丙型肝炎病毒1b型NS3基因扩增方案的改进

目的优化扩增武汉地区HCV1b型患者HCV非结构蛋白3(NS3)的cDNA,并进行测序。方法从患者血清中提取HCVRNA,采用型特异性引物扩增分型法检测HCV患者基因分型。设计3对外侧引物和3对内侧引物,采用套式PCR技术(方案一)分别扩增HCV1b型患者的HCVNS33个区段,然后用3对内侧引物进行测序。为了优化NS3扩增和测序效果和减少操作繁琐,对引物进行改进,设计1对外侧引物和1对内侧引物,采用改进的套式PCR技术(方案二)直接扩增HCV1b型患者的HCVNS3区,然后用3个正向引物和1个逆向引物进行测序。结果改进的套式PCR技术(方案二)与套式PCR技术(方案一)相比,操作较为简单,而且扩增效率增高,扩增效果较好。结论采用改进的套式PCR技术(方案二)扩增和测序HCVNS3区更迅速、有效、实用。     

环介导等温扩增技术及其应用

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种新型的体外核酸扩增技术,在等温条件下,利用一种具有自动链置换活性的Bst DNA聚合酶和一组特异性引物,对靶DNA序列进行快速扩增,1 h左右可合成109～1010拷贝的靶DNA序列.LAMP技术具有简便、快速、扩增效率和特异性高等特点,近年来该技术广泛应用于病原菌、病毒等病原体的快速分子检测.该文详细介绍LAMP的原理、引物设计及其在微生物分子检测方面的应用.     

实时均相PCR技术在肝病科研中的应用

一、技术背景近年发展起来的一种能集扩增与检测于一体的核酸扩增技术,即实时均相PCR技术(real-time homogeneous PCR)。可在单一闭管体系中对靶核酸进行扩增、检测和定量。不仅有传统PCR的优点,且不易受到交叉污染,已在微生物学、分子遗传学、肿瘤学和血液学等领域得到广泛的应用。现就其中的相关技术以及在肝脏病学中的应用作一介绍。     

LAMP法应用于寄生虫感染检测的研究进展

环介导等温扩增(LAMP)技术是近年来发展迅速的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。与传统PCR方法相比,LAMP技术属于等温扩增,无需昂贵的热循环仪,并且由于LAMP反应中产生大量的副产物-白色焦磷酸镁沉淀,扩增产物可不经过电泳,无需开盖直接通过肉眼观察即可判定结果,在反应前、后加入染色剂效果更佳。LAMP技术敏感性高、特异性强、操作简便,能够满足现场和条件较差的基层实验室进行快速检测的需求。近年来LAMP技术在寄生虫感染检测中应用广泛,本文对其研究进展进行了综述。     

核酸检测技术对日本血吸虫病诊断价值的meta分析

目的　应用诊断试验meta分析,定量评价核酸检测中变温和等温扩增技术对日本血吸虫病的诊断价值。方法　通过计算机检索1990年1月-2019年6月中国知网、万方数据知识服务平台、PubMed数据库和ScienceDirect数据库中公开发表的日本血吸虫病核酸检测相关文献,手工查阅《血吸虫病研究资料汇编》及论文集等纸质出版物,并以文献追溯法对相关文献引文进行追溯查找。按照纳入与排除标准对检索的文献进行筛选,提取纳入文献相关数据,采用RevMan 5.3软件对入选文献进行质量评价,采用MetaDiSc 1.4软件对数据进行meta分析。结果　最终纳入19篇文献,其中中文文献5篇、英文文献14篇;共24组研究,其中17组研究涉及变温扩增技术与金标准的比较、7组研究涉及等温扩增技术与金标准的比较。文献质量评价结果表明,所纳入文献总体偏倚较小;Deek漏斗图提示变温扩增技术相关文献可能存在发表偏倚。变温扩增技术相关研究间存在非阈值效应引起的异质性,故采用随机效应模型合并效应量;合并分析结果示,其检测日本血吸虫病的综合灵敏度为0.81（0.79,0.83）、特异度为0.73（0.71,0.74）、SROC曲线下面积为0.944 3。等温扩增技术相关研究间不存在异质性,故使用固定效应模型进行效应量合并;合并分析结果显示,其检测日本血吸虫病的综合灵敏度为0.96（0.94,0.98）、特异度为0.95（0.94,0.97）、SROC曲线下面积为0.989 9。结论　变温扩增技术和等温扩增技术对日本血吸虫病均有较高诊断价值,等温扩增技术诊断准确性相对更高。     

安徽省3种常见蜚蠊基因组多态性DNA的研究

目的研究随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,用于蜚蠊分子分类。方法提取3种蜚蠊的基因组DNA,鉴定及定量分析。确定RAPD反应总体积、反应条件。选取3条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物,进行PRPD-PCR扩增反应。将扩增产物制备成DNA图谱,通过对DNA图谱和遗传距离的分析,研究这3种蜚蠊基因组DNA的多态性。结果分别扩增出不同数量和分子大小的DNA片段。3种蜚蠊基因组DNA扩增产物中具有相同的DNA条带,这反映了各蜚蠊基因组DNA具有同源性;3种蜚蠊基因组DNA扩增产物又具有各种独特的DNA条带,DNA条带亮度也有差别。结论 RAPD技术简便、快速、精确,可用于蜚蠊分子生物学分类。     

用RAPD-PCR扩增DNA多态性进行埃及伊蚊亚种和种群的鉴定

随机复制多样性DNA聚合酶链反应(RAPD-PCR)是以单一的、含10个碱基序列的随机引物体外扩增基因组DNA的随机片段,用以研究基因多态性。此技术快速、简易、不需了解基因背景。本研究用RAPD-PCR技术扩增埃及伊蚊基因组DNA,用统计学方法分析扩增的基因片段,通过基因分析进行亚种和种群的鉴定。     

多重置换扩增在地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用

多重置换扩增(MDA)技术作为一种全新的全基因组扩增技术,为单细胞的后续检测提供了足够和稳定的DNA,在地中海贫血植入前遗传学诊断的实验研究和临床应用中取得了较大进展。该文就MDA的原理、技术特点及其在地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用研究进展进行综述。     

环介导等温扩增技术及其在病原生物检测中的应用北大核心CSCD

环介导等温扩增(LAMP)技术是近年来发展起来的一种新型核酸扩增技术,具有操作简便、快速、特异性高、灵敏性高等特点,自2000年开发以来,在短短的十几年内被广泛应用于细菌、病毒和寄生虫等病原生物的检测,在即时检验和基层实验室推广中有重要意义。     

等温扩增技术在寄生虫及其他病原体检测中的应用

以聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction, PCR）为基础的体外核酸扩增技术已成功应用于科学研究各方面。近年来等温扩增技术（Isothermal amplification technology）凭借恒温、高效、耗时短、不过分依赖设备仪器等优点越来越多地被应用于分子诊断及疾病检测中。本文对现有的部分等温扩增技术原理、特点以及在寄生虫病病原体及其他病原体检测方面的应用进行综述,并展望其应用前景。     

PCR-RAPD技术在医学蠕虫研究中的应用进展

PCR-RAPD技术是建立在PCR基础上的一种随机引物扩增技术,已广泛应用于种系鉴定、遗传分析、连锁图的构建、疾病诊断和基因分离等众多领域。近年来该技术在寄生虫研究中应用较广,本文介绍了国内外有关吸虫、绦虫和线虫等蠕虫方面的应用报道。     

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for malarial parasites of humans: Would it come to clinical reality as a point-of-care test?

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is a novel molecular method that accelerates and facilitates DNA amplification and detection under isothermal conditions. It represents a revolution in molecular biology by reducing the high cost, turnaround time and technicality of polymerase chain reaction and other amplification methods. It has been applied for the diagnosis of a variety of viral, bacterial, parasitic and other diseases in the biomedical field. LAMP has been involved in studies concerning the diagnosis of malaria which is still a major cause of morbidity and mortality in different parts of the world. For the success attained with this technology to diagnose human malaria, is it time to think that LAMP-based point-of-care diagnostics come to application to support the diagnosis of clinical malaria cases? The present review deals with the use of LAMP in the diagnosis of malaria and related investigations to make a view on what has been investigated and highlights the future perspectives regarding the possible applications of LAMP in diagnosis of the disease.     

环介导等温扩增技术在寄生虫检测中的应用进展

环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术是近年来发展起来的一种分子生物学检测方法,具有简便快捷、敏感特异、实用等优点,并已在人体和动物寄生虫检测领域中得到广泛应用,本文主要就 LAMP 技术在原虫、吸虫、线虫、绦虫等寄生虫检测中的应用进行介绍。     

结核病分子生物学检测技术研究进展

随着医学科学技术的不断发展,特别是精准诊疗时代的来临,分子生物学检测技术在结核病早期诊断辅助方面受到广泛重视和应用。分子生物学检测技术具有准确、高效、高通量等优点,为结核病的诊疗及疫情的防控带来了新曙光。本文中,笔者综合国内外学者研究成果,阐述了基于核酸扩增试验技术、核酸分子杂交技术、基因测序的结核病检测及药物敏感性分析技术和其他新型结核病检测技术的应用现状及其最新研究进展,以期为结核病的辅助诊断提供参考。     

LAMP技术在动物病毒病原检测中的应用进展

环介导等温扩增技术(LAMP)是一种具有简单、快速、特异性强和扩增效率高的核酸检测技术,目前已在食品、卫生及疾病预防控制检验等领域得到了诸多应用。本文主要介绍了LAMP技术在实验及临床过程中检测肝炎病毒、流感病毒、HIV-1、狂犬病毒、乙脑病毒、冠状病毒、登革病毒等病毒病原感染的应用进展。     

Microarray technology: the future of blood testing?

The increasing pace of development in molecular biological techniques during the last 10-15 years has had a direct effect on mass testing and diagnostic applications, including blood screening. Nucleic acid amplification techniques (NAT), usually based on the polymerase chain reaction (PCR), have been successfully applied to blood grouping and implemented recently in screening of blood donations for hepatitis C virus (HCV). The majority of microarray technologies involve an amplification step, yet the main benefits of this technology come from simultaneous analysis of thousands of analytes. Microarrays were developed to utilize the huge amount of information provided by genome projects, but they have clear potential in mass screening and diagnostics. The application of microarray technology may revolutionize blood testing, providing for the first time the prospect of an integrated platform for comprehensive donor and donation testing, replacing multiple individual assays. Design features of a blood-testing chip and various technologies with potential application in this field are discussed in this review.     

Amplification of an ancestral mammalian L1 family of long interspersed repeated DNA occurred just before the murine radiation.

Each mammalian genus examined so far contains 50,000-100,000 members of an L1 (LINE 1) family of long interspersed repeated DNA elements. Current knowledge on the evolution of L1 families presents a paradox because, although L1 families have been in mammalian genomes since before the mammalian radiation approximately 80 million years ago, most members of the L1 families are only a few million years old. Accordingly it has been suggested either that the extensive amplification that characterizes present-day L1 families did not occur in the past or that old members were removed as new ones were generated. However, we show here that an ancestral rodent L1 family was extensively amplified approximately 10 million years ago and that the relics (approximately 60,000 copies) of this amplification have persisted in modern murine genomes (Old World rats and mice). This amplification occurred just before the divergence of modern murine genera from their common ancestor and identifies the murine node in the lineage of modern muroid rodents. Our results suggest that repeated amplification of L1 elements is a feature of the evolution of mammalian genomes and that ancestral amplification events could provide a useful tool for determining mammalian lineages.     

核酸扩增技术在淋球菌检测中的研究进展

淋病是一种性传播疾病,其病原体是淋球菌。淋球菌主要寄生于人体尿道粘膜,导致人类泌尿生殖系感染。及时、准确地诊断淋球菌感染是控制淋病传播的关键,核酸扩增检测技术对淋球菌的临床确诊及治疗有重大意义。本文综述了核酸扩增技术在淋球菌检测中的应用进展。