细胞凋亡相关因子与急性呼吸窘迫综合征的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)发病机制尚不明确，可能与炎症反应、氧化/抗氧化失调有关。细胞凋亡逐渐成为本学科研究的重点。细胞凋亡的调控主要是Bcl-2、Bax以及Caspase-3蛋白，通过检测ARDS患者体内相关蛋白的表达，可以对其发病机制进行研究和探讨。本文查阅相关文献，从Bcl-2及其同源体促凋亡的Bax基因及凋亡通路因子Caspase-3进行综述，阐明与ARDS的相互关系。     

肿瘤坏死因子α诱导早孕原代培养细胞滋养细胞的凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对早孕细胞滋养细胞凋亡的影响.方法 选取正常妊娠早孕（7～9周）绒毛,采用Percoll梯度离心法提取细胞滋养细胞进行原代培养.A组6孔培养皿分别加入10 μL PBS,10 μg/mL,100 μg/mL TNF-a,B组双孔对照.24 h后分别收集细胞使用RT-PCR方法测定Bax和Bcl-2的表达.并使用TUNEL方法测定细胞凋亡数目.结果 A组与B组相比,TNF-α可以明显增加Bax的表达（P〈0.05）,并呈剂量相关性.TUNEL方法测定显示：与B组相比,A组凋亡细胞数明显增加（P〈0.05）.结论 TNF-α可以诱导早孕细胞滋养细胞的凋亡.     

抗肿瘤坏死因子单克隆抗体对兔创伤性急性呼吸窘迫综合征的保护作用

通过胸部创伤加静脉注射脂多糖(LPS)建立兔急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型。探讨创伤伴感染时肿瘤坏死因子(TNF)和白介素8(IL-8)在ARDS中的作用及抗TNF单抗(TNF-MAb)的保护效果。结果发现:实验模型组实验后呼吸困难,PaO_2下降,两肺出血水肿以及血浆和支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF和IL-8升高明显,病变最重;并发现心、肝、肾等远隔器官有炎性改变,达到了建立创伤性ARDS动物模型要求,亦表明创伤后ARDS不是单一的肺损伤,而是多器官衰竭(MOF)的一个重要组成部分。TNF和IL-8作为重要炎性介质参与了创伤性ARDS发病过程,起了协同作用。胸部创伤后,给LPS之前静注TNF-MAb,TNF和IL-8峰值明显下降,肺、心、肝、肾组织病理变化亦明显减轻,提示TNF-MAb对创伤性ARDS具有良好的保护作用。     

急性呼吸窘迫综合征患儿血清TNF-α和IL-6水平检测的临床意义

目的观察急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)的变化,探讨其临床意义。方法以90例ARDS患儿和45例健康对照组为研究对象,根据2012年ARDS柏林标准以病情严重程度将患儿分为轻、中、重三组,采用酶联免疫吸附实验方法(ELISA)测定各组血清TNF-α和IL-6水平。结果 ARDS组患儿血清TNF-α和IL-6水平均高于健康对照组;重度ARDS组及中度ARDS组患儿血清TNF-α和IL-6水平均高于轻度ARDS组(P<0.05),重度ARDS组患儿血清TNF-α和IL-6水平均高于中度ARDS组(P<0.05)。结论 TNF-α、IL-6在儿童急性呼吸窘迫综合征发病中起重要作用,且与ARDS的发生、发展和严重程度密切相关。     

肿瘤坏死因子和白细胞介素-1基因多态性与急性呼吸窘迫综合征的相关性研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子 (TNF)α、TNFβ、白细胞介素 (IL) 1β和白细胞介素受体拮抗剂 (IL 1ra)基因多态性与急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)易感性及预后的相关性。方法 :以 2 0 0 1～ 2 0 0 2年本院ICU收治的 2 7例ARDS患者为研究对象 ,以正常献血者为对照。提取全血基因组DNA ,应用聚合酶链反应 (PCR )和限制性长度片段多态性 (RFLP)方法检测细胞因子TNFα、TNFβ和IL 1β基因多态性 ,PCR法检测IL 1ra基因内含子 2区多态性区域含有 86bp的同向重复结构可变数 (VN TR)。结果 :与对照组比较 ,ARDS患者TNFα、TNFβ和IL 1β基因型和等位基因频率分布无显著性差异。对照组IL 1ra等位基因A2 的检出率为 7.5 % ,ARDS患者的检出率为 16.7% ,有增高趋势 ,但无显著性差异 (P =0 .0 84)。ARDS存活患者TNFβ等位基因 1的检出率为 47.1% ,显著低于ARDS病死组 ( 80 .0 % ) ,等位基因 1携带者病死的相对危险度为 4.5。但TNFα、TNFβ和IL 1β和IL 1ra的基因型频率在ARDS存活和病死患者之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 结论 :TNFα、IL 1β和IL 1ra基因多态性可能不是决定ARDS发病及预后的主要遗传信息 ,但TNFβ等位基因 1和 2对ARDS预后有影响     

人参皂甙对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的作用及机制探讨

目的：研究人参皂甙Rg1和Rb1对脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞（AM）过度分泌肿瘤坏死因子（TNF－α）的影响,并探讨人参皂甙的作用机制。方法;体外培养小鼠AM,分为对照组、LPS组、RG1 LPS组、Rg1组和Rb1 LPS组,Rb1组。分别收集培养细胞及上清液,测定上清TNF－α水平、上清LPS水平以及细胞中1－κB表达情况。结果：LPS可使AM分泌大量TNF－α（P＜0．01）,并使I－κB表达明显减少（P＜0．01）。Rg1 LPS组与LPS组相比,上清TNF－α水平显著下降（P＜0．01）,细胞内I－κB表达明显增加（P＜0．01）。Rgl LPS组上清游离LPS水平明显高于LPS组（P＜0．05）。Rb1的作用结果与Rg1相似。结论：人参皂甙Rg1和Rb1在体外能抑制AM过量分泌TNF－α,其可能作用机制为通过阻断LPS与AM膜的结合,抑制LPS诱导的细胞内I－κB的低表达,从而使TNF－α的分泌水平下降。     

siRNA抑制小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α的实验研究

0引言肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是由激活的巨噬细胞分泌的炎性细胞因子,虽然TNF-a在免疫反应中起着非常重要的作用,但是当它过度表达和分泌的时候会引起一系列的疾病或病态体征,如中毒性休克、风湿性关节炎、急性坏死性胰腺炎。因此,抑制TNF-a的过度表达和分泌可能成     

油酸致大鼠急性呼吸窘迫综合征过程心肌肿瘤坏死因子α、Bax、Bcl-2动态变化及山莨菪碱的作用

临床研究证实在多器官功能障碍综合征(MODS)的发生发展过程中,肺脏是最易受损伤的靶器官,肺功能损害可导致机体其他器官相继发生功能障碍。据报道,急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是引起心脏在内的其他器官功能障碍的重要原因之一[1],由于心功能障碍在MODS发展过程中占有重要地位,是MODS预后不良的重要标志[2]。因此,改善MODS时的心功能将有利于改善MODS的预后。本实验动态观察了油酸致大鼠ARDS过程中心功能变化及其与心肌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、凋亡相关基因(Bax、Bcl-2)在基因和蛋白水平的表达变化的关系,同时用山莨菪碱(654-2)…     

骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与肿瘤坏死因子α的研究

目的：探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓细胞凋亡及髓内肿瘤坏死因子α（TNFα）水平,初步揭示MDS无效造血机制,方法：采用TUNEL法检测26例MDS及10例正常健康对照组新鲜骨髓单个核细胞（BMMNC）凋亡,RT－PCR探讨…BMMNC中TNFαmRNA表达,ELISA法测定骨髓上清液TNFα蛋白水平。结果：早期MDS（RA＋BM原始细胞＜10％RAEB）患者的骨髓细胞凋亡率明显增加,进展期MDS（BM原始细胞＞10％RAEB＋RAEB－t)骨髓细胞凋亡率与对照组无显著差异,凋亡累及各阶段幼稚粒细胞及有核红细胞。早期MDS细胞凋亡程度与骨髓增殖程度有关。58％（15／26）MDSTNFαmRNA,77%(20/26)MDS髓内TNFα蛋白升高,早期MDS髓内TNFα水平与凋亡呈正相关,并于外周血血红蛋白（Hb）量呈负相关。结论：早期MDS骨髓细胞凋亡增加,随病情演变,凋亡逐渐下降,这可能与异常克隆逃逸凋亡有关。髓内TNFα增加是骨髓细胞发生凋亡的机制之一。α     

缺氧诱导因子-1与急性呼吸窘迫综合征的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是临床上常见的急危重症之一,主要由严重感染、创伤、休克和误吸等多种原因引起,以肺泡毛细血管膜损伤导致的肺水肿、肺内微血栓形成和炎性细胞浸润为主要病理改变,以呼吸窘迫和顽固低氧血症为主要临床表现特征的综合征.     

肿瘤坏死因子-α致体外肝细胞凋亡效应的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对HepG2细胞的致凋亡作用.方法 利用HepG2细胞作为体外肝细胞模型,HepG2细胞经TNF-α(400U/ml)作用12、24、48 h后,分别测定培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量.选择TNF-α作用24 h的细胞,电镜观察细胞形态,检测DNA 梯形条带,采用原位末端标记技术(TUNEL)、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 TNF-α作用24 h后,培养上清中LDH轻度增高;电镜观察发现部分细胞出现典型的细胞凋亡形态改变;细胞内片段化DNA经琼脂糖凝胶电泳后出现了典型的DNA 梯形条带;TUNEL法绝大多数细胞核呈棕褐色阳性染色,而对照组无阳性染色;用Apo2.7抗体标记凋亡细胞后经流式细胞仪检测,阳性比例达98.37%,而对照组阳性比例为16.52%.结论 TNF-α可引起HepG2细胞凋亡.     

MicroRNA-34a在脂多糖诱导急性呼吸窘迫综合征中的表达及作用机制

目的：探讨microRNA-34a（miR-34a）在脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）中表达的意义及作用机制。方法：40只雄性SD大鼠随机分为5组：对照组,腹腔注射10 mg/kg LPS 3、6、12、24 h组,人肺泡Ⅱ型上皮细胞株（A549）分为5组：对照组,10 μg/mL LPS刺激3、6、12、24 h组。在A549细胞中转染miR-34a inhibitor,24 h后加入10 μg/mL LPS,再刺激24 h。测定肺湿/干重值,观察肺组织病理学改变,实时荧光定量PCR（quan－titative real-time PCR,qRT-PCR）检测肺组织及细胞miR-34a表达,ELISA检测肺组织及细胞肿瘤坏死因子－α（tumor necrosis factor－α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）浓度,Western blot检测细胞磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-AKT）的蛋白表达。结果：实验组肺湿/干重值较对照组明显升高。苏木素-伊红（HE）染色显示实验组肺组织肺泡间隔增厚,肺泡腔内有粉红色水肿液,肺间质炎性细胞浸润及出血。miR-34a表达在实验组的各个时间点较对照组升高,TNF-α、IL-1β浓度在实验组的各个时间点较对照组升高,miR-34a表达与TNF-α、IL-1β浓度呈正相关。PI3K、p-AKT蛋白表达在实验组的各个时间点较对照组升高。转染miR-34a inhibitor能够明显下调LPS作用于A549细胞后TNF-α、IL-1β浓度及PI3K、p-AKT蛋白表达。结论：miR-34a可能通过抑制PI3K/AKT通路减轻LPS诱导的肺组织损伤,为ARDS的治疗提供新的靶点。     

中性粒细胞凋亡与急性呼吸窘迫综合征

急性呼吸窘迫综合征 (ａｄｕｌｔｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｔｒｅｓｓｓｙｎｄｒｏｍｅ ,ＡＲＤＳ)始因多样 ,且互不相关 ,但引起的肺损伤却完全一致。尽管近年来对急性肺损伤支持治疗有了长足的进步 ,但ＡＲＤＳ的发生未见减少[1 ] 。中性粒细胞 (ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒｎｅｕｔｒｏ ｐｈｉｌｓ ,ＰＭＮ)是ＡＲＤＳ发生、发展的关键细胞[2 ] ,ＰＭＮ如何消散在一定程度上决定着ＡＲＤＳ患者的转归。从细胞动力学和分子生物学角度探讨ＰＭＮ与ＡＲＤＳ的关系是近年来研究的热点之一。细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)不仅在…     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与死亡受体结合后,可启动凋亡信号的转导。它对肿瘤细胞的高效杀伤作用使其成为最具有潜力的肿瘤治疗药物,但在TRAIL的研究领域中仍然存在许多热点问题有待解决。本文综述了近年来TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的胞内机制、抗肿瘤活性及安全性问题的研究进展。     

组织蛋白酶B促进肿瘤坏死因子α诱导的血管平滑肌细胞凋亡

目的 以肿瘤坏死因子α/放线菌素(TNF-α/act D)诱导细胞凋亡作为一种血管平滑肌细胞损伤模型,探讨组织蛋白酶B在TNF-α/act D诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用.方法 通过脂质体转染人主动脉平滑肌细胞株pcDNA3.1-组织蛋白酶B和pSilencer 2.1-组织蛋白酶B质粒,经过筛选鉴定建立组织蛋白酶B过表达组与基因沉默组,以TNF-α/act D诱导人主动脉平滑肌细胞凋亡,分别从细胞活性分析,形态学观察及凋亡蛋白检测细胞凋亡情况,并在组织蛋白酶B过表达细胞中加入组织蛋白酶抑制剂(E64d)和组织蛋白酶B特异性抑制剂(CA-074ME),观察细胞活性改变.结果 噻唑蓝分析正常培养条件下组织蛋白酶B过表达组、基因沉默组细胞活性和对照组无明显差别;经TNF-α/act D诱导后细胞活性明显降低,与对照组(14.60%±1.34%)比较,过表达组(9.98%±1.04%)明显下降,加入E64d、CA-074ME组(18.23%±1.05%,17.40%±1.03%)较过表达组活性增加;基因沉默组(21.30%±2.37%)活性增加;吖啶橙/溴化乙啶染色分析得到相似结果;Western印迹Bcl-2蛋白表达,基因沉默组显著高于对照组,而过表达组水平明显低于对照组,E64d、CA-074ME组的水平均明显高于过表达组.Bax蛋白表达在各组间差异无统计学意义.结论 过表达组织蛋白酶B能够促进TNF-α诱导的血管平滑肌细胞凋亡,而组织蛋白酶B基因沉默以及加入组织蛋白酶抑制剂可以抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞凋亡.

Abstract：

Objective To establish the cathepsin B over-expression group and cathepsin B genesilencing group so as to investigate whether cathepsin B was capable of promoting the apoptosis of VSMC (vascular smooth muscle cell) induced by TNF-α/act D.Methods Human aortic smooth muscle cell (HA-VSMC) was transfected with pcDNA3.1-cathepsin B and pSilencer2.1-cathepsin B plasmids by lipofection to establish the over-expression and gene-silencing groups.Through TNF-α induced apoptosis,the cell viability was observed by MTT assay,morphological observation and assays of apoptotic proteins as indicators of apoptosis.Results The cathepsin B over-expression and gene-silencing group were successfully established.MTT assay showed no significant difference between the transfected cell and blank control.After the intervention of TNF-α,the HA-VSMC viability decreased significantly.As compared with control group,the over-expression group significantly decreased (9.98% ± 1.04 % vs 14.60% ± 1.34% ).As compared with the over-expression group,the E64d and CA-074ME groups (18.23% ± 1.05%,17.40% ± 1.03% ) increased significantly while the silent group ( 21.30% ± 2.37% ) significantly increased.The analysis of acridine orange/ethidium bromide staining showed similar results.Western blot showed the Bcl-2 protein were significantly higher in the silent group than that in the control group.And the over-expression group was significantly lower than the control group.The E64d and CA-074ME groups were significantly higher than that in the over-expression group.But the Bax protein level had no significant difference among all groups.Conclusion The over-expression of cathepsin B promotes TNF-α-induced VSMC apoptosis while Cathepsin B gene silencing and the addition of cathepsin inhibitor in over-expression group inhibit the TNF-α induced VSMC apoptosis.     

过热对脂多糖介导的大鼠急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的影响

目的研究过热对脂多糖(LPS)介导的大鼠急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)的影响.方法雄性SPF级Wistar大鼠随机分为常温生理盐水组(C组),高温生理盐水组(H组),常温脂多糖组(L组),高温脂多糖组(HL组).持续描计动物直肠温度(Tr),并检测动物应激0,40,80,120min时血浆TNF-α,IL-6含量,动脉血气,血浆肺湿质量/干质量比值(W/D)以及肺病理改变.结果①HL组Tr上升到(43.04±0.11)℃,与C组,L组之间存在显著性差异(P<0.01),与H组之间不存在显著性差异(P>0.05);②HL组动物血浆TNF-α峰值(80min)及IL-6表达水平显著升高(P<0.01);③HL组HCO3-,PaCO2于致伤40min时即出现显著下降(P<0.01),致伤120min时分别为(10.42±1.06)mmol/L,(2.82±0.81)kPa;④HL组动物W/D显著性升高(P<0.05);肺急性微血管损伤有病理学改变.结论过热应激能够加重LPS介导的大鼠ALI/ARDS.     

急性呼吸窘迫综合征的探讨

急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是指严重感染、创伤、休克等肺内外疾病后出现的以肺泡毛细血管损伤为主要表现的临床综合征，是急性肺损伤（acute lung injury，ALI）的严重阶段或类型。其临床特征为呼吸频速和窘迫，进行性低氧血症。1972年Ashbaugh提出成人呼吸窘迫综合征的命名。     

脂多糖激活p38在诱导肿瘤坏死因子α基因表达中的作用

目的探讨防治内毒素休克的新方法,研究脂多糖（ＬＰＳ）诱导肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）表达的分子机制。方法用蛋白激酶活性测定检测ＬＰＳ刺激引起的激酶活性变化;共聚焦激光扫描技术显示ｐ３８激活移位;用反转录聚合酶链反应和报告基因系统研究ＴＮＦα基因转录的分子机制。结果发现ＬＰＳ刺激ＲＡＷ细胞引起ｐ３８激活并由胞浆移位至胞核。ＬＰＳ刺激引起ＴＮＦαｍＲＮＡ表达增加,而且由ＬＰＳ引起的ＴＮＦα的转录活性可被ｐ３８特异性抑制剂所抑制。结论激活的ｐ３８通过磷酸化转录因子增加ＴＮＦα基因转录活性,这是中毒性休克时ＴＮＦα生成增加的一个重要机制。ｐ３８是ＬＰＳ诱导ＴＮＦα基因表达的重要调节物质。     

儿童急性呼吸窘迫综合征患儿血清肿瘤坏死因子-α与白细胞介素-1β白细胞介素-6表达水平分析

目的探讨儿童急性呼吸窘迫综合征患者血清肿瘤坏死因子(TNF)-α与白细胞介素(IL)-1β、IL-6表达水平。方法选取2016年5月至2018年10月在我院就诊的儿童急性呼吸窘迫综合征患儿60例为观察组,另选取同期在我院接受检查的非呼吸窘迫综合征患儿30例为对照组,均行血清TNF-α、IL-1β及IL-6检测,对比2组及不同病情患者血清TNF-α、IL-1β及IL-6水平。结果相较于对照组,观察组血清IL-1β、IL-6及TNF-α水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05);观察组中重度患儿血清TNF-α、IL-1β及IL-6水平大于中度患儿大于轻度患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童急性呼吸窘迫综合征患儿血清TNF-α、IL-1β及IL-6水平明显升高,且随着患儿病情加重,其水平越高。     

肿瘤坏死因子在急性胰腺炎并发ARDS中的作用研究进展

肿瘤坏死因子在急性胰腺炎并发ＡＲＤＳ中的作用研究进展谷俊朝秦兆寅（审校）重症急性胰腺炎可并发多种肺损害，其中约２０％患者出现ＡＲＤＳ（急性呼吸窘迫综合征），死亡率高，尚缺乏有效的治疗。近年来，炎症介质，特别是细胞因子在急性胰腺炎（ＡＰ）并发ＡＲＤＳ发...