曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物敏感性分析

目的 研究曲霉菌临床分离株的分子鉴定及体外抗真菌药物的敏感性。方法 采用Internal Transcribed Spacer（ITS）及β-tubulin基因部分测序对临床分离的53株经形态学鉴定为曲霉的菌株进行分子鉴定,并按照美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的M38-A2微量液基稀释法测定唑类（伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑）,两性霉素B和棘白菌素类（米卡芬净、阿尼芬净和卡泊芬净）共7种抗真菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）或最低有效浓度（minimum effective concentration, MEC）。结果 53株曲霉菌包含烟曲霉复合体22株（烟曲霉21株和仑图卢斯曲霉1株）,黑曲霉复合体23株（塔宾曲霉16株、黑曲霉5株和百岁兰曲霉2株）及土曲霉和黄曲霉各4株;米卡芬净、阿尼芬净、卡泊芬净、泊沙康唑、伏立康唑、伊曲康唑、两性霉素B对曲霉菌株的MIC90为0.031、0.031、0.25、0.5、0.5、1、2μg/mL。除1株烟曲霉对伊曲康唑（MIC≥16μg/mL）和伏立康唑（MIC为2μg/mL）耐药及1株仑图卢斯曲霉对两性霉素B耐药（MIC为8μg/mL）外,其余菌株对7种药物均敏感。4种曲霉复合体对7种抗真菌药物的敏感性差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 棘白菌素类药物体外抗曲霉菌活性最好,两性霉素B体外抗曲霉菌活性相对较差,唑类药物介于以上两者之间。不同种曲霉菌对不同抗真菌药物的敏感性存在差别。     

烟曲霉临床菌株对体外抗真菌药物的敏感性研究

目的 揭示国内烟曲霉临床分离株对目前常用及新型抗真菌药物敏感性及不同地区烟曲霉对抗真菌药物的敏感性特点。方法 实验室保存的分离自2011—2015年中国不同地区的159株临床烟曲霉菌株为试验菌株。采用美国标准化实验室与研究所(CLSI)推荐的M38-A2微量液基稀释法为药敏方法,按规定的标准进行。结果 12种抗真菌药物伊曲康唑(ITC)、伏立康唑(VRC)、泊沙康唑(POS)、里氟康唑(RAV)、艾沙康唑(ISA)、氟康唑(FLC)、米卡芬净(MCF)、阿尼芬净(ANI)、卡泊芬净(CBF)、两性霉素B(AMB)、特比萘芬(TBF)和5-氟胞嘧啶(5-FC)对159株烟曲霉菌的MIC₉₀分别为1、0.5、0.25、0.5、1、64、0.063、0.063、0.5、2、4、64mg/L。烟曲霉唑类耐药率分别为: ITC为4.4%,ISA和RAV均为3.77%,POS为3.14%,VRC为1.9%。除VRC、FLC和5-FC外,烟曲霉临床分离株对其他9种抗真菌药物的敏感性在不同地区间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 三唑类(除FLC外)和棘白菌素类体外抗烟曲霉菌活性较高,优于AMB和TBF;烟曲霉在体外对FLC、5-FC表现为高度耐药。目前我国烟曲霉临床株唑类耐药率相对较低。烟曲霉株体外抗真菌药物的敏感性存在地区差异。     

头孢哌酮／舒巴坦联合米诺环素对碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性研究

目的评价头孢哌酮／舒巴坦联合米诺环素对临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性。方法采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的头孢哌酮／舒巴坦联合米诺环素对30株临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度（MIC）,计算部分抑菌浓度（FIC）指数,判定联合效应。结果头孢哌酮／舒巴坦与米诺环素联合应用的效应为协同效应（FIC≤0．5）占33．3％,部分协同效应（0．5〈FIC〈1）占46．7％,相加效应（FIC=I）和无关效应（1〈FIC≤4）各占10％,无拮抗效应。结论体外试验中,头孢哌酮／舒巴坦与米诺环素联合应用以协同效应及部分协同效应为主。     

双黄连粉针剂联合阿米卡星与头孢哌酮/舒巴坦对广泛耐药鲍曼不动杆菌的体外抑菌效果

目的探讨双黄连粉针剂联合阿米卡星与头孢哌酮/舒巴坦对广泛耐药鲍曼不动杆菌的体外抑菌效果。方法应用棋盘法设计,肉汤稀释法测定不同浓度组合双黄连与阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦对30株临床分离广泛耐药鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度,以部分抑菌浓度指数(FIC)为指标判定中西药联合抑菌作用。结果双黄连联合阿米卡星FIC结果显示:FIC≤0.5为0%,FIC>0.5~1为16.7%,FIC>1~2为70.0%,FIC>2为13.3%;双黄连联合头孢哌酮/舒巴坦FIC结果显示:FIC≤0.5为23.3%,FIC>0.5~1为73.3%,FIC>1~2为3.3%,FIC>2为0%。结论双黄连联合阿米卡星对广泛耐药鲍曼不动杆菌多数表现为无关作用和拮抗作用,体外联合抑菌作用较差;而双黄连与头孢哌酮/舒巴坦联合表现出的协同作用和相加作用比例较高,对广泛耐药鲍曼不动杆菌的体外联合抑菌作用较好。     

Etest法在耳鼻咽喉致病真菌药敏检测中的应用研究

目的：用Etest法研究耳鼻咽喉致病真菌对酮康唑（KE）、伊曲康唑（IT）、5-氟孢嘧啶（FC）、二性霉素B（AP）、氟康唑（FL）5种抗真菌药的敏感性。方法：按瑞典倍肯公司关于Etest检测方法,用上述5种抗真菌药对来自耳鼻咽喉的黄曲霉、烟曲霉及白念珠菌等15种致病真菌进行药敏检测,判定其MIC值,结果：（1）白念珠菌对上述5种抗真菌药均敏感,其中酮康唑及伊曲康唑最敏感;（2）酮康唑、伊曲康唑对黄曲霉、烟曲霉、米曲霉、卡氏枝孢霉、尖端单孢霉、桔青霉及皮癣菌均有敏感性,两药对15种致病真菌的MIC值分别为≤0.008->32mg/L和≤0.006-32mg/L;（3）氟康唑对15种受试菌株中的11株有耐药性,其MIC值≤0.5->32mg/L。结论：（1）Etest法对致病真菌的药敏检测真有先进新颖,操作简便,定值精确,结论可靠,重复性好的优点;（2）酮康唑、伊曲康唑有广谱高效的抗真菌功效,而氟康唑是窄谱的抗真菌药。     

胡桃楸提取物抗深部感染真菌的活性研究

目的探讨胡桃楸提物对常见深部感染真菌生长的抑制作用。方法以NCCLS方案检测胡桃楸提取物和伊曲康唑(ICZ)、氟康唑(FCZ)、两性霉素B(AMB)和5-氟胞嘧啶(5-FC)对白念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉菌体外最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)。结果胡桃楸提取物对深部致病性真菌有较强的抑菌和杀菌作用,其作用强度与ICZ、FCZ相当,但逊色于AMB和5-FC。结论胡桃楸提取物对深部致病性真菌体外生长有较强的抑菌和杀菌作用。     

多种中药对泛耐药肺炎克雷伯菌体外抗菌活性筛选

目的筛选对泛耐药肺炎克雷伯菌有抗菌活性的中药,并初步探究其体外抑菌机制。方法从60种中药颗粒剂中,筛选对28株泛耐药菌有体外抗菌活性的中药。调整有抗菌活性药液pH至中性,比较调整pH前后抑菌效果差异。检测有抑菌活性中药的最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）、联合抑菌效果以及对细菌细胞外碱性磷酸酶（ALP）活性改变。结果筛选出黄芩、黄连、麻黄和鸡血藤等4种对泛耐药菌均有抑菌作用的中药,其MIC依次为:64、64（82.1%黄连菌株）、128（19.9%）、128、256 mg/mL;MBC依次为:128、64（28.6%黄连菌株）、128（71.4%）、256、512 mg/mL。4种中药调整pH前后抑菌效果均无差异（P>0.05）。黄连和黄芩联合应用时的FIC值均>2。随着4种药物浓度的增加,ALP的浓度均升高,其中黄芩和黄连作用后的ALP浓度升高更为明显。结论黄芩、黄连、麻黄和鸡血藤具有良好的体外抗菌效果,其中黄芩和黄连的抗菌机制可能与增加细胞膜的通透性有关;但黄芩和黄连联合用药有拮抗作用。     

丹参酮与万古霉素联合应用对MRSA的抑制作用

目的探讨丹参酮及其与万古霉素、β-内酰胺类抗菌药物联用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的体外抑制作用。方法从临床送检的标本中鉴定筛选出20株MRSA。采用微量稀释法分别测定丹参酮、万古霉素、苯唑西林、氨苄西林、头孢唑林对MRSA的最低抑菌浓度MIC（minimal inhibitory concentration）。采用试管棋盘稀释法分别测定丹参酮与万古霉素、苯唑西林、氨苄西林、头孢唑林联合使用时对MRSA的MIC，计算联合指数（FIC）。结果丹参酮对MRSA的MIC与对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA）即标准株ATCC29213的MIC比较差异无统计学意义。丹参酮与万古霉素在体外联合使用时万古霉素的MIC为（0.23±0．27）μg/ml，与单用万古霉素对MRSA的MIC[（O．71±0．42）μg／ml]比较差异有统计学意义（P〈0．001）。FIC平均为0.75，呈相加作用。上述β-内酰胺类抗菌药物与丹参酮合用的FIC均大于1．0，呈无关作用。结论丹参酮对MRSA有抑制作用。丹参酮与万古霉素联合使用具有相加作用。丹参酮与苯唑西林、氨苄西林、头孢唑林联合使用则呈无关作用。本研究结果提示丹参酮有望成为治疗MR-SA感染的辅助用药，为MRSA感染的患者提供一治疗新思路。     

中药对幽门螺杆菌的体外联合抗菌实验

目的研究黄连、乌梅、蜂胶对幽门螺杆菌的体外联合抗菌作用。方法应用棋盘法,以琼脂平板法测定两两组合的不同浓度中药提取物对Hp的最低抑菌浓度,计算部分抑菌浓度（FIC）指数并判定联合效应。结果黄连与蜂胶联合应用后,其FIC指数为0．13（〈0．5）;黄连与乌梅联合应用后,其FIC指数为0．75（〉0．5）;乌悔与蜂胶联合应用后,其FIC指数为0．19（〈0．5）。结论黄连与蜂胶联合应用及乌梅与蜂胶联合应用,对Hp表现为协同作用,且乌梅与蜂胶联合应用协同作用较强;黄连与乌梅联合应用对Hp表现为相加作用;3种中药之间均无拮抗作用。     

洋铁酸模提取物体外抑真菌作用活性部位筛选研究

目的研究洋铁酸模提取物体外抗真菌活性,筛选其抗真菌作用活性部位。方法本实验采用滤纸片法、连续稀释法,测定洋铁酸模提取物对36株临床常见皮肤癣菌的最小抑菌浓度（MIC）值。结果洋铁酸模乙酸乙酯提取物对红毛癣菌的生长有较明显的抑制作用,最小抑菌浓度为30 mg/mL;对白色念珠菌的抑制作用很弱,最小抑菌浓度为120 mg/mL。抑菌成分在40,60℃下（处理2 h）较稳定,在80℃以上热稳定性较差。结论洋铁酸模提取物可抑制真菌生长,筛选出的活性部位为乙酸乙酯层。     

Voriconazole -- better chances for patients with invasive mycoses

The past two decades have witnessed an increase in serious fungal infections, without corresponding growth in available antifungal agents. Voriconazole (VRC) is a novel triazole antifungal, recently approved in Europe for treatment of serious infections caused by Aspergillus, Fusarium, Scedosporium, and resistant Candida species. Voriconazole has in vitro activity against yeasts and yeast-like fungi similar, or superior to, fluconazole (FLC), itraconazole (ITC) and amphotericin B (AMB). Candida albicans is generally the most susceptible yeast (VRC MIC subset90 of 0.06 microg/ml); C. krusei often has low MICs even in the face of FLU/ITC resistance. Voriconazole has demonstrated comparable, or better, in vitro activity than ITC and AMB against Aspergillus (mean MICs 0.19-0.58 microg/ml), Ascomycetes, Bipolaris, Fusarium, Blastomyces dermatitidis, Coccidioides immitis, dermatophytes, Histoplasma capsulatum, Malassezia, and Scedosporium angiospermum (P. boydii). The drug possesses potent fungicidal activity against moulds including Aspergillus, Scedosporium, and Fusarium. Fungicidal activity is likely due to the high affinity of VRC for fungal 14-alpha-demethylase, a concept supported by ultrastructural and biochemical analysis. Animal studies confirmed the activity of VRC against infections including pulmonary and invasive aspergillosis (IA); A. fumigatus endocarditis; fusariosis; pulmonary cryptococcosis; and invasive candidiasis. Most importantly, well-designed human clinical trials have confirmed the efficacy of VRC in the treatment of candidal esophagitis, IA, and febrile neutropenia. Smaller studies and case reports have shown VRC is useful for salvage therapy of IA, cerebral aspergillosis, Scedosporium, and other fungal infections. Clinical testing has shown VRC is safe and well tolerated; the most common side effect is benign, self-limited visual disturbance.     

In vitro susceptibility testing of Aspergillus spp. against voriconazole, itraconazole, posaconazole, amphotericin B and caspofungin

Background During recent years, the incidence of serious infections caused by opportunistic fungi has increased dramatically due to alterations of the immune status of patients with hematological diseases, malignant tumors, transplantations and so forth. Unfortunately, the wide use of triazole antifungal agents to treat these infections has lead to the emergence of Aspergillus spp. resistant to triazoles. The present study was to assess the in vitro activities of five antifungal agents （voriconazole, itraconazole, posaconazole, amphotericin B and caspofungin） against different kinds of Aspergillus spp. that are commonly encountered in the clinical setting. Methods The agar-based Etest MIC method was employed. One hundred and seven strains of Aspergillus spp. （5 species） were collected and prepared according to Etest Technique Manuel. Etest MICs were determined with RPMI agar containing 2% glucose and were read after incubation for 48 hours at 35℃. MIC50, MIC90 and MIC range were acquired by Whonet 5.4 software. Results The MIC90 of caspofungin against A. fumigatus, A. flavus and A. nidulans was 0.094 μg/ml whereas the MIC90 against A. niger was 0.19μg/ml. For these four species, the MIC90 of caspofungin was the lowest among the five antifungal agents. For A. terrus, the MIC90 of posaconazole was the lowest. For A. fumigatus and A. flavus, the MIC90 in order of increasing was caspofungin, posaconazole, voriconazole, itraconazole, and amphotericin B. The MIC of amphotericin B against A. terrus was higher than 32 μg/ml in all 7 strains tested. Conclusions The in vitro antifungal susceptibility test shows the new drug caspofungin, which is a kind of echinocandins, has good activity against the five species of Aspergillus spp. and all the triazoles tested have better in vitro activity than traditional amphotericin B.     

吞噬烟曲霉对巨噬细胞活性变化的影响

目的研究烟曲霉对巨噬细胞吞噬能力及细胞活性的影响规律。方法通过免疫荧光法测定巨噬细胞吞噬烟曲霉后吞噬量的变化,同时利用MTT比色法测定巨噬细胞的细胞活性变化。结果在吞噬初期（20min）,巨噬细胞吞噬乳胶颗粒的速度明显高于吞噬孢子（P〈0.05）,然而最终（70min）吞噬两种颗粒的能力无明显差异（P〉0.05）;巨噬细胞吞噬休眠孢子及热灭活孢子的量无显著差异（P〉0.05）;另外,休眠孢子、热灭活休眠孢子及膨胀孢子均可显著降低巨噬细胞的细胞活性（均P〈0.05）,而烟曲霉菌丝和乳胶颗粒对巨噬细胞的细胞活性无明显影响（P〉0.05）。无色素的烟曲霉白化株休眠孢子不能使巨噬细胞活性降低（P〉0.05）。结论烟曲霉孢子表面色素可能是降低巨噬细胞活性的影响因素。     

含哌嗪环的叔丁基三唑醇类化合物的合成及体外抗真菌活性

目的:设计合成含哌嗪环侧链的叔丁基三唑醇类化合物;并研究其体外抗真菌活性.方法:以一氯频哪酮为起始原料经多步反应合成含哌嗪环的叔丁基三唑醇类化合物,化合物结构经1HNMR确证为1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-叔丁基-3-[(4-取代哌嗪)-1-基]-2-丙醇类化合物;选择白念珠菌(Candida albicans)ATCC76615、新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)ATCC32609、热带念珠菌(Candida tropicalis)、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)、红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)、羊毛样小孢子菌(Microsporum lauosum)、紧密着色真菌(Fonsecaea compacta)以及薰烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)8种真菌为实验菌株,按国际标准抗真菌敏感性实验方法测定体外抑菌活性.结果:设计合成了11个新化合物.所有目标化合物对8种真菌均具有一定的抑制作用.结论:化合物9对新生隐球菌的活性高于对照药氟康唑和伊曲康唑,化合物8对薰烟曲霉菌的活性高于对照药氟康唑,这两个化合物有进一步研究的价值.     

1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(2,4-二氟苯基)-3-(N-正丁基-N-取代苄基氨基)-2-丙醇的合成及其抗真菌活性

目的:研究具有正丁基和取代苄基侧链结构的三唑醇类化合物的抗真菌活性。方法:设计并合成了14个1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-2-(2,4二氟苯基)-3-(N-正丁基-N-取代苄基氨基)-2-丙醇化合物,其结构都经过 1H NMR、IR和LC-MS确证。选择8种临床常见的真菌为实验菌株,进行体外抑菌活性测试。结果:体外抑菌测试结果表明,所有化合物对除熏烟曲霉菌外的所有菌株均有一定程度的抑制活性,对深部真菌的抑制活性明显优于浅部真菌。其中化合物6a、6d 和 6j 对石膏样小孢子菌的抑制活性(MIC80 0.015 6 μg/ml)是氟康唑的16倍;化合物6m和6n对白念珠菌的抑制活性(MIC80 0.003 9 μg/ml)是氟康唑的128倍,比其他对照药活性都高。结论:引入正丁基和取代苄基侧链的目标化合物都具有一定的抗真菌活性。     

慢性烟曲霉暴露对哮喘大鼠气道嗜酸粒细胞性炎症及气道高反应性的影响

目的探讨慢性烟曲霉暴露对哮喘大鼠气道嗜酸粒细胞的募集活化及气道反应性的影响。方法使用卵白蛋白腹腔注射后雾化吸入法制备Wistar大鼠哮喘模型,采用雾化吸入孢子悬液的方式模拟慢性烟曲霉暴露,并设置相应的生理盐水对照组。测定反映大鼠气道反应性的指标Penh值,ELISA法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中自细胞介素5（IL-5）、嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）浓度,肺组织切片HE染色观察气道炎症性病理改变,测定嗜酸粒细胞浸润程度。瑞士姬姆萨复合染色计数BALF中嗜酸粒细胞比例。结果烟曲霉可引起哮喘大鼠气道反应性升高及气道嗜酸粒细胞增多,加重哮喘大鼠气道过敏性炎症。烟曲霉暴露组中气道嗜酸性细胞增加与IL-5、Eotaxin水平升高相一致。但烟曲霉对生理盐水对照组大鼠的气道反应性、嗜酸粒细胞及IL-5、Eotaxin水平改变无显著作用。结论烟曲霉孢子雾化吸入可促进IL-5、Eotaxin的生成从而加重哮喘大鼠气道的嗜酸粒细胞性炎症,并可加重气道高反应性。     

1-（1H-1，2，4-三唑-1-基）-2-（2，4-二氟苯基）-3-[（4-取代）-哌嗪-1-基]2-丙醇的合成及其抗真菌活性

目的 寻找广谱、高效、低毒的新-代三唑类抗真菌药物。方法设计合成了11个三唑醇类新化合物,进行体外抑菌活性测试。结果合成的目标化合物对4种不同真菌均有-定的抑制活性,有4个化合物对白色念珠菌和新型隐球菌的活性强于氟康唑;1个化合物对薰烟曲霉菌的活性强于氟康唑;2个化合物对红色毛癣菌的活性优于氟康唑。结论脂水分配系数和立体化学因素的改变对该类化合物体外抑菌活性有较大影响。     

肉桂醛对烟曲霉菌体外生物膜的影响

目的：探讨肉桂醛对烟曲霉菌生物膜（BF）的体外作用。方法体外建立烟曲霉菌BF ;采用2倍稀释法测定肉桂醛的最低抑菌浓度（MIC）;结晶紫法评价不同浓度的肉桂醛对烟曲霉菌BF的影响;扫描电镜观察BF的形态学变化。结果烟曲霉菌可在体外形成生物膜;肉桂醛对受试烟曲霉菌的 M IC为256μg／m L ;在1 M IC、1／2 M IC、1／4 M IC 时,生物膜量分别为0．81±0．11、1．13±0．18和1．59±0．11,与阳性对照组（2．18±0．15）相比,差异有统计学意义（ P＜0．05）;电镜下可见肉桂醛作用后生物膜结构变稀疏松散。结论肉桂醛对烟曲霉菌具有抗菌活性,亚抑菌浓度的肉桂醛对生物膜具有一定的破坏作用,其中浓度越高作用越强。