4周组（H4组）。测定肺动脉平均压力（mPAP）、右心室重／（左心室重＋室间隔重）[RV／（LV＋S）]、肺细小动脉管壁面积占管总面积的百分比（WA／TA）。用凝胶电泳迁移率改变试验（EMSA）检测肺动脉NF-κB／DNA结合活性。用Western blot检测肺动脉PKCα胞膜和胞质蛋白质表达。结果①H3组大鼠mPAP、RV／（LV＋S）、WA／TA分别与H2组、H1组及C组相应指标比较差异均有显著性意义（均P〈0．05）；与H4组比较差异无显著性意义（均P〉0．05）。②H1组、H2组、H3组和H4组NF-κB／DNA结合活性明显高于C组，差异均有显著性意义（均P〈0．05）；但H1组、H2组、H3组和H4组组间两两比较差异无显著性意义（均P〉0．05）。③H3组大鼠肺动脉PKCα胞膜蛋白质表达明显增高，PKCα胞质蛋白质表达明显下降，与H2组、H1组及C组比较差异均有显著性意义（均P〈0．05），与H4组比较差异均无显著性意义（P〉0．05）。结论早期缺氧可使NF-κB／DNA结合活性明显增强；缺氧3周大鼠肺动脉PKCα转位活化明显增强。提示不同缺氧阶段大鼠肺血管PKCα和NF-κB活性的变化可能与缺氧性肺血管的重建和肺动脉高压的形成有关。     

细胞核因子kappa B p50蛋白在肾缺血再灌注损伤中的表达及意义

目的观察大鼠肾缺血再灌注后细胞核因子Kappa B p50（Nuclear factor kappa B p50,NF-κBp50）蛋白的表达情况,探讨其参与肾缺血再灌注损伤的作用机制。方法 SD雄性大鼠48只随机分为对照组（Control组,简称C组）,缺血再灌注组（Ischemia-reperfusion组,简称Ir组）两个实验组,每组各4个时相（6、12、24、72h）。采用切除右肾,夹闭左肾动脉45min后恢复灌流建立肾缺血再灌注损伤模型。观察肾组织病理变化,免疫组化二步法检测大鼠肾组织中NF-κBp50蛋白的表达情况,测定髓过氧化物酶（Mpo）活性及血清肌酐（Scr）水平以反映中性粒细胞活化及肾功能损害的程度。结果 C组大鼠肾组织形态结构正常,NF-κBp50蛋白几乎无表达;Ir组大鼠肾小管上皮细胞可见不同程度的损伤及炎细胞浸润,NF-κBp50蛋白高表达（P〈0.01）。与C组比较,Ir组血清肌酐（Scr）水平明显升高,髓过氧化物酶（Mpo）活性显著增加（P〈0.01）。结论缺血再灌注后肾组织中NF-κBp50蛋白表达增强,提示NF-κBp50蛋白可能在肾缺血再灌注损伤中扮演了重要角色。     

间歇低氧对大鼠肝脏细胞中同源性磷酸酶张力蛋白及磷酸化蛋白激酶B表达的影响

目的通过检测间歇低氧大鼠肝脏细胞中同源性磷酸酶张力蛋白（PTEN）及其下游信号分子磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）的表达水平,探讨肝脏细胞PTEN、P-AKT在间歇低氧相关胰岛素抵抗中的作用。方法选取健康雄性SD大鼠24只,随机分成3组,即慢性间歇空气对照组（CIA组）、慢性间歇低氧4周组（CIH4组）和慢性间歇低氧8周组（CIH8组）。检测3组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、肝细胞中PTEN及p-AKT的表达,用胰岛素敏感指数（IsI）以及稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）系统评价胰岛素抵抗。以平均灰度值表示PTEN及p-AKT的蛋白表达量,灰度值越高表示蛋白质表达越少。结果与CIA组比较,CIH4组、CIH8组ISI下降有统计学意义（P〈0．05）,且CIH8组下降比CIH4组明显（P〈0．05）;CIH4组、CIH8组HOMA—IR升高有统计学意义（P〈0．05）,且CIH8组升高较CIH4组明显（P〈0．05）。与CIA组比较,CIH4组、CIH8组PTEN蛋白表达量升高有统计学意义（P〈0．05）;与CIH4组比较,CIH8组PTEN蛋白表达量升高亦有统计学意义（P〈0．05）。与CIA组比较,CIH4组、CIH8组p-AKT蛋白表达量下降有统计学意义（P〈0．05）;与CIH4组比较,CIH8组p-AKT蛋白表达量下降亦有统计学意义（P〈0．05）。间歇低氧大鼠肝细胞中PTEN的表达随着IsI的下降和HOMA—IR的升高有显著升高趋势,且随间歇低氧时间的延长而显著性增加;间歇低氧大鼠肝细胞中p-AKT随着IsI的下降和HOMA—IR的升高表达下降,且随着间歇低氧时间的延长而更加明显。结论慢性间歇低氧暴露使大鼠空腹血糖及胰岛素水平升高,发生胰岛素抵抗,并且随着间歇低氧暴露时间的延长,胰岛素抵抗程度加重。间歇低氧大鼠肝细胞PTEN蛋白表达增加,p-AKT蛋白表达减少,且与ISI、HOMA．IR具有明显的相关性,表明该蛋白可能在间歇低氧大鼠胰岛素抵抗的发生