siRNA沉默Drp1对鱼藤酮诱导的帕金森病模型细胞自噬和凋亡的影响

目的探究siRNA沉默动力相关蛋白1(Drp1)后对鱼藤酮诱导的帕金森病模型细胞自噬以及细胞凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,用1μm、5μm、10μm、20μm鱼藤酮进行处理24 h、48 h,MTT法检测细胞抑制情况。将细胞分为鱼藤酮最佳浓度处理组(20μm鱼藤酮处理,损伤组)、阴性转染组(损伤组基础上转染Drp1阴性序列)、Drp1siRNA处理组(损伤组基础上转染Drp1 siRNA)、Drp1抑制剂组(损伤组基础上添加Mdivi-1试剂)、自噬促进剂组(损伤组基础上添加雷帕霉素)。观察各组线粒体自噬情况、细胞线粒体功能相关蛋白(Mfn2、Drp1、NRF1)、自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3、P62)、凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)表达情况和细胞凋亡情况。结果与对照组相比,鱼藤酮处理组细胞抑制率均升高,随着浓度以及培养时间的增加,细胞抑制率逐渐增加(P0.05)。损伤组、阴性转染组、自噬促进剂组LC3II定位在细胞线粒体,且细胞线粒体结构受损,外周出现自噬双层膜。与Drp1 siRNA转染组、Drp1抑制剂组相比,损伤组、阴性转染组、自噬促进剂组Drp1、LC3II、Beclin-1、Bax蛋白表达和细胞凋亡率升高,Mfn2、NRF1、P62、Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。结论 Drp1参与鱼藤酮诱导帕金森病细胞线粒体自噬,沉默Drp1后可降低鱼藤酮诱导帕金森病细胞线粒体自噬以及细胞凋亡,具有保护作用。     

肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的影响

目的探讨肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1(hepatocyte growth factor activator inhibitor-1, HAI-1)基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的机制。方法对数生长期HeLa细胞分为转染组和对照组,转染组转染HAI-1质粒,对照组细胞正常培养。采用实时荧光定量PCR法检测2组细胞HAI-1 mRNA表达情况,采用AO染色和流式细胞术检测2组细胞自噬情况,采用ELISA检测2组细胞自噬相关因子LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和Beclin-1蛋白水平,应用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率,采用Western blot法检测细胞Bax和Bcl-2蛋白相对表达量。结果转染组细胞HAI-1 mRNA相对表达量(1.57±0.26)、AO细胞荧光强度(52.14±3.88)、LC3-Ⅱ蛋白[(3.42±0.85)μg/L]、Beclin-1蛋白[(14.69±1.96)μg/L]水平、细胞凋亡率[(86.75±6.42)%]、Bax蛋白相对表达量(1.24±0.13)和Bax/Bcl-2(7.75±0.83)高于对照组[0.48±0.09、5.47±0.32、(1.10±0.22)μg/L、(10.12±0.53)μg/L、(12.64±1.33)%、0.25±0.06、0.17±0.05)](P0.05),LC3-Ⅰ蛋白水平[(0.59±0.11)μg/L]、Bcl-2蛋白相对表达量(0.16±0.04)低于对照组[(3.26±0.82)μg/L、1.47±0.15](P0.05)。结论 HAI-1转染通过增加HeLa细胞中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,降低LC3-Ⅰ蛋白表达,提高Bax/Bcl-2来调节宫颈癌细胞的自噬和凋亡。     

OTUB1基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞凋亡及STAT3信号通路的影响研究

目的探讨卵巢肿瘤相关蛋白酶B1(OTUB1)基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞活力、凋亡及STAT3信号通路的影响。方法 Western blotting检测OTUB1在人脑恶性胶质瘤U251、U87、BT325和M17细胞中的蛋白表达;U87细胞分为空白组(不做任何处理)、NC组(转染Control siRNA)和si-OTUB1组(转染OTUB1 siRNA),参照Lip2000转染试剂盒说明转染siRNA。Western blotting检测转染OTUB1-siRNA后OTUB1的蛋白表达,并选择抑制效果好的siRNA作为研究对象;MTT检测OTUB1-siRNA转染后的24~72 h细胞活力;流式细胞仪检测OTUB1-siRNA转染的48 h细胞凋亡率;Western blotting检测STAT3、磷酸化的STAT3及STAT3信号通路下游相关基因cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达。结果 OTUB1在U251、U87、BT325和M17细胞中均呈现出阳性表达,在U87细胞中呈现出较高水平表达;OTUB1-siRNA转染后的U87细胞OTUB1的蛋白表达显著低于空白组和NC组(P0.05);与NC组比较,si-OTUB1转染U87细胞24-72h的细胞活力均显著降低,转染48 h的细胞凋亡率显著升高,p-STAT3、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达均显著降低(P0.05),而三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 OTUB1在人脑恶性胶质瘤细胞高表达,抑制OTUB1表达后可明显降低脑胶质瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,机制可能是通过下调STAT3信号通路实现的。     

特定沉默胶质瘤U251细胞株的PDGF-B基因对细胞凋亡和增殖的影响研究

目的利用RNA干扰基因治疗技术,特定沉默胶质瘤U251细胞株的血小板衍生生长因子B(PDGF-B)基因,观察其对U251细胞株细胞凋亡和增殖的影响。方法用血清培养液(含10%胎牛血清DMEM培养基)体外培养人U251脑胶质瘤细胞系。随机分为3组,第1组为实验组:转染siRNA的细胞,第2组为阴性对照组:转染空白质粒的细胞;第3组为空白对照组:细胞常规培养不予以干预。利用脂质体将siRNA转染进入U251细胞,在细胞内形成双链siRNA,识别并降解PDGF-B mRNA。通过RT-PCR检测U251细胞中PDGF-B基因mRNA的表达水平,Western blot检测PDGF-B的蛋白表达,MTT法检测U251细胞的增殖情况,流式细胞学对比检测3组细胞的凋亡情况。结果利用脂质体将靶向PDGF-B基因siRNA转染进入U251细胞,48 h后利用RT-PCR检测PDGF-B基因mRNA的表达,结果显示与阴性对照组和空白对照组对比,转染组PDGF-B基因mRNA表达水平明显下降;转染72 h后,Western blot检测显示siRNA转染组PDGF-B蛋白表达明显抑制(抑制率60%);MTT结果显示siRNA转染组U25细胞增殖较对照组明显降低;流式细胞学检测显示,与阴性对照组和空对照组相比,转染siRNA的细胞的实验组中,G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,提示降低PDGF-B在胶质瘤细胞的表达,能够使细胞周期阻滞在G1期,从而抑制胶质瘤细胞的增殖,并促进细胞的凋亡。结论构建靶向胶质瘤细胞PDGF-B的RNA干扰质粒并转染人胶质瘤U251细胞株后,通过体外试验观察可明显抑制U251细胞株PDGF的表达,其所产生的RNA干扰效应对人胶质瘤U251细胞株有明显的生长的抑制和促进凋亡作用。     

自噬在硼替佐米诱导的肾癌细胞凋亡中作用的研究

目的探讨自噬在硼替佐米诱导的肾癌细胞凋亡中的作用。方法采用MTT检测硼替佐米对人肾癌ACHN细胞增值率的影响;通过Western Blotting检测硼替佐米对人肾癌ACHN细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及自噬相关蛋白LC3表达水平的影响;联用自噬抑制剂3-MA后,MTT检测细胞增殖率,Western Blotting检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达水平。结果硼替佐米对肾癌ACHN细胞的增殖有抑制作用,并且增加人肾癌ACHN细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达水平及自噬相关蛋白LC3表达水平,呈一定的浓度依赖性;联用3-MA可增加硼替佐米诱导的肾癌ACHN细胞的增殖抑制作用,并可增加硼替佐米诱导的肾癌ACHN细胞cleaved caspase-3表达水平。结论硼替佐米可诱导肾癌细胞凋亡并诱导肾癌细胞发生自噬,抑制自噬可以明显增强硼替佐米的肾癌细胞毒作用。     

紫草素对人早幼粒细胞白血病细胞自噬和凋亡的影响

目的：探讨紫草素对人早幼粒细胞白血病细胞自噬和凋亡的影响及可能的机制。方法：取对数生长期的人早幼粒细胞白血病细胞NB4,将其分为对照组（未处理的NB4细胞）、紫草素组（0.3μmol/L紫草素处理）、740Y-P组（15μmol/L PI3K/Akt/m TOR通路激活剂740Y-P处理）、紫草素+740Y-P组（0.3μmol/L紫草素与15μmol/L 740Y-P共同处理）,处理24 h后,用于后续实验,CCK-8法检测各组细胞活力,单丹磺酰戊二酸染色检测细胞自噬囊泡的聚集情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测各组细胞中Beclin1、LC3、p62、Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2及PI3K/Akt/m TOR通路相关蛋白的表达。结果：与对照组比较,紫草素组NB4细胞内紫色点状荧光强度、细胞凋亡率及Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、cleaved caspase-3、Bax蛋白相对表达量升高,OD450值（24、48 h）及Bcl-2、p62蛋白相对表达量降低（均P<0.05）;与对照组比较,740Y-P组NB4细胞内紫色点...     

红景天甙影响SACC-2细胞凋亡途径相关蛋白表达的体外研究

目的探讨不同浓度红景天甙处理对SACC-2细胞凋亡途径相关蛋白表达的影响。方法将SACC-2细胞在含10%胎牛血清的1640培养基中培养,研究分为两组,实验组分别加2.5μg/ml、5μg/ml红景天甙,对照组用生理盐水处理,采用Western Blot实验检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ的表达水平。结果与对照组比较,①2.5μg/ml用药组和5μg/ml用药组BCL-2/bax比值降低;②自噬相关蛋白LC3-Ⅰ表达降低,LC3-Ⅱ表达增高,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值增加。结论红景天甙能通过促进SACC-2的凋亡和上调SACC-2细胞自噬水平来抑制其增殖。     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

自噬调节药物对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的:探讨自噬调节药物包括自噬激活剂(雷帕霉素)、自噬抑制剂(羟氯喹和3-甲基腺嘌呤)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用不同浓度雷帕霉素(RAPA)、羟氯喹(HCQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理RPMI 8226细胞,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术检测药物作用24 h后细胞凋亡率,应用单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬小体数量,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC-3b和凋亡相关蛋白(caspase-3、PARP和BCL-2)的表达情况。结果:RAPA和HCQ可呈时间及剂量依赖性抑制RPMI8226细胞的增殖,并增加细胞的凋亡,而3-MA无明显抑制细胞增殖作用,也无诱导凋亡作用。MDC染色结果显示,细胞内自噬泡数量随着RAPA浓度的提高逐渐增多,而随着HCQ和3-MA浓度升高自噬泡数量却逐渐减少。Western blot结果显示,RAPA可诱导自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和凋亡蛋白caspase-3及PARP表达上调,但抑制抗凋亡蛋白BCL-2表达;HCQ抑制LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和BCL-2表达,但可上调caspase-3和PARP表达;3-MA可下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达,但对caspase-3、PARP及BCL-2表达均未显示明显影响。结论:RAPA能抑制RPMI8226细胞增殖,诱导RPMI8226细胞凋亡和自噬,HCQ则在抑制自噬和增殖的同时也可诱导凋亡,3-MA可抑制细胞自噬但对细胞增殖和凋亡影响不大。     

PKC介导的自噬在肝纤维化中的作用

目的探讨在PKC信号通路介导的自噬在肝纤维化小鼠肝组织中的变化及意义。方法本研究将C57BL/6小鼠随机分为两组:模型组和假手术对照组,其中模型组采用胆管结扎方法诱导小鼠肝纤维化,手术4周后取材。HE染色、Masson染色显示小鼠肝组织纤维化程度;免疫组化检测肝组织内LC3蛋白的表达;Western Blot法检测肝组织中α-SMA、PKCα、p-PKCα和LC3蛋白的表达,最后将人正常肝细胞L02细胞转染PKCαsiRNA后检测LC3蛋白的表达变化并分析二者之间的关系。结果 HE和Masson染色结果显示胆管结扎诱导的肝纤维化模型组有明显的纤维增生。Western Blot结果显示模型组肝组织中α-SMA、PKCα和p-PKCα蛋白表达明显高于对照组(P0.01),而Western Blot和免疫组化结果均显示LC3蛋白的表达则明显降低(P0.05)。最后,L02细胞在转染PKCαsiRNA后显示LC3蛋白表达上调(P0.01)。结论 PKCα信号通路的激活可以抑制自噬的发生,二者的相互作用可能与肝纤维化的发生和发展密切相关。     

RhoE在诱导人脑胶质细胞瘤凋亡中的作用

目的:研究和探讨RhoE在诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用,为胶质瘤分子靶向治疗寻找新的靶点.方法:采用western blotting检测RhoE在人脑胶质瘤细胞系中的表达水平;构建重组pcDNA3.1-RhoE真核表达载体,将质粒快速转染U87细胞,采用四唑盐法检测细胞增殖能力的变化;Hoechst染色法观察细胞核的形态改变;流式细胞术检测细胞凋亡的情况;western blotting分析细胞Bcl-2、Bax表达变化,以及capase-3和NF-kB的活化水平.结果:RhoE蛋白在T98、A172和U87细胞系中表达明显低于正常人脑胶质细胞(P＜0.05);上调RhoE表达后,U87细胞增殖能力明显下降(P＜0.05),并且发生了显著的细胞凋亡改变(P＜ 0.05);western bolt检测显示裂解的caspase-3水平增加,Bcl-2表达水平下降,Bax的表达水平升高,另外,p65在细胞核中的表达降低.结论:RhoE可能通过抑制NF-kB的活性,下调Bcl-2/Bax的比例,从而促进caspase-3的活化,最后诱导U87细胞发生凋亡.     

miR-17-5p通过介导自噬调节胶质瘤U251细胞放射敏感性

目的探究miR-17-5p对胶质瘤U251细胞放射敏感性的影响及其机制。方法经过5Gy X-射线或模拟照射后,实时定量PCR技术检测72h内U251细胞miR-17-5p表达变化。U251细胞转染anti-miR-17-5p(AmiR-17组)和阴性对照(阴性对照组)反义寡核苷酸序列,并设置未转染细胞为空白对照组,实时定量PCR技术检测miR-17-5p表达变化;5Gy X-射线或模拟照射后,CCK8法检测细胞增殖能力;GFP-LC3表达分析检测细胞自噬通量;western bloting检测ATG7蛋白表达。结果 U251细胞在放射后8h内表现出明显的miR-17-5p表达上调,其中照射后4hmiR-17-5p表达明显于高模拟照射组(P=0.001)。转染且5Gy X-射线照射后,AmiR-17组细胞miR-17-5p表达均明显降低(P=0.006);AmiR-17组细胞48h存活率均显著低于空白对照组(P=0.037);AmiR-17组自噬水平明显高于阴性对照组,LC3II/LC3I比值明显高于阴性对照组(P=0.021);AmiR-17组ATG7蛋白明显高于阴性对照组(P=0.003)。结论 miR-17-5p表达能降低胶质瘤U251细胞放射敏感性,其机制与降低细胞自噬水平有关。     

LncRNA NORAD靶向抑制miR-363-3p对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制

目的:探索长链非编码RNA NORAD(lncRNA NORAD)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其与微小RNA-363-3p(miR-363-3p)的靶向关系。方法:RT-qPCR检测健康人成骨细胞h FOB1.19和多发性骨髓瘤细胞U266,LP-1,H929中NORAD和miR-363-3p表达。在U266细胞中转染si-NORAD,或共转染si-NORAD和anti-miR-363-3p,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。star Base软件预测结合双荧光素酶报告实验分析NORAD与miR-363-3p的靶向结合。结果:多发性骨髓瘤细胞系U266,LP-1和H929中NORAD表达明显上调(P0.05),miR-363-3p表达显著下调(P0.05)。沉默NOR A D表达显著降低48,72h的U266细胞活性和c yclin D1,CDK4,Bcl-2蛋白水平(P0.05),明显提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3,Ba x蛋白表达量(P0.05)。NOR AD靶向调控miR-363-3p表达。抑制miR-363-3p表达逆转沉默NOR AD表达对U266细胞增殖、cyclin D1,CDK4和Bcl-2表达的抑制作用,以及逆转沉默NORAD表达对细胞凋亡、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达的促进作用。结论:Lnc RNANOR AD通过靶向miR-363-3p表达影响多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡。     

自噬与乙型肝炎病毒复制的关系

目的：探究自噬与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制之间的相互关系。方法利用 HepG2细胞,转染绿色荧光标记的微管相关蛋白轻链3(GFP-LC3),分别在正常和饥饿条件下培养,另共转染 HBV WT 和GFP-LC3,正常条件培养,免疫荧光观察细胞自噬;分别转染1.3 mer HBV 野生型质粒(HBV WT)与 HBV 突变型(HBV X-)质粒,正常和饥饿两种条件下培养,蛋白印迹检测自噬相关蛋白 LC3和乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)的表达;细胞转染 HBV WT 后,分别正常条件培养(对照组),无血清饥饿培养(饥饿组),加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)培养(3-MA 组),采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎 e 抗原(HBeAg)的含量。结果转染 HBV WT 质粒的细胞内自噬荧光颗粒较对照组明显增加发生自噬的细胞比例分别为13%和2%;饥饿组 HBsAg 含量(1.856±1.415)较对照组(1.531±0.944)升高,HBeAg 含量(0.533±0.391)较对照组(0.334±0.110)升高,差异具有统计学意义(P <0.05);自噬抑制剂组 HBsAg 含量(1.184±0.759)较饥饿组(1.856±1.415)降低,HBeAg 含量(0.306±0.130)较饥饿组(0.533±0.391)降低(P <0.05);蛋白印迹显示,转染HBV WT 质粒的细胞中 LC3蛋白表达较 HBV X-组增高,且在饥饿条件下,HBc 蛋白的表达增高。结论乙型肝炎病毒可诱导细胞自噬的发生,且自噬可促进乙型肝炎病毒的复制。     

血红素氧合酶1对肺上皮细胞自噬和凋亡的影响及机制

目的探讨血红素氧合酶1(HO-1)对肺泡上皮细胞自噬和凋亡的影响及机制。方法采用前瞻性研究体外培养人源肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,利用体外设计合成的小分子RNA(siRNA)沉默A549细胞HO-1基因的表达。实验分为:对照组(Control组)、siRNA-Con空载组(Con组)、HO-1 siRNA沉默组(siRNA组)。Control组不作任何处理,Con组和HO-1 siRNA组分别转染siRNA-Con和HO-1 siRNA 48 h后取样本检测。采用荧光定量PCR(QT PCR)检测HO-1 mRNA水平;采用Western Blot法检测HO-1、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、微管相关蛋白轻链3B(LC-3B)蛋白的表达变化;采用免疫荧光结合荧光显微镜观察各组细胞内HO-1和LC3B表达定位;采用JC-1结合流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位情况。结果与Control组相比,Con组HO-1、LC3B、PI3K蛋白表达,JC-1单体所占比率差异无统计意义(P0.05);与Con组相比,HO-1 siRNA组细胞HO-1、LC-3B、PI3K蛋白表达明显下降(P0.05);HO-1 siRNA组JC-1单体所占百分比升高,早期凋亡细胞增多(P0.01)。结论血红素氧合酶1有介导细胞自噬、下调细胞凋亡的作用,该调节作用可能与PI3K信号通路有关。     

长链非编码RNA HOTAIR靶向miR-1对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探究长链非编码RNA (Long non-coding RNA,LncRNA)HOTAIR对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移能力的作用及机制。方法 RT-PCR检测胶质瘤细胞株U87、U251、U118和LN18中HOTAIR的表达水平和shRNA HOTAIR (sh-HOTAIR)转染U251细胞细胞后HOTAIR和miR-1的表达水平。生物信息预测HOTAIR和miR-1的靶向关系,荧光素酶报告实验验证两者靶向关系。将细胞分为Control、sh-HOTAIR、miR-1inhibitor和sh-HOTAIR+inhibitor组,用sh-HOTAIR和miR-1inhibitor分别或同时转染细胞,CCK8检测各组细胞活性,流式检测细胞凋亡,Transwell和划痕实验分别检测细胞侵袭和迁移能力,免疫印迹检测Ki67、Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的表达。结果 HOTAIR在U251细胞中表达水平最高,因此选择U251细胞进行后续实验;sh-HOTAIR能显著降低U251细胞HOTAIR的表达水平,升高miR-1的表达水平;miR-1mimic能显著降低HOTAIR野生质粒的荧光素酶活性;与Control组比较,sh-HOTAIR组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显降低,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显升高;sh-HOTAIR组比较,sh-HOTAIR+inhibitor组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显升高,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显降低;同时,sh-HOTAIR组侵袭细胞数与Control组比较明显减少,划痕闭合率明显降低;sh-HOTAIR+inhibitor侵袭细胞与sh-HOTAIR比较显著增多,划痕闭合率明显升高;此外,sh-HOTAIR能显著降低MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平,miR-1inhibitor能显著减弱sh-HOTAIR对MMP-2和MMP-9表达的抑制作用。结论 HOTAIR能通过靶向抑制miR-1的表达促进胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移。     

靶向IRF-2基因的siRNA对胰腺腺泡细胞凋亡的机制研究

目的探讨靶向干扰素调节因子2(IRF-2)基因的小干扰RNA(siRNA)对胰腺腺泡细胞凋亡的影响及机制。方法以脂质体Lipofectamine TM2000为载体,参照其转染说明将设计并合成的IRF-2的siRNA转染AR42J细胞,并设置阴性对照siRNA(NC)及空白组(仅加入脂质体)。IRF-2的siRNA及阴性对照siRNA转染AR42J细胞24 h后与雨蛙肽(10-8mol/L)同培养,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率及活性氧族(ROS)含量;Western blotting检测Bcl-2、Bax和p53的蛋白表达。结果转染IRF-2的siRNA的AR42J细胞IRF-2蛋白表达降低,与空白组比较差异具有统计学意义(P0.05)。雨蛙肽可明显诱导AR42J细胞凋亡,诱导ROS产生,上调Bax和p53蛋白表达,下调Bcl-2的蛋白表达,与NC组比较差异具有统计学意义(P0.05),而转染si-IRF-2后可降低由雨蛙肽诱导的AR42J细胞凋亡和ROS产生,下调Bax和p53蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达,与NC+雨蛙肽组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论靶向IRF-2基因的siRNA可抑制胰腺腺泡细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS含量及下调Bax、p53表达和上调Bcl-2表达有关。这种抑制可能与增加急性胰腺炎的炎症程度有关。     

跑台训练对脊髓损伤后大鼠小脑浦肯野细胞的影响

摘要 目的：探讨跑台运动训练对脊髓损伤（SCI）后大鼠小脑细胞脑浦肯野细胞的影响及其机制研究。 方法：选取108只雌性SD大鼠,随机分成3组,包括假手术组、SCI组、SCI运动组。SCI运动组大鼠于术后开始跑台运动训练,BBB评分评定大鼠脊髓损伤后后肢运动功能。分别在术后第3天、第7天、第14天取小脑组织,通过HE染色、尼氏染色检测大鼠小脑浦肯野细胞数量和形态变化;免疫组化检测小脑中浦肯野细胞caspase-9、mGluR1表达情况;免疫荧光检测小脑中浦肯野细胞caspase-3、mGluR1表达情况;Western Blot检测小脑组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cyt-C、caspase-9、caspase-3蛋白表达水平变化。 结果：与假手术组比较,SCI组、SCI+TT组BBB评分均显著下降（P<0.05）;小脑组织中浦肯野细胞数量减少,体积缩小、失去正常形态;小脑中凋亡相关蛋白Bax、Cyt-C、活化caspase-9、活化caspase-3蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,Bcl-2表达显著降低;浦肯野细胞caspase-9和caspase-3表达增加,mGluR1表达降低（P<0.05）。与SCI组相较,SCI+TT组评分BBB评分结果比较无显著性差异（P>0.05）;小脑组织中浦肯野细胞数量、正常形态占比增加;凋亡相关蛋白Bax、Cyt-C、活化caspase-9 、活化caspase-3蛋白表达水平下降（P<0.05）,Bcl-2表达升高;浦肯野细胞caspase-9和caspase-3表达下降,mGluR1表达水平显著升高（P<0.05）。 结论：跑台运动训练可通过线粒体凋亡途径抑制脊髓损伤后大鼠小脑浦肯野细胞的凋亡。     

姜黄素调控自噬在抑制HPV阳性宫颈癌细胞的体外研究

目的研究姜黄素在体外应用于诱导HPV阳性宫颈癌细胞凋亡与自噬的影响。方法采用MTT检测法和流式细胞仪检测姜黄素(10,20,30,40μmol/L)对HPV阳性宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响;采用自噬抑制剂3-MA与姜黄素联用,观察自噬对姜黄素抑制HPV阳性宫颈癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的影响;分光光度法检测SiHa细胞Caspase-3活性;应用ELISA检测姜黄素和(或)自噬抑制剂3-MA对宫颈癌SiHa细胞内Bcl-2、Bax和Beclin-1表达的影响。结果姜黄素对HPV阳性的宫颈癌SiHa细胞的生长具有抑制作用,而且这种抑制作用呈浓度依赖性和时间依赖性;而姜黄素与3-MA联用后,对HPV阳性宫颈癌SiHa细胞诱导凋亡的作用明显下降;与对照组相比,姜黄素组细胞Caspase-3活性明显提高(P0.01)、Bax和Beclin-1的表达均明显升高(P0.01),而Bcl-2的表达明显降低(P0.01);与单独应用姜黄素组相比,姜黄素与3-MA联用组细胞Caspase-3活性和Bax表达均明显下降(P0.01),而Bcl-2的表达明显增加(P0.01)。结论姜黄素能有效抑制HPV阳性宫颈癌SiHa细胞的增殖,可以提高细胞Caspase-3活性、促进促凋亡因子Bax的表达升高和抑制凋亡因子Bcl-2表达下调,同时促进自噬相关蛋白Beclin 1的表达上调,从而诱导HPV阳性宫颈癌SiHa细胞发生凋亡和自噬性细胞死亡。     

小干扰RNA沉默DEK基因对肝癌HepG_2细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默DEK基因表达对肝癌细胞株HepG_2凋亡的影响及其相关分子机制。方法常规培养人肝癌细胞株HepG_2,分为空白对照组、对照siRNA组和DEK siRNA组。对照siRNA组和DEK siRNA组在Lipofectamine~(TM) 2000脂质体介导下进行对照siRNA表达载体和DEK siRNA表达载体的转染;空白对照组正常培养,不做任何处理。采用实时PCR法检测3组细胞DEK mRNA表达情况,采用Western blot法检测3组细胞DEK蛋白、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)表达情况,采用流式细胞术观察3组细胞周期和细胞凋亡率。结果转染48h后,DEK siRNA组DEK mRNA(0.420±0.050)和蛋白表达水平(0.311±0.038)及S期细胞比率[(20.713±1.529)%]、G_2/M期细胞比率[(20.030±4.833)%]、Bcl-2蛋白表达水平(0.342±0.061)明显低于空白对照组[0.826±0.052、0.691±0.073、(25.553±2.109)%、(26.560±4.766)%、0.599±0.075]和对照siRNA组[0.776±0.051、0.726±0.061、(24.210±2.463)%、(29.365±4.891)%、0.686±0.079](P0.05),G0/G1期细胞比率[(59.257±4.767)%]、细胞凋亡率[(10.325±0.791)%]、Bax(0.610±0.038)和caspase-3蛋白表达水平(0.716±0.054)高于空白对照组[(47.887±3.753)%、(5.697±0.508)%、0.280±0.059、0.373±0.044]和对照siRNA组[(46.425±3.354)%、(6.547±0.674)%、0.340±0.045、0.321±0.049](P0.05);空白对照组与对照siRNA组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论特异性DEK siRNA可针对性下调HepG_2细胞中DEK基因表达,促进HepG_2细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达、上调caspase-3和Bax表达有关。