琼玉膏对衰老大鼠作用的差异蛋白分析

目的研究琼玉膏对衰老大鼠产生调节作用的相关蛋白质,在分子水平上探索琼玉膏的作用机制。方法将42只6月龄SD雄性大鼠随机平均分为3组,分别标记为琼玉膏组、空白组和模型组。给药结束后,取三组大鼠下丘脑全蛋白,运用同位素相对标记与绝对定量(i TRAQ)技术,分离、分析、鉴定大鼠下丘脑差异蛋白质。结果成功建立衰老大鼠模型,分析比较三组大鼠下丘脑蛋白质,发现14种显著差异蛋白质。结论 14种显著差异蛋白分别为,细胞色素C氧化酶多肽VIc-2、中性神经酰胺酶、植烷酸-辅酶A羟化酶相互作用类蛋白、尼克酰胺磷酸核糖转移酶、尾锚定蛋白插入受体WRB、O-甘露糖β-1,4-N-乙酰葡糖胺基转移酶、信号转导子和转录激活子5b、脂酰Co A合成酶、特定微管伴侣蛋白E、3-磷酸肌醇依赖的蛋白激酶1、双特异性作用蛋白激酶7、RAS脒基释放蛋白2、SHC转运蛋白和泛酸酯激酶4,琼玉膏对这些蛋白均起到下调的作用,该研究为琼玉膏延缓衰老作用的靶蛋白研究奠定基础。     

应用蛋白质组学技术研究琼玉膏抗衰老的作用机制

琼玉膏为古代养生名方,抗衰老作用已应用于临床近千年,但其作用机制未明,困扰其开发利用.笔者根据中医肾藏精主骨生髓的理论,以下丘脑为研究对象,应用现代蛋白质组和生物信息学等技术,获得候选靶蛋白,通过基因沉默等分子生物学技术确定靶蛋白,以期阐明琼玉膏延缓衰老的关键机制,为将来更好地开发利用提供科研思路和方法.     

益胃汤对初老雌性大鼠下丘脑作用的差异蛋白分析

[目的]研究益胃汤对初老雌性大鼠下丘脑产生调节作用的相关蛋白质,在分子水平上探索益胃汤的作用机制。[方法]将20只4～6月龄雌性大鼠随机分成正常组、去势组,每组10只,10只10～12月龄雌性大鼠作为初老组。给药结束后,取3组大鼠下丘脑组织,运用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)分离、分析、鉴定大鼠下丘脑差异蛋白。[结果]分析比较初老组、去势组、正常组3组大鼠下丘脑蛋白质,通过多组数据韦恩图分析发现初老组与去势组有17种共同表达的差异蛋白。通过火山图(Volcano Plot)过滤,确定显著差异蛋白[差异倍数(FC)1.5或2/3,P0.05];筛选出了7种与衰老相关的显著差异蛋白及其相关KEGG通路,它们分别为:plasminogen、α-crystallin B chain、Hsp70 binding protein 1、serum transferrin、unconventional myosin-Id、myelin oligodendrocyte glycoprotein、protein Fbxo44。[结论]益胃汤对这7种显著差异蛋白起到上调或下调的作用,为研究益胃汤延缓衰老作用的靶蛋白奠定了基础。     

琼玉膏对D-半乳糖所致衰老大鼠差异蛋白质表达的影响

目的 采用蛋白质组学方法,在下丘脑中探索琼玉膏对衰老大鼠产生调节作用的相关蛋白质,从而在分子水平上解释抗衰老方剂琼玉膏的作用机理。方法 将2～3月龄42只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、琼玉膏组,每组14只。给药结束后,抽提下丘脑全蛋白。利用荧光双向差异凝胶电泳、图像分析、胶内酶切、质谱鉴定等蛋白质组学技术,分离、分析、鉴定大鼠下丘脑差异蛋白质;通过数据库检索和生物信息学方法,分析差异蛋白的功能及属性。结果 1. 成功复制亚急性衰老大鼠动物模型;2. 获得了正常对照组、模型组和琼玉膏组下丘脑组织的全蛋白表达荧光双向差异凝胶电泳图谱;3. 运用蛋白质组学技术,比较正常对照组、模型组及琼玉膏组的下丘脑组织,确认了15种表达量发生了变化的蛋白质。结论 鉴定出差异蛋白主要涉及有突触形成相关蛋白、线粒体相关蛋白、能量代谢相关蛋白、抗氧化、细胞骨架蛋白、细胞分化、增殖和凋亡蛋白等,为进一步筛选特异相关蛋白和药物靶位治疗奠定基础。     

琼玉膏抗衰老与下丘脑nf-kb炎症通路及GnRH1关系的相关性研究

目的探索琼玉膏抗衰老以及下丘脑nf-kb炎症通路的激活与GnRH1基因甲基化相关性的可能分子机制。方法(1)观察比较6只24月龄自然衰老SD大鼠和6只2月龄青年SD大鼠下丘脑衰老相关蛋白及其基因mRNA的表达水平:Western Blot检测GnRH1、Sirt1、DNMT1、DNMT3a的蛋白表达水平;Real-Time PCR检测GnRH1、Sirt1、DNMT1、DNMT3a基因mRNA的表达水平;使用SPSS19.0统计软件做统计学分析。MSP法检测老年鼠和青年鼠GnRH1基因甲基化情况。(2)通过分离新生SD大鼠下丘脑神经元干细胞,建立D-半乳糖诱导的下丘脑神经元干细胞衰老模型,比较正常神经元干细胞组、D-半乳糖衰老组以及不同浓度琼玉膏干预组之间炎性因子及NF-κB表达的差异。结果 (1)GnRH1、Sirt1、DNMT1的蛋白及其基因mRNA表达水平在老年鼠中明显降低,与青年鼠比较有显著性差异(P0.05);DNMT3a的蛋白及基因mRNA表达水平在老年鼠中无明显变化,与青年鼠比较无显著性差异(P0.05);老年鼠中GnRH1基因出现部分甲基化,青年鼠中GnRH1基因未发生甲基化。(2)D-半乳糖诱导建立的神经元干细胞衰老模型呈现炎性指标高表达以及NF-κB信号通路激活;琼玉膏可抑制炎性因子、nuclear P65的表达水平以及NF-κB的转录活性;并且,随着琼玉膏浓度从45μg/ml增加到90μg/ml,其提前干预D-半乳糖诱导的神经元干细胞衰老的作用也相应增强。结论琼玉膏抗衰老的可能分子机制在于降低下丘脑神经元干细胞炎性因子表达和NF-κB转录活性,进而能够逆转衰老进程中GnRH1基因甲基化及其表达水平下降。     

蓖麻PIP5Ks基因的生物信息学及荧光定量PCR分析

目的预测磷脂酰肌醇4-磷酸5-激酶(PIP5Ks)基因家族7个基因的表达部位;测定Lm型雌性系蓖麻a Lm AB23种品系不同时期的蓖麻花序中PIP5Ks各成员相对表达量。方法利用生物信息学分析在线软件进行蛋白质理化性质分析、蛋白质疏水性分析、亚细胞定位预测、跨膜区分析。采用荧光定量PCR方法进行蓖麻PIP5Ks基因家族的生物信息学分析和采用DNAMAN程序进行序列比对。结果蓖麻PIP5Ks共有7个成员,分别为PIP5K1、PIP5K2、PIP5K4、PIP5K6、PIP5K8、PIP5K9、PIP5K11;蓖麻PIP5K对应的蛋白之间的氨基酸序列同源性达到48.06%,蓖麻PIP5Ks所对应蛋白均为亲水性蛋白,除PIP5K9和PIP5K11为不稳定蛋白质其余均为稳定蛋白质;PIP5Ks对应蛋白均不存在跨膜结构域,均为非跨膜蛋白。亚细胞定位结果显示PIP5K1、PIP5K4、PIP5K6、PIP5K9、PIP5K11蛋白具有导肽的可能性较低,并且无对应的氨基酸切割位点,即定位在其他细胞器或者可能为胞浆蛋白;PIP5K2蛋白定位在叶绿体,叶绿体转运肽数值较高;PIP5K8蛋白定位在分泌通路。利从PIP5Ks在差异表达的相对表达量变化上来看,除PIP5K4并未检测到荧光,其余PIP5Ks均有一定的差异表达,PIP5Ks的相对表达量的变化趋势均较为相近,PIP5K1、PIP5K2的相对表达量较多,其次为PIP5K8、PIP5K9的相对表达量,PIP5K6及PIP5K11只有少量的表达。结论 PIP5Ks在蓖麻中对花序轴性状可能有一定的影响,PIP5Ks在花序轴上的差异含量与花序发育具有一定的规律性。     

何首乌饮对雌性衰老大鼠下丘脑神经递质的影响

目的 探讨下丘脑衰老时神经递质的变化及何首乌饮延缓下丘脑衰老的作用机制.方法 D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老动物模型,造模后灌胃何首乌饮连续60 d后,大鼠断头取下丘脑.采用ELISA法检测各组大鼠SP,β-EP和GnRH的含量;高效液相色谱法(HPLC)以SHIMADZU-10A 高效液相色谱仪和L-ECD-6A电化学检测器检测下丘脑单胺类神经递质NA,DA,5-HT的含量.结果 同正常对照组相比,模型组大鼠下丘脑GnRH、SP明显增高,β-EP与NA、DA、5-HT含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,何首乌饮组下丘脑GnRH、SP明显下降,β-EP与NA、DA、5-HT含量显著升高,呈现一定的剂量依赖性.结论 衰老时大鼠下丘脑正常功能被破坏,何首乌饮通过对神经递质紊乱的调节而延缓了下丘脑的衰老.     

补益营卫方对衰老皮肤表皮角蛋白18的影响

目的观察补益营卫方对衰老小鼠表皮角蛋白(Keratin,K)18的影响,探讨补益营卫方延缓皮肤衰老的机制。方法传代培养年轻小鼠与自然衰老小鼠表皮细胞,将衰老小鼠表皮细胞分为2组,一组常规培养,一组用含2.5%补益营卫方培养基培养。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测细胞K18蛋白、mRNA表达水平。结果与年轻组比较,老年组K18蛋白与mRNA表达水平显著升高(P<0.05);经2.5%药物干预后衰老表皮细胞中K18蛋白与mRNA表达水平较老年组降低(P<0.05)。结论补益营卫方通过抑制衰老皮肤表皮K18蛋白及mRNA表达而延缓皮肤衰老。     

艾炷灸命门穴对衰老模型大鼠脑组织中AGEs、RAGE表达影响

目的:观察艾炷灸命门穴对D-半乳糖致衰老大鼠脑组织中AGEs及其受体RAGE表达的影响,探讨艾炷灸命门穴延缓衰老的作用机制。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为空白组10只、模型制备组30只,空白组腹腔注射生理盐水,模型制备组进行腹腔注射D-半乳糖500 mg/kg,每日1次,连续60天,模型制备成功后随机选取20只分为模型对照组、命门穴治疗组,艾炷灸治疗4周。酶联免疫吸附测定法(Elisa)观察各组大鼠脑组织匀浆中AGES、RAGE表达水平,RT-PCR观察RAGE mRNA的表达水平。结果:模型对照组大鼠脑组织中AGES、RAGE及RAGE mRNA表达水平比空白组明显增加(P<0.01);命门穴治疗组脑组织中AGES、RAGE及RAGE mRNA表达水平明显低于模型对照组(P<0.01)。结论:艾炷灸命门穴可以延缓衰老,其机制可能是AGEs的水平下调减少了对蛋白的直接修饰及抑制AGEs与特异性配体RAGE结合而引发一系列的生物学效应而达到延缓衰老的目的。     

补肾中药何首乌饮对雄性衰老大鼠下丘脑的保护作用

目的 观察何首乌饮对雄性衰老大鼠下丘脑的保护作用.方法 选用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型,并用补肾中药何首乌饮进行干预,采用液相色谱法检测各实验组大鼠下丘脑NA、DA、5-HT含量;电镜观察下丘脑超微结构的变化.结果 模型组大鼠下丘脑NA、DA、5-HT含量明显下降;大鼠弓状核暗细胞和明细胞的核膜、线粒体、粗面内质网和高尔基复合体明显异常,神经毡的纤维排疏松、不规则,部分突起萎缩变性,部分突起出现异常改变.用药组同模型组相比,下丘脑NA、DA、5-HT含量明显提高,与正常组比较有显著性差异(P＜0.01),下丘脑超微结构有明显改善,而且何首乌饮预防中剂量组和延缓高剂量组效果明显好于其余各组(P＜0.05).结论 何首乌饮可延缓下丘脑衰老.