类风湿性关节炎患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞检测及意义

目的:研究CD4 CD25 FoxP3 调节性T细胞在类风湿关节炎患者(RA)外周血中的比例改变,并探讨其在疾病进程中的意义.方法:选取活动期及稳定期RA患者,采用细胞内染色的流式细胞术及定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测FoxP3表达,并与正常人进行比较.结果:RA患者CD4和CD25双阳性细胞所占比例与对照组没有明显差异,而活动期患者外周血CD4 CD25high和CD4 CD25 FoxP3 细胞明显低于稳定期和对照组(P＜0.05).FoxP3 mRNA表达水平与蛋白质表达水平变化相一致.结论:类风湿性关节炎活动期时CD4 CD25 FoxP3 调节性T细胞明显减少,这群调节性T细胞可能参与了类风湿性关节炎的病理进程.     

肺癌患者CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞的格局变化及意义

目的：研究肺癌患者外周血（PBMC）及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中CD4^＋ CD25^high Foxp3^＋调节性T细胞（Treg）的比例改变，探讨其在抗肿瘤免疫中的调节作用。方法：分离肺癌患者PBMC及TIL，FACS分析CD4^＋／CD8^＋T细胞的比值及CD4^＋ CD25^highT细胞占CD4^＋T细胞的比例。Real-time PCR检测Treg特异性转录因子Foxp3基因在PBMC及TIL中的表达。结果：肺癌患者PBMC及TIL中CD4^＋／CD8^＋比值降低；而CD4^＋ CD25^high T细胞在CD4^＋T细胞中所占比例升高；Foxp3基因仅在TIL中高表达，而在PBMC中低或不表达，表明肿瘤局部的CD4^＋ CD25^high T细胞主要是CD4^＋ CD25^high Foxp3^＋ Treg。结合临床资料分析显示Treg在肺腺癌比例较高。结论：CD4^＋ CD25^high Foxp3^＋ Treg在肺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中明显升高，可能与其通过细胞与细胞间接触抑制CD8^＋T细胞的杀伤效应，最终发挥免疫抑制效应相关。     

Foxp3和CD4+CD25+调节性T细胞研究进展

调节性T细胞是机体维持自身耐受的重要组成部分,其对免疫反应具有抑制效应,在体外增殖能力低,在免疫病理、移植物耐受、阻止自身免疫反应和维持机体免疫平衡方面都有一定作用.最近发现Foxp3在调控调节性T细胞的一重要亚群CD4+CD25+T细胞的发育上起很重要的作用.本文就CD4+CD25+T细胞特性、Foxp3在其发育和功能发挥中的作用以及其活性调节方面作一综述.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在麻风病中的水平和意义

目的:探讨CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)在麻风病发病中的作用.方法:采用流式细胞仪检测51例现症麻风患者,5例发生Ⅱ型麻风反应(ENL)的患者,26例治愈麻风患者及56例正常体检者外周血CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)占CD4+的百分比.结果:现症组、治愈组、Ⅱ型麻风反应(ENL)组及正常对照组外周血Treg的水平分别为:(17.626±8.1977)％、(38.442±4.761 8)％、(6.380±1.548 2)％和(9.998±1.706 2)％.治愈组与现症组麻风患者的Treg高于正常对照组,并且治愈组的Treg比现症组高(P＜0.05),ENL组的Treg比正常对照组低(P＜0.05);在现症麻风病人中,少菌型患者(PB)及多菌型患者(MB) Treg的百分比分别为:(29.629±7.999 5)％和(15.709±6.4809)％,均高于正常对照组(9.998±1.706 2)％ (P ＜0.05),并且少菌型患者(PB)的Treg高于多菌型患者(MB) (P ＜0.05).结论:治愈组与现症组麻风患者的Treg均高于正常对照组,发生Ⅱ型麻风反患者(ENL组)的Treg比正常对照组低,Treg可能打破了外周免疫耐受,参与了麻风病的发生发展.     

SLE患者外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞的分析

目的分析SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达,以初步阐述其在SLE患者免疫稳态调节中的作用和意义。方法以流式细胞术检测SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞和T细胞亚群上GITR的表达。结果稳定期及活动期SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞比例显著低于健康对照(P<0.05),且活动期SLE患者Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞比例高于稳定期SLE患者(P>0.05)。SLE患者外周血CD3 CD4 T细胞和CD3 CD8 T细胞上GITR表达显著增加(P<0.05);随着疾病活动性增加,CD3 CD4 T细胞上GITR表达降低(P>0.05),CD3 CD8 T细胞上GITR表达增加(P>0.05)。结论SLE患者外周血中Foxp3 CD4 CD25 调节性T细胞表达降低,而患者T细胞亚群上GITR表达增加,其共同作用在诱导SLE患者外周耐受障碍中具有重要意义。     

2型糖尿病患者外周血CD8+CD25+Foxp3+Treg细胞检测及意义

目的探讨外周血CD8~+CD25~+Foxp3~+Treg(CD8~+Treg)细胞比例在2型糖尿病(T2DM)疾病过程中的作用。方法选取T2DM患者90例。根据尿微量白蛋白(MAL),分为45例T2DM伴正常蛋白尿患者(NMAU,MAL30 mg/24 h),45例T2DM伴微量蛋白尿患者(MAU,MAL 30～300 mg/24 h),同时选择门诊体检健康人员45名作为对照组(HC)。通过特定蛋白仪检测患者mAlb浓度;流式细胞仪检测CD8~+Treg细胞比例;Luminex200检测血浆白细胞介素(IL)-8、1β、6和肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。结果与HC组[4.43(3.26～5.75)%]相比,NMAU组[4.06(3.15～5.43)%]和MAU组[3.52(2.30～4.87)%]患者CD8~+Treg细胞比例降低,且MAU组降低更明显(P0.05);与HC组相比,MAU组和NMAU组患者血浆细胞因子TNF-α、IL-8、IL-6和IL-1β浓度均升高(P0.05);MAU组患者CD8~+Treg比例与血清细胞因子TNF-α(r=-0.444 8,P0.01)、IL-8(r=-0.341 2,P0.05)、IL-6(r=-0.365 3,P0.05)和IL-1β(r=-0.319 2,P0.05)呈负相关;Logistic回归分析显示CD8~+Treg对T2DM患者可能具有保护作用。结论通过调控T2DM患者外周血CD8~+Treg细胞比例,有可能减缓糖尿病的进程。     

妊娠期高血压患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化及意义

目的:研究CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在妊娠期高血压疾病患者(HDCP)外周血中比例改变,并探讨其在妊娠期高血压疾病进程中的意义。方法:选取2007年11月至2008年6月在镇江市妇幼保健院、镇江市润州区人民医院门诊及住院妊娠期高血压疾病患者56例,其中妊娠期高血压20例,轻度子痫前期16例,重度子痫前期20例。选择同期正常妊娠妇女20例,正常育龄妇女16例。采用细胞内染色的流式细胞术及定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测调节性T细胞Foxp3的表达。结果:(1)轻度子痫前期和重度子痫前期妇女外周血中CD4+CD25+T细胞比例分别为6.78%±1.18%、4.79%±1.17%,显著低于正常妊娠妇女11.95%±3.73%(P0.01)和正常育龄妇女8.99%±2.40%(P0.05);重度子痫前期CD4+CD25+T细胞比例明显低于妊娠期高血压的10.17%±1.46%(P0.05);正常妊娠妇女外周血CD4+CD25+细胞比例显著高于正常育龄妇女(P0.05)。(2)妊娠期高血压、轻度子痫前期和重度子痫前期患者CD4+CD25+Foxp3+细胞分别为1.80%±0.45%、1.36%±0.21%和0.72%±0.25%,显著低于正常妊娠妇女的4.23%±1.28%(P0.01)和正常育龄妇女的2.75%±1.09%(P0.05),而轻度子痫前期和重度子痫前期患者CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞明显低于妊娠期高血压(P0.05);正常妊娠妇女外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞显著高于正常育龄妇女(P0.05)。(3)Foxp3mRNA表达水平与蛋白质水平相一致。结论:妊娠期高血压疾病发病时CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞明显减少,这些调节性T细胞改变可能参与了妊娠高血压疾病的病理进程。     

不同结核病患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达的变化

Objective To investigate the expression of CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cell in patients with tuberculosis, and to discover its role in the immune response to mycobacterium tuberculosis. Methods Thirty-three patients with tuberculosis and 30 healthy controls were selected who were consulted in our hospital. Patients were classified by their chemotherapy and smear sputum and CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cell were detected by flow cytometry. Results Expression of CD4 + CD25high and CD4+ CD25 + Foxp3 + regulatory T cell in experimental group were ( 8.84 ± 2.55 ) % and (6.30 ± 1.38 ) % respectively, which were significantly higher than they were in control group (t = 3.57,4. 01, P ＜ 0. 01 ). The expression of CD4 + CD25high and CD4+ CD25 + Foxp3 + regulatory T cell in patients with positive smear sputum were also significant higher than that in patients with negative smear sputum ( t = 2. 51,2. 42,P ＜ 0.05). No significance was founded between the first-visit group and revisit group ( t = 0. 03, 0. 02, P ＞ 0.05 ). Conclusions CD4 + CD25high and CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T cell in patients with tuberculosis were higher than healthy control, which may result in immune suppression.     

新生儿脐带血CD4+CD25high调节性T细胞Foxp3的表达

目的:检测新生儿脐带血CD4 CD25high调节性T细胞(Treg)数量及胞内转录因子Foxp3的表达,探讨Treg细胞在新生儿期的表达特点.方法:采集新生儿脐带血(n=15)和成人外周血(n=12),密度梯度离心法获取单个核细胞用荧光标记单克隆抗体(mAb)作表面和胞内染色后,在流式细胞仪上检测CD4 CD25highTreg细胞的数量及其胞内转录因子Foxp3的表达.结果:脐带血Treg细胞占CD3 CD4 T细胞的比例(3.86%±1.63%)明显高于成人外周血(0.87%±0.74%,P<0.01);而脐带血Treg细胞中表达Foxp3的比例明显低于外周血Treg细胞(23.21%±8.9%vs71.3%±11.6%,P<0.01).结论:虽然新生儿脐带血CD4 CD25highTreg细胞数量明显高于成人外周血,但Foxp3 细胞数量明显低于成年人,提示在功能上可能尚未成熟.     

初发系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+和CD4~+CD25~-Foxp3~+T细胞

目的：研究初发系统性红斑狼疮患者（Systemic lupus elythematosus，SLE）外周血CD4^＋T细胞中CD25和Foxp3表达及其在SLE发病中的意义。方法：根据SLE疾病活动积分（SLEDAI）将初发SLE患者分为活动组（10例）和不活动组（11例），流式细胞仪检测治疗前后外周血CD4^＋T细胞中CD25、Foxp3和CD127表达百分率，并对其与SLE临床活动度、尿蛋白、补体和anti-ds-DNA相关性进行研究。结果：初发活动组和不活动组SLE患者CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞表达百分率分别为（1．91％～6．75％）和（2．74％～7．01％），与正常对照（2．11％～9．90％）相比没有统计学差异（P=0．524，P=0．794）；且初发SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞在体外增殖反应和增殖抑制功能与正常对照相比无明显差别（P=0．174，P=0．689）；外周血CD4^＋CD25^-Foxp3^＋T细胞百分率在初发活动组（3．71％～10．94％）和不活动组（2．97％～7．69％）SLE患者均比正常对照（1．01％～3．62％）显著增高（P〈0．01和P〈0．01）；而CD4^＋CD2^＋Foxp34^-T百分率在初发活动组SLE患者（1．19％～9．23％）显著低于正常对照（2．67％～11．26％）和初发不活动组SLE患者（3．73～8．27％）（P=0．039，P=0．048）；与CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞类似，90％左右的CD4^＋CD25一Foxp3^＋T细胞不表达或低表达CD127，其百分率与anti-ds-DNA浓度呈正相关，且尽管未达到统计学意义，但激素和免疫抑制治疗后其水平下降。结论：初发未经治疗的SLE患者CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞数量和功能无明显异常，而CD4^＋CD25^-Foxp3^＋T细胞数量增多，与SLE疾病活动相关，可能具有调节功能。     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞在子宫内膜癌患者外周血中的表达及意义

探讨在子宫内膜癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的表达情况及意义。采用流式细胞术检测84例术前子宫内膜癌患者及40例子宫肌瘤患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+细胞比例及Foxp3平均荧光强度,采用qRT-PCR检测两组患者外周血中Foxp3的mRNA表达情况,同时采用ELISA检测外周血中TGF-β1和IL-17含量。与子宫肌瘤组比较,子宫内膜癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例虽略有升高但没有统计学意义(P=0.08),而CD4+CD25+细胞内Foxp3的平均荧光强度明显升高(P<0.001)。子宫内膜癌患者外周血中Foxp3的mRNA表达要明显多于子宫肌瘤组(P<0.001)。子宫内膜癌患者外周血中TGF-β1、IL-17的含量要多于子宫肌瘤组。子宫内膜癌患者外周血中的Foxp3+Treg细胞表达增多,这些细胞可能通过增加细胞因子TGF-β和IL-17的分泌从而调节机体对肿瘤细胞免疫反应的方向,最终促进子宫内膜癌的发生和发展。     

外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与丙型肝炎病毒感染的相关性

CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)可抑制T细胞免疫反应,Foxp3+是Treg的主要转录因子,可调控Treg的生长发育与功能效应.本研究旨在探讨丙型肝炎病毒(HCV)感染时外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg出现的频率及其与HCV RNA含量的相关性.     

小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞体外扩增

目的:本研究旨在探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞体外扩增的方法。方法:采用磁珠分选小鼠CD4+T细胞,αCD3单克隆抗体包被24孔板,加入αCD28单克隆抗体、雷帕霉素、rhIL-2,培养3周后,流式细胞仪测定培养细胞中CD4+CD25+T细胞的含量,实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达;单向混合淋巴细胞反应和增殖抑制试验测定扩增的CD4+CD25+T细胞的增殖及其抑制功能;ELISA检测培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:小鼠CD4+T细胞培养3周后,CD4+CD25+T细胞达(76.05±2.73)%,高于未加雷帕霉素组(52.17±1.36)%(P<0.001),磁珠分选的CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达是未加雷帕霉素组的5倍(P<0.001),增殖能力是未加雷帕霉素组的0.29倍(P<0.001),对CD4+T细胞增殖抑制能力是未加雷帕霉素组的3.6倍(P<0.001),培养上清中IL-10和TGF-β1分别是对照组的1.8倍和1.6倍(P<0.001)。结论:小鼠CD4+T细胞在含有1μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和终浓度为10 nmol/L雷帕霉素的培养体系中培养3周后能有效扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。     

肺癌患者CD4+ CD25+调节性T细胞的检测及临床意义

目的:检测肺癌患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞的分布并探讨相关机制.方法:采用流式细胞仪分析66例肺癌患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞占CD4 T淋巴细胞的比例.结果:66例肺癌患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞占CD4 T淋巴细胞的比例为(16.2±2.4)%,与对照组(6.19±1.5)%比较差异有显著性(P＜0.05). 25例鳞癌、29例腺癌、12例小细胞癌患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞比例分别为(18.3±2.9)%、(15.6±1.8)%、(17.3±2.2)%,各组间比较差异无显著性(P＞0.05);均显著高于对照组(6.19±1.5)%,P＜0.05;34例Ⅲ期,14例Ⅳ期肺癌患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞比例为(15.3±2.6)%,(20.4±3.1%),均显著高于18例Ⅱ期患者(9.4±1.3)%,P均＜0.05.结论:肺癌患者外周血中有CD4 CD25 调节性T细胞比例增高,且与分期有关.它可能与肺癌患者免疫功能受损有关,可作为评估肺癌患者预后的一项指标.     

CD4+CD25+调节性T细胞研究的意义

以往的免疫学理论认为 ,实现自身免疫耐受的主要机制是胸腺细胞及前Ｂ(ｐｒｅ Ｂ)细胞在中枢免疫器官中的克隆清除 (ｃｌｏｎａｌｄｅｌｅｔｉｏｎ)。其次 ,进入外周的成熟淋巴细胞如果表达针对自身抗原的识别受体(ＴＣＲ或者ＢＣＲ) ,通常被诱导进入免疫无能 (ａｎｅｒｇｙ)状态而不表现任何自身反应性。另外尚有部分淋巴细胞对自身抗原的免疫忽视 (ｉｇｎｏｒａｎｃｅ)也被认为是外周免疫耐受的机制之一。上述三种途径均以“被动”的方式实现自身免疫耐受 (ｒｅｃｅｓｓｉｖｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ)。近年积累的大量实验证据表明 ,机体可能…     

CD4+CD25+Foxp3+T细胞在子痫前期中作用机制的研究

目的 探讨子痫前期(PE)患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞及胎盘组织Foxp3的表达水平.方法 73例PE患者分为MPE组(轻度PE,38例)和SPE组(重度PE,35例),以正常的孕妇作为对照组;采用流式细胞术(FCM)检测外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达水平,采用免疫组化法(IHC)检测胎盘组织Foxp3的表达水平;将Foxp3与CD4+CD25+Foxp3+T、胎盘重量和阿氏(Apgar)评分进行Spearman相关性分析.结果 SPE组、MPE组外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞表达水平分别为4.23±0.74％、6.58±0.8％,均低于对照组的7.01±0.95 ％(P＜0.05),SPE组外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞表达水平低于MPE组(P ＜0.05);SPE组、MPE组胎盘组织中Foxp3的阳性表达率分别为28.57％、47.37％,均低于对照组的82.76％(P ＜0.05),SPE组胎盘组织中Foxp3的阳性表达率显著低于MPE组(P＜0.05);胎盘组织中Foxp3的阳性表达率与CD4+CD25+Foxp3+T细胞表达水平、胎盘重量及Apgar评分均呈正相关(P＜0.01).结论 PE与外周血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞表达水平下降密切相关.     

流式细胞术不同设门方法对CD4+CD25+调节性T细胞的检测方法比较

目的 比较CD4+CD25hi、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-/low 3种设门方法对CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)的界定效果.方法 完全随机法选择33例本院健康体检者,分别采用CD4+CD25hi、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-/low设门的方法进行检测.结果 (1)CD4+CD25hi、CD4+CD25+FoxP3+设门方法对CD4+CD25+Treg细胞的检测结果差异无统计学意义[(6.85±2.72)%,(6.69±2.30)%,t=0.270,P=0.788],相关性检验显示,两者呈正相关(r=0.866,P＜0.001);(2)CD4+CD25+CD127-/low设门方法的细胞检测结果[(8.07±2.18)%]高于CD4+CD25hi和CD4+CD25+FoxP3+设门方法(t=2.055,P=0.043;t=2.325,P=0.022),相关性检验显示,均呈正相关(r=0.615,P＜0.001;r=0.683,P＜0.001);(3)CD4+CD25hi细胞群中FoxP3+细胞占(57.11±12.42)%,CD4+CD25hi细胞群中FoxP3+细胞占所有FoxP3+细胞的比例为(54.4±9.0)%.结论 CD4+CD25hi设门方法可用于人外周血CD4+CD25+Treg细胞的检测,CD4+CD25+CD127-/low设门方法可应用于CD4+CD25+Treg细胞的纯化.     

三色流式细胞术在检测人外周血CD4+CD25+CD62L+调节性T细胞的应用

随着流式细胞术(FCM)在淋巴细胞亚群分析及免疫状态分型技术领域的应用日益成熟,多参数FCM分析,已能区分不同的细胞亚群,由间接免疫荧光标记法,过渡到采用直接免疫荧光标记且从单色荧光发展到双色及多色荧光标记.