调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。     

抑制自噬对缺氧复氧后H9c2心肌细胞损伤及线粒体Cx43变化的影响

目的研究缺氧复氧(HR)后,抑制自噬对H9c2心肌细胞损伤的影响,同时观察线粒体Cx43含量及磷酸化水平的变化,探讨抑制自噬对HR心肌损伤的影响及可能机制。方法通过缺氧12h、复氧12h建立H9c2心肌细胞HR模型。随机将H9c2心肌细胞分为5组:对照组、HR组、格尔德霉素(GA)组、3甲基腺嘌呤(3-MA)组、GA+3-MA组。分别测定各组细胞活力、线粒体膜电位以及人卷曲螺旋-肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、线粒体Cx43、线粒体磷酸化Cx43蛋白水平和自噬体含量。结果与对照组比较,HR组漂浮的死亡细胞增多、存活心肌细胞密度减少,细胞存活率和活力、线粒体膜电位下降,乳酸脱氢酶水平升高(P0.05)。与HR组比较,GA组、3-MA组和GA+3-MA组线粒体膜电位、细胞活力均下降(P0.05);GA+3-MA组线粒体膜电位、细胞活力均分别低于GA组和3-MA组(P0.05)。与对照组相比,HR组自噬体增多、自噬相关蛋白Beclin-1水平和LC3BⅡ/LC3BⅠ均升高(P0.05);与HR组比较,GA组、3-MA组和GA+3-MA组自噬体减少、Beclin-1水平GA、LC3BⅡ/LC3BⅠ均下降(P0.05);GA+3-MA组Beclin-1水平、LC3BⅡ/LC3BⅠ均分别低于GA组和3-MA组(P0.05)。与对照组比较,HR组线粒体Cx43及磷酸化Cx43蛋白均下降(P0.05);GA组和GA+3-MA组线粒体Cx43蛋白低于HR组(P0.05);GA组、3-MA组和GA+3-MA组线粒体磷酸化Cx43蛋白低于HR组(P0.05);GA+3-MA组线粒体磷酸化Cx43蛋白分别低于GA组和3-MA组(0.18±0.04 vs 0.27±0.06,0.33±0.05,P0.05)。结论 HR导致线粒体Cx43含量及磷酸化水平下降,心肌细胞出现缺血再灌注损伤,同时自噬激活。而抑制自噬,使HR后线粒体Cx43脱磷酸化加剧,进一步加重HR心肌细胞损伤。     

自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧过程中的表达及其意义

目的 探讨自噬及凋亡相关蛋白在PC12细胞缺糖缺氧(OGD)过程中的表达及其意义.方法 将PC12 细胞分为正常对照组、缺糖缺氧1、4和12 h组.MTT法检测细胞存活率,Western印迹法检测各组PC12细胞中BECN1、Bcl-2及Bax蛋白的表达水平.结果 与正常对照组相比,OGD 1及4 h组PC12细胞存活率下降(均P<0.05),BECN1蛋白表达升高,且Bcl-2/Bax比值升高;而与缺糖缺氧1和4 h组相比,OGD 12 h组细胞存活率明显下降(P<0.01),BECN1蛋白表达及Bcl-2/Bax比值亦明显降低.结论 自噬蛋白BECN1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax参与了PC12细胞OGD损伤过程.在OGD早期,自噬起主要作用,并对OGD PC12细胞起一定的保护作用,随着OGD时间的延长,凋亡在其中占主导地位,促进凋亡蛋白表达,引起PC12细胞的死亡.     

线粒体自噬在COPD发病机制中作用的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是最常见的呼吸系统疾病之一.自噬是内质网膜包裹并降解异常蛋白质和细胞器的细胞途径,对维持细胞正常生理功能至关重要.线粒体是细胞中最重要的细胞器,主要参与能量生成和氧化还原反应等重要细胞过程.线粒体自噬是一种选择性清除损伤线粒体的自噬过程,是维持线粒体功能和数量正常的重要途径.越来越多的研究发现,线粒体自噬在COPD的病理生理过程中发挥着重要作用,故本文将线粒体自噬在COPD发病机制中的作用进行综述.     

脊髓损伤治疗干预对细胞自噬及凋亡影响的相关研究进展

脊髓损伤是脊柱外科常见的严重疾患之一,其治疗一直是世界性难题。脊髓损伤后继发性损伤所引起的后果更严重,细胞自噬与凋亡在其调控过程中起重要作用。该文对近年来脊髓损伤治疗干预对细胞自噬及凋亡影响的相关研究进展作一综述。     

自噬下降参与了β1肾上腺素受体自身抗体诱导的H9c2心肌细胞凋亡

目的 探讨自噬下降对β₁肾上腺素受体自身抗体(β₁adrenergic receptor autoantibodies, β₁-AA)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用。方法 使用1 μM的β₁-AA对H9c2心肌细胞进行处理,Real time-PCR检测自噬相关基因LC3 mRNA表达的改变,Western blot检测LC3、Beclin 1以及P62蛋白表达水平的变化;使用流式细胞术、Caspase-3活性检测以及Hoechst 33258染色反映细胞凋亡情况;使用经典的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine, 3-MA)预处理30 min以及mTOR通路抑制剂雷帕霉素(rapamyein,RAPA)预处理1 h后,再给予细胞β₁-AA处理,检测此时细胞凋亡的变化情况。结果 1 μM的β₁-AA干预H9c2心肌细胞6 h可以明显降低细胞存活率;β₁-AA干预细胞6 h、12 h、24 h,LC3 mRNA水平依次降低,LC3II和Beclin 1蛋白水平依次降低,P62蛋白水平逐渐增加,表明β₁-AA可以引起心肌细胞自噬水平逐渐下降;同时发现,β₁-AA干预细胞6 h、12 h,细胞凋亡水平明显升高;使用经典自噬抑制剂3-MA预处理心肌细胞30 min抑制自噬后,H9c2心肌细胞凋亡水平较β₁-AA单独处理组显著增加,相反使用经典mTOR通路抑制剂RAPA预处理心肌细胞1 h上调自噬后,心肌细胞凋亡水平较β₁-AA单独处理组明显下降,说明自噬水平改变可以影响心肌细胞凋亡水平。 结论 自噬下调能够增加β₁-AA诱导的H9c2心肌细胞凋亡。     

右美托咪定预处理调控PINK1/Parkin通路对H9C2细胞缺氧/复氧损伤线粒体自噬的影响

目的 研究右美托咪定对缺氧/复氧(H/R)条件下心肌细胞PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)通路介导的线粒体自噬的影响,以明确右美托咪定保护心肌细胞的相关作用机制。方法 体外培养H9C2细胞,将细胞分为空白对照组、H/R组、右美托咪定低剂量组(0.1μmol/L右美托咪定+H/R)、右美托咪定中剂量组(1.0μmol/L右美托咪定+H/R)、右美托咪定高剂量组(10.0μmol/L右美托咪定+H/R)。采用3-2(4,5-二甲基噻唑-2)-2-四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测各组H9C2细胞增殖能力;检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、活性氧簇(ROS)水平;透射电镜下观察线粒体自噬情况;JC-1法检测线粒体膜电位(MMP);免疫印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)、家蚕隔离体蛋白1(p62)、PINK1/Parkin通路相关蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,H/R组H9C2细胞增殖抑制率、自噬小体数量、MDA含量、ROS水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PINK1、Parkin蛋白表达水平明显升高(P<0.05)...     

线粒体自噬和线粒体凋亡及其相关病理生理机制研究进展

线粒体为双层膜封闭式结构的细胞器,它是细胞内氧化磷酸化的场所,为细胞生命活动提供能量。呼吸底物经呼吸链传递给氧发生氧化还原反应,伴有ATP合酶生成ATP,并将质子从基质泵到膜间隙称为氧化磷酸化。     

CRISPR/Cas9沉默Fas可抑制急性肝衰竭细胞线粒体自噬及减轻线粒体损伤

目的 探讨凋亡相关因子(Fas/CD95)在急性肝衰竭疾病进展中的作用及机制。方法 构建刀豆蛋白A诱导的急性肝衰竭小鼠动物模型,通过透射电子显微镜及免疫印迹检测了急性肝衰竭肝细胞内的线粒体自噬发生;在小鼠尾静脉输注靶向Fas基因的CRISPR/Cas9质粒,随后予以刀豆蛋白A诱发急性肝衰竭,检测小鼠肝组织急性损伤情况及肝细胞内线粒体自噬及线粒体损伤的变化,同时体外转染靶向Fas的CRISPR/Cas质粒到细胞内,刀豆蛋白A诱导HepG2肝细胞损伤,验证Fas敲除后对线粒体自噬和线粒体损伤的影响。结果 刀豆蛋白A可诱导小鼠急性肝衰竭,透射电镜观察发现肝细胞中发生了线粒体自噬,肝细胞内p62蛋白水平降低,PINK1/Parkin的蛋白上调,Fas的表达上调;小鼠肝组织和体外肝细胞先予以PX330Fas质粒转染,再予以刀豆蛋白A诱导肝损伤后,LC3II/LC3I表达比值减低,p62蛋白的表达得到恢复,线粒体蛋白COX4I1和线粒体DNA含量的水平下降,Fas表达下调,与转染空白质粒的对照组相比,差异均有统计学意义。结论 CRISPR/Cas9沉默Fas抑制急性肝衰竭进展及肝细胞内线粒体自噬的...     

Bcl-2蛋白在调控细胞凋亡与自噬中的作用

细胞凋亡与自噬均属于细胞死亡的形式。程序性细胞死亡的细胞凋亡,主要依赖一系列蛋白水解,而细胞的残余部分最终被巨噬细胞清除。自噬被称为Ⅱ型程序性细胞死亡,与凋亡方式不同的是不依附于蛋白的水解,而是以独特的自噬体的结构出现为其特征,此独特结构和其细胞内的成分最终将通过自身溶酶体系统而被消除。两者紧密联系在哺乳动物发育,维持组织动态平衡中且起着核心作用,并与疾病的发生、发展密切相关。通过对Bcl-2蛋白构象与功能的不断研究,意识到Bcl-2蛋白不仅具有抗凋亡的功能,也可通过与其他蛋白的相互作用介导细胞自噬,提示其有助于维持细胞的存活,而不单单是促进细胞死亡的双重作用。新近研究发现,Bcl-2蛋白在脑缺血后的病理机制中起着关键性的作用,但其具体机理还有待进一步研究。     

瘦素-p38MAPK通路介导高糖对H9c2心肌细胞的损伤

目的 探讨瘦素-p38丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路在高糖损伤H9c2心肌细胞中的作用。方法 应用35 mmol/L葡萄糖处理H9c2心肌细胞以建立高糖损伤细胞模型。应用细胞计数试剂盒检测细胞存活率;双氯荧光素染色荧光显微镜照相测定胞内活性氧水平;Hoechst 33258核染色检测凋亡细胞形态与数量的改变;罗丹明123染色荧光显微镜照相测定线粒体膜电位;Western blot检测瘦素和p38MAPK蛋白的表达水平。结果 35 mmol/L葡萄糖处理H9c2心肌细胞明显促进瘦素的表达。在高糖处理H9c2心肌细胞前,应用50 μg/L瘦素拮抗剂预处理24 h明显抑制高糖对磷酸化p38MAPK表达的上调作用。瘦素拮抗剂预处理24 h或p38MAPK抑制剂（SB203580）预处理60 min均能抑制高糖对H9c2心肌细胞的损伤作用,使细胞存活率升高,凋亡细胞数量减少,活性氧生成及线粒体膜电位丢失减小。结论 瘦素-p38MAPK通路参与高糖对心肌细胞的损伤。     

自噬与2型糖尿病胰岛β细胞增殖及凋亡

<正>自噬与细胞的生存与死亡密切相关〔1〕。研究发现,自噬在维持胰岛β细胞活性及数量中具有重要作用。在一定氧化应激水平下,自噬可以减少胰岛β细胞凋亡、保证其正常增殖。有研究显示,当环境极度恶劣时,超出自噬的调控能力,自噬和凋亡将同时出现于细胞中。因此,阐述自噬在2型糖尿病(T2DM)中的作用,尤其是对胰岛β细胞生存的影响尤为重要。1自噬自噬是一个将自身细胞质内受损蛋白或受损细胞器包被     

曲美他嗪对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和自噬及心功能的影响

目的:观察曲美他嗪对心肌梗死模型大鼠缺血心肌细胞凋亡、自噬以及心功能的影响。方法:成年雄性,SD大鼠, SPF级, 90只,随机分为假手术组、模型对照组和曲美他嗪干预组,假手术组暴露心脏后不结扎前降支,模型对照组结扎前降支,曲美他嗪干预组结扎前降支后给予10 mg·kg~(-1)·d~(-1)曲美他嗪,连续4周。心肌细胞凋亡使用TUNEL法检测,LC3Ⅱ自噬蛋白使用Western blot检测。Vevo2100小动物超声仪测定LVESD、短轴缩短分数(FS)和EF。结果:HE病理切片显示曲美他嗪干预心肌细胞坏死和间质炎性细胞浸润较模型对照组减轻。模型对照组心肌凋亡指数为(20.87±5.64)%,显著高于曲美他嗪干预组的[(10.26±1.88)%,P0.01]。曲美他嗪干预组心肌凋亡指数显著高于假手术组的[(0.62±0.14)%,P0.01]。假手术组、模型对照组和曲美他嗪干预组心肌自噬蛋白LC3Ⅱ相对灰度值分别为[(0.13±0.02)vs.(0.42±0.09)vs.(0.73±0.14),P0.01]。假手术组心肌自噬蛋白LC3Ⅱ表达显著低于模型对照组,模型对照组又显著低于曲美他嗪干预组。术后4周,曲美他嗪干预组LVEDD显著低于模型对照组(P0.05),而FS和EF又显著高于模型对照组(P0.05)。结论:曲美他嗪显著减低心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡和增加心肌细胞自噬,有利于心功能的恢复。     

缺氧对大鼠心肌细胞损伤的影响及机制

目的探讨缺氧对大鼠心肌细胞系H9C2的损伤及机制。方法在1%O_2+5%CO_2+94%N_2条件下培养大鼠心肌细胞株H9C2 3、6、12、24、48 h,并以正常大鼠心肌细胞株作对照,使用台盼蓝进行细胞计数;CCK-8法检测细胞存活率;实时监测心肌细胞生长状态;透射电镜观察细胞内部结构;活性氧检测试剂盒检测胞内活性氧(ROS);Western印迹法检测线粒体色素C蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞坏死程度。结果缺氧状态下,随着缺氧时间的不断增加,大鼠心肌细胞株H9C2的细胞生长、存活率均明显降低、细胞形态明显改变,细胞器结构明显损伤,ROS水平升高,线粒体细胞色素释放增加,细胞凋亡率明显增加,LDH的释放率明显增高。结论缺氧会造成大鼠心肌细胞的生长速度减慢、形态改变及心肌线粒体损伤,最终导致细胞凋亡和细胞坏死。     

细胞凋亡和细胞自噬在慢性环孢素A肾毒性中的作用

目的探讨细胞凋亡和细胞自噬在慢性环孢素A(CsA)肾毒性中的作用。方法 Sprague-Dawley大鼠分为两组:对照组:皮下注射橄榄油(1 ml·kg-1·d-1)4 w;慢性CsA肾毒性组:皮下注射CsA(15 mg·kg-1·d-1)4 w。检测两组大鼠的体重和肾功能;三色染色检测肾小管间质纤维化程度;ELISA法检测血、尿8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平;原位末端标记法(TUNEL)染色观察细胞凋亡;免疫印迹法检测细胞凋亡调控基因(Bcl-2、Bax、Caspase-3)和细胞自噬体膜型LC3-Ⅱ蛋白的表达;Pearson直线相关分析肾小管间质纤维化程度与细胞凋亡和LC3-Ⅱ蛋白表达的相关关系。结果与对照组相比,毒性组大鼠体重减轻、肾功能低下、血尿8-OHdG水平升高,同时肾毒性组可见明显的肾小管间质纤维化和大量TUNEL阳性细胞。免疫印迹结果表明,毒性组Bax、Caspase-3、LC3-Ⅱ蛋白的表达明显增加,反之,Bcl-2的表达显著减少。直线相关分析提示,肾小管间质纤维化程度与TUNEL阳性细胞数和LC3-Ⅱ蛋白表达呈正向相关。结论细胞凋亡和细胞自噬参与了慢性CsA肾毒性肾小管间质的损伤。     

线粒体自噬对心力衰竭的作用及相关中药研究进展

对心力衰竭时线粒体自噬的发生发展及其分子机制进行系统梳理,并总结目前中药干预线粒体自噬缓解心力衰竭的研究进展,为中药治疗心力衰竭提供新的研究环节。     

抵当汤调节线粒体自噬对脑出血后神经损伤的保护作用及机制

目的 基于线粒体自噬研究抵当汤(DDT)对脑出血(ICH)后神经损伤的保护作用及机制。方法 应用自体血注入法建立ICH大鼠模型,氯化钴(CoCl₂)诱导PC12细胞建立神经细胞缺氧模型,并应用DDT进行治疗。随机分为假手术(Sham)组、ICH组、脑血康(NXK,0.64 mg/100 g)组、ICH+DDT低、中、高剂量(0.13、0.26、0.52 g/100 g)组、线粒体自噬诱导剂CCCP阳性对照(CCCP,4 mg/kg)组、CoCl₂(150μmol/L)组、CoCl₂+DDT低、中、高剂量(50、100、200μg/ml)组。Longa评分法观察DDT对ICH大鼠神经功能缺损的保护作用,通过检测超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量探索DDT保护神经细胞氧化损伤的作用。利用Tunel染色和流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光染色法观察线粒体膜电位变化,Western印迹和免疫组化法检测DDT对线粒体自噬的调控作用。结果 DDT可以改善ICH神...     

线粒体ATP敏感钾通道与线粒体自噬对心力衰竭的作用研究

心力衰竭是由心脏的收缩和/或舒张功能发生障碍,导致心室泵血功能受损引起的循环障碍症候群。临床主要表现为呼吸困难、咳嗽和咳痰。心力衰竭是心脏疾病发展的终末阶段,患者预后较差,目前心力衰竭的发病机制尚不完全明确。近年来,许多研究表明线粒体功能障碍与心力衰竭的发生发展密切相关。现对线粒体ATP敏感钾通道以及线粒体自噬对心力衰竭的作用进展进行综述。     

线粒体自噬对急性肾损伤的保护作用

近年来,全球范围内急性肾损伤(AKI)的发病率和死亡率增加。线粒体自噬通过清除受损、功能障碍的线粒体,在减少活性氧积累、维持细胞正常能量代谢、抑制炎症反应、维持线粒体动力学稳态等方面具有重要作用。研究表明在缺血再灌注损伤、顺铂、对比剂、脓毒症等诱导的AKI中,线粒体自噬缺陷促进肾小管上皮细胞损伤,导致肾功能下降。本文就线粒体自噬在AKI中的保护作用进行综述,旨在寻找新的治疗靶点,改善AKI患者预后。