长链非编码RNA KCNIP4-IT1通过靶向miR-181c-5p对喉癌细胞增殖和迁移的影响

目的　探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）KCNIP4-IT1/miR-181c-5p分子轴对喉癌TU177细胞增殖和迁移的调控作用。方法　采用qPCR检测30对喉癌组织和癌旁组织、喉癌细胞系（TU159、TU686、AMC-NH-8、TU177、TU138）和支气管上皮细胞系（16HBE）中KCNIP4-IT1表达水平。通过RNA干扰技术将KCNIP4-IT1的小干扰RNA转染到TU177细胞（si-KCNIP4-IT1组），建立KCNIP4-IT1低表达细胞系，另设置阴性Ctrl组（Ctrl组，转染阴性对照序列）。MTT法、划痕愈合实验检测敲低KCNIP4- IT1后TU177细胞增殖和迁移的变化。双荧光素酶报告基因实验验证KCNIP4-IT1与miR-181c-5p之间的靶向调控关系。qPCR检测细胞中miR-181c-5p和人纤溶酶原激活物抑制剂1（SERPINE1）mRNA的表达水平。Western blotting检测细胞迁移蛋白（β-catenin、N-Cadherin）和增殖蛋白（CDK3、PCNA）的表达水平。结果　KCNIP4-IT1在喉癌组织中表达水平高于癌旁组织（t =9.297，P<0.01）。KCNIP4-IT1在喉癌细胞系中表达水平高于16HBE细胞（t分别为4.620、7.502、4.944、8.665、9.139，P 均<0.01），以TU177细胞中KCNIP4-IT1表达水平最高（F =17.819，P<0.01）。与Ctrl组相比，敲低KCNIP4-IT1显著抑制TU177细胞增殖（P 均<0.05）和迁移（t=3.740，P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实KCNIP4-IT1靶向调控miR-181c-5p（t=5.838，P<0.01）。与Ctrl组相比，敲低KCNIP4-IT1明显上调miR-181c-5p的表达水平（t=6.214，P <0.01），下调SERPINE1基因的表达水平（t =8.190，P<0.01）。与Ctrl组相比，敲低KCNIP4-IT1明显下调细胞迁移蛋白（β-catenin、N-Cadherin）和增殖蛋白（CDK3、PCNA）的表达水平。结论　KCNIP4-IT1在喉癌组织和细胞系中呈高表达状态，敲低KCNIP4-IT1抑制喉癌TU177细胞的增殖和迁移，其分子机制可能与靶向调控miR-181c-5p并抑制SERPINE1表达有关。     

LncRNA SNHG12靶向结合miR-206对甲状腺乳头状癌增殖、凋亡及AKT3蛋白的作用机制CSCD

目的 研究lncRNA SNHG12靶向结合miR-206对甲状腺乳头状癌增殖、凋亡及AKT3蛋白的作用机制。方法选取2020年1月～2021年1月于新乡市中心医院接受治疗的甲状腺乳头状癌患者的癌组织与癌旁组织标本各10例作为研究对象。将甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞分成3组：实验组（TPC-1常规培养无处理组）、转染组（SNHG12基因沉默组）和对照组（转染不相关序列组）。RT-PCR检测lncRNA SNHG12、miR-206水平，CCK-8检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫印迹检测AKT3，双荧光素酶报告检测lncRNA SNHG12靶向miR-206，双荧光素酶报告检测向miR-206靶向AKT3。结果 lncRNA SNHG12在甲状腺乳头状癌组织中的表达量高于癌旁组织（t=11.240,P<0.05）,miR-206在甲状腺乳头状癌组织中的表达量低于癌旁组织（t=6.795,P<0.05）。lncRNA SNHG12在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平最低，在TPC-1中的表达量高于在K1、BCPAP细胞中的表达（t=5.753,P<0.05）。miR-206在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的表达水平最高，在TPC-1细胞中的表达低于在K1、BCPAP细胞中的表达（t=11.000,P<0.05）。与对照组相比，转染组lncRNA SNHG12表达水平、细胞凋亡率、AKT3蛋白表达降低（t=5.306,P <0.05;t=19.850,P <0.001;t=12.440,P <0.001），而miR-206表达升高（t=2.504,P<0.05），转染组在24、48、72 h的细胞增殖低于对照组（F=42.000、69.740、52.510,P<0.01）。结论 低表达的lncRNA SNHG12通过靶向上调miR-206表达、抑制AKT3蛋白，从而抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡。     

MicroRNA-107抑制喉癌细胞的迁移及侵袭能力的临床分析

目的通过观察microRNA 107（miR 107）在喉癌及癌旁组织中的表达,并且在喉癌细胞系选择性上调及敲减miR 107,检测其对喉癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法收集40例喉癌及其邻近癌旁组织标本,运用RT qPCR检测miR 107的表达,并分析其在喉癌中的临床意义。在人喉癌细胞TU212及TU686中过表达或敲减miR 107,通过Transwell法检测其对喉癌细胞迁移及侵袭能力的影响。结果MiR 107在喉癌组织中的表达显著低于癌旁组织,差异具有统计学意义（P<0.05）,miR 107的表达水平与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移及原发部位相关（P<0.05）。细胞实验显示,过表达miR 107后喉癌细胞迁移及侵袭能力明显下降（P<0.05）,而敲减miR 107后细胞迁移及侵袭能力明显增强（P<0.05）。结论MiR 107在喉癌中表达显著下调,它能够抑制喉癌细胞的迁移和侵袭能力。     

微小RNA-107对脂多糖诱导人鼻黏膜上皮细胞增殖、凋亡及炎症因子的影响及机制研究

目的　检测微小RNA（microRNA,miR）-107对细菌脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的人鼻黏膜上皮细胞（human nasal mucosal epithelial cells,HNMECs）增殖、凋亡及炎症因子的影响及可能的分子机制。方法  以1 mg/L LPS诱导HNMECs建立炎症反应模型,采用实时荧光定量PCR检测诱导前后miR-107和高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGBl）的表达量变化。HNMECs中转染miR-107激动剂（agomir）和激动剂对照（agomir control）,并采用噻唑蓝比色法、流式细胞术及酶联免疫吸附试验观察细胞增殖、凋亡及炎症因子的变化。利用双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹试验验证HMGBl是否为miR-107的靶基因。结果　miR-107在LPS诱导后HNMECs中的表达量较诱导前显著降低（t =9.35,P <0.05）,而HMGBl在LPS诱导后HNMECs中的表达量较诱导前显著升高（t =13.07,P <0.05）。与转染agomir control相比,LPS诱导后HNMECs中转染miR-107agomir可显著抑制细胞增殖（F =17.12,P <0.05）,降低炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）（t =6.11,P <0.05）、白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）（t =6.90,P <0.05）及IL-6（t =8.18,P <0.05）的表达水平,并提高细胞凋亡率（t =7.49,P <0.05）。HMGBl是miR-107的靶基因,LPS诱导后HNMECs中转染miR-107 agomir可显著降低HMGBl蛋白的表达量（t =28.56,P <0.05）。结论　miR-107在LPS诱导后HNMECs中表达下调,而HMGBl表达上调。过表达miR-107可显著抑制LPS诱导后HNMECs增殖和炎症因子的表达,同时促进细胞凋亡。HMGBl是miR-107的靶基因,提示miR-107可能通过调控HMGBl发挥抑制作用。     

沉默长链非编码RNA HCG18通过miRNA-107/PAG1轴逆转喉癌细胞放射抗拒机制研究#br#

目的　分析长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）HCG18对放疗抗拒喉癌的放疗敏感性的影响及作用机制。方法　流式细胞术检测喉癌细胞系经过放射后的细胞凋亡率，应用荧光定量PCR（qRT-PCR）分别检测lncRNA HCG18、微小RNA-107（miR-107）和PAG1在喉癌细胞中的相对表达含量，分别于喉癌细胞中敲除和过表达HCG18、miR-107和PAG1，用克隆形成等检测其 对喉癌细胞放疗敏感性的影响。利用实时荧光qRT-PCR和蛋白质印迹法检测HCG18对miR-107及PAG1表达的影响，并运用荧光素酶报告实验分析HCG18/miR-107/PAG1之间的调控作用。结果　Tu212max细胞系细胞凋亡率低于Tu212和Tu212min细胞系，将其选定为放疗抗拒的喉癌细胞系。HCG18和PAG1在喉癌组织和Tu212max中表达上调，miR-107在喉癌组织和Tu212max中表达下调（t =22.60、18.15、14.38，P 均<0.05）。在Tu212max中沉默HCG18和PAG1的表达能够抑制Tu212max克隆（P 均<0.05）、提高 凋亡率（t =35.55、24.25、51.44、49.75，P 均<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实HCG18可负向调控miR-107的表达（t =32.46，P <0.05），miR-107可以负向调控其下游靶基因PAG1的表达水平（t =34.71，P<0.05），HCG18通过调控miR- 107而并正向调控PAG1的表达水平。HCG18对Tu212max放射敏感性的影响又依赖于miR-10 7。结论　沉默HCG18表达，促进miR-107上调，而抑制PAG1的表达，最终提高了放疗抗拒喉癌细胞的放射敏感性。     

基于丝氨酸/苏氨酸激酶信号观察芬太尼对鼻咽癌细胞增殖侵袭的作用机制

目的　基于丝氨酸/苏氨酸激酶（RhoA/Rho）信号通路观察芬太尼（简称芬太尼）对鼻咽癌细胞增殖侵袭的影响。方法　传代培养高侵袭性鼻咽癌细胞系CNE2,分为空白对照组（加入无血清培养基）、抑制剂组（加入RhoA激酶抑制剂C3转化酶）、芬太尼组（加入药物芬太尼）。MTT实验、划痕实验及Transwell检测细胞增殖、迁移 和侵袭能力,采用qRT-PCR法、Western blot法检测 RhoA、Rho的mRNA和蛋白表达。采用Western blot法检测RhoA/Rho激活后的下游效应产物MYPT1蛋白。结果　与空白对照组比较,芬太尼组与抑制剂组细胞克隆数、细胞增殖率、细胞迁移率均显著降低（t =24.947、22.329、5.361、4.789、9.262、8.968,P 均＜0.05）;抑制剂组与芬太尼组RhoA以及Rho的mRNA转录水平显著低于空白对照组（t =7.712、8.261、7.983、7.905,P 均＜0.05）;与空白对照组相比,芬太尼组与抑制剂组的RhoA、Rho以及MYPT1蛋白表达明显降低（t =2.661、3.105、3.862、3.429、4.656、4.648,P 均＜0.05）。结论　芬太尼可抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭,该作用可能与其抑制Roha/Rho激酶信号密切相关。     

敲低蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子表达对下咽癌细胞增殖、迁移的影响

目的 通过shRNA敲低下咽癌FaDu细胞（简称FaDu细胞）蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的癌性抑制因子（cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A）的表达,了解其在下咽癌发生发展中的作用。方法 设计特异性shRNA序列,包装慢病毒并转染FaDu细胞,特异性敲低CIP2A的表达,分别通过RT-PCR和Western blot检测CIP2A mRNA和CIP2A蛋白的表达情况。结果 （1）shRNA敲低FaDu细胞中CIP2A后,实验组CIP2AmRNA和CIP2A蛋白的表达量均较空白组显著降低。（2）细胞克隆和CCK8实验结果显示,实验组细胞较空白组细胞增殖能力明显下降（t=50.86,P<0.01;t=12.406,P<0.001）。细胞划痕实验结果显示,实验组细胞横向迁移能力较空白组细胞明显下降。Transwell实验结果显示,实验组细胞纵向迁移能力较空白组细胞明显下降（t=40.038,P<0.01;t=12.247,P<0.001）。结论 敲低FaDu...     

MiR-150调控Nanog对鼻咽癌侧群细胞增殖、侵袭的影响

目的 检测MiR-150在鼻咽癌侧群(SP)细胞中的表达,并探讨其是否通过调控靶基因Nanog促进鼻咽癌侧群细胞的增殖与侵袭。 方法 采用SYBR Green 实时定量荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测MiR-150及Nanog在鼻咽癌侧群细胞和非侧群(NSP)细胞中的表达情况;并通过瞬时转染miR-150 inhibitor 至SP细胞、miR-150 mimic至NSP细胞中,western blotting检测Nanog的表达情况;进一步通过CCK-8实验、Transwall实验检测鼻咽癌侧群细胞增殖、侵袭能力的变化,数据处理采用两独立样本t检验。 结果 qRT-PCR检测结果表明,MiR-150在SP细胞(0.99±0.05)较NSP细胞(0.59±0.02)中表达水平升高(t=8.06, P<0.000 1),Nanog在鼻咽癌SP细胞(0.99±0.47)较NSP 细胞(0.49±0.05)表达升高(t=7.5, P<0.000 1);SP细胞转染MiR-150 inhibitor(0.46±0.03)较对照组(1.01±0.07)Nanog表达下调(t=6.85, P=0.000 5)、CCK-8实验示增殖受抑制、Transwell侵袭实验示侵袭能力减弱(114.40±5.14 vs 57.30±4.29, t=8.5, P<0.000 1);NSP细胞转染MiR-150 mimic(1.01±0.06)组较对照组(0.48±0.04)Nanog表达上调(t=6.16, P=0.000 8),增殖及侵袭能力增强。 结论 鼻咽癌SP细胞中MiR-150与Nanog呈高表达,MiR-150可通过调控靶基因Nanog促进鼻咽癌侧群细胞的增殖与侵袭。     

SHCBP1高表达促进鼻咽癌细胞上皮间质转化过程的分析

目的 探究SHC SH2结构域结合蛋白1(SHCBP1)在鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞系中的表达情况,分析其对鼻咽癌细胞系的增殖、侵袭能力及上皮间质转化(EMT)过程的影响。方法 利用TCGA数据库分析SHCBP1在头颈鳞状细胞癌(HNSC)中的表达情况,分析SHCBP1表达程度与肿瘤免疫细胞浸润程度的关系。同时收集2019年9月—2021年9月于贵州医科大学附属医院及贵州医科大学附属肿瘤医院经病理确诊的31例鼻咽癌初诊患者临床组织样本,所有患者就诊前均未接受任何放化疗,并收集同期就诊的31例疑似鼻咽癌但病检示慢性鼻咽炎组织作为对照组。利用逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测临床样本及鼻咽癌细胞系5-8F中SHCBP1的表达情况。细胞实验以鼻咽癌细胞系5-8F、正常鼻咽部永生化上皮细胞系NP69作为研究对象。采用利用慢病毒载体shRNA-SHCBP1干扰技术沉默5-8F细胞中SHCBP1表达,并分为NC组(空载慢病毒LV-Zs-Green-PURO-NC感染5-8F)、SHCBP1-shRNA组(LV-SHCBP1-shRNA-Zs-Green-PURO沉默5-8F细胞SHCBP1表达)。CCK-8法、克隆形成实验检测SHCBP1对鼻咽癌细胞增殖的影响;划痕实验、Transwell迁移、侵袭实验检测SHCBP1对鼻咽癌细胞的转移、侵袭能力的影响。Western blot检测NC组、SHCBP1-shRNA组中E-cadherin、N-cadherin、基质金属蛋白9(MMP9)、Vimentin的表达情况。结果 在HNSC中SHCBP1高表达,表达量与Th2细胞浸润程度相关。与慢性鼻咽炎组织相比,鼻咽癌组织中SHCBP1明显高表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。与NC组相比,SHCBP1-shRNA组鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭能力均减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。SHCBP1-shRNA组E-cadherin表达较NC组升高,N-cadherin、MMP9、Vimentin表达较NC组降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 SHCBP1在鼻咽癌中高表达,并可促进鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移及激活EMT过程。     

微小RNA通过SIRT1调控小鼠耳蜗老化HEI-OC1细胞凋亡的研究

目的 构建小鼠耳蜗毛细胞株HEI-OC1(house ear institute-organ of Corti 1)老化模型,探索微小RNA-96(miR-96)可否通过SIRT1调控老化HEI-OC1凋亡。方法 CCK-8筛选D-半乳糖浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测p53、p38、caspase-3蛋白表达。q RT-PCR检测miR-96、SIRT1 mRNA表达,Western blot检测SIRT1蛋白表达。miR-96模拟物转染HEI-OC1细胞,qRT-PCR检测miR-96、SIRT1 mRNA表达,Western blot检测SIRT1、caspase-3蛋白表达。结果 HEI-OC1细胞在15 mg/ml D-半乳糖条件下培养72 h后,凋亡较对照组显著增加（P<0.01）,且p53、p38(P<0.05)及caspase-3(P<0.0001)蛋白表达明显增加。老化组miR-96与SIRT1 mRNA和蛋白表达均明显减低（P<0.05）。miR-96过表达后,SIRT1 mRNA及蛋白较对照组表达升高,caspas...     

甲状腺癌相关基因1在喉癌组织中的表达及对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响CSCD

目的 探讨甲状腺癌相关基因1(thyroid cancer gene-1,TC-1)在喉癌组织中的表达及对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 采用免疫组织化学方法检测48例喉癌患者的喉癌组织及对应癌旁正常喉黏膜中TC-1的表达水平。Lenti-GFP-Puro(对照质粒)、Lenti-TC-1-GFP-Puro、siRNA N-CTL(阴性对照)及siRNA TC-1转染喉癌细胞，分别命名为Control组、TC-1组、siRNA-Control组及siRNA-TC-1组。采用CCK-8法、划痕实验及Transwell实验检测喉癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用Western blot检测β-catenin、c-Myc及MMP-7蛋白表达的变化。结果 TC-1在喉癌组织中的阳性表达率高于正常喉黏膜组织(χ2=15.875,P<0.001)。喉癌组织中TC-1的表达强度与肿瘤部位(χ2=8.261,P=0.041)、TNM临床分期(χ2=8.308,P=0.040)及病理分级(χ2=15.808,P=0.015)相关。与Control组比较，TC-1组喉癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力增强(t=-4.671、-8.179、-26.130,P<0.001、P=0.004、P<0.001),c-Myc与MMP-7蛋白表达升高(t=-7.391、-4.793,P=0.018、0.041)。与siRNA-Control组比较，siRNA-TC-1组喉癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力减弱(t=9.144、4.213、6.684,P <0.001、P=0.015、P=0.004),c-Myc与MMP-7蛋白表达降低(t=15.989、13.021,P=0.004、0.006)。结论 TC-1在喉癌组织中呈高表达，其表达强度与肿瘤发生部位、TNM临床分期及病理分级相关。过表达TC-1或干扰TC-1的表达能增强或减弱喉癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力，其机制可能为TC-1调节Wnt/β-catenin信号通路靶基因的表达有关。     

微小RNA-548c-3p通过靶向调控PCNA基因表达对喉癌细胞增殖及凋亡影响的研究[论著]

目的　探讨微小RNA-548c-3p（miR-548c-3p）对喉癌细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法　用miR-548c-3p mimic、增殖细胞核抗原（PCNA）-siRNA及其阴性对照分别或同时转染喉癌TU686和M4e细胞,用qRT-PCR与Western blot法检测miR-548c-3p和PCNA的表达;MTT法和流式细胞术分别检测转染细胞的增殖和凋亡;双荧光素酶报告基因实验观察miR-548c-3p和PCNA的靶向关系。Western blot法检测PCNA、细胞周期蛋白1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）的表达。结果　miR-548c-3p的表达量在癌旁组织（0.74±0.10）、喉癌组织（1.94±0.16）,TU686细胞（0.35±0.07）和M4e细胞（0.41±0.03）中均呈低表达,而PCNA mRNA和蛋白均呈高表达,差异有统计学意义（P 均＜0.05）。证实PCNA上存在miR-548c-3p的结合位点。上调miR-548c-3p可抑制细胞增殖及CyclinD1、Bcl-2的表达,并可促进细胞凋亡及Bax的表达,差异有统计学意义（P 均＜0.05）;上调miR-548c-3与抑制PCNA对细胞增殖及凋亡的作用相似。pcDNA-PCNA显著减弱miR-548c-3p mimic对细胞增殖和凋亡的作用。结论　miR-548c-3p通过抑制PCNA表达而降低喉癌细胞增殖能力并诱导细胞凋亡。     

Twist基因高表达诱导Hep-2细胞上皮间质转化并促进其侵袭能力的实验

目的探讨编码位于常染色体上的碱性螺旋-环-螺旋转录因子（Twist）,在Hep-2细胞中的高表达对上皮细胞标记物——上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、间充质细胞标记物——神经钙黏蛋白（N-cadherin）及Hep-2细胞的侵袭能力的影响。方法以人喉癌细胞系Hep-2为实验材料,将构建好的pcDNA3.1-Twist质粒利用脂质体2000转染于Hep-2细胞,利用Western-blotting方法检测转染pcDNA3.1-Twist的细胞中Twist、E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达情况;采用倒置相差显微镜观察转染pcDNA3.1-Twist后细胞的形态学变化;利用细胞侵袭实验,检测Twist的高表达对Hep-2细胞侵袭能力的影响。结果Western-blotting检测发现转染pcDNA3.1-Twist的实验组细胞中Twist和N-cadherin的表达均上升,E-cadherin的表达下降,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）;倒置相差显微镜发现细胞形态由转染前的多角型、椭圆型变为运动能力更强的细长、梭型;检测高表达TWIST的Hep-2细胞的侵袭能力,发现转染TWIST实验组的穿过膜的细胞数为85.33±6.66,明显高于pcDNA3.1组及对照组穿过膜的细胞数为29.33±10.70和32.00±3.61,差异具有统计学意义（F=52.32,P〈0.05）。结论Twist能诱导Hep-2细胞上皮间充质转化现象的产生,提高Hep-2细胞的侵袭能力,可能通过调控E-cadherin和N-cadherin发挥作用。     

上调miR-200b对人喉癌Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨上调miR-200b对人喉癌Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。 方法 培养人喉癌Hep-2细胞,随机分为miR-200b模拟物组、miR-对照序列组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测各组细胞中miR-200b表达,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、β-catenin蛋白表达。 结果 与空白对照组和miR-对照序列组相比,miR-200b模拟物组细胞中miR-200b相对表达量显著升高,差异有统计学意义(F=70.766, P<0.001);与空白对照组［(0.22±0.05)、(0.45±0.07)、(0.59±0.06)、(0.72±0.08)和(0.85±0.07)］和miR-对照序列组［(0.24±0.06)、(0.46±0.08)、(0.61±0.07)、(0.70±0.05)和(0.84±0.06)］相比,miR-200b模拟物组细胞24、48、72、96 h时吸光度A值［(0.21±0.04)、(0.29±0.06)、(0.40±0.04)、(0.53±0.07)和(0.58±0.05)］均降低,差异均有统计学意义(F=0.134, P=0.876; F=6.449, P=0.010; F=37.299, P<0.001; F=5.352, P=0.018; F=29.921, P<0.001);与空白对照组［(140.2±2.3)、(127.9±6.0)］和miR-对照序列组［(141.0±1.2)、(130.4±7.4)］相比,miR-200b模拟物组迁移细胞数和侵袭细胞数［(98.5±2.4)、(90.9±2.8)］均减少,差异均有统计学意义(F=845.523, P<0.001; F=88.859, P<0.001);与空白对照组［(0.35±0.07)、(0.54±0.10)、(0.76±0.12)］和miR-对照序列组［(0.24±0.03)、(0.60±0.14)、(0.65±0.24)］相比,miR-200b模拟物组细胞中E-cadherin蛋白相对表达量(0.54±0.14)升高,而N-cadherin、β-catenin蛋白相对表达量［(0.31±0.10)、(0.35±0.06)］降低,差异均有统计学意义(F=17.287, P<0.001; F=10.083, P=0.002; F=10.434, P=0.001)。 结论 上调喉癌细胞中miR-200b基因表达可减少细胞增殖,抑制细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制上皮-间质转化过程有关。     

MicroRNA-24对人喉鳞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨MicroRNA-24(miR-24)对喉鳞状细胞癌(LSCC)Hep-2、AMC-HN-8细胞增殖、侵袭及凋亡等生物学行为的影响。 方法 应用Lipofectamine^TM 2000转染上调Hep-2、AMC-HN-8细胞中miR-24的表达,通过荧光定量PCR验证转染效率;然后分别采用MTT法、克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验流式细胞分析技术分析外源上调miR-24后Hep-2、AMC-HN-8细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。 结果 miR-24质粒稳定转染Hep-2、AMC-HN-8细胞后miR-24表达明显上调。与转染miR-NC组和空白对照组相比,转染miR-24能明显降低Hep-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力;同时,转染miR-24能明显增加Hep-2、AMC-HN-8细胞的凋亡能力。 结论 miR-24异常表达与LSCC Hep-2、AMC-HN-8细胞的生物学行为密切相关,可能发挥抑癌作用。     

miR-129-5p靶向调节果蝇形态同系物2基因抑制喉鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的　探讨miR-129-5p对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的调控机制。方法　运用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time f luorescence quantification polymerase chain reaction，qRT-PCR）法检测人支气管上皮细胞HBE、喉鳞状细胞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p、DIAPH2的表达；将miR-NC组（转染miR-NC）、miR-129-5p组 （转染miR-129-5p mimics）、anti-miR-NC组（转染antimiR-NC）、anti-miR-129-5p组（转染anti-miR-129-5p）、si-NC组（转染si-NC）、si-DIAPH2（果蝇形态同系物2，Drosophila Homologue of Diaphanous2，DIAPH2）组（转染si-DIAPH2）、miR-129-5p+pc DNA组（共转染miR-129-5p和pc DNA）、miR-129-5p+pc DNA-DIAPH2组（共转染miR-129-5p和pc DNA-DIAPH2），用脂质体法转染HN4、TU177细胞；Western blot检测细胞中DIAPH2、细胞周期蛋白依赖激酶1（cyclinD1）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase-3）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（cleaved-caspase-9）的蛋白表达；MTT法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-129-5p与DIAPH2的结合力。结果　与人支气管上皮HBE相比，喉鳞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p 表达均显著降低，DIAPH2表达显著升高（P <0.05）；过表达miR-129-5p、敲减DIAPH2均可显著抑制HN4、TU177细胞增殖、促进凋亡、下调cyclinD1、上调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9；miR-129-5p可抑制野生型DIAPH2细胞的荧光活性，并负向调控DIAPH2的表达；过表达DIAPH2可逆转miR-129-5p对Hep-2细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论　miR-129-5p可抑制喉鳞状细胞癌的增殖，促进凋亡，其机制可能与靶向DIAPH2相关，将可为miR-129-5p靶向治疗喉鳞状细胞癌提供新的依据。     

Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制Bcl-2基因对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用

目的观察Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（B-cell lymphoma gene 2,Bcl-2gene）表达对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）CNE-2细胞的生长抑制作用。方法将构建成功的重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-15a/16-1经Lipofectamine 2000转染CNE-2细胞,RT-qPCR检测miR-15a/16-1、Bcl-2 mRNA表达水平,流式细胞术和WesternBlot检测Bcl-2、caspase-3蛋白表达水平,CCK-8法分析细胞生长抑制情况,4,6-二脒基-2-苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）染色观察细胞凋亡状况。结果转染后miR-15a表达增高（F=547.525,P均〈0.001）;miR-16-1表达增高（F=99.979,P均〈0.001）;Bcl-2 mRNA表达无明显差别（F=0.220,P〉0.05）;Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达增高;细胞在体外凋亡明显;细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效关系。结论 Hsa-miR-15a/16-1对Bcl-2基因的靶向抑制,可体外对CNE-2细胞产生增殖抑制和促进凋亡作用。     

MiR-324-3p经上皮-间质转化调控鼻咽癌迁移侵袭的实验分析

摘要：目的探讨miR 324 3p对鼻咽癌细胞体外迁移侵袭能力的影响。方法MiR 324 3p转移上调其在鼻咽癌5 8F和6 10B细胞中的表达,采用划痕愈合实验及Transwell侵袭实验检测上调后的鼻咽癌5 8F和6 10B细胞迁移及侵袭能力;western blot检测上皮-间质转化（EMT）上皮细胞标志物E cadherin和间质细胞标志物Vimentin的表达。结果MiR 324 3p成功转移上调了其在鼻咽癌5 8F和6 10B细胞中的表达。过表达miR 324 3p的鼻咽癌5 8F和6 10B细胞的体外迁移及侵袭能力显著下降,可同时伴随着E cadherin的表达上调,Vimentin的表达下降。结论MiR 324 3p可能通过诱导EMT改变调控鼻咽癌细胞的侵袭转移能力。     

AEG-1介导上皮-间质转化调控头颈部鳞状细胞癌的侵袭转移

目的分析星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)可介导上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)调控头颈鳞癌侵袭转移的分子机制。方法采用慢病毒介导AEG-1的上调载体上调AEG-1在头颈鳞癌Tu686细胞中的表达,划痕愈合实验、Transwell侵袭小室实验检测其体外迁移侵袭能力的改变,同时Western blot检测EMT分子标志物E-cadherin及Vimentin的表达情况。结果 Tu686细胞中AEG-1表达上调后,细胞划痕愈合率增加,穿过Transwell聚碳酸酯膜的细胞明显增多,且Tu686细胞上皮细胞标志物E-cadherin的表达量显著下调,间质细胞标志物Vimen-tin表达显著上调。结论 AEG-1表达上调可显著提高头颈部鳞癌细胞的体外侵袭能力,且该侵袭能力的增强可能与AEG-1介导的EMT改变密切相关。