紫外线灭活仙台病毒诱导人胶质瘤细胞系LN229凋亡作用(英文)北大核心CSCD

目的探讨紫外线灭活仙台病毒致人胶质瘤LN229细胞凋亡作用及其机制。方法用不同剂量灭活病毒感染LN229细胞,24h后,MTT法检测灭活病毒对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;分光光度法检测caspase活性;Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果 MTT检测显示灭活仙台病毒能够剂量依赖性抑制LN229细胞增殖;流式细胞仪检测显示灭活病毒组细胞凋亡率呈剂量依赖性升高;caspase活性测定显示灭活病毒组细胞中caspase-3,-8和-9蛋白活性呈剂量依赖性增加;Western blotting结果显示,随着灭活病毒滴度增加,细胞中Bax、细胞色素c、Fas、FasL表达水平升高、而Bcl-2、caspase-8前体、caspase-9前体和caspase-3前体蛋白表达下降。结论灭活仙台病毒能够诱导LN229细胞剂量依赖性凋亡,其机制与线粒体途径和死亡受体途径相关。     

TRAIL诱导恶性胶质瘤LN215细胞凋亡抵抗的机制

目的 探讨人恶性胶质瘤LN215细胞及其单克隆细胞经TRAIL诱导凋亡的百分率及BID和SMAC蛋白的表达与凋亡抵抗机制.方法 培养LN215细胞及筛选单克隆细胞,应用酸性磷酸酶法检测LN215细胞及单克隆细胞经TRAIL诱导凋亡的百分率,Western印迹检测BID和SMAC表达情况.结果 筛选出5株(1、6、17、13、32)单克隆细胞.LN215和单克隆细胞经TRAIL作用后细胞凋亡率在-10.2％ ～55.7％之间波动,BID和SMAC的表达与细胞凋亡百分率明显相关.结论 LN215和单克隆细胞经TRAIL诱导凋亡与BID和SMAC表达量密切相关.     

TRAIL与环磷酰胺诱导LN215细胞凋亡的作用

目的探讨人恶性胶质瘤细胞株LN215细胞对TRAIL的敏感性及TRAIL与环磷酰胺诱导LN215细胞凋亡的作用。方法培养LN215细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长特性,应用酸性磷酸酶法检测LN215细胞对TRAIL单独及联合环磷酰胺作用诱导凋亡的程度。结果 LN215细胞在TRAIL低浓度时无明显的凋亡发生,甚至出现轻微的增殖现象;TRAIL浓度达到1 ng/ml时,细胞开始出现凋亡;随TRAIL浓度升高,凋亡水平逐渐升高,在300 ng/ml时,凋亡率可达到12%。TRAIL与环磷酰胺联合作用组(0.11±0.01)与对照组(0.29±0.02)相比具有显著性差异(P﹤0.01)。结论 LN215是TRAIL耐药细胞株,与环磷酰胺联合后可发挥协同作用,引起细胞发生明显的凋亡反应。     

紫外线联合臭氧及高温诱导人外周血淋巴细胞凋亡作用的研究

目的:观察紫外线、臭氧及高温综合治疗对人外周血淋巴细胞凋亡水平的影响,并探讨其在免疫炎症性疾病治疗中的作用。 方法: 采用瑞氏-姬姆萨染色涂片镜检、琼脂糖DNA凝胶电泳及流式细胞仪定量测定技术,检测紫外线、高温及臭氧分别及联合运用时人外周血淋巴细胞的凋亡率。结果: 经诱导的淋巴细胞在光镜下均可观察到典型的凋亡细胞的形态改变, DNA电泳呈现有一定间隔的梯状条带。经紫外灯照射10 min、20 min及30 min,淋巴细胞的凋亡率依次为12.03%、16.98%和26.58%;而单纯置于温度为40、42.5及45℃的水浴中20 min,凋亡率分别为15.93%、26.83%和39.88%;经高温水浴联合紫外照射共同影响,凋亡率可达54.45%;经臭氧联合高温水浴及紫外照射共同作用,凋亡率最高达76.15%。结论: 人外周血淋巴细胞在紫外线、高温及臭氧的共同影响下,其凋亡率较单一或两种因素联合作用显著提高（P<0.05）,可呈现一定的时间和剂量依赖效应,以42.5℃水浴、29 μg/ml臭氧联合紫外照射20 min后,淋巴细胞的凋亡率最高。     

三氧化二砷诱导人脑SHG-44胶质瘤细胞凋亡

目的观察三氧化二砷(As2O3)对SHG-44胶质瘤细胞增殖抑制的分子机制。方法在加入SHG-44胶质瘤细胞As2O348 h后,采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)方法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR及蛋白免疫印迹(WB)方法,检测BAX及Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平。结果As2O3对SHG-44胶质瘤细胞的抑制作用随着药物浓度的升高而增强;BAX mRNA及蛋白表达水平与对照组比无明显变化(P0.05),BAX mRNA及蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 As2O3通过促进细胞凋亡而抑制SHG-44胶质瘤细胞的增殖。     

茶多酚诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡的机制

目的探讨茶多酚体外诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡的机制。方法茶多酚作用GBC-SD细胞48 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst33258/PI双染色,激光扫描共聚焦显微镜观察茶多酚诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡作用;DCFH-DA为细胞内活性氧探针,激光扫描共聚焦显微镜检测茶多酚对人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞活性氧(ROS)水平的影响,分光光度法测定茶多酚对人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞内caspase-3活性的影响。结果 50、100、200μg/ml茶多酚作用GBC-SD细胞48 h后,人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞呈现典型的凋亡特征;激光扫描共聚焦显微镜下观察茶多酚作用后GBC-SD细胞ROS明显上升,细胞内caspase-3活性增强(P<0.01)。结论茶多酚能显著诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞发生凋亡作用,其机制可能是ROS过量积聚、激发caspase级联反应,从而诱导细胞凋亡。     

rsTRAIL诱导白血病细胞系HL60凋亡及其作用机制

用不同浓度可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rsTRAIL）处理白血病HL60细胞系,采用AO/EB双重荧光染色法、MTT比色法、流式细胞分析术、染色体核型分析等多种细胞及遗传学方法检测rsTRAIL诱导白血病HL60细胞凋亡的作用。结果rsTRAIL处理后HL60细胞可见典型的凋亡特点,细胞生长抑制率和凋亡率从50 ng/ml的8.4%和21.4%上升到5 000 ng/ml的70.0%和86.5%,具显著的剂量和时间效应;高浓度rsTRAIL（3 200 ng/ml、5 000 ng/ml）作用HL60细胞后,出现体积增大,染色体多倍化（130~144条）的细胞,流式分析结果提示细胞出现裂亡。认为rsTRAIL对白血病细胞系HL60的细胞及遗传学影响非常显著,可通过诱导凋亡的方式杀伤肿瘤细胞。     

布鲁生诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的机制

目的 通过体外实验探讨布鲁生诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡的作用机制.方法 取人胶质瘤细胞系SHG-44培养18h,按布鲁生作用的不同浓度分组.0.125、0.25、0.5、1.0、1.5 mmol/L,作用的不同时间分组:12、24、48 h,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)计算细胞抑制率;吖啶橙(A0)/溴乙啶(EB)染色及流式细胞术检测细胞凋亡的变化;使用Westem印迹观察细胞BCL-2、BAX和COX-2蛋白表达的变化.结果 (1)利用MTT比色分析法,发现SHG-44细胞分别用含不同浓度布鲁生溶液培养12、24、48 h后,细胞增殖受到明显的抑制,且与浓度和时间呈正相关;(2)流式细胞仪分析结果显示,布鲁生主要使SHG-44细胞集中在晚期凋亡;(3)Western印迹凝胶电泳显示,0.25、0.5、l mmol/L浓度处理组作用24 h后,剂量性地降低SHG44细胞中COX-2、BCL-2蛋白的表达,而升高BAX蛋白的表达.结论 布鲁生能明显抑制人胶质瘤SHG-44细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制了COX-2蛋白表达有关.     

芍药甙诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡的研究

目的：观察芍药甙诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡及凋亡相关基因的变化。方法：用0．5～0．2g／L芍药甙处理人肝癌HepG2细胞，光镜下观察细胞形态；MTT法检测细胞增殖率；流式细胞仪检测凋亡峰；免疫组化法检测P53，bcl-2，bax等凋亡相关基因的表达。结果：0．5～2．0g／L浓度的芍药甙对HepG2有显著抑制作用；可诱导HepG2凋亡，并能上调凋亡相关基因P53和bax表达、下调抗凋亡基因bcl-2表达。结论：0．5～2．0g／L芍药甙可诱导人肝癌细胞HepG2凋亡，其机制可能与凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

抗Fas单克隆抗体诱导人胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡

目的探讨抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡的规律及在胃癌治疗中的意义.方法应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术检测抗Fas 单克隆抗体对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了SGC -7901细胞表面Bcl-2的表达情况..结果抗Fas单克隆抗体有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用. 经抗Fas单克隆抗体处理后,SGC-7901细胞表面Bcl-2蛋白表达无明显变化. .结论抗Fas单克隆抗体可以诱导胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡. 抗Fas单克隆抗体诱导胃癌细胞凋亡与Bcl-2表达无关.     

五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的作用及机制

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将浓度为0、200、400和800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测其上清液中Bax和Bcl-2的蛋白表达;细胞免疫组织化学法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Bax和Bcl-2阳性表达率。结果不同浓度五味子多糖作用细胞后,细胞培养上清中Bcl-2蛋白表达水平均下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),Bax/Bcl-2值均升高(P<0.01)。细胞免疫组化结果显示,400和800μg/ml多糖组Bax阳性表达率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。400和800μg/ml多糖组Bcl-2阳性表达率下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过上调Bax/Bcl-2比值,使促凋亡因素占优势,从而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

三氧化二砷诱导胰腺癌细胞系PC-3凋亡及其抑制转移的作用

目的:探讨三氧化二砷(亚砷酸,As2O3)注射液诱导人类胰腺癌细胞凋亡及其抑制转移的作用机制.方法:用AS2O3处理人胰腺癌细胞株PC-3,通过流式细胞仪观察细胞的凋亡率及生长周期的变化;用免疫组织化学的方法,检测凋亡相关基因蛋白Fas,Fas-L,Bc1-2和Bax及转移相关基因蛋白CD44和nm23表达的变化.结果:流式细胞仪检测显示明显的凋亡峰出现,并使细胞周期主要被阻滞在S期(14.9%-63.7%);免疫组化结果显示,Bc1-2( ～ ),CD44( ～ )基因的表达下调,Fas( ～ )、Fas-L(-～ )及nm23( ～ )基因的表达上调.结论:As2O3注射液可诱导人类胰腺癌细胞株PC-3凋亡并具有抑制转移作用,这可能与调节Bc1-2,Fas,Fas-L及CD44,nm23蛋白的表达有关.     

诺帝对肺腺癌细胞系A549细胞凋亡的诱导作用

目的探讨化学合成物诺帝对人肺腺癌细胞系A549细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2蛋白表达的影响。方法采用自行合成的化合物诺帝（终浓度为100umol／L）处理A549细胞,于处理后12、24、48和72h用细胞培养、流式细胞仪、免疫组化及图像分析等方法检测诺帝对A549细胞凋亡和bcl-2蛋白的表达。结果一定浓度的诺帝处理A549细胞12～48h,均可诱导A549细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;诺帝处理A549细胞后,出现细胞bcl-2蛋白表达水平显著降低。结论诺帝诱导了A549细胞的凋亡,其作用可能与其下调了bcl-2蛋白的表达有关。     

2-(3羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人胃癌细胞系(SGC-7901)的诱导凋亡作用

目的 观察2-(3-羧基-t-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COADG)体外诱导人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡的作用，探讨其可能作用机理。方法 采用MTT法，筛选药物作用最佳浓度。用流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量，透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。结果 2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖能明显抑制胃癌细胞的增长，MTT法显示抑制程度具有时间和剂量效应关系，统计组问比较差异有显著性；流式细胞仪分析可见亚二倍体(Sub-G1)凋亡峰；电镜观察到凋亡小体。结论 2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖有诱导人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡的作用。     

2-(3羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人胃癌细胞系(SGC-7901)的诱导凋亡作用

目的 观察2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖（COADG）体外诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用,探讨其可能的作用机理。方法 采用MTT法,筛选药物作用最佳浓度。用流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量,用透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。结果 2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖能明显抑制胃癌细胞的增长,MTT法显示抑制程度具有时间和剂量效应关系,组间比较表达差异有显著性;流式细胞仪分析可见亚二倍体（Sub—G1）凋亡峰;电镜观察到凋亡小体。结论 2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖有诱导人胃癌细胞（SGC-7901）凋亡的作用。     

蛋白酶体抑制剂Bortezomib对人脑胶质瘤增殖抑制及诱导凋亡作用

目的 探讨Bortezomib对体外SHG-44胶质瘤细胞株形态的影响及诱导凋亡作用.方法 Bortezomib体外处理培养的SHG-44胶质瘤细胞后,采用MTT法检测细胞增殖、HE染色光镜观察、Hochest33342染色荧光显微镜观察以及锇铀铅染色透射电镜观察胶质瘤细胞的形态变化,流式细胞术分析细胞凋亡率及细胞周期.结果 MTT显示Bortezomib抑制SHG-44胶质瘤的增殖与浓度和时间呈相关性;6.0 μmol/L Bortezomib处理SHG-44胶质瘤细胞24 h后,光镜、荧光显微镜、透射电镜下均可见凋亡形态学改变.流式细胞术分析细胞凋亡率为(20.31±2.84)% ( P＜0.01);细胞周期变化显示S期细胞减少到(17.65±6.38)% (P＜0.01),细胞周期被阻滞于G_0/G_1期和G_2/M期,分别为(68.51±5.62) % (P＜0.01)和(14.75±2.48)% (P＜0.01).结论 Bortezomib抑制C6胶质瘤细胞的增殖并诱导其凋亡.     

氯化镧诱导脑胶质瘤SHG44细胞凋亡作用的机制

目的探讨氯化镧对人脑胶质瘤细胞株SHG44细胞诱导凋亡及其作用机制。方法体外培养人胶质瘤细胞,流式细胞仪、电镜检查细胞周期和超微结构的改变,原位杂交技术及免疫组化染色技术检测bcl-2、bax基因、蛋白表达情况。结果氯化镧能促进入脑胶质瘤SHG44细胞发生凋亡,明显增加G1期DNA含量,减少S期DNA含量。使bax基因、蛋白表达显著增强,bcl-2、bax基因蛋白表达显著减弱（P〈0．05）。结论氯化镧可抑制人脑胶质瘤SHG44细胞的生长,并促进其凋亡。     

Survvin反义寡核苷酸诱导人胃癌细胞凋亡的作用

目的探讨生存素（Survivin）反义寡核苷酸（ASODN）诱导人胃癌细胞SGC7901凋亡的作用。方法设计合成特异性靶向Survivin的ASODN,将胃癌细胞株分为空白对照组（Sham组）、脂质体转染对照组（Lip组）、正义链转染对照组（Lip-SODN组）和ASODN转染组（Lip-ASODN组）。作用48h后,Westemblot法检测各组Survivin表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,免疫组化SP法检测细胞中PCNA表达情况。结果脂质体介导Survivin ASODN转染后的胃癌细胞Survivin蛋白表达明显下降;ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组（P均〈0．05）,各对照组间无统计学差异（P〉0．05）。ASODN转染后胃癌细胞中PCNA表达水平明显降低。结论 Survivin ASODN转染胃癌细胞能下调Survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,具有明显的抗癌作用。     

三氧化二砷抑制人肝癌细胞株增殖和诱导凋亡作用

目的体外培养人肝癌细胞株HepG-2,BEL-7402,观察测定应用不同浓度三氧化二砷后多种指标的变化,从多个角度探讨三氧化二砷的抗肿瘤作用及其机制.方法应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透射电镜、扫描电镜、流式细胞仪、细胞免疫组化法,分别对不同浓度加药组及对照组HepG-2,BEL-7402细胞的存活,形态学改变,细胞DNA含量的分布以及Bc1-2,Bax蛋白的表达进行了观察和测定.结果0.5,1,2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株细胞的生长增殖.流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减小、核变圆、胞质内出现分化良好的细胞器,0.5,1,2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成.细胞免疫组化法测定Bcl-2,Bax蛋白的表达以及两者之间的比率均有变化.结论三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡.诱导肝癌细胞凋亡与Bd-2,Bax蛋白的表达改变有关.