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1.
目的 观察重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)在体外对人正常精子运动的影响.方法 40例健康自愿者正常精液,Peroll梯度离心将精子密度调整为10×106/ml,分别与对照组以及终浓度为30 pg/ml、60 pg/ml、90 pg/ml、270 pg/ml的rhTNF-α孵育.在0.5h、1h、2h、3h、4h时间段取样,用CASA检测精子运动参数变化.结果 rhTNF-α终浓度为60、90、270 pg/ml各组精子的活力、直线速度、曲线速度、平均速度和前向运动明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),且270 pg/ml组的rhTNF-α对精子作用最为显著.结论 一定浓度的rhTNF-α可明显抑制人正常精子运动.  相似文献   

2.
目的通过线粒体氧化磷酸化(OXPHOS)特异性抑制剂FCCP对人精子活动力及其线粒体功能影响的研究,探讨氧化磷酸化在精子能量代谢中的作用。方法选择来自捐精志愿者的正常精液8份,优选后制备精子悬液,将每份精子悬液分为4组,分别与终浓度为0μmol/L(对照组)、2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L的FCCP共孵育1h、3h、5h,以精子动力学参数、线粒体膜电位、精子细胞内ATP含量、精子质膜完整性作为评价指标,分析比较各组间的差异。结果 (1)各组精子活动率和其他各项运动参数随着FCCP浓度增高呈下降趋势:孵育1h后,与对照组相比,仅10μmol/L组的精子活动率、前向运动百分率和精子头侧摆幅度(ALH)显著下降(P0.05),其余指标无显著性变化,而其余浓度处理组的各指标变化均无统计学意义(P0.05);孵育3h后,10μmol/L组的精子活动率、前向运动百分率、平均路径速率(VAP)、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、ALH和鞭打频率(BCF)均显著降低(P0.05),5μmol/L组的ALH和BCF指标显著下降(P0.05);孵育5h后,与对照组相比,10μmol/L组的前述指标继续显著性下降(P0.05),5μmol/L组的精子活动率和前向运动百分率也出现显著降低(P0.05),而2.5μmol/L组各指标差异均无统计学意义(P0.05)。(2)精子线粒体膜电位(MMP)和ATP含量随FCCP浓度增加逐渐降低,10μmol/L组的MMP和ATP含量显著低于对照组(P0.05)。(3)质膜完整性比较中,10μmol/L组比对照组显著降低(73.94%vs.84.53%)(P0.05)。(4)随着FCCP孵育时间延长,各组精子活动率和前向运动百分率呈下降趋势。结论不同浓度的FCCP体外处理精子后,精子活动率和其他各项运动参数,以及反映线粒体活性的线粒体膜电位和ATP含量呈浓度依赖性下降,FCCP所抑制的线粒体氧化磷酸化是精子能量代谢的重要途径。  相似文献   

3.
目的探究线粒体lon蛋白水解酶(LonP1)对精子线粒体稳态的维持调节作用及其可能存在的调节机制。方法收集2016年6月至2017年6月于温州医科大学附属第一医院生殖中心进行精液常规检查的120名男性精液标本,根据精子活力分为正常活力精子(NS)和弱精子症精子(AS)两组,采用计算机辅助精液分析系统(CASA)检测各组精子运动参数,通过免疫荧光法和免疫蛋白印迹法检测精子中LonP1的蛋白表达水平,流式细胞术检测各组精子的线粒体膜电位强度(MMP,以绿色荧光强度/红色荧光强度比值表示,比值越小代表膜电位越高)和线粒体内活性氧(mROS)水平,比较两组各指标参数差异,并分析LonP1表达水平和精子活力及精子线粒体功能相关指标(MMP,mROS)的关联性。另外,NS组精液经密度梯度离心法处理后,沉淀精子加入培养液重悬,以LonP1功能抑制剂CDDO-ME 2.5μmoL/L和5μmol/L为终浓度进行体外培养,同时设置空白对照组(0μmol/L),比较各组精子运动参数、LonP1表达水平以及精子线粒体功能相关指标。结果 (1)人类成熟精子中存在LonP1的表达,且稳定表达于精子中段的线粒体鞘部;(2)NS组和AS组精子LonP1表达水平(0.52vs.0.22)与精子活力(69.89%vs.26.10%)、MMP(4.72%vs.12.73%)呈正相关(P0.05),与mROS含量呈负相关(418.85vs.460.52)(P0.05);(3)经LonP1功能抑制剂CDDO-ME处理后,与空白对照组比较,CDDO-ME药物处理组的LonP1蛋白表达水平随CDDO-ME作用浓度增加而显著降低(P0.05),5μmol/L浓度组的MMP水平显著下降(78.81%vs.7.34%)、mROS含量增加(640.68vs.462.26),差异均有统计学意义(P0.05);(4)CDDO-ME处理后,除精子活率(PR+NP)外,精子运动参数平均路径(VAP)和曲线速率(VSL)均随CDDO-ME作用浓度增加而下降(P0.05),与空白对照组相比,5μmol/L浓度组的精子活力(PR)(52.08%vs.65.15%)、曲线速率(VCL)(48.28μm/s vs.78.78μm/s)、侧摆幅度(ALH)(1.28μm vs.1.93μm)、直线性(LIN)(38.83%vs.56.05%)和前向性(STR)(45.53%vs.81.25%)均显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论精子线粒体鞘部存在LonP1的稳定表达,LonP1能够通过精子线粒体稳态维持改善精子活力。  相似文献   

4.
白蛋白与卵黄联合应用于人类精液冷冻保存的研究   总被引:3,自引:1,他引:3  
目的:初步探讨白蛋白与卵黄两种蛋白联合应用于人类精液冷冻保存的效果,以期为人类精液冷冻提供一种更为有效的冷冻保护液。方法:以卵黄甘油柠檬酸钠作为对照组,其内加不同浓度的白蛋白(1、2、3、4、5 g/L)作为实验组,对人类精液进行冷冻保存,冷冻前后运用计算机辅助精液分析系统(CASA)进行精子运动参数分析;在实验组中选用冷冻复苏后精子运动参数最佳的加1 g/L白蛋白的卵黄甘油柠檬酸钠组及卵黄甘油柠檬酸钠对照组,进行精子存活率、膜功能、线粒体功能、超微结构比较分析。结果:加1 g/L白蛋白的卵黄甘油柠檬酸钠组,其精子活率、活力明显高于对照组及其他实验组(P<0.05);精子存活率、精子头部未着色率明显高于对照组(P<0.05);精子琥珀酸脱氢酶活性明显高于对照组(P<0.01);精子超微结构优于对照组。结论:白蛋白与卵黄两种蛋白联合应用冷冻保存人类精液的效果优于单用卵黄,且白蛋白的作用与其使用浓度有关;白蛋白与卵黄联合使用在人精液冷冻保存中可能具有相加和互补功能。  相似文献   

5.
双丁酰环磷酸腺苷对人精子运动功能的影响   总被引:2,自引:1,他引:1  
目的 :通过研究双丁酰环磷酸腺苷 (dbcAMP)对体外人精子的运动功能有无影响 ,了解环磷酸腺苷 /蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号传导通道是否参与人精子运动功能的调节。 方法 :10例健康生育男性手淫获得并经上游优化处理的精子与不同浓度的dbcAMP一起孵育 2 0、30、6 0min后 ,采用计算机辅助的精液分析系统 (CASA)检测精子的运动参数。 结果 :dbcAMP在体外能显著提高人精子的活率及前向性运动百分率 ,并且随浓度的增加 ,这种作用显著增强 ,而对精子的形态及直线速度 (VSL)和曲线速度 (VCL)无明显影响。 结论 :dbcAMP在体外能提高人精子的运动功能  相似文献   

6.
目的 评价自吞噬在脂多糖(LPS)诱导HL-1心肌细胞损伤中的作用.方法 采用随机数字表法,将培养的HL-1细胞随机分为4组(n=15):正常对照组(C组)不予任何处理,继续培养24h;LPS组在细胞培养液中加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬诱导剂纳巴霉素组(R组)在细胞培养液中加入纳巴霉素(终浓度0.2 μg/ml),孵育48 h时加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬抑制剂三甲基嘌呤组(3-MA组)在细胞培养液中加入加入3-MA(终浓度10 mmol/L),孵育48 h时加入LPS(终浓度1μg/ml).各组孵育4h时测定自吞噬蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)表达水平,并观察线粒体超微结构,计算自吞噬体数量,测定线粒体光密度值、线粒体膜电位(JC-1).于孵育24h时测定细胞凋亡率和Caspase-3活性.结果 与C组比较,LPS组LC3Ⅱ表达水平、线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高,自吞噬体数量增加,JC-1降低(P<0.05);与LPS组比较,R组LC3Ⅱ表达水平和JC-1升高,自吞噬体数量增加,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性降低,3-MA组LC3Ⅱ表达水平和JC-1降低,自吞噬体数量减少,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高(P<0.05).R组线粒体超微结构损伤较LPS组减轻,3-MA组较LPS组加重.结论 自吞噬可减轻LPS诱导的HL-1心肌细胞损伤,机制可能与清除受损线粒体,改善线粒体功能,抑制细胞凋亡有关.  相似文献   

7.
活性氧致人精子运动功能和存活力变化的分析   总被引:15,自引:7,他引:8  
目的 :对活性氧 (ROS)作用后精子的运动参数和存活率的变化进行分析 ,以证实ROS是否为引起精子运动功能障碍的病因之一。 方法 :采用Percoll梯度离心法选择具有正常生理功能的人精子作为正常精子模型 ,应用次黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶体系产生ROS ,在有氧环境下与精子模型孵育后 ,运用计算机辅助精液分析 (CASA)系统 ,分析ROS攻击后精子运动参数的改变。 结果 :与对照组相比 ,正常精子模型与ROS孵育 30min后 ,精子活动率、曲线速度 (VCL)、直线速度 (VSL)、平均路径速度 (VAP)均明显下降 (P <0 .0 0 1) ,头侧摆幅度 (ALH)尚无明显改变 (P >0 .0 5 ) ,而与ROS孵育 6 0min后 ,精子运动功能近乎丧失 ,精子主要运动参数趋向于零。 结论 :ROS与正常精子作用后 ,可导致精子运动功能下降 ,从而证实ROS为精子运动功能障碍的病因之一。  相似文献   

8.
目的 检测ropporin基因在人精子中的表达.探讨Ropporin抗体对人精子运动的影响,评价Ropporin蛋白在精子运动中的功能.方法 收集正常男性精子,非连续梯度离心法分离精子,用RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光方法检测ropporin基因在精子中的表达和蛋白定位;将纯化精子分别在含不同浓度Ropponn抗体的培养液中孵育(0,0.8,4和20 μ g/mL),在不同时间点(1,2,6h)用精子计算机辅助分析系统(computer-assisted sperm analysis,CASA)检测精子活动力.结果 RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光方法均检测出ropporin基因在精子中表达;免疫荧光表明Ropporin主要定位在精子鞭毛的主段和末段;抗体实验显示抗体孵育1h、2h、6h后精子的快速前向运动(a级)和慢速前向运动(b级)均明显受到抑制,并显示剂量依赖性.结论 Ropporin在精子鞭毛的主段和末段上的表达与精子的运动密切相关.  相似文献   

9.
刺五加水提物体外对弱精子症患者精子运动参数的影响   总被引:4,自引:1,他引:3  
目的:研究不同浓度的刺五加水提物体外对弱精子症患者精子运动的影响,探讨其可能的作用机制。方法:将35例弱精子症患者经手淫法获得并通过上游优化处理的精子,与不同浓度刺五加水提物共同孵育30、60、120、180 m in后,应用计算机辅助精子分析系统(CASA)观察不同浓度(2.5、5、10、20 g/L)刺五加水提物对人精子各运动参数的作用。结果:不同浓度刺五加水提物能明显提高弱精子症患者精子的运动能力,在浓度为5 g/L和10 g/L时,精子活率(MOT)、前向运动精子百分率、曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)和平均路径速度(VAP)与空白对照组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论:刺五加水提物在体外能明显改善弱精子症患者精子运动能力,其最佳浓度为10 g/L。  相似文献   

10.
目的:比较刺五加注射液与茶碱、咖啡因体外对精子运动功能的影响。方法:由12例弱精子症患者通过手淫获得并经上游优化处理的精子分别与一定浓度的刺五加注射液(10g/L)、咖啡因(7mmol/L)和茶碱(3mmol/L)一起孵化0h、1h、3h后,采用计算机辅助精液分析系统(CASA)检测精子的运动参数(精子活动率、前向性运动百分率、直线运动速度、曲线运动速度)。结果:刺五加注射液在体外能显著提高人精子活动率,前向性运动精子百分率,精子直线运动速度和曲线运动速度,其改善精子运动功能优于茶碱和咖啡因,差异均有显著性(P<0.05)。结论:中药刺五加注射液在体外能显著改善人精子的运动功能。  相似文献   

11.
目的研究冷冻保存前后供精者精子运动特征的变化,了解冷冻保存对人精子受精潜能的影响。方法供精者精液标本68例,按照世界卫生组织推荐的方法和仪器行精液常规分析和计算机辅助精子分析(CASA)。入选精液加入甘油-卵黄-柠檬酸钠精子冷冻保护剂,行液氮蒸汽冷冻,1个月后复温,再次行CASA。结果冷冻后精子运动学参数中精子头侧摆幅度(ALH)和鞭打频率(BCF)升高,其它所有运动学参数均降低。精子动动学参数中除中速动动(Medium)、慢速运动(Slow)、平均路径速度(VAP)、直线运动速度(VSL)、ALH外,人精子冷冻前和解冻后各个参数都有显著的正相关(P<0.05)。除Medium、Slow、(曲线速度)VCL、ALH外,供精者精子各项参数冷冻前和解冻后比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。冷冻复温后VCL>25μm/s、VSL>25μm/s。结论冷冻保存后人精子运动能力降低,但仍具有受精潜能。CASA用于冷冻精液的评估有一定的临床应用价值。  相似文献   

12.
目的 探讨黑皮质素4型受体(MC4R)在大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸中的作用.方法 原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞,随机分为3组,每组6孔:正常白对照组(C组)、T组和TH组.C组未作任何处理,T组加入终浓度为10μg/L的TNF-α;TH组同时加入终浓度为10μg/L的TNF-α和终浓度为1 μmol/L的MC4R特异性阻断剂HS014.各组孵育3 h后采用高效液相-串联四级杆质谱法检测上清液谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)的浓度.结果 与C组比较,T组Glu和Asp浓度升高(P<0.01),TH组Glu和Asp浓度差异无统计学意义(P>0.05);与T组比较,TH组Glu和Asp浓度降低(P<0.01).结论 MC4R介导了大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸的作用.  相似文献   

13.
目的:探讨在正常精液中加入IgG类抗精子抗体阳性精浆对人精子膜功能完整性及压力敏感性Ca~(2+)内流的影响。方法:在门诊的不育患者中收集精浆IgG抗精子抗体阳性患者,通过离心的方法从其精液中分离出精浆,并同正常人精子孵育,与正常精浆及正常人精子、精子培养液及正常人精子孵育的对照组比较研究,分别对它们进行低渗肿胀(HOS)试验及测定精子细胞内钙离子浓度的变化。结果:与IgG抗精子抗体阳性精浆孵育的精子,其g形精子百分率和精子尾部总肿胀率均明显低于两个对照组,差异有统计学意义(P0.01);试验组的精子细胞内Ca~(2+)荧光强度差值明显低于两个对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:IgG类抗精子抗体对人精子膜功能完整性及压力敏感性Ca~(2+)内流均可造成影响。  相似文献   

14.
目的:研究不同配比的苦参/白头翁乙醇提取物的体外杀精能力.方法:收集15例正常男性的精液标本,经密度梯度离心法处理,与9种不同配比的苦参/白头翁乙醇提取物一起孵育20s、2min及4min后,采用计算机辅助的精液分析系统(CASA)检测精子活力及运动参数;同时分别检测其具有瞬间杀精能力时的最低有效浓度.结果:以3:1配比的乙醇提取物,浓度为0.5 mg/ml时能明显抑制精子活力,并且对精子运动参数VCL、VSL、VAP、ALH、WOB及MAD等指标均产生了明显的抑制作用,与对照组比较有统计学意义;9个不同配比的乙醇提取物中以3:1配比时,其具有瞬间杀精能力时的最低有效浓度最低,为3.5 mg/ml.结论:苦参/白头翁3:1配比时,其乙醇提取物具有最佳的体外杀精能力.  相似文献   

15.
目的 探讨各动力学参数对常规体外受精(IVF)受精率的影响.方法 分别对103例常规IVF周期病人的新鲜精液、优化后及孵育后3个阶段的精液进行计算机辅助的精子分析(CASA)的动力学参数检测,同时根据第五版WHO<人类精液检验及处理实验室手册>,对各组间正常和异常精液进行动力学参数的差异分析.结果 (1)异常精液组在新鲜精液的大部分参数水平显著低于正常精液组,但经过优化处理以及一定条件下的孵育后,这种差异消失;(2)检测的大部分参数在新鲜精液和优化后精液之间均有极显著性差异,在孵育后精液和优化后精液之间均有显著性差异.此外,各参数同受精率之间均无显著相关性(3)受精组和不受精组间的各动力学参数无显著性差异.结论 使用精液优化方法以及加精之前的孵育过程可以显著改善精子的活动力和直线运动能力:CASA分析各动力学参数的结果,可作为病人精液分析结果诊断的依据,但不能以此推断IVF结局.  相似文献   

16.
睾酮体外对人精子运动参数的影响   总被引:4,自引:1,他引:3  
目的通过研究睾酮体外对人精子运动参数的影响,探讨睾酮在男性不育症治疗中的作用。方法10例健康生育男性手淫获得精液,经上游优化处理后的精子与不同浓度的睾酮孵育10、30、60min,10例弱精子症患者手淫取精并与睾酮孵育10、60、120min后,采用计算机辅助的精液分析系统(CASA)检测精子的运动参数。结果50ng/dl(1.73nmol/L)睾酮在体外能显著增强正常人精子的直线速度(VSL)、曲线速度(VCL)和平均速度(VAP),而对活率、前向运动百分率无明显影响,而100ng/dl(3.47nmol/L)睾酮使精子活率和前向性运动百分率均有明显下降(P<0.01);1.04nmol/L~1.73nmol/L浓度睾酮能显著增强弱精子症患者精子的活率、前向运动百分率及VSL,并随着浓度的增加,睾酮作用显著增强,而对VCL和VAP无明显影响。结论低浓度(1.04nmol/L~1.73nmol/L)睾酮在体外显著增高弱精症患者精子的运动参数。  相似文献   

17.
目的 通过研究弗司扣林(forskolin)对体外人精子的运动功能有无影响,了解环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号传导途径是否参与人精子运动功能的调节。方法 10例健康成年男性手淫获得新鲜精液,经上游优化处理后与不同浓度的forskolin一起孵育20、30、60min后,采用计算机辅助的精子分析系统(CASA)检测精子的各项运动参数,并进行对比分析。结果 forskolin在体外能显著提高人精于的活率及前向性运动百分率,而对精子的形态及直线速度(VSL)和曲线速度(VCL)无明显影响。结论 forskolin在体外能提高人精子的运动功能,此结果为证实cAMP/PKA信号传导通道参与调节人精子运动功能提供了一定的实验依据。  相似文献   

18.
流式细胞术在精子功能检测中的应用   总被引:8,自引:1,他引:7  
目的:研究流式细胞术在精子功能评价中的作用。方法:对104例男性不育患者和10例正常生育男性的精液标本进行精液量、精子密度、活动率、畸形率等精液常规分析(CASA法),对精子存活率、染色质结构和线粒体膜电位等进行流式细胞术分析,并将检测结果通过SAS软件进行统计学分析。结果:成组U检验结果表明:不育患者的精子与正常生育男性精子相比除了具有密度低(U=2.51,P=0.014 3)、活动率差(U=3.44,P=0.001)、畸形率高(U=-5.88,P<0.000 1)等特点外,经流式细胞术测定精子结果表明不育男性的精子质膜完整率(U=4.72,P<0.000 1)、线粒体膜电位正常率(U=-2.53,P=0.030 9)和染色质完整率(αt:U=-3.82,P=0.000 3;SDαt:U=-3.98,P=0.000 1;COMPαt:U=-3.57,P=0.000 5)均显著低于正常生育男性。多元逐步回归分析结果表明:精子质膜完整性与精子活动率(t=1.66,P=0.101 6)、精子的线粒体膜电位与精子活动率(t=3.33,P=0.001 4)、精子染色质的完整性与精子活动率(t=3.24,P=0.001 9)均呈正相关,而精子的线粒体膜电位与精子颈、尾部的畸形率呈负相关(t=-3.44,P=0.001)。结论:流式细胞仪测定对精子质量评定意义显著,对男性不育的诊断和治疗也具有较高的参考价值。  相似文献   

19.
目的:探讨精索静脉曲张(VC)患者精子中T型钙通道α1H和α1G基因的表达与精索静脉曲张的关系.方法:根据WHO标准用计算机辅助精液分析(CASA)方法对所取精液进行检查,根据检查结果分为正常精液组(20例)、VC精液正常组(16例)、VC精液异常组(44例),用Percoll非连续梯度离心法对精液进行分离,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测3组精子T型钙通道α1H和α1G mRNA的表达.结果:与正常精液组相比较,VC精液正常组α1H和α1G mRNA的表达差异无显著性(P>0.05);VC精液异常组α1H和α1GmRNA的表达差异具有极显著性(P<0.01).结论:T型钙通道α1H和α1G基因表达异常可能是导致VC患者精液质量下降从而不育的原因之一,此为VC不育的病因及治疗提供了新的方向.  相似文献   

20.
异丙酚对乳鼠心肌细胞氧化损伤时线粒体功能的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 评价异丙酚对乳鼠心肌细胞氧化损伤时线粒体功能的影响.方法 SD乳鼠20只,分离乳鼠心肌细胞,接种于96孔培养板原代培养48 h,随机分为5组,每组32孔,对照组(C组):继续培养4 h;氧化损伤组(OI组):加入叔丁基过氧化氢,终浓度为100 μmol/L,孵育4 h;异丙酚1 μmol/L组、10 μmol/L组和30 μmol/L组(P1-3组):加入叔丁基过氧化氢,终浓度为100 μmol/L,同时加入异丙酚,终浓度分别为1、10、30,μmol/L,孵育4 h.于细胞培养或孵育4 h时,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性,细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性、心肌细胞线粒体活力、线粒体膜电位和心肌细胞凋亡率.结果 与C组比较,其余4组上清液LDH活性、心肌细胞MDA含量、凋亡率升高,心肌细胞线粒体活力、膜电位降低、心肌细胞GSH含量、SOD活性降低(P<0.05);与OI组比较,P2,3组上清液LDH活性、心肌细胞MDA含量、凋亡率降低,心肌细胞线粒体活力、膜电位升高,P3组心肌细胞GSH含量、SOD活性升高(P<0.05),P1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);P2组与P3组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚减轻心肌细胞氧化损伤的机制与改善线粒体功能、抑制细胞凋亡有关.  相似文献   

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