温阳活血利水方含药血清对足细胞组织蛋白酶L、发动蛋白以及微丝、微管的影响

目的探讨温阳活血利水方治疗原发性肾病综合征蛋白尿的可能作用机制。方法将足细胞分为正常对照组、模型组、地塞米松组、10%中药血清组、20%中药血清组、空白对照组。除正常对照组、空白对照组外,其余各组用氨基核苷嘌呤霉素粉剂制备足细胞损伤模型。正常对照组和模型组加入完全培养基5 ml,地塞米松组加入392μg/L地塞米松5 ml,10%中药血清组、20%中药血清组、空白对照组分别加入10%中药血清、20%中药血清、空白对照血清各5 ml。RT-PCR法与Western blot分别检测各组足细胞胞浆组织蛋白酶L(CatL)、发动蛋白mRNA和蛋白表达含量,并用激光共聚焦观察各组中足细胞骨架微丝、微管的形态结构变化。结果与正常组比较,模型组CatL mRNA与蛋白含量升高,发动蛋白表达含量降低(P<0.01);与模型组比较,各中药血清组与地塞米松组CatL mRNA与蛋白表达含量降低,足细胞发动蛋白蛋白表达含量升高(P<0.01);与10%中药血清组比较,20%中药血清组CatL mRNA与蛋白表达含量降低,发动蛋白表达含量升高(P<0.01)。各组间足细胞发动蛋白mRNA表达含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论温阳活血利水方可能通过下调足细胞CatL的表达,减少CatL对发动蛋白的酶解,从而稳定细胞骨架中的微丝、微管等结构,减少足突融合,改善蛋白尿。     

温阳活血利水方调控Klotho/TRPC6/CatL通路稳定补体损伤足细胞骨架北大核心CSCD

目的体外观察温阳活血利水方含药血清对膜攻击复合物C5b-9介导的非致死性足细胞损伤的影响,探讨该方药治疗特发性膜性肾病(IMN)的疗效机制。方法体外组装C5b-9建立足细胞亚溶破模型,将足细胞分为正常对照组、模型组、他克莫司组、10%及20%含药血清组,并设他克莫司及中药血清空白对照组。激光共聚焦显微镜观测足细胞Klotho、瞬时受体电位通道(TRPC6)、组织蛋白酶L(CatL)及其底物Synaptopodin表达;采用荧光探针检测细胞内Ca^(2+)水平;活性定量检测试剂盒测定RhoA及Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)活性;Western Blot检测LIM结构域激酶1(LIMK1)、cofilin蛋白及其磷酸化蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组足细胞Klotho及Synaptopodin表达下调(P<0.01);TRPC6、CatL、Ca^(2+)、RhoA、ROCK、p-LIMK1/LIMK1及p-cofilin/cofilin表达上调(P<0.01);骨架微丝明显减少,排列紊乱。与模型组比较,各干预组足细胞Klotho与Synaptopodin的表达上调(P<0.01);而TRPC6、CatL、Ca^(2+)、RhoA、ROCK、p-LIMK1/LIMK1及p-cofilin/cofilin表达下调(P<0.01);中药血清和他克莫司均改善了足细胞骨架的重构。结论温阳活血利水方含药血清可能通过调控Klotho/TRPC6/CatL通路,从而稳定非致死性C5b-9介导的细胞骨架紊乱。     

黄芪甲苷通过调控肾素原受体-自噬途径改善嘌呤霉素诱导肾足细胞骨架损伤的作用研究

目的:探讨肾素原受体(prorenin-receptor,PRR)及自噬在嘌呤霉素诱导的肾足细胞骨架损伤中的作用及黄芪甲苷(astragaloside IV, AS-IV)的改善机制。方法:体外培养人肾足细胞株AB8/13,30μg/ml嘌呤霉素(puromycin,PAN)孵育0～48 h后,免疫印迹法检测足细胞PRR蛋白表达。PRR siRNA干扰足细胞48 h,PAN干预24 h,检测PRR及自噬蛋白(LC3II,P62)表达,免疫荧光法检测细胞骨架。分化后足细胞分为对照组、PAN组(30μg/ml)、PAN(30μg/ml)+不同剂量AS-IV干预组(5μg/ml,25μg/ml, 50μg/ml)孵育48 h,免疫荧光法检测各组细胞骨架蛋白F-actin、synaptopodin表达,免疫印迹法检测各组synaptopodin、PRR、LC3II、P62蛋白表达。结果:PRR在PAN刺激早期表达升高,24 h达峰,48 h显著下降。PRR小RNA干扰后,足细胞PRR表达下调、LC3II表达下调,但自噬抑制相关蛋白P62显著升高,骨架损伤提前发生;低中高剂量AS-IV均可改善嘌呤霉素诱导的足细胞变构,其中低、中剂量(5μg/ml,25μg/ml)AS-IV改善最明显,AS-IV干预后较PAN组PRR蛋白显著升高,LC3II蛋白表达上调,P62表达下调,synaptopodin表达上调。结论:PRR可能通过介导自噬在PAN诱导的肾足细胞损伤中发挥保护作用,低中剂量AS-IV可能通过提高PRR、稳定自噬发挥肾足细胞保护作用。     

肾炎康血清对嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨中药复方肾炎康含药血清对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的足细胞损伤的保护作用。方法:原代培养大鼠足细胞,随机分为正常组,模型组,肾炎康低、中、高剂量组,阳性药(厄贝沙坦)组。除正常组外,其余各组分别予以嘌呤霉素氨基核苷血清+正常大鼠血清、肾炎康低、中、高剂量血清、厄贝沙坦血清干预48 h。原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,实时定量PCR方法检测p53、Caspase-3 mRNA表达,Western blot检测细胞p53、Caspase-3蛋白变化。结果:嘌呤霉素氨基核苷作用下的各组足细胞凋亡率、p53、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常组(P0.05,P0.01);药物干预各组足细胞凋亡率、p53、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平均显著低于模型组(P0.05,P0.01);肾炎康高剂量组足细胞凋亡率、p53、Caspase-3 mRNA及蛋白表达与厄贝沙坦组相当(P0.05)。结论:中药复方肾炎康对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与抑制p53、Caspase-3表达有关。     

活血通络利水方含药血清在高浓度谷氨酸环境下 对Müller细胞谷氨酸-天冬氨酸转运体、谷氨酰胺合成酶蛋白表达及活性的影响

目的 研究活血通络利水方含药血清在高浓度谷氨酸(GLU)环境下对Müller细胞谷氨酸-天冬氨酸转运体(GLAST)、谷氨酰胺合成酶(GS)蛋白表达及活性的影响。方法 将40只健康SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、银杏叶组、活血通络利水方低剂量组和活血通络利水方高剂量组,每组10只。银杏叶组予银杏叶片水溶剂5. 2 mg/kg灌胃,活血通络利水方低剂量组予活血通络利水方合剂20 g/kg灌胃,活血通络利水方高剂量组予活血通络利水方合剂40 g/kg灌胃,正常组予等容积0. 9%氯化钠注射液灌胃,每日1次,连续灌胃7 d后,腹主动脉取血后离心收集血清备用。培养Müller细胞,分别用不同浓度的GLU(0、0. 1、0. 5、1、10、20、25、30 mmol/L)干预24 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测Müller细胞存活率。Müller细胞分为正常组、模型组、银杏叶组、活血通络利水方低剂量组和活血通络利水方高剂量组,正常组和模型组每孔加入正常血清0. 5 m L、培养基2 m L,银杏叶组每孔加入银杏叶含药血清0. 5 m L、培养基2 m L,活血通络利水方低、高剂量组每孔分别加入活血通络利水方20、40 g/kg含药血清0. 5 m L、培养基2 m L。除正常组外,其余4组均加入GLU 25 mmol/L。相同条件下培养24 h后提取总蛋白,采用免疫印迹法(Western Blot)检测各组Müller细胞中GLAST、GS蛋白表达水平;用高效液相色谱法(HPLC)检测各组细胞培养液中GLU含量。结果 MTT实验结果显示,GLU干预24 h后,与0 mmol/L浓度GLU比较,10 mmol/L及以下低浓度GLU细胞存活率升高(P 0. 05); 20、25、30 mmol/L浓度GLU细胞存活率逐渐降低(P 0. 05),其中25 mmol/L浓度GLU细胞存活率下降至约0. 67。Western Blot检测结果显示,与正常组比较,模型组GLAST、GS蛋白表达水平均降低(P 0. 05);与模型组比较,银杏叶组和活血通络利水方低、高剂量组GLAST、GS蛋白表达水平均升高(P 0. 05),且活血通络利水方高剂量组的上调高于银杏叶组(P 0. 05),与正常组比较差异无统计学意义(P0. 05)。高效液相色谱(HPLC)检测结果显示,与模型组比较,银杏叶组和活血通络利水方低、高剂量组的胞外GLU含量均降低(P 0. 05);与银杏叶组比较,活血通络利水方低、高剂量组Müller细胞胞外GLU含量比较差异无统计学意义(P0. 05)。结论 在25 mmol/L GLU浓度环境下,活血通络利水方能够上调Müller细胞GLAST、GS蛋白表达和活性,促进细胞摄取胞外GLU,以维持GLU代谢平衡。     

温阳益气、活血利水法对冠脉结扎心肌梗死后心衰大鼠NT-proBNP的影响

目的观察温阳益气、活血利水法对心肌梗死后心衰大鼠N-末端脑钠肽前体（NT-proBNP）的影响。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支,制作大鼠心肌梗死后心衰模型,分为对照组,假手术组,模型组,温阳益气、活血利水法组方高、中、低剂量组,卡托普利组。中药干预后,检测大鼠血清NT-proBNP水平。结果各模型组血清NT-proBNP水平均显著高于假手术组（P〈0.01）;与模型组比较,温阳益气、活血利水法组方各剂量组血清NT-proBNP水平均降低（P〈0.05或P〈0.01）;卡托普利组血清NT-proBNP水平与温阳益气、活血利水法组方高剂量组相近（P〉0.05）;空白对照组和假手术组比较,血清NT-proBNP水平无显著性差异。结论温阳益气、活血利水法可降低心肌梗死后心衰大鼠血清NT-proBNP水平。     

益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷损伤小鼠足细胞表达TRPC6的影响

目的:观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达TRPC6的影响,探讨不同类中药的作用强度。方法:应用PAN(50μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用RT-PCR和Western Blot法检测各组血清对小鼠足细胞表达TRPC6 mRNA及蛋白的影响。结果:(1)RT-PCR结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6mRNA表达差异显著(P0.05)。含药血清作用24 h后,化瘀组、清热组、复方组表达TRPC6mRNA明显低于对照组(P0.01)和益气组(P0.05),而3组之间无显著差异(P0.05),益气组与对照组也无显著差异(P0.05)。含药血清作用48 h后,益气组、化瘀组、清热组及复方组表达TRPC6mRNA均显著低于对照组(P0.05),且4组之间无明显差别(P0.05)。(2)Wersten印迹结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6蛋白表达差异显著(P0.05)。含药血清作用24 h后,益气组、化瘀组TRPC6蛋白表达低于对照组(P0.05),清热组、复方组与对照组相比无显著差异(P0.05),且4组间差异不明显(P0.05)。各含药血清作用48 h后,益气组、清热组、复方组TRPC6蛋白表达低于对照组(P0.01),化瘀组与对照组相比无差别(P0.05);复方组、益气组、清热组3者在TRPC6蛋白表达上无差别(P0.05);化瘀组TRPC6表达水平高于复方组(P=0.0080.01),而与益气组、清热组相比无显著差异(P0.05)。结论:益气化瘀清热方及其拆方均能抑制造模足细胞TRPC6mRNA和蛋白的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,抑制TRPC6表达的作用强度不同。     

温阳益气活血利水中药对慢性心力衰竭患者左室舒张功能的影响

目的观察慢性心力衰竭 (CHF)患者左室舒张功能的变化及温阳益气、活血利水中药对其的影响.方法给患者 25例 (心衰组 )温阳益气、活血利水之中药,治疗前后分别用彩色多普勒超声仪测定其左室舒张功能.同时设 24例正常人作为对照组.结果心衰组治疗前与对照组相比,左室舒张功能指标有明显降低,治疗后则有明显升高.结论 CHF患者左室舒张功能明显受损,温阳益气、活血利水中药能明显改善患者的左室舒张功能.     

肾炎康血清干预嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤研究

目的:探讨复方肾炎康对嘌呤霉素氨基核苷诱导足细胞损伤的保护作用。方法:原代培养大鼠足细胞,随机分为正常组,对照组,肾炎康低、中、高剂量组,厄贝沙坦组除正常组外,其余各组分别予以嘌呤霉素氨基核苷,正常组加正常大鼠血清,肾炎康低、中、高剂量组分别加肾炎康低、中、高剂量,厄贝沙坦组加厄贝沙坦,均干预48h。用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,实时定量PCR方法检测P53、Caspase 3 m RNA,western印迹检测细胞中P53、Caspase 3蛋白变化。结果:嘌呤霉素氨基核苷作用下的各组足细胞凋亡率、P53、Caspase 3m RNA及蛋白表达均显著高于正常组(P0.05,P0.01),药物干预的各组足细胞凋亡率、P53、Caspase 3 m RNA及蛋白表达均显著低于对照组(P0.05,P0.01),肾炎康高剂量组足细胞凋亡率、P53、Caspase 3 m RNA及蛋白表达与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:中药复方肾炎康能抑制嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡,其机制可能与抑制P53、Caspase 3表达有关。     

利水活血温阳方联合常规疗法治疗慢性心衰的临床疗效

目的探讨利水活血温阳方联合常规方法治疗慢性心衰的临床效果及对血清氨基末端B型利钠肽前体(NTpro BNP)、心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、可溶性细胞间粘附分子(s ICAM-1)的影响。方法 80例患者按治疗方式分为对照组和实验组,每组40例,对照组予以常规治疗,实验组在常规治疗基础上加用利水活血温阳方,2组均持续用药3个疗程。对2组疗效、NT-proBNP、H-FABP、s ICAM-1、血液流变学、心功能、生活质量评分及安全性进行比较。结果实验组总有效率高于对照组(P0. 05); NT-proBNP、H-FABP、s ICAM-1低于对照组;血液流变学、心功能及生活质量评分均优于对照组(P0. 05)。2组安全性差异无统计学意义(P0. 05)。结论利水活血温阳方治疗慢性心衰的临床效果肯定,能够降低血清NT-proBNP、H-FABP、s ICAM-1浓度,改善心功能。     

温阳败毒饮对脓毒症大鼠血清降钙素原及C反应蛋白水平影响的研究

目的研究温阳败毒饮对脓毒症大鼠血清降钙素原、C反应蛋白水平的影响。方法选用120只健康雄性SD大鼠,采取腹腔内注射大肠杆菌内毒素的方法,制备细菌毒血症大鼠模型。将其随机分为正常组、模型组、常规西药组、中药干预组、联合用药组,正常组、模型组给予生理盐水灌胃,常规西药组给予地塞米松灌胃,中药干预组给予温阳败毒饮经口灌胃,联合用药组给予温阳败毒饮联合地塞米松经口灌胃。比较观察不同时间点(24h、48h、72h)不同组别大鼠炎症反应因子变化(CRP、PCT)。结果联合用药组血清PCT、CRP的水平低于其他四组,常规西药组和中药干预组血清PCT、CRP的水平低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论温阳败毒饮可有效降低大肠杆菌内毒素诱导的脓毒症大鼠血清PCT、CRP水平。     

肾衰Ⅲ号方对阿霉素诱导损伤足细胞nephrin、desmin表达的影响

目的:探讨肾衰Ⅲ号方对阿霉素诱导的足细胞损伤的保护作用。方法:分离大鼠肾组织足细胞以阿霉素0.5 mg/L培养24 h复制足细胞损伤模型,再分别以低、中、高剂量肾衰Ⅲ号含药血清(3.8%、7.5%、15%)干预24 h后,MTT检测细胞增殖活性,分别检测各组细胞nephrin、desmin mRNA(RT-PCR法)和蛋白(Western Blot法)表达。结果:MTT结果显示7.5%肾衰Ⅲ号含药血清干预24 h为效果最佳。RT-PCR结果显示,与正常对照组比较,模型组nephrin mRNA表达显著降低(P0.01)、desmin mRNA表达显著增高(P0.01);与模型组比较,高剂量组nephrin mRNA表达显著增高(P0.05)、desmin mRNA表达显著降低(P0.05)。Western Blot结果显示,与正常对照组比较,模型组nephrin蛋白表达显著降低(P0.01),desmin蛋白表达显著增高(P0.01);与模型组比较,中、高剂量组nephrin蛋白表达显著增高(P0.01)、desmin蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:肾衰Ⅲ号含药血清能减轻阿霉素引起的原代培养的足细胞损伤。     

止血化瘀利水方对缺氧诱导ARPE-19细胞VEGF及HIF-1α表达的影响

目的探讨止血化瘀利水方含药血清对CoCl_2诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白及mRNA表达的影响。方法体外培养ARPE-19细胞,用CoCl_2诱导构建缺氧模型,将RPE细胞分为正常组、缺氧模型组、空白对照组、阳性对照组、中药组,以CCK-8法检测细胞增殖活性,ELISA法检测VEGF蛋白浓度,应用荧光定量PCR检测HIF-1α和VEGF的mRNA表达水平。结果 200μmol/LCoCl_2对RPE细胞吸光度值(OD值)影响最大,设立为缺氧细胞模型浓度。与正常组比较,缺氧模型组细胞增殖活性增强,VEGF蛋白浓度增高,HIF-1α及VEGF的m RNA表达水平上调。与缺氧模型组比较,中药组、阳性对照组在24 h、48 h、72 h细胞VEGF蛋白均含量减少,差异均有统计学意义(中药组:t_(24 h)=4.242,P_(24 h)0.001;t_(48 h)=3.430,P_(48 h)0.001;t72 h=2.501,P72 h=0.006;阳性对照组:t_(24 h)=2.897,P_(24 h)=0.001;t_(48 h)=2.308,P_(48 h)=0.013;t72 h=4.748,P72 h0.001),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。中药组、阳性对照组在48 h细胞HIF-1αmRNA表达下调,与缺氧模型组比较,差异有统计学意义(中药组:t=15.358,P0.001;阳性对照组:t=14.918,P0.001),24 h、72 h差异无统计学意义(P0.05)。中药组、阳性对照组在24 h、48 h细胞VEGF m RNA表达受到抑制,与缺氧模型组比较,差异均有统计学意义(中药组:t_(24 h)=3.084,P_(24 h)=0.003;t_(48 h)=14.837,P_(48 h)0.001;阳性对照组:t_(24 h)=3.437,P_(24 h)=0.001;t_(48 h)=13.554,P_(48 h)0.001)。结论缺氧损伤可诱导ARPE-19细胞增殖,VEGF蛋白表达量增加,HIF-1α和VEGF mRNA表达水平上调;止血化瘀利水方对缺氧RPE细胞的增殖及VEGF蛋白、HIF-1α和VEGF mRNA的表达有抑制作用。与对照组复方血栓通胶囊比较,止血化瘀利水方对RPE细胞增殖的抑制作用更持久,在24 h、48 h控制VEGF蛋白表达水平更接近正常组;而二者在抑制VEGF和HIF-1αmRNA表达方面作用相似。     

健脾祛湿和络方含药血清对足细胞标志蛋白Nephrin、Podocalyxin及mTOR表达的影响

目的探讨健脾祛湿和络方(Jianpi Qushi Heluo Formula,JQHF)含药血清对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的小鼠足细胞损伤模型标志蛋白Nephrin、Podocalyxin及mTOR相关自噬因子表达的影响。方法以体外培养小鼠足细胞为研究对象,除空白组外均以PAN(100μ/mL)体外诱导足细胞,根据含药血清细胞培养基的不同分为空白组(10%空白血清),模型组(10%空白血清+PAN),JQHF低剂量组(10%低剂量JQHF含药血清+PAN),JQHF中剂量组(10%中剂量JQHF含药血清+PAN),JQHF高剂量组(10%高剂量JQHF含药血清+PAN),替米沙坦(TMST)组(10%TMST含药血清+PAN),醋酸泼尼松(PRE)组(10%PRE含药血清+PAN),雷帕霉素(RAP)组(100μg/L RAP+10%空白组血清+PAN)。CCK-8法检测足细胞损伤模型在各组血清作用后的活性变化;Western blot法检测各组足细胞标志蛋白Nephrin、Podocalyxin及细胞内mTOR相关自噬蛋白表达水平。结果 (1)与空白组比较,模型组细胞活力显著下降(P0.01),与模型组比较,JQHF高剂量、TMST、PRE及RAP组足细胞活力上升(P0.05);(2)与模型组比较,除JQHF低剂量组Podocalyxin表达外,其余各药物干预组Nephrin、Podocalyxin表达均增多(P0.05,P0.01);与JQHF低剂量组比较,JQHF高剂量、TMST、PRE及RAP组Nephrin表达增多(P0.05);与JQHF中剂量组比较,JQHF高剂量、TMST、PRE及RAP组Nephrin表达增多(P0.05),TMST、PRE、RAP组Podocalyxin表达亦增多(P0.05);与JQHF高剂量组比较,TMST、PRE、RAP组Podocalyxin表达增多(P0.05)。(3)与模型组比较,各药物干预组LC3-Ⅱ表达均增多(P0.05,P0.01),JQHF高剂量组、TMST组、PRE组、RAP组P-mTOR、P-4EBP1表达均减少(P0.05),JQHF高剂量组、TMST组、RAP组P-P70S6K表达减少(P0.01)。结论 JQHF可以改善细胞内自噬水平,修复PAN诱导损伤足细胞,与上调细胞内Nephrin、Podocalyxin及LC3-Ⅱ的表达,减少mTOR及相关因子合成有关。     

温阳健脾祛痰颗粒含药血清对非酒精性脂肪性肝病细胞模型TLR4/TRIF/NF-κB通路的影响

目的研究温阳健脾祛痰颗粒(WYJPQT)含药血清对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型的影响,初步探讨其作用机制。方法 0.25 mM油酸诱导HepG2细胞24 h,油红O染色和三酰甘油检测确定NAFLD细胞模型成功建立,将NAFLD细胞模型分为WYJPQT高、中、低剂量组,阳性对照组及模型组,同时设置空白对照组。随后进行含药血清的制备,WYJPQT高、中、低剂量组分别给予10%WYJPQT高、中、低剂量组含药血清培养基孵育48 h,阳性对照组给予10%多烯磷脂酰胆碱含药血清培养基孵育48h,模型组和空白对照组给予10%大鼠血清培养基孵育48 h后,进行油红O染色,细胞内三酰甘油含量测定,并应用逆转录-实时荧光定量PCR法(RTqPCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MYD88)、Toll样白介素-1受体结构域适配子诱导干扰素-b(TRIF)和核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达水平。结果含药血清干预48h后,油红O染色提示WYJPQT高、中、低剂量组降低TG的作用细胞内脂滴颗粒较模型组减少,TG含量较模型组明显降低(P0.05),低剂量组与阳性对照组相当(P0.05);高、中剂量组TRIF蛋白相对表达量较模型组明显减少(P0.01),高剂量组TRIF蛋白表达量与阳性对照组相当(P0.05);WYJPQT各剂量组NF-κB m RNA和蛋白相对表达量均较模型组显著减少(P0.01);WYJPQT高、中剂量组TLR4 m RNA相对表达量较模型组和阳性对照组明显降低(P0.05)。结论 WYJPQT含药血清可调控TLR4/TRIF/NF-κB信号通路,降低NAFLD细胞模型中的脂滴颗粒数量,减少TG含量,达到对NAFLD细胞模型的治疗作用。     

消渴通痹方含药血清对高糖损伤后HUVEC细胞骨架及RhoA/ROCK信号通路的影响北大核心CSCD

目的:观察消渴通痹方含药血清对高糖损伤后人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells, HUVEC)F肌动蛋白(F-actin)、Ras基因家族成员A(Ras homolog gene family member A,RHOA)、Rho相关蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil containing kinase, ROCK)蛋白表达的影响。方法:将高糖损伤后HUVEC模型分为高糖模型组、22.5 g/kg消渴通痹方5%、10%、15%含药血清组,另设正常对照组,应用免疫荧光法检测F-actin的动态变化,Western blot检测F-actin、ROCK、p-ROCK和RhoA蛋白表达。结果:高糖刺激HUVEC骨架蛋白F-actin聚集到细胞中央,形成大量的应力纤维;22.5 g/kg消渴通痹方5%、10%含药血清干预后能够改善F-actin的聚集状态,使F-actin重新分布在细胞周边。与正常对照组比较,高糖模型组F-actin积分光密度值升高,F-actin、p-ROCK、RHOA蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),ROCK蛋白表达明显下调(P<0.05);与高糖模型组比较,22.5 g/kg消渴通痹方5%含药血清组F-actin积分光密度值明显降低,F-actin、p-ROCK、RHOA蛋白表达明显下调(P<0.05),ROCK蛋白表达明显上调(P<0.05);10%含药血清组F-actin积分光密度值明显降低、F-actin蛋白表达明显下调(P<0.01或P<0.05),RHOA、ROCK蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:益气活血中药消渴通痹方可能通过抑制RHOA/ROCK信号通路的异常激活稳定或保护内皮细胞骨架。     

真武汤及其拆方对肾小管上皮细胞氧化损伤的干预作用研究

目的:研究真武汤及温阳组、利水组对肾小管上皮细胞氧化损伤的干预作用,为中医治则治法的科学性提供实验依据。方法:不同浓度H2O2作用于肾小管上皮细胞HK-2,诱导HK-2细胞氧化损伤模型,采用真武汤组含药血清、温阳组含药血清、以及利水组含药血清进行干预,分别检测各中药组对损伤细胞的增殖作用,对缺氧损伤相关基因HO-1、HIF-1α、生存素(s urvivin)表达的影响,以及对肾纤维化和肾小管上皮转分化相关基因转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、钙黏蛋白(E-c a dherin)基因表达的影响。结果:H2O2作用不同时间可造成HK-2细胞损伤明显。与模型组比较,真武汤组和利水组具有明显修复HK-2细胞生长的作用(P0.05),温阳组作用不显著;真武汤组、温阳组及利水组均可上调HO-1、HIF-1α的表达,抑制s urvivin的表达(P0.05),但三者之间差异不明显。真武汤组、温阳组及利水组可降低SMA及E-c a dherin的表达,温阳组可下调TGF-β1的表达,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:真武汤对体外HK-2细胞氧化损伤模型具有明显的保护作用,利水组对损伤模型的修复作用比较明显,温阳组抗肾纤维化及肾小管上皮转分化作用比较明显。本研究为中医治则治法的科学性提供了实验依据。     

肾苏Ⅳ干预嘌呤霉素肾病大鼠足细胞损伤的机制研究

目的:探讨中药复方肾苏Ⅳ干预嘌呤霉素(PAN)肾病大鼠足细胞损伤的机制。方法:采用单次颈静脉注射法建立PAN肾病大鼠足细胞损伤模型。将60只SD大鼠随机分为A组(对照组),B组(模型组)、C组(肾苏Ⅳ低剂量组)、D组(肾苏Ⅳ中剂量组)及E组(肾苏Ⅳ高剂量组),每组12只。治疗第1、2、3、4、6周末检测大鼠24h尿蛋白定量(24hUpro)及血清白蛋白(ALB)水平;第1、6周末分别处死6只大鼠留取肾脏组织,检测肾小球足细胞Nephrin、CD2AP的表达变化;电镜观察肾小球足细胞超微结构的改变。结果:第6周末,C、D、E组24hUpro水平均低于B组,P0.05;C、D、E组ALB水平均高于B组,P0.05。第6周末,C、D、E组Nephrin、CD2AP表达均高于B组,P0.05。C、D、E组大鼠肾小球基底膜增厚及足突融合程度较B组均明显减轻。结论:肾苏Ⅳ可降低PAN肾病大鼠24hUpro,提高ALB水平,促进足细胞骨架结构的损伤修复,阻抑足细胞损伤。     

中西医结合治疗原发性肾病综合征的临床研究

目的：观察补肾健脾活血利水方治疗原发性肾病综合征的临床疗效。方法：将60例原发性肾病综合征患者随机分为2组：治疗组和对照组均口服泼尼松治疗,治疗组在口服泼尼松的基础上予补肾健脾活血利水中药汤剂口服。治疗前及治疗60d后,测定2组的24h尿蛋白量、血清白蛋白、血脂水平。结果：治疗后2组24h尿蛋白、血脂水平均明显下降,血清白蛋白上升,但治疗组改善程度优于对照组（P〈0.05）。结论：中西医结合治疗肾病综合征疗效较好,在泼尼松治疗基础上口服补肾健脾活血利水中药能增强其疗效。     

心衰康及其拆方不同干预周期对心衰大鼠尿液水通道蛋白2的影响

目的:观察心衰康及其拆方对充血性心力衰竭(CHF)大鼠尿液水通道蛋白2(AQP2)的影响,并评价心衰康及其拆方不同用药周期对心衰大鼠水液代谢作用机制及差异。方法:对大鼠行冠状动脉结扎术造成心梗后心衰模型,按超声评价的左室射血分值分为6组,分别为模型组、心衰康全方组、益气组、温阳组、活血组、利水组。连续灌药4周及8周后观察动物尿量,并采用实时定量PCR法检测心衰康及其拆方对心衰大鼠尿液AQP2的影响。结果:心衰大鼠进行药物干预4周后,大鼠尿液中AQP2的含量较模型组比较均降低,其中心衰康全方组作用最明显,利水组次之,且利水组较其他拆方组比较均有差异(P0.05);而药物干预8周后,心衰康全方组的效果同样最为明显,而利水组效果与益气、温阳、活血组类似(P0.05)。结论:短期应用心衰康全方及利水中药能够降低心衰大鼠尿液AQP2的表达,而益气、温阳、活血中药对心衰大鼠尿液AQP2无明显影响。随着用药时间的延长,益气、温阳、活血药对AQP2的作用逐渐增强,而利水药作用无明显改变。