橙皮素抑制P-选择素诱导的乳腺癌转移作用机制研究

目的探究橙皮素对P-选择素介导的MDA-MB-231乳腺癌细胞转移的影响及其作用机制。方法运用计算机虚拟对接技术体外评价橙皮素与P-选择素的结合能力;采用MDA-MB-231乳腺癌细胞为模型,MTS法观察不同浓度的橙皮素/P-选择素对MDA-MB-231生长能力的影响;ELISA法检测橙皮素对活化的血小板表面P-选择素分泌的影响;黏附实验考察橙皮素对P-选择素介导的MDA-MB-231与内皮细胞黏附的影响;Transwell实验分析橙皮素对P-选择素促进MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移的影响;采用Western blotting法考察橙皮素对MDA-MB-231细胞表面糖蛋白(Mucin-1)、整合素(Integrinβ3、β1)及基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)蛋白表达的影响;进一步分析橙皮素对MDA-MB-231细胞Integrin-MMP信号通路的影响,阐明橙皮素抗肿瘤转移的作用机制。结果计算机虚拟对接技术证实橙皮素与P-选择素有较好的结合能力;在体外橙皮素能剂量依赖性抑制MDA-MB-231增殖及其与内皮细胞的黏附;橙皮素能降低活化的血小板表面P-选择素的分泌;迁移实验中橙皮素能显著抑制P-选择素介导的MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移;降低P-选择素诱导的细胞表面糖蛋白Mucin-1、Integrinβ3、Integrinβ1及MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结论橙皮素具有抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞生长能力,阻断P-选择素诱导的乳腺癌MDA-MB-231肿瘤细胞迁移以及其与内皮细胞的黏附,其机制为橙皮素通过竞争性结合P-选择素,阻断其与Mucin-1的结合,抑制PI3K-AKT-Paxillin-FAK-Src信号通路,下调P-选择素调控的Integrins及MMP-2、MMP-9表达。     

鸡血藤通过调控SNX9及β-catenin抑制三阴性乳腺癌细胞转移的作用机制

目的探索鸡血藤对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响,以及抑制三阴性乳腺癌转移发生可能的作用机制。方法采用不同浓度（25、12.5、6.25、3.12、1.56 μg/mL）的鸡血藤提取物,干预三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231-luc,另设空白对照组。利用细胞划痕实验、Transwell实验检测其对细胞迁移能力及侵袭能力的影响。利用Western Blot检测不同浓度鸡血藤提取物干预后,乳腺癌细胞中的分类连接蛋白9（SNX9）和β-catenin的表达水平。结果与空白对照组同期比较,12.5及25 μg/mL组给药6 h细胞迁移率降低（P<0.05）;3.12、6.25、12.5及25 μg/mL组给药12 h后细胞迁移率降低（P<0.05,P<0.01）;各剂量组给药24 h后细胞迁移率均降低（P<0.05,P<0.01）;3.12 μg/mL组β-catenin表达降低（P<0.05）;25 μg/mL组SNX9表达增加（P<0.05）,β-catenin表达降低（P<0.01）。与1.56 μg/mL组同期比较,12.5及25 μg/mL组给药12 h后细胞迁移率降低（P<0.05）。与3.12 μg/mL组比较,25 μg/mL组β-catenin表达降低（P<0.05）。结论鸡血藤可抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MD-231-luc的迁移及侵袭能力,其机制与调控SNX9及β-catenin表达有关。     

山慈菇-蜂房药对抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭转移的机理研究

目的 研究山慈菇-蜂房药对对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响及其作用机制。方法 噻唑蓝（MTT）法检测山慈菇-蜂房药对大鼠含药 血清对细胞活力的影响,Transwell小室法测定其侵袭力,实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）基 因的表达。结果 山慈菇-蜂房药对组MDA-MB-231细胞体外生长杀伤率为35.86 %;能明显抑制MDA-MB-231 细胞的侵袭能力（P＜ 0.01）,其抑制率为34.8 %;MMP-9 mRNA明 显降低,TIMP-1 mRNA明显升高,MMP-9 mRNA/ TIMP-1 mRNA值显著降低（P＜ 0.05,P＜ 0.01）。结论 山慈菇-蜂房药对能够抑制MDA-MB-231 细胞侵袭能力,其机制可能与 下调MMP-9mRNA表达,上调TIMP-1mRNA的表达,降低MMP-9 mRNA/ TIMP-1 mRNA比值有关。     

槲皮素抑制乳腺癌细胞迁移侵袭及分子机制研究

目的:探究槲皮素(naringenin)对乳腺癌细胞MDA-MB-231转移的影响及其作用机制。方法:MTT法观察经不同浓度槲皮素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长能力的影响;划痕实验(wound healing)及Transwell实验分析考查槲皮素对MDAMB-231水平运动能力的影响;采用Western blotting考察槲皮素对MDA-MB-231细胞整合素Integrinβ3,β1及基质金属蛋白酶MMP-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2),MMP-9蛋白表达的影响;运用计算机虚拟对接技术体外评价槲皮素与整合素Integrinβ3的结合能力。结果:槲皮素可以剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞的增殖;Wound healing实验和Transwell小室迁移实验中,随着槲皮素浓度提高,MDA-MB-231迁移数目呈递减趋势;随着槲皮素浓度的提高,乳腺癌细胞侵袭能力呈递减趋势;槲皮素可以剂量依赖性抑制Integrinβ3蛋白表达,而对Integrinβ1的表达不甚明显,此外槲皮素可以显著抑制MMP-2和MMP-9的蛋白表达;计算机虚拟对接结果发现槲皮素与Integrinβ3的结合能力数值为较低负值,表明槲皮素与Integrinβ3有较好的亲和力。结论:槲皮素具有抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞生长能力,阻断MDA-MB-231细胞迁移、运动以及侵袭,其机制为槲皮素与Integrinβ3结合后,下调MMP-2,MMP-9的表达。     

黄芩素对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖与迁移的影响

目的 探讨黄芩提取物黄芩素(Baicalein)抑制人乳腺癌细胞增殖作用的机制.方法 利用MTT细胞毒性实验检测黄芩素对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖的影响,并采用划痕实验检测器对细胞迁移的影响;通过Western Blotting和免疫荧光实验在蛋白水平检测黄芩素作用下,人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞中MMP-9蛋白变化情况.结果 MTT实验证实黄芩素可以明显抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞的增殖,划痕实验证明黄芩素课有效抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞迁移,Western blotting和免疫荧光实验发现黄芩素可抑制MMP-9蛋白表达.结论 黄芩素可能通过抑制MMP-9蛋白表达,抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖和迁移.     

南蛇藤提取物通过调控基质金属蛋白酶组及其抑制因子抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的研究

目的探讨南蛇藤提取物(COE)对人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和转移的影响及其分子机制。方法 MTT法检测COE对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测COE对SGC-7901细胞侵袭和转移能力的影响。Western blotting检测经COE作用后的SGC-7901细胞中金属基质蛋白酶(MMPs)MMP2、MMP9和金属基质蛋白酶抑制因子(TIMPs)TIMP1、TIMP3的蛋白水平。RT-PCR检测经COE作用后的SGC-7901细胞中MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP3的m RNA表达情况。结果 Transwell实验显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞穿膜数明显减少并呈一定的浓度依赖性。Western blotting结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞,MMP2、MMP9蛋白的表达水平明显降低,而TIMP1、TIMP3蛋白表达水平明显上调。RT-PCR结果显示,经20、40、80 mg/L COE处理过的SGC-7901细胞中MMP2和MMP9的m RNA水平有轻微升高趋势,而TIMP1和TIMP3的m RNA水平明显大幅上调(P0.001)。结论 COE能明显抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭和迁移,其机制可能与下调MMP2、MMP9蛋白水平直接相关。而其作用的实现,很可能是通过直接上调TIMP1和TIMP3的m RNA转录水平从而提高TIMPs蛋白表达水平实现的。     

从高良姜中制备高良姜素对照品的研究

目的:建立从高良姜中制备高良姜素对照品的方法.方法:结合萃取、常压制备色谱和重结晶方法对高良姜乙醇提取物进行分离纯化,通过MS、IR、UV和NMR进行结构鉴定,薄层色谱和HPLC进行纯度检查和含量测定.结果:制备得到的高良姜素纯度检查符合国家药典要求,纯度为99.7%.结论:建立的制备方法简单,对照品纯度高,可作为高良姜药效物质基础研究的标准对照品.     

二氢丹参酮抑制人胃癌SGC7901细胞侵袭迁移作用及机制研究

目的研究二氢丹参酮(DHT)对人胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其作用的分子机制。方法利用不同浓度的DHT处理细胞后,MTT法检测DHT对细胞生长活力的影响,划痕实验观察DHT对细胞运动能力的影响,Transwell小室模型研究DHT对细胞迁移和侵袭的影响,q RT-PCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶MMP2、MMP9和Hedgehog通路调控基因Gli1和HHIP的m RNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,DHT可显著抑制SGC7901细胞的体外增殖及迁移能力,Transwell实验表明药物处理后穿膜细胞数明显低于对照组,并且呈剂量依赖性。Western blotting和q RT-PCR实验结果表明,DHT可显著抑制SGC7901细胞中MMP9的表达,降低Gli1基因的m RNA和蛋白表达,并提高HHIP基因的表达水平。结论 DHT能够抑制SGC7901细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与MMP9蛋白的表达降低和Hedgehog通路活性抑制有关。     

高良姜饮片HPLC指纹图谱及高良姜素含量测定研究

目的:采用高效液相色谱法建立高良姜饮片的HPLC指纹图谱,同时测定样品中高良姜素的含量,为其质量控制提供新方法。方法:以Phenom enex C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-0.2%磷酸溶剂系统,线性梯度洗脱,检测波长为280 nm(高良姜素含量测定为235 nm);采用指纹图谱相似度软件进行数据分析。结果:确定了高良姜饮片9个共有峰,建立了14批药材的共有图谱,并比较了样品中高良姜素的含量。结论:指纹图谱信息结合有效成分含量测定,可较为全面评价高良姜饮片的质量。     

高良姜素的药效学研究

对高良姜素以镇痛和止呕为主要药效学指标进行研究,结果提示高良姜素具明显的镇痛和止呕的药理作用,表明高良姜素为高良姜的有效成分,以其作为评价高良姜药材质量标准是可行的。     

乳移平对乳腺癌细胞增殖和迁移能力影响及机制研究

目的研究中药乳移平对MDA-MB-231细胞增殖与侵袭能力的影响及其分子机制。方法使用乳移平刺激MDAMB-231细胞,通过MTT实验检测细胞增殖,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力。RT-PCR法和免疫印迹法检测乳移平刺激后及加入NF-κB抑制剂后E-Cadherin表达水平。结果乳移平对MDA-MB-231细胞增殖能力有一定抑制能力,并且其能显著抑制细胞迁移;乳移平能够通过NF-κB通路诱导E-Cadherin表达来抑制乳腺癌细胞迁移。结论乳移平能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力,其机制可能与促进E-Cadherin表达有关。     

水飞蓟素对乳腺癌细胞系的作用及其机制研究

目的：研究水飞蓟素在体外对不同乳腺癌细胞系的作用，并进一步探讨其作用机制。方法：MTT实验测定水飞蓟素对乳腺癌细胞系MCF－7和SK－BR－3的半数抑制浓度（IC50）；软琼脂克隆形成试验检测加药后两种细胞在软琼脂内的增殖能力。在此基础上，用Her-2抑制剂AG825进行干预，对水飞蓟素的作用机制进行初步探讨。结果：水飞蓟素对两种乳腺癌细胞有不同程度的抑制作用，其中对MCF－7细胞的作用较强，IC50≤0．02％，而对SK－BR－3的作用较弱。Her-2抑制剂AG825可增加SK－BR－3细胞对药物的敏感性，抑制了水飞蓟素作用后该细胞在软琼脂中集落的形成。结论：水飞蓟素在体外对MCF－7细胞具有明显的抑制作用，而AG825可增强SK－BR－3细胞对药物的敏感性。因此，SK－BR－3细胞中Her-2的高表达可能是该细胞对水飞蓟素敏感性差的原因，而水飞蓟素也可能通过Her-2调节某个或某几个下游分子起作用。     

片仔癀对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其机制研究

目的研究片仔癀对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其机制。方法以人肺癌A549细胞作为体外实验对象,分别用不同质量浓度的片仔癀处理,MTT检测细胞增殖变化,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移变化,Western blotting检测细胞中侵袭、迁移蛋白MMP-9、MMP-2和上皮细胞-间充质转化(EMT)蛋白E-cadherin、vimentin及Akt信号通路蛋白Akt磷酸化水平。用Akt信号通路激活剂和片仔癀处理肺癌细胞,检测激活Akt信号通路对片仔癀抗肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用。结果 100μg/mL的片仔癀对肺癌细胞增殖能力没有影响(P0.05),200μg/m L的片仔癀处理可以明显降低肺癌细胞增殖能力(P0.05)。100、200μg/m L的片仔癀处理后的肺癌细胞侵袭和迁移能力均降低,细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平下降,E-cadherin蛋白水平升高,vimentin蛋白水平降低,同时细胞中Akt磷酸化水平也下降(P0.05)。Akt信号通路激活剂处理可以明显减弱片仔癀对肺癌细胞增殖、侵袭、迁移的抑制作用(P0.05)。结论片仔癀具有降低肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力,作用机制与抑制Akt信号通路的激活有关。     

鸦胆子苦醇对三阴性乳腺癌细胞凋亡的影响

目的:研究鸦胆子苦醇(BRU)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡影响.方法:用BRU处理MDA-MB-231细胞.采用CCK-8法检测MDA-MB-231细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率和周期.结果:BRU对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生长抑制率测定结果显示,不同浓度的BRU对MDA-MB-...     

异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制

目的 探讨异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制.方法 人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞分别用异长春花碱1、10 μmol/L处理后,MTS法检测细胞黏附能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,ELISA法检测细胞转移生长因子-β (TGF-β)分泌的变化,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9活性,Western blotting法检测肿瘤细胞E-钙黏素、N-钙黏素、MMP-2、MMP-9、p-JNK及p-Akt蛋白的表达,RT-PCR法检测肿瘤细胞E-钙黏素、N-钙黏素及MMP-2、MMP-9基因的表达,双荧光素酶报告基因实验考察AP-1和核因子-κB (NF-κB)活性的变化.结果 异长春花碱1、10 μmol/L给药后,细胞黏附能力:MCF-7细胞分别下降34.8％、66.8％,MDA-MB-435细胞分别下降42.6％、72.3％;侵袭能力:MCF-7细胞分别下降44.4％、72.2％,MDA-MB-435细胞分别下降47.7％、86.4％; TGF-β分泌:MCF-7细胞分别下降28.2％、52.1％,MDA-MB-435细胞分别下降39.0％、55.1％;E-钙黏素基因表达:MCF-7细胞分别上调86.5％、181.6％,MDA-MB-435细胞分别上调116.6％、160.7％; N-钙黏素基因表达:MCF-7细胞分别下降33.7％、74.1％,MDA-MB-435细胞分别下降57.6％、76.9％; MMP-2基因表达:MCF-7细胞分别下降71.6％、88.4％,MDA-MB-435细胞分别下降57.4％、69.4％; MMP-9基因表达:MCF-7细胞分别下降15.0％、84.0％,MDA-MB-435细胞分别下调22.1％、73.0％;E-钙黏素蛋白表达显著上调,N-钙黏素蛋白表达明显下调,MMP-2和MMP-9及p-JNK、p-Akt蛋白表达显著下降;AP-1活性:MCF-7细胞分别下降27.7％、68.2％,MDA-MB-435细胞分别下降34.8％、71.4％; NF-κB活性:MCF-7细胞分别下降18.4％、44.8％,MDA-MB-435细胞分别下降24.4％、51.9％.结论 异长春花碱可抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞体外侵袭能力,其机制可能与下调肿瘤转移相关信号通路及上皮间质转化表达有关.     

蓝萼甲素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究蓝萼甲素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞周期的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测蓝萼甲素对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期;Western blotting法检测细胞中cyclin B1、cyclin D1、细胞周期素依赖激酶2(CDK2)、CDK4、p53、p21、p27、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)、组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化(H3K4me2)、组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化(H3K9me2)蛋白表达水平。结果蓝萼甲素能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;提高G2/M期细胞比例;上调p53、p21、p27、H3K4me2、H3K9me2蛋白表达水平,下调cyclin B1、cyclin D1、CDK2、CDK4、LSD1蛋白表达水平。结论蓝萼甲素抑制MDA-MB-231细胞增殖,阻滞MDA-MB-231细胞周期于G2/M期,其机制可能与激活p53的表达及调控组蛋白的甲基化作用有关。     

茯苓酸通过激活多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡

目的观察茯苓酸对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨作用机制。方法乳腺癌MDA-MB-231细胞与不同浓度(1、2、5μmol/L)的茯苓酸共孵育,采用CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒检测细胞存活率;流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)及与细胞凋亡相关蛋白的表达。结果茯苓酸能够剂量和时间依赖性地抑制MDA-MB-231细胞的增殖,并可诱导MDA-MB-231细胞凋亡。浓度为1、2、5μmol/L的茯苓酸作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率显著增加至25.6%、59.4%、87.2%,明显高于对照组凋亡率(5.4%);经过1、2、5μmol/L茯苓酸分别处理48 h后,实验组MDA-MB-231细胞中凋亡蛋白标志物PARP裂解量升高,且呈剂量依赖性。结论茯苓酸能抑制MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与激活PARP有关。     

西黄丸含药血清对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的:研究西黄丸含药血清对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移以及对环氧化酶2(COX-2)转录的影响,以期探讨西黄丸对三阴性乳腺癌细胞的作用.方法:大鼠灌胃给药制备西黄丸含药血清,实验设置大鼠空白血清组和西黄丸含药血清组,以含药血清干预三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法检测细胞增殖...