趋化因子受体CCR7介导树突状细胞抗凋亡机制研究

目的研究趋化因子受体CCR7对成熟树突状细胞（DCs）的抗凋亡作用，并对其机制进行探讨。方法体外培养大鼠骨髓来源DCs，脂多糖诱导成熟。加入CCR7配体CCL21进行刺激，以不加CCL21为对照组，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测磷酸化Akt、Akt蛋白表达，应用Wortmannin抑制PI3K/Akt信号通路进一步观察磷酸化Akt蛋白表达和细胞凋亡的变化。结果在CCL21的作用下，DCs细胞凋亡率明显低于对照组，而磷酸化Akt蛋白表达却明显增高（P〈0.05）。DCs经PI3K抑制剂预处理后，CCR7介导的Akt蛋白磷酸化及抗凋亡作用被阻断。结论在CCL21作用下，CCR7介导了抗凋亡效应，其对DCs的凋亡调控通过PI3K/Akt信号通路发挥作用。     

缺氧微环境中胰腺星状细胞通过CCL7/CCR5轴促进胰腺癌侵袭

目的：探讨缺氧状态下胰腺星状细胞的单核细胞趋化因子7(C-C motif chemokine ligand 7,CCL7)表达情况及其对胰腺癌侵袭的影响。方法：通过组织块外植法获得人肿瘤相关胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs),于常氧(20% O2)、缺氧(1% O2)下培养,并通过人趋化因子抗体芯片技术分析其上清液中多种趋化因子的表达差异;通过加入不同浓度外源性人重组蛋白CCL7（0、1、10/100 ng/mL）研究趋化因子CCL7与胰腺癌细胞侵袭之间的浓度依赖关系;使用慢病毒转染、Transwell等技术着重分析缺氧PSCs过表达的CCL7促胰腺癌侵袭的作用。结果：相较于常氧培养PSCs,缺氧培养PSCs的条件培养基可显著增强胰腺癌侵袭能力（P＜0.05）;缺氧培养下PSCs上清液中CCL7相较于常氧培养显著高表达(fold change=2.38);外源性重组CCL7蛋白（0、1、10/100 ng/mL）可显著增加胰腺癌细胞(Miapaca-2、Colo357)侵袭能力,且呈浓度依赖关系。流式细胞术检测CCL7受体(CCR1、CCR2、CCR3、CCR5)表达,显示胰腺癌细胞(Miapaca-2、Colo357)仅有CCR5高表达。Western blot印迹显示,缺氧诱导PSCs高表达CCL7并促胰腺癌侵袭的过程中存在EMT改变,即E-cadherin表达下降,Vimentin、N-cadherin表达上升。结论：缺氧可诱导PSCs高表达CCL7,并通过CCL7/CCR5轴促进胰腺癌细胞迁移和侵袭,其机制可能与诱导胰腺癌上皮间质化有关。     

肿瘤微环境趋化因子通过与细胞因子受体互作参与HCC诱导的炎症反应

目的探讨肿瘤微环境(TM)中趋化因子参与肝细胞癌(HCC)引起的炎症反应的可能机制。方法提取肿瘤组织(TM组)和癌旁组织(对照组)总RNA并通过RNA-seq和生物信息学手段分析趋化因子相关差异表达基因的功能及其编码蛋白的互作情况,并以RT-qPCR验证实验结果。结果 TM中共有43个趋化因子相关差异表达基因,它们被富集到2个KEGG信号通路、5个生物学过程和2个细胞组分,其中大量趋化因子相关基因参与炎症反应、免疫反应、趋化性、细胞对IL-1的反应和细胞对肿瘤坏死因子的反应过程。尤其值得一提的是,涉及趋化性的7个基因(ACKR3、CCL20、CCL3、CCL5、CCR4、CCR6、PTGDR2)中,有6个参与细胞因子-细胞因子受体信号通路、5个参与免疫反应、4个参与炎症反应;涉及细胞因子-细胞因子受体信号通路的134个基因中有7个参与炎症反应。结论 TM中趋化因子通过与细胞因子受体互作的方式参与HCC诱导的炎症反应。     

Sox2下调表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞β-catenin与转录中介因子γ的影响

目的 下调乳腺癌MDA-MB-231细胞Sox2基因表达,观察对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响以及信号因子β-catenin和TIF1γ表达的影响.方法 将MDA-MB-231细胞分为重组质粒转染组(转染Sox2-shRNA干扰载体)、阴性对照组(转染pMafic7.1-shRNA-NC质粒)、空白对照组(未经处理的MDA-MB-231细胞,n=6),并将shRNA-Sox2-1瞬时转入乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western blot检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中Sox2蛋白表达水平,FCM检测细胞凋亡的情况,Transwell检测细胞的侵袭能力,MTS检测细胞活力和增殖能力.另外,采用Westem blot和免疫组化检测靶向抑制Sox2对信号因子β-catenin和TIF1γ蛋白的表达与分布.结果 成功构建重组载体pMafic7.1-shRNA-Sox2.与空白对照组(未转染组)和阴性对照组(转染pMafic7.1-shRNA-NC)相比,pMafic7.1-shRNA-Sox2转染至MDA-MB-231细胞后,Sox2蛋白的表达水平明显下调(P＜0.01),细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),细胞的侵袭能力、活力和增殖能力均明显下降(P＜0.05).与空白对照组(0.79 ±0.07)和阴性对照组(0.74±0.10)相比,重组质粒转染组β-catenin(0.15±0.04)蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05);同样,与空白对照组(0.74±0.05)和阴性对照组(0.64±0.07)相比,重组质粒转染组TIF1γ蛋白(0.11±0.01)的表达水平明显下调(P＜0.05).结论 靶向沉默Sox2基因能促进细胞凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭,其作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路与TIF1γ调控有关.     

I2PP2A蛋白调控PP2A/Akt信号通路对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨蛋白磷酸酶2A抑制剂-2(protein phosphatase 2A inhibitor-2,I2PP2A)调控PP2A/Akt信号通路对人神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞转染I2PP2A-shRNA干扰质粒及对照质粒后分为siI2PP2A组及siC组。CCK-8、细胞克隆形成实验、细胞周期实验用于检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞内相关蛋白相对表达量;磷酸酶检测系统试剂盒测定PP2A活性;给予PP2A抑制剂冈田酸(okadaic acid, OA)处理细胞并检测增殖活性及PP2A/Akt信号通路变化。结果 与siC组比较,siI2PP2A组48h及72h的吸光度(A)值下降(P<0.01),细胞克隆形成数目显著降低(P<0.01);siC组G₀/G₁期、S期、G₂/M期、细胞凋亡比例分别为43.29%±3.68%、31.76%±2.42%、24.96%±2.34%、1.89%±1.09%,siI2PP2A组...     

CCL28-CCR10通路在类风湿关节炎单核细胞迁移中的作用

目的：观察类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者关节中单核/巨噬细胞趋化因子受体CCR10的表达,探讨趋化因子CCL28与其受体CCR10在RA单核细胞迁移中的作用及机制。方法：采用免疫组织化学法分析8例RA患者、4例骨关节炎(osteoarthritis, OA)患者和4例正常对照者滑膜组织中CCR10的表达并进行细胞染色评分(0～5分),流式细胞术检测26例RA患者和20例健康对照者外周血、15例RA患者滑液CD14⁺单核细胞中CCR10阳性细胞比例,Transwell迁移实验检测CCL28对RA和健康对照单核细胞的趋化性,Western blotting检测CCL28干预RA单核细胞的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路磷酸化。结果：CCR10表达在RA滑膜衬里层细胞及衬里下层的巨噬细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞;RA滑膜衬里层细胞和衬里下层巨噬细胞的CCR10表达明显高于OA和正常对照的滑膜(P均&l...     

毛兰素通过CCL2-CCR2信号轴介导的免疫逃避抑制食管癌细胞的恶性进展

目的:探讨毛兰素对食管癌(EC)细胞恶性进展的影响及其作用机制。方法:收集2021年3月至2022年12月期间在本院根治手术治疗EC患者(40例)的癌组织及距离癌组织3cm处的癌旁组织；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测EC组织及细胞中CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达水平；以不同浓度的毛兰素(0、10、20、40、60、80、160nmoL/L)干预ECA109细胞48h, MTT法检测细胞增殖，筛选最佳干预浓度；将ECA109细胞分为control组(正常培养)、毛兰素低、中、高剂量组(20、40、60nmoL/L)、pcDNA组(转染pcDNA3.1)、pcDNA-CCL2组(转染pcDNA3.1-CCL2),MTT法、平板克隆实验、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡；ECA109细胞和CD8⁺T细胞共培养后，分为T细胞组、共培养组、毛兰素组、pcDNA组、pcDNA-CCL2组，MTT、流式细胞仪检测CD8⁺T细胞增殖、凋亡，酶联免疫吸附(ELISA)法检测CD...     

趋化因子受体CCR6/CCL20信号转导通路与胃癌淋巴结转移

目的 探讨趋化因子受体CCR6/CCL20信号转导通路在胃癌组织、远处正常黏膜以及转移淋巴结中的表达情况,分析CCR6/CCL20在胃癌淋巴结转移中的作用.方法 应用Westem blot检测40例胃癌患者标本中肿瘤组织、远处正常黏膜以及转移淋巴结中CCR6/CCL20通路成员的表达情况.结果 胃癌组织中CCR6/CCL20表达水平明显高于正常胃黏膜(P＜0.05);32例淋巴结转移癌组织中20例CCR6/CCL20蛋白表达高于原发瘤;CCR6/CCL20表达水平与淋巴结转移呈正相关(P＜0.05).结论 趋化因子受体CCR6/CCL20在原发胃癌及淋巴结转移癌组织中呈高表达.CCR6/CCL20转导通路可能在胃癌淋巴结转移过程中起重要作用.     

肝X受体激动剂GW3965对高糖所致心肌细胞凋亡的影响及作用机制

目的:观察GW3965对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:取对数期H9c2心肌细胞,随机分为对照组(Control组)、高糖诱导组(高糖组)和高糖诱导+激动剂处理组(GW3965组)。GW3965组细胞加入10μmol/L GW3965预处理24h,之后高糖组和GW3965组细胞加入33mmol/L葡萄糖继续诱导培养24h。采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1荧光染料法检测线粒体膜电位,Western blot检测LXRα、ERK和p38 MAPK信号通路相关蛋白的变化。结果:GW3965可以提高H9c2抑制细胞凋亡,提高细胞存活率,改善细胞线粒体膜电位变化,并抑制ERK和p38 MAPK通路活性。结论:GW3965通过介导LXRα和MAPK通路减轻高糖诱导的细胞凋亡和线粒体损伤,对心肌细胞具有保护作用。     

乳腺癌中COL17A1表达的意义及其免疫相关性

目的 基于生物信息学分析乳腺癌中COL17A1表达的意义及其免疫相关性。方法 利用各种数据库分析COL17A1在乳腺癌中的表达情况、差异表达基因、基因本体论（GO）功能注释和京都基因和基因组数据库（KEGG）通路富集分析、与淋巴细胞浸润和趋化因子相关性以及患者生存预后分析。Western blotting和实时定量PCR (qRT-PCR)检测乳腺癌细胞中COL17A1的表达。结果 与正常乳腺组织比较，COL17A1在乳腺癌不同状态（肿瘤分期，年龄，绝经前、中、后和淋巴结转移等）均表达降低（均P <0.05）；并且COL17A1低表达与患者低生存率相关。COL17A1差异表达基因的GO功能分析结果显示主要富集在表皮发育与形成、细胞-细胞间连接和钙离子结合等；KEGG通路富集分析显示主要富集在PI3K-AKT信号通路。Western blotting和qRT-PCR检测结果显示，与MCF-10A细胞比较，不同乳腺癌细胞中COL17A1的表达均显著降低（均P <0.000 1）。乳腺癌组织中COL17A1与CCL14、CCL21、CX3CL1和CCL19等趋化因子和CCR6、C...     

脊髓背根神经节ZXDC介导CCL2对慢性压迫性神经损伤小鼠神经性疼痛的作用

目的 探讨脊髓背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)中转录因子锌指X连锁复制C(zinc finger X-linked duplicated C,ZXDC)介导CCL2/CCR2信号通路对慢性压迫性神经损伤(chronic construction injury model, CCI)诱导神经性疼痛的作用及机制。方法 构建小鼠坐骨神经慢性压迫性损伤模型,免疫荧光染色、Western blot法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测正常情况和CCI造模后DRG中ZXDC及CCL2表达变化;将实验动物分为假手术(Sham)组、CCI+AAV-NC组和CCI+AAV-ZXDC siRNA组;Western blot法和免疫荧光染色检测各组小鼠CCI造模后各时间点DRG中ZXDC、CCL2和CCR2表达,RT-qPCR检测DRG中促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β mRNA表达,机械性缩足反射测试检测神经性疼痛行为改变。结果 ZXDC表达定位在DRG大、中、小神经元。CCI损伤后1~3天 DRG中ZXDC和CCL2 蛋白和mRNA表达显著增高,CCI后7天二者表达显著降低,ZXDC和CCL2mRNA表达量呈正相关(P均<0.05)。CCI后3天,与Sham组比较,CCI+AAV-NC组和CCI+AAV-ZXDC siRNA组ZXDC、CCL2、CCR2蛋白表达、TNF-α和IL-1β mRNA表达显著增高,其中CCI+AAV-ZXDC siRNA组较CCI+AAV-NC组ZXDC、CCL2、CCR2蛋白表达、TNF-α和IL-1β mRNA显著降低(P均<0.05)。与Sham组比较,CCI+AAV-ZXDC siRNA组和CCI+AAV-NC组CCI后各时间点机械缩足阈值均显著降低,其中CCI后7天,CCI+AAV-ZXDC siRNA组机械缩足阈值显著高于CCI+AAV-NC组(P均<0.05)。结论 脊髓背根神经节ZXDC基因敲减通过抑制CCL2/CCR2信号通路介导CCI诱导的神经性疼痛。     

泪膜和眼表CCR5及其配体在干眼症中的表达和意义

目的探讨泪膜和眼表趋化因子受体5(CCR5)及其配体在干眼症中的表达和临床意义。方法选择干眼症患者44例,其中干燥综合征患者(干燥综合征组)17例,非干燥综合征患者(非干燥综合征组)27例。以健康体检者20例作为对照组。对3组分别采用酶联免疫吸附法检测CCL3、CCL4和CCL5表达水平,免疫组织化学法检测结膜上皮CCL3、CCL4、CCL5表达水平和CCR5+细胞密度,流式细胞术检测结膜上皮CCR4+CD4+、CCR5+CD4+和CCR6+CD4+细胞比例。对干燥综合征组CCL3、CCL4、CCL5表达水平与检测指标的相关性进行分析。结果干燥综合征组结膜上皮CCL3、CCL4和CCL5表达水平均显著高于非干燥综合征组,非干燥综合征组、干燥综合征组结膜上皮CCL3、CCL4和CCL5表达水平则均显著高于对照组(均P<0.01)。干燥综合征组CCR5+CD4+、CCR6+CD4+细胞比例明显高于非干燥综合征组,非干燥综合征组、干燥综合征组CCR5+CD4+、CCR6+CD4+细胞比例则均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。干燥综合征组CCL3、CCL4、CCL5表达水平与泪液清除率、结膜杯状细胞密度均呈正相关(r=0.446、0.693、0.656、0.712、0.768和0.780,均P<0.05)。结论CCR5及其配体在干眼症泪膜和眼表中的表达均显著增高,CCL5表达可能与干眼症严重程度有关。     

支气管哮喘患者外周血Th17细胞及相关趋化因子表达水平检测

目的探讨支气管哮喘患者外周血Th17细胞及相关趋化因子表达水平与肺功能的关系。方法选取60例支气管哮喘患者分为急性发作组和缓解组,每组各30例,另选取健康体检者30例为对照组。采用流式细胞术检测三组人群外周血中Th17细胞(CD4+IL-17+)上CCR4、CCR6表达水平,用ELISA法检测患者血清中总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平。结果 1急性发作组哮喘患者外周血Th17细胞CCR4、CCR6表达水平明显高于缓解组哮喘患者(P<0.05),缓解组哮喘患者外周血Th17细胞CCR4、CCR6表达水平高于健康对照组(P<0.05);2急性发作组哮喘患者外周血血清中总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平明显高于缓解组哮喘患者(P<0.05),缓解组哮喘患者外周血血清中总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平高于健康对照组(P<0.05);3CCR4、CCR6表达水平与患者的总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平正相关(P<0.05)。结论支气管哮喘患者外周血中Thl7细胞相关趋化因子CCR4、CCR6表达增高并与Th17细胞造成的炎症损伤有关。     

克罗恩病患者成熟的树突状细胞增加：趋化因子介导的细胞浸润机制的新证据

背景与目的：树突状细胞（DC）活化的T细胞在诱导和维持克罗恩病（CD）时发挥重要作用，但目前对CD患的DC表型、成熟度及DC致病机制的深入研究仍十分缺乏。方法：应用免疫组化法鉴别髓样细胞和类浆细胞等DC亚型；应用实时RT—PCR检测对照组与CD组淋巴细胞趋化因子CCL19、CCL20、CCL21的表达；应用免疫组化染色检测CCL19、CCL20、CCL21及其相应受体CCR6（CCL20）、CCR7（CCL19和CCL21）的表达，并通过双免疫荧光法对其细胞进行定位。结果：CD患的结肠组织以成熟髓样细胞型DC的集落形成增加并伴随T细胞增殖为特征。DC具有趋化因子受体CCR7，以确保与其成熟度同步。DC对CCR7配体CCL19的自身表达增加，同样，网状细胞及淋巴管对CCL21的自身表达亦增加，因此导致成熟的DC被局限在炎症部位。     

CCL23及其受体CCR1与人上皮性卵巢癌细胞顺铂耐药的研究

目的 研究趋化因子配体23(CCL23)及趋化因子受体1(CCR1)与人上皮性卵巢癌细胞顺铂耐药的关系.方法 qRT-PCR法检测人上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞C13K及其敏感细胞OV2008中CCL23及CCR1表达;慢病毒转染使OV2008细胞过表达CCL23,嘌呤霉素筛选阳性克隆,倒置荧光显微镜及qRT-PCR观察和...     

雷公藤内酯醇对鳞癌A431细胞增殖凋亡及其COX-2和survivin表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TP)对皮肤鳞癌A431细胞株增殖与凋亡、环氧合酶-2(COX-2)和生存素(survivin)mRNA表达水平的影响,探讨TP抗皮肤肿瘤的作用机制.方法 以体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞株为研究对象,MTT比色法测定不同浓度TP对A431细胞株增殖活性的影响,光镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测TP作用于A431细胞株后细胞周期的分布以及凋亡峰的出现.RT-PCR法检测TP对A431细胞株COX-2和survivin mRNA表达水平的影响.结果 随着TP剂量的增加及作用时间的延长,TP对A431细胞株增殖活性的抑制作用增强,TP能够诱导A431细胞株凋亡和改变细胞周期的分布,与对照组相比,G0/G1期细胞比例增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05);另外,TP能抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA的表达,不同浓度处理组两两相比,差异具有显著性(P<0.01).结论 TP通过诱导A431细胞凋亡、抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA表达发挥抗皮肤肿瘤的作用.     

Th1/Th2趋化因子及其受体在大疱性类天疱疮皮损中的表达

目的 探讨 Th1 趋化因子 MIG/CXCL9、I-TAC/CX-CL11与其受体 CXCR3,Th2 趋化因子 TARC/CCL17、MDC/CCL22及其受体CCR4在大疱性类天疱疮( BP)患者发病中的作用.方法 应用免疫组化及光密度(OD)技术检测趋化因子CXCL9、CXCL11、CCL17、CCL22 及受体CXCR3 、CCR4在50例BP患者皮损及30例正常皮肤中的表达.结果 50例BP患者皮损中4种趋化因子及其受体阳性表达的OD值均高于正常皮肤.其中, BP 皮损和对照组 Th1 趋化因子CXCL9、CXCL11 及其受体 CXCR3 表达的 OD 值分别为(0.55 ± 0.09) vs (0.26 ± 0.08)、(0.38 ± 0.06) vs (0.18 ± 0.04)和(0.37 ± 0.04) vs (0.22 ± 0.02),Th2 趋化因子CCL17、CCL22及其受体CCR4表达的OD值分别为(0.42 ± 0.10) vs (0.25 ± 0.12)、(0.35 ± 0.04) vs (0.21 ± 0.03)和(0.42 ± 0.05) vs (0.24 ± 0.07),且表达差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 Th1趋化因子CXCL9、CXCL11和Th2趋化因子CCL17、CCL22及其受体CXCR 3、CCR4可能与BP的发病相关,对探讨BP发病机制有一定的价值.     

青葙皂苷对过氧化氢诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究青葙皂苷（Celosins,CES）对H2O2诱导的H9c2凋亡的保护作用。方法 噻唑蓝检测各组细胞活力以确定CES的最佳作用浓度,以及对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。细胞分组为：空白对照组、H2O2处理组、低剂量青葙皂苷+H2O2处理组、中剂量青葙皂苷+H2O2处理组、高剂量青葙皂苷+H2O2处理组。利用流式细胞术检测心肌细胞凋亡比例、ROS的产生情况。蛋白印记法（WB）检测凋亡信号通路相关蛋白的表达和Nrf2 /ARE 信号通路相关蛋白表达。结果 （1）青葙皂苷可升高H2O2处理的H9c2细胞活力,差异具有统计学意义(P＜0.05)。（2）青葙皂苷可降低H2O2处理的H9c2细胞凋亡率(P＜0.05)。降低ROS的产生(P＜0.05)。（3）青葙皂苷可降低蛋白细胞质细胞色素C、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3、Bax的表达(P＜0.05),升高蛋白Bcl-2、Nrf2 核转位与HO-1的表达(P＜0.05)。结论 CES通过激活Nrf2 /ARE信号通路抑制H2O2诱导的H9c2细胞损伤。     

靶向CCR7基因shRNA表达载体的构建及鉴定

目的设计并构建靶向CCR7基因shRNA真核表达质粒,并检测其干扰效果。方法以CCR7为靶基因设计具有短发夹结构的模板寡核苷酸,退火形成互补双链结构,再克隆至pGC-silencer-CRM30载体,构建的3条重组短发夹shRNA表达载体分别命名为pGC-silencer-CRM30-CCR7A、-CCR7B和-CCR7C。采用测序法鉴定寡核苷酸序列。将构建好的真核表达载体转染人结肠癌SW480细胞,荧光显微镜观察转染效果,RT-PCR法检测CCR7干扰效率。结果重组质粒测序结果与Genebank中的CCR7 cDNA序列相符,转染SW480细胞后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白,RT-PCR结果表明,pGC-silencer-CRM30-CCR7C干扰效果最强。结论靶向CCR7基因shRNA表达载体构建无误,为进一步探讨趋化因子受体CCR7在胃肠道恶性肿瘤生物学行为中的作用奠定了基础。     

人正常肝细胞LO2感染HBV后表达CCL22

目的探讨感染HBV的人正常肝细胞LO2表达趋化因子CCL22的机制。方法首先用HBV病毒感染LO2细胞,通过ELISA检测细胞IL-32表达情况;之后用外源人类重组IL-32蛋白刺激人急性单核细胞白血病细胞THP-1或用HBV感染共培养的LO2和THP-1细胞,通过ELISA检测TNF-α表达情况;其次用外源人类重组TNF-α蛋白刺激LO2细胞或用HBV感染共培养的LO2和THP-1细胞,使用特异性抗体通过Western blot检测CREB蛋白磷酸化情况,并通过ELISA检测趋化因子CCL22的表达情况。结果 HBV诱导LO2细胞表达IL-32;病毒诱导的IL-32诱导THP-1细胞分泌TNF-α(P0.05);TNF-α诱导LO2细胞活化CREB通路(P0.05);CREB通路活化后促使LO2表达趋化因子CCL22(P0.05)。结论 HBV感染与THP-1共培养的LO2细胞可表达CCL22,其机制可能是HBV诱导LO2细胞表达IL-32,之后IL-32诱导THP-1细胞分泌TNF-α,进而TNF-α促进HBV感染的LO2细胞表达趋化因子CCL22。