使用中和法的反向间接血凝试验检测乙型肝炎e抗原

我们曾报道用抗HBe IgG致敏的双醛固定的羊红细胞,通过反向间接血凝试验(RPHA法)检测乙型肝炎e抗原(HBeAg)。试验中用正常人IgG致敏红细胞作对照,以排除样品中非特异性凝集(包括抗IgG的干拢)(上海医学,4(11):31,1981)。本文进一步改用中和法检测HBeAg,这样既保证了试验的特异性,也提高了试验的重复性。现介绍如下:     

应用聚乙二醇改进的间接血凝试验检测单克隆抗体(摘要)

本文采用硷化乙醇法制备霍乱弧菌稻叶型“35A_3”O抗原,用以致敏醛化红细胞。临用前加入3％聚乙二醇(PEG)、56℃灭活的正常兔血清及绵羊红细胞膜配成间接血凝应用液,以检测杂交瘤产生的抗霍乱弧菌菌体抗原的单克隆抗体。在细胞培养上清和小鼠腹水抗体的检测中,其灵敏度比经典的醛化致敏血球提高4～8倍。我们还同时观察到:含菌数     

单克隆抗体夹心反向被动血凝试验用于HBsAg亚型分析

单克隆抗体(McAb)是一种只针对某一抗原表位(或决定簇)的高度特异性的抗体,因此具有很大的实用价值。但当其针对的抗原表位在抗原分子表面重复性较低时,则与相应的McAb便不出现沉淀或凝集等可见的二级反应,因而限制了它的使用。本文通过以两种McAb分别包被和致敏血球,建立了一种McAb夹心RPHA试验,可使原来不出现凝集反应的抗HBsAg-d McAb成功     

反向被动血凝改良一步法检测HBsAg

<正> 反向被动血凝法(RPHA)检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)具有灵敏、快速、简便等优点。为了避免非特异性凝集反应,通常采取中和抑制试验作为对照,测定时间需2～3小时,包括两段保温时间,加抗体后保温30～60分钟,加致敏红细胞后保温45～120分钟。本文根据抗原抗体特异结合可迅速完成     

亲和层析一步纯化IgM类单克隆抗体

本文介绍采用兔抗鼠IgM血清制备的亲和层析柱从小鼠腹水中一步提纯单克隆抗体IgM的方法。提纯的IgM应用琼脂糖电泳检测,为一个区带;应用还原条件下的SDS—PAGE检测,分离为分子量～80K的重链和～25K的轻链两条区带,几未见其他杂带;应用免疫印染法鉴别,进一步确证为IgM,不含常见的杂质IgG。实验过程还发现提纯的IgM不够稳定,在贮存过程有降解现象。另外应用同一亲和柱从吸附IgG后的小鼠血清中提取多克隆抗体IgM的效果也是良好的,经用还原条件下的SDS-PAGE检测,同样也只分离为轻、重链两条区带,未见混有其他杂蛋白。     

亲和层析一步纯化IgM类单克隆抗体

本文介绍采用免抗鼠IgM血清制备的亲和层祈柱从小鼠腹水中一步提纯单克隆抗体IgM的方法。提纯的IgM应用琼脂糖电泳检测，为一个区带；应用还原条件下的SDS—PAGE检测．分离为分子量～80K的重链和～25K的轻链两条区带，几未见其他杂带；应用免疫印染法鉴引．进一步确证为IgM，不合常见的杂质IgG。实验过程还发现提她的IgM不够稳定，在贮存过程有降解现象。另外厘用同一亲和柱从吸附IgG后的小鼠血清中提取多克隆抗体IgM的效果也是良好的，经用还原条件下的SDS—PAGE检测，同样也只分离为轻，重链两条区带，未见混有其他杂蛋白。     

鼠源性IgM类单克隆抗体的纯化方法

本文综述了鼠源性IgM类单克隆抗体(McAb)的纯化方法,并对其进行了比较。(1)聚乙二醇(PEG)沉淀法具有操作简便,适于大批量生产的特点。(2)免疫亲和层析法纯化的单克隆抗体具有良好的免疫活性,其纯度较高。(3)高效液相色谱法(HPLC)具有纯化条件温和,操作时间短,样品纯度高,且对单克隆抗体活性无不良影响的优点;但其设备昂贵,样品处理量相对较少。在实际应用中,可根据不同用途来选择纯化方法,获得理想的单克隆抗体。     

纯化小鼠IgM腹水单克隆抗体方法的探索

IgM单克隆抗体的提纯是比较困难的。国内外不少作者采用了不同的提纯方法,本文选用产生IgM单抗的杂交瘤细胞系(PS-1)在BALB/c小鼠腹腔产生的腹水单克隆抗体,摸索并比较了三种提纯方案的效果。     

纯化小鼠IgM腹水单克隆抗体方法的探索

本文选用IgM的杂交瘤细胞系(PS-1)在BALB/c小鼠腹腔产生的腹水单克隆抗体,摸索并比较了三种提纯方案的效果。 抗体经低速离心去除纤维蛋白后,分别用盐析、低渗透析和腹水二次过柱三种方案提纯,盐析后的沉淀、低渗透析后的上清和沉淀物以及原腹水,四种样品分别经Sephacryl S-200柱层析(床体积-1.7×ll5cm;洗脱液-0.001MEDTA,0.01M Tris,0.5M NaCl pH=7.4;     

纯化小鼠IgM腹水单克隆抗体方法的探索

本文选用了混有大量IgG的小鼠IgM腹水单克隆抗体(Ps-1)。采取三种不同方案提纯抗体:A、盐析一层析法;B、低渗透析一层析法,即单克隆抗体(McAb)透析后所得的沉淀及上清部份分别层析;C、二次层析法。比较了它们的蛋白得率、免疫活性和纯度。A、B、C方案所得抗体蛋白量分别是0.62,1.43,2.2mg/ml腹水,各占腹水蛋白的3.8％,9.0％,14％。电泳纯度在90％左右,Ig亚型鉴定均是к链的IgM抗体,并与IgG、IgA无交叉。提纯后抗体均保持免疫活性。     

一种敏感的反向杂交／酶促发光检测方法

一种敏感的反向杂交／酶促发光检测方法纪立农，孙继红，王虹，毛腾淑，王申五随着分子生物学的迅速发展，人们已能够用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）及序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＳＳＯＰＨ）方法对许多基因（如ＨＬＡ基因）的多态性进行分析。美国Ｐｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ／...     

一种简易的纯化单克隆抗体方法

<正> 从小鼠腹水中纯化抗体常是单克隆抗体特征鉴定,生产应用中的一个重要步骤。目前最常用的方法为离子交换层析法,但该法既不适于多种细胞及腹水同时纯化鉴定,也不适于大规模生产,且洗脱液中抗体含量较低,常需浓缩后才能使用。近来,Reik M(1987)等报导了正辛酸纯化法。本实验室在从腹水纯化抗HCG单克隆抗体中,用正辛酸法与DEAE柱层析进行对照、分析,结果     

点免疫结合试验和反向间接血凝试验检测粪便中福氏志贺氏菌的研究

采用单克隆抗体作为试剂,建立了两种用于快速检测粪便中福氏痢疾杆菌的方法—DIBA夹心法和RPHA法。长期以来困扰研究者的非特异性干扰问题,可能用煮沸标本上清的方法得到解决。检测114份病人标本的结果证明,用常规培养法检测阳性者,DIBA和RPHA检测均为阳性,两类方法的符合率为86.4％。由此证明两种快速免疫学方法不仅能检出完整的细菌细胞,而且也能检出其裂解产物。这两种方法,尤其是RPHA法具有较高的敏感性、特异性和快速性,且不需复杂的仪器设备,加之实验程序简单,甚适于在基层单位及农村地区应用。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究(简报)

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体对临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT)和免疫酶染色法虽已被广泛应用,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验主要检出IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(Mc Ab)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和IgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

一种快速高效纯化单克隆抗体的方法

我室应用羟磷灰石柱层析法纯化小鼠腹水及培养上清液中的抗羊催乳素单克隆抗体.结果表明这一方法具有操作简单、条件温和.省时高效,适用于大量各类免疫球蛋白单克隆抗体的纯化与制备等优点.其主要过程是以10mM、pH6.8磷酸钠缓冲液     

一种提高单克隆抗体产量的简易方法

采用一种较常规培养法更简便且能提高产量的制备单克隆抗体的方法，即当杂交瘤细胞生长达９０％－９５％单层密度时培养液至瓶颈，加塞置３７℃孵箱直立式孵育８－１０ｄ后收集上清，用ＥＬＩＳＡ法测定单抗效价，结果较常规法产量提高８－１４倍。