miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 观察miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 过表达miR-30c质粒载体转染CNE-1细胞,同时设立空质粒载体转染阴性对照组和无处理的空白对照组。荧光定量PCR检测miR-30c表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果 鼻咽癌组织中miR-30c的表达量为0.23±0.05,显著低于癌旁非肿瘤鼻咽组织的0.37±0.08（P <0.01）。过表达miR-30c组表达量（0.46±0.12）显著高于空白对照组（0.17±0.03）和阴性对照组（0.18±0.04）（P 均<0.01）。在24、48、72小时过表达miR-30c组OD值显著低于空白对照组和阴性对照组（P 均<0.01）。过表达miR-30c组G1期细胞比例（90.36±10.23）% 显著高于空白对照组（74.46±9.14）%和阴性对照组（75.25±9.23）%（P <0.01）。过表达miR-30c组凋亡细胞比例（31.06±5.12）%显著高于空白对照组（3.18±0.72）%和阴性对照组（3.56±0.78）%（P <0.01）。结论 过表达miR-30可以现在抑制鼻咽癌细胞增殖、细胞周期以及诱导细胞凋亡。     

丹酚酸B对人鼻咽癌细胞株CNE-2增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 研究丹酚酸B对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测丹酚酸B对人鼻咽癌CNE-2细胞的半数抑制浓度(IC50);用IC50浓度的丹酚酸B处理人鼻咽癌CNE-2细胞后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;在荧光显微镜下应用Hoechst33258荧光...     

3-溴丙酮酸对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的 观察3-溴丙酮酸(3-B r PA)对鼻咽癌细胞CNE-1增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 用不同浓度的3-BrPA处理CNE-1细胞,24 h后CCK-8法检测细胞增殖活性,PI染色法流式检测细胞凋亡情况,Western blot检测mTOR和S6及其相应磷酸化蛋白的表达水平.结果 50、100、1...     

miR-634调控趋化因子受体-4蛋白对鼻咽癌细胞生物活性的作用机制

目的 探究miR-634调控趋化因子受体-4[chemokine(C-X-C motif)receptor 4,CXCR4]蛋白对鼻咽癌细胞生物活性的作用机制.方法 过表达miR-634转染至CNE1 细胞,RT-PCR检测miR-634和CXCR4 mRNA的表达;荧光素酶报告基因检测miR-634和CXCR4的靶向...     

17-AAG联合EGCG对人鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究

目的　研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）单药或联合使用对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法　MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果　①17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关（P＜0.01）;两者联合抑制作用显著增 加,且表现出时间、剂量依赖性（P＜0.01）。②RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论　17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。     

1,25二羟维生素D3对人喉鳞状细胞癌细胞系增殖及凋亡的影响

目的：研究1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]对Lscc-02人喉鳞状细胞癌细胞系增殖及凋亡的影响。方法：将不同浓度的1,25（OH）2D3与Lscc-02人喉鳞状细胞癌细胞系共同培养,采用MTT法、流式细胞仪及透射电镜观察该细胞系的增殖及凋亡诱导情况。结果：（10^-10～10^-7）mol／L浓度的1,25（OH）2D3均能抑制Lscc-02细胞系的增殖,抑制作用随1,25（0H）2D3浓度的增加而增强,在半抑制浓度时,抑制作用随时间延长而增强。流式细胞仪显示,经1,25（OH）2D3作用的喉鳞状细胞癌细胞位于细胞周期G0／G1期的细胞数量明显增多且细胞凋亡数目明显增加。结论：1,25（OH）2D3体外能抑制Lscc-02细胞系的增殖并诱导细胞凋亡,为临床探索1,25（OH）2D3治疗喉癌提供了重要的实验依据。     

Cep63表达及其与甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1凋亡功能的研究

目的研究中心体蛋白Cep63在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞系TPC-1凋亡过程中的作用及相关机制。方法收集PTC病例的癌组织和癌旁组织,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织Cep63的表达情况并分析其与临床病理因素的关系。本实验随机分为阴性对照组(NC)、低表达组[Cep63(-)]和过表达组[Cep63(+)],将Cep63慢病毒转染野生型TPC-1细胞系,并通过蛋白免疫印迹法(WB)和qRT-PCR验证Cep63的干扰效果。通过平板克隆实验与MTT法检测细胞增殖能力变化;流式细胞术检测细胞的凋亡率,免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和WB检测转染前后细胞凋亡相关蛋白表达差异。2组间均数比较采用t检验,单因素方差分析进行多组间均数差异的比较,病理因素关联分析采用卡方检验。结果相比NC组,Cep63(-)组细胞增殖受到抑制(3.18±0.07比2.14±0.09,t=8.54,P<0.01),Cep63(+)组细胞的增殖能力明显提高(3.18±0.07比3.58±0.10,t=3.21,P<0.05);NC组、Cep63(-)组和Cep63(+)组凋亡率分别为3.03%±0.24%、8.66%±0.44%和1.17%±0.44%,流式结果表明Cep63的低表达使TPC-1细胞的凋亡水平明显提高(F=157.7,P<0.001);NC组、Cep63(-)组和Cep63(+)组Bcl-2表达量分别为1.07±0.03、0.49±0.01和1.99±0.09,BAX表达量分别为0.64±0.02、1.06±0.01和0.21±0.03,WB结果表明,Cep63的低表达使TPC-1细胞Bcl-2蛋白的表达量明显降低(F=183.2,P<0.001),同时BAX表达明显上调(F=283.7,P<0.001)。结论Cep63可能通过Bcl-2/BAX通路调控了PTC细胞系TPC-1的凋亡过程,Cep63可能是PTC的一个潜在癌基因。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨虎杖苷诱导鼻咽癌细胞凋亡的初步研究

目的　基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨虎杖苷（polydatin, PYD）诱导鼻咽癌细胞凋亡的机制。方法 用不同梯度浓度的PYD处理CNE-1细胞后,采用CCK-8法检测虎杖苷对CNE-1细胞增殖的抑制作用,吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）双荧光染色法显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪分细胞周期分布;qRT-PCR和Wester n blot法检测细胞中PI3K、AKT、mTOR、p70S6K的mRNA和蛋白表达。结果 CNE-1细胞经不同PYD（40、80、160 μg/ml）干预48小时 后,CNE-1细胞增殖抑制率,凋亡率呈浓度依赖性增加;G0/G1、S期细胞的百分比呈浓度依赖性降低,而G2/M期细胞的百分比呈浓度依赖性增加;CNE-1细胞中PI3K、AKT、mTOR、p70S6K的mRNA和蛋白表达明显下调,均呈浓度依赖性。结论　PYD具有抑制鼻咽癌CNE-1细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能是PI3K/AKT/mTOR信号通路受到PYD抑制,致使其下游基因蛋白表达下降。     

白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞株的抗肿瘤作用及机制探讨

目的 观察白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞株的抗肿瘤作用并探讨可能作用机制。方法　体外常规培养甲状腺癌SW579细胞,将细胞分为对照组和白藜芦醇组（终 浓度为20、40、80 μmol/L）,MTT法检测甲状腺癌SW579细胞活性,BrdU荧光染色检测甲状腺癌SW579细胞增殖,DAPI染色法检测细胞凋亡,caspase-3和caspase-9活性检测试剂盒分析白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞亡的作用机制。结果　白藜芦醇（20、40、80 μmol/L）组甲状腺癌SW579细胞活性、BrdU表达、DAPI染色显著低于对照组,但细胞内caspase-3和caspase-9活性上升（P＜0.01）。Ac-DEVD-CHO和ZLEHD-FMK可显著提高白藜芦醇组（80 μmol/L）中甲状腺癌SW579细胞的活性（P＜0.05）。结论  白藜芦醇对抗甲状腺癌细胞具有抑制作用,通过激活caspase-3和caspase-9内源性凋亡信号通路可能是其作用机 制之一。     

STAT3蛋白活化与甲状腺乳头状癌上皮间质转化的关系及意义

目的：探讨STAT3、p-STAT3蛋白在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及其与上皮间质转化的关系及意义。方法：采用免疫组织化学方法检测56例PTC组织中STAT3、p-STAT3蛋白及上皮标志物E—cadherin和间质标志物Vimentin蛋白的表达,分析其与PTC临床病理特征间的关系及相互之间的相关性。结果：PTC组织中STAT3、p—STAT3蛋白的阳性表达率为78．6％和83．9％,明显高于癌旁甲状腺组织中的阳性表达率33．3％和20．8％（P〈0．01）。PTC组织中E-cadherin的阳性表达率为37．5％,明显低于癌旁甲状腺组织中的阳性表达率91．7％（P〈0．01）,PTC组织中Vimentin蛋白的阳性表达率为85．7％,明显高于癌旁甲状腺组织中的阳性表达率8．3％（P〈0．01）。STAT3、p-STAT3、E—cadherin、Vimentin蛋白的表达与性别、年龄无明显相关性（P〉0．05）,而均与PTC淋巴结转移、临床分期明显相关（P〈0．05）。STAT3、p-STAT3蛋白的表达和E—cadherin蛋白的表达呈负相关（r=-0．494,r=-0．364,均P〈0．01）,STAT3、p—STAT3蛋白的表达与Vimenin蛋白的表达呈正相关（r=0．533,P=0．000;r=0．377,均P〈0．01）。结论：PTC组织中存在STAT3蛋白活化及EMT,且与PTC淋巴结转移密切相关;STAT3通路激活可能通过介导PTC细胞EMT促进PTC侵袭转移。     

细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL和Bcl-2表达活性与鼻息肉上皮细胞增殖和凋亡活性平衡机制的相关性

目的探讨细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL和Bcl-2表达活性与鼻息肉上皮细胞增殖和凋亡活性平衡机制的相关性。方法鼻息肉组织标本29例,下鼻甲黏膜标本11例,免疫组化法检测上皮细胞Fas、FasL、Bcl-2和PCNA蛋白的表达活性,TUNEL过氧化酶原位标记法检测上皮原位细胞凋亡活性。结果在鼻息肉组,PCNA阳性细胞指数（PIPCNA）大于自身的细胞凋亡指数（AI,P〈0.01）,而且PIPCNA和AI绝对值均大于下鼻甲组（P〈0.01）,但PIPCNA/AI比值（1.95±0.66）却小于下鼻甲组（P〈0.01）;FasL和Bcl-2阳性细胞指数（PIFasL、PIBcl-2）均大于自身的Fas阳性细胞指数（PIFas,P〈0.05）,但该三指数均大于下鼻甲组（P〈0.01）;PIBcl-2/PIFas比值大于下鼻甲组（P〈0.01）,但组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论鼻息肉上皮细胞的增殖活性和凋亡活性均增强,但前者仍然大于后者;Bcl-2介导的细胞凋亡抑制机制和FasL介导的细胞免疫逃逸机制可能对鼻息肉上皮细胞凋亡活性产生部分抑制作用。     

槲皮素对人鼻咽癌HEN1细胞系增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的:目的:探讨黄酮类化合物槲皮素对人鼻咽癌HEN1细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用,并对其机制做初步探讨。方法:应用MTT法检测不同浓度槲皮素对人鼻咽癌HEN1细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布;比色法测定凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果:槲皮素能明显抑制人鼻咽癌HEN1细胞增殖,存在剂量依赖(r=0.709;P<0.01)与时间依赖(r=0.703;P<0.01);HEN1细胞经不同浓度槲皮素(15、30、60、90、120μmol/L)作用48 h后细胞凋亡率分别为4.81%、9.02%、14.33%、19.65%、28.88%,明显高于对照组(1.70%)(P<0.01);随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加,将细胞特异性地阻滞在G2/M期,出现凋亡峰;槲皮素组的HEN1细胞凋亡相关因子caspase-3表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:槲皮素能通过caspase-3途径抑制人鼻咽癌HEN1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有细胞周期特异性。     

Livin抗凋亡作用的机制及临床意义

凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein,IAP）是一类重要的抗细胞凋亡因子,与肿瘤的发生和发展密切相关。Livin是新近发现的IAP家族成员,主要通过抑制Caspases途径等机制发挥强大的抗凋亡能力,不仅特异性高表达于人的胚胎组织及大多数人类肿瘤组织,在一些非肿瘤性疾病中也发现其异常表达。下调Livin的表达能够增加细胞凋亡率、抑制肿瘤生长和增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。Livin的特异性表达有可能为这些疾病的早期诊断和基因、蛋白、免疫靶向治疗提供新方向。     

微小RNA-548c-3p通过靶向调控PCNA基因表达对喉癌细胞增殖及凋亡影响的研究[论著]

目的　探讨微小RNA-548c-3p（miR-548c-3p）对喉癌细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法　用miR-548c-3p mimic、增殖细胞核抗原（PCNA）-siRNA及其阴性对照分别或同时转染喉癌TU686和M4e细胞,用qRT-PCR与Western blot法检测miR-548c-3p和PCNA的表达;MTT法和流式细胞术分别检测转染细胞的增殖和凋亡;双荧光素酶报告基因实验观察miR-548c-3p和PCNA的靶向关系。Western blot法检测PCNA、细胞周期蛋白1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）的表达。结果　miR-548c-3p的表达量在癌旁组织（0.74±0.10）、喉癌组织（1.94±0.16）,TU686细胞（0.35±0.07）和M4e细胞（0.41±0.03）中均呈低表达,而PCNA mRNA和蛋白均呈高表达,差异有统计学意义（P 均＜0.05）。证实PCNA上存在miR-548c-3p的结合位点。上调miR-548c-3p可抑制细胞增殖及CyclinD1、Bcl-2的表达,并可促进细胞凋亡及Bax的表达,差异有统计学意义（P 均＜0.05）;上调miR-548c-3与抑制PCNA对细胞增殖及凋亡的作用相似。pcDNA-PCNA显著减弱miR-548c-3p mimic对细胞增殖和凋亡的作用。结论　miR-548c-3p通过抑制PCNA表达而降低喉癌细胞增殖能力并诱导细胞凋亡。     

血清微小RNA-222-3p在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的　探讨血清微小RNA-222-3p（miR-222-3p）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）中的表达及其临床意义。方法　提取121例PTC及甲状腺良性疾 病患者血清中的总RNA,采用qRT-PCR方法检测miR-222-3p的表达情况,分析其与PTC临床病理特征的关系,并探讨其对PTC的临床诊断价值。结果　血清miR-222-3p在PTC患者中的中位表达水平显著高于良性对照组（2.2188 vs0.7022,P <0.05）。血清miR-222-3p的表达水平与PTC的肿瘤最大径、双侧累及、病灶数量及淋巴结转移状况等密切相关（P 均<0.05）,但与性别、年龄、被膜侵犯及TNM分期等无关（P 均>0.05）。ROC曲线分析显示,miR-222-3p诊断PTC的AUC为0.717,灵敏度为79.75%,特异性为61.90%。结论血清miR-222-3p在PTC患者中高表达,其表达水平能反映PTC的进展情况,并对PTC的临床诊断具有一定价值。     

内耳免疫反应中细胞凋亡及Caspase-3动态表达的研究

目的:研究内耳免疫反应过程中是否存在细胞凋亡,以及细胞凋亡是否与Caspase3信号转导有关。方法:选用雌性白色豚鼠45只,随机分为实验组29只,对照组16只,以钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)全身免疫后,实验组以相同抗原进行内耳免疫,对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS),分别在内耳免疫术后1、3、5、7d和14d后处死动物,于免疫前及处死前行双侧听性脑干反应(ABR)测试。取内耳免疫侧耳蜗做石蜡切片。通过DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测内耳凋亡细胞,免疫组织化学检测内耳Caspase3的表达。结果:实验组豚鼠内耳免疫前、后反应阈比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01);对照组给药前、后比较反应阈无明显变化。实验组豚鼠内耳均存在TUNEL染色阳性细胞,并且TUNEL染色阳性细胞具有凋亡细胞的典型形态学特征,而对照组仅在支持细胞、血管纹和螺旋神经节细胞中发现极少数TUNEL染色阳性细胞。Caspase3免疫组织化学染色实验组内耳从内耳免疫后5d开始出现阳性表达,而对照组表达阴性。结论:内耳免疫反应可以诱导细胞凋亡的发生;内耳免疫反应诱导细胞凋亡的发生中有Caspase3的激活。     

七氟烷对甲状腺癌细胞AMPK-SIRT1-PGC-1α信号通路的调控作用研究CSCD

目的探究七氟烷对甲状腺癌细胞能量代谢信号通路AMPK-SIRT1-PGC-1α的调控作用。方法将人甲状腺癌细胞株(TPC-1)分为对照组、NC组、七氟烷组和七氟烷+AICAR组,MTT检测各组TPC-1细胞在24、48、72 h细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞存活、早期凋亡及晚期凋亡水平,q PCR检测细胞AMP依赖蛋白激酶(adenosine5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)、AMPK/AD-依赖性去乙酰化酶Sirtuin-1(NAD-dependent deacetylase sirtuin-1,SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子(peroxisome proliferator-activated receptorgamma coactivator,PGC-1α)mRNA表达水平,Western blot检测细胞AMPK、SIRT1和PGC-1α蛋白表达水平。结果与对照组相比,七氟烷组细胞在24、48、72 h细胞增殖水平显著下降,分别为70.42±1.51、62.16±1.73、55.21±1.22,且有时间依赖效应,差异有统计学意义(P<0.01);七氟烷组细胞存活比例显著降低,早期凋亡和晚期凋亡比例显著增加,分别为(62.71±2.73)%、(16.21±0.22)%、(22.49±2.32)%,差异有统计学意义(P<0.01);q PCR和Western blot实验表明七氟烷组AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA和蛋白表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);NC组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与七氟烷组相比,七氟烷+AICAR组细胞在24、48、72 h细胞增殖显著升高,分别为86.11±1.33、78.28±1.41、62.24±1.24,差异有统计学意义(P<0.01);七氟烷+AICAR组细胞存活比例显著升高,早期凋亡和晚期凋亡比例显著降低,分别为(72.25±2.33)%、(12.21±1.01)%、(14.21±2.01)%,差异有统计学意义(P<0.01);q PCR和Western blot实验表明七氟烷+AICAR组AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA和蛋白表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论七氟烷可以抑制甲状腺癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡,此过程与抑制能量信号通路AMPK-SIRT1-PGC-1α的激活有关。     

阻断氯通道对人喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡的影响

目的研究氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙氨基)苯甲酸[5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)- benzoic acid,NPPB]对人喉表皮样癌细胞(Hep-2)细胞增殖及凋亡的影响,探讨氯通道在喉癌中的意义。方法以Hep-2细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度NPPB对Hep-2细胞增殖的影响;用流式细胞术检测NPPB阻断氯通道前后Hep-2细胞凋亡率及细胞周期变化。结果NPPB浓度依赖性地抑制Hep-2细胞增殖,NPPB阻断氯通道前后Hep-2细胞凋亡率及细胞周期存在显著性差异。结论氯通道与Hep-2细胞增殖及凋亡密切相关,阻断氯通道可抑制Hep-2细胞增殖、诱导Hep-2细胞凋亡。