circ＿0016788靶向调控miR-1200抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨circ＿0016788影响肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法 选取9例肝癌患者的癌组织及癌旁组织，RT-qPCR检测组织中circ＿0016788和miR-1200表达；将肝癌细胞MHCC97分为si-NC组、si-circ＿0016788组、si-circ＿0016788+anti-miR-NC组、si-circ＿0016788+anti-miR-1200组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性；Western印迹检测增殖、凋亡、迁移和侵袭蛋白表达；Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术检测细胞凋亡；双荧光素酶报告基因实验验证circ＿0016788和miR-1200的靶向关系。结果 circ＿0016788在肝癌组织中的表达水平高于显著癌旁组织(P<0.05),miR-1200表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。抑制circ＿0016788表达后，肝癌MHCC97细胞活性、细胞迁移侵袭能力及CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及p21、Bax表达水平显著...     

NEDD9表达下调对结肠癌生物学行为的影响

背景:NEDD9在细胞迁移、趋化、凋亡、细胞周期中发挥重要作用,NEDD9 siRNA可有效降低基因表达,并从不同水平上促进细胞凋亡、阻断肿瘤细胞迁移和侵袭。目的:探讨NEDD9在结肠癌组织中的表达以及siRNA干扰NEDD9表达对结肠癌Caco-2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:收集2017年1月—2018年1月漯河市郾城区人民医院确诊的结肠癌组织和相应癌旁组织。常规培养结肠癌Caco-2细胞,采用LipofectamineTM2000转染细胞,并将细胞分为对照组、阴性对照组和siRNA干扰组。采用qRT-PCR法检测结肠癌组织和细胞中NEDD9 mRNA表达,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测NEDD9、MMP-9、Bcl-2、Bax、TIMP1蛋白表达。结果:结肠癌组织NEDD9 mRNA表达显著高于癌旁组织(P 0. 05)。与对照组相比,siRNA干扰组NEDD9 mRNA表达明显降低(P 0. 05),细胞增殖、迁移和侵袭能力受到明显抑制(P 0. 05),细胞凋亡增强(P 0. 05),NEDD9、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P 0. 05),Bax、TIMP1蛋白表达显著增加(P 0. 05)。结论:NEDD9基因可通过凋亡相关基因Bcl-2和Bax以及侵袭相关基因MMP-9和TIMP1来调控结肠癌Caco-2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。     

miR-503在结直肠癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨microRNA-503(miR-503)在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测54例结直肠癌组织及4种结直肠癌细胞(SW480、Lovo、LS174T和HT-29)中的miR-503水平,分析结直肠癌组织miR-503表达与常见临床病理参数的关系,采用脂质体转染miR-503模拟物(mimics)至miR-503水平最低的细胞,采用MTT法、流式细胞仪及Transwell法检测过表达miR-503对细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭的影响。结果 54例结直肠癌组织的miR-503相对表达量为(0.257±0.011),低于癌旁组织(P0.05),且miR-503水平与TNM分期、分化情况、肿瘤大小和术前癌胚抗原均有关(P0.05);与人正常结肠细胞系CCD-18Co相比,4种不同恶性程度结直肠癌细胞SW480、Lovo、LS174T和HT-29的miR-503相对表达量依次为(0.342±0.072)、(0.161±0.054)、(0.260±0.041)和(0.415±0.086),差异均有统计学意义(P0.05);与对照组相比,转染miR-503 mimics后的细胞增殖抑制率和凋亡率均升高,G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例均降低,穿膜细胞数减少(P0.05)。结论 miR-503在结直肠癌组织和细胞中低表达,且与结直肠癌的临床病理参数有关,上调miR-503水平可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭并诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

miR-509-3p靶向BCL2基因调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-509-3p(miR-509-3p)调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制。方法 qRT-PCR检测miR-509-3p、B淋巴细胞瘤(BCL)2在乳腺癌组织及不同乳腺癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-509-3p与BCL2之间的相互作用;噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测miR-509-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡能力的变化情况;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-509-3p对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭行为的变化情况;Western印迹检测miR-509-3p对BCL2、细胞周期蛋白(CyclinD)1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的调控情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-509-3p的表达水平显著下调(P<0.05),与其他乳腺癌细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231细胞中miR-509-3p表达最低,而BCL2的表达水平相反;上调miR-509-3p表达MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),而细胞凋亡水平明显升高(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平明显降低(P<0.05),而p21表达水平明显升高(P<0.05);miR-509-3p可靶向调控BCL2表达;上调BCL2表达可逆转上调miR-509-3p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。结论 miR-509-3p能够靶向抑制BCL2而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。     

miR-133b、Bcl-w在老年食管鳞癌中表达及相关机制

目的 探讨microRNA(miR)-133b、B细胞淋巴瘤(Bcl)-w在老年食管鳞状细胞癌中的表达及对食管鳞状细胞癌细胞的影响。方法 使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例老年患者食管鳞状细胞癌组织及其对应癌旁组织中miR-133b及Bcl-w mRNA表达。将miR-133b mimics及阴性对照转染至食管鳞状细胞癌ECA109细胞株，检测转染效率。检测转染后ECA109细胞的增殖和凋亡情况，使用TargetScan和miRDB软件预测miR-133b的靶基因，并通过双荧光素酶报告实验方法验证，Western印迹检测靶基因Bcl-w蛋白表达。结果 食管鳞状细胞癌中miR-133b mRNA表达量明显低于癌旁组织(P<0.001),而食管鳞状细胞癌中Bcl-w蛋白表达量明显高于癌旁组织(P<0.001),miR-133b与Bcl-w表达呈负相关(r=-0.792,P<0.01)。miR-133b mimics转染能明显上调ECA109细胞中的miR-133b水平，并明显降低其增殖能力，明显促进其凋亡(P<0.001)。miR-133b与B...     

miR-133靶向JAK2抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-133对胃癌(gastric cancer, GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法运用qRT-PCR法检测组织和细胞中miR-133、JAK2的mR NA表达;将miR-133组(转染miR-133 mimics)、miR-NC组(未转染细胞)、miR-133 inhibitors组(转染miR-133 inhibitors)、inhibitors-NC组(转染inhibitors)、JAK2WT(载体psiCHECK2-JAK2-32 MUT(载体pUT和miR-133共转染)、miUTRWT和miR-133共转染)、JAKsiCHECK2-JAK2-3UTR MR-133+JAK2组(miR-133 mimics和JAK2共转染)、miR-133+Vector组(miR-133 mimics和pc-DNA 3。1共转染)均用脂质体法转染至AGS、MGC-803细胞;用Western blot检测细胞中JAK2的蛋白表达; MTT法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光素酶活性。结果与人癌旁组织、人正常胃黏膜细胞GES-1相比, GC组织、GC细胞AGS、MGC-803中miR-133均低表达,JAK2均高表达;且过表达miR-133、沉默JAK2均可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭; JAK2为miR-133的靶点,且回补JAK2可逆转miR-133对GC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-133可抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭,其可能与靶向JAK2有关,将可为GC的临床诊断治疗提供新靶点。     

CLCA4对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化的影响及机制

目的 探讨CLCA4对结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化的影响及可能机制。方法 收集100例患者的结直肠癌组织及癌旁正常组织。培养SW620细胞，根据转染质粒不同分为Vector组(转染pcDNA3.1)、CLCA4组(转染pcDNA3.1-CLCA4)、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-CLCA4组(转染sh-CLCA4)及Control组(无处理)。sh-NC组及sh-CLCA4组细胞用GSK2126458分处理并定义为sh-NC+GSK2126458组、sh-CLCA4+GSK2126458组。分析CLCA4与结直肠癌临床病理特征、预后的关系，CCK-8检测细胞增殖能力，Tanswell实验检测细胞侵袭能力，划痕实验检测细胞迁移能力，qRT-PCR检测细胞、组织中CLCA4 mRNA表达水平，Western blotting检测细胞或组织中CLCA4、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平。结果 结直肠癌组织CLCA4 mRNA、蛋白表达水平低于癌旁正常组织(P&l...     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

CTHRC1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的观察胶原三股螺旋重复蛋白(CTHRC)1对结直肠癌HT29细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测结直肠癌组织中CTHRC1的表达情况。采用电穿孔转染法,将pc DNA3.1-CTHRC1和CTHRC1 si RNA转染HT29细胞中,通过克隆形成实验检测CTHRC1对HT29细胞增殖的影响;通过伤口愈合实验和Boyden小室检测CTHRC1对HT29细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和免疫组织化学检测显示,CTHRC1在结直肠癌组织中的表达显著高于正常对照组织。增殖、迁移和侵袭实验结果显示,对照组、转染CTHRC1和转染CTHRC1 si RNA的结直肠癌HT29细胞克隆形成数分别为(147.34±15.86)、(234.17±27.86)和(66.03±8.95);伤口宽度百分比分别为(1.00±0.00)、(0.37±0.12)和(1.48±0.35);发生侵袭的细胞数分别为(201.24±33.54)、(415.36±45.63)和(96.13±15.46);转染CTHRC1可显著促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;而转染si-CTHRC1可显著抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 CTHRC1可明显增加HT29细胞增殖、迁移和侵袭能力,这可能是CTHRC1参与结直肠癌发生发展的机制。     

干细胞标志物CD133、PSCA和Oct-4在胃癌组织中表达及其临床意义

目的探讨胃癌组织中肿瘤干细胞标志物CD133、前列腺干细胞抗原(PSCA)和Oct-4的表达情况及其在胃癌中的诊断意义。方法胃癌根治手术后病例60例,留取胃癌、癌旁组织及正常组织标本,免疫组化法检测组织中CD133、PSCA和Oct-4的表达情况。结果与正常胃组织相比,癌旁组织组中CD133和Oct-4蛋白的表达水平略有提高(P<0.05),胃癌组织中CD133和Oct-4蛋白的表达水平显著增高(P<0.01);正常胃癌组织中PSCA蛋白有明显表达,癌旁组织中仅有少量表达,但是在胃癌组织中没有PSCA蛋白表达。结论肿瘤干细胞标志物CD133、PSCA和Oct-4联合分析可以作为胃癌的临床诊断的分子标记。     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响北大核心CSCD

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P<0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

lncRNA LINC02418通过调控miR-940表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

背景lnc RNALINC02418在非小细胞肺癌、肺腺癌和结直肠癌等肿瘤中表达上调,促进肿瘤的发展进程.但是, LINC02418对肝癌发生发展的影响和机制还未知.LncBase Predictedv.2靶基因预测显示,LINC02418可能靶向结合miR-940.本研究假设LINC02418可靶向调控miR-940影响肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡,进而影响肝癌发展进程.目的探讨lncRNA LINC02418对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制.方法RT-qPCR检测肝癌组织和对应癌旁组织中LINC02418和miR-940表达水平.分别转染LINC02418小干扰R N A、miR-940模拟物至肝癌细胞HCCL M3,RTq PCR检测转染效果,CCK-8、Transwell、流式细胞术和蛋白印迹法分别检测下调LINC02418表达或上调miR-940表达对HCCLM3细胞活性、迁移和侵袭、凋亡及Cyclin D1、p21、MMP-2、MMP-9、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-940与LINC02418调控关系.结果与癌旁组织比较,肝癌组织中LINC02418表达水平升高(P0.05), miR-940表达水平降低(P0.05).下调LINC02418或上调miR-940表达降低了HCCLM3细胞活性、迁移和侵袭数及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和Bcl-2的蛋白表达(P 0.05),而提高了细胞凋亡率、p21和Bax的蛋白表达(P0.05). LINC02418靶向负调控miR-940表达.下调miR-940表达逆转了下调LINC02418表达对HCCLM3细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.结论LINC02418在肝癌组织中表达升高,下调其表达可能通过靶向上调miR-940抑制肝癌细胞的恶性生物学行为,可作为肝癌治疗的分子靶点.     

AZGP1在老年结直肠癌患者中的预后价值及其下调后对结直肠癌细胞的影响

目的探讨锌-α2-糖蛋白1(AZGP1)在老年结直肠癌组织中的表达和临床意义,及其对结直肠癌细胞恶性增殖能力的影响和可能的机制。方法选取行手术切除的结直肠癌存档蜡块和癌旁正常组织(距病变部位5 cm处,且证实为无癌浸润)石蜡标本各70例,应用免疫组织化学法检测结直肠癌组织及癌旁组织中AZGP1蛋白的表达,分析蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征间的关系,并进行生存分析。然后通过慢病毒感染的方式成功敲低HCT116、SW480细胞系中AZGP1的表达水平,采用MTT实验检测AZGP1敲低后细胞的增殖情况;采用克隆形成实验检测AZGP1敲低后细胞的克隆形成能力;采用流式细胞技术检测敲低AZGP1后细胞周期的改变;Western blotting检测细胞G_1/S期调控分子cyclin D1、促凋亡分子active-caspase-3及PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)表达情况。结果 AZGP1蛋白在结直肠癌组织中的表达较癌旁正常组织明显上调,蛋白表达与结直肠癌患者临床分期、肿瘤浸润程度、肿瘤大小、肝脏转移显著相关,而与患者性别、淋巴结转移、肿瘤分化程度无关。生存分析结果提示AZGP1高表达组的患者生存率明显低于低表达组。RT-PCR实验显示:感染慢病毒后HCT116、SW480细胞中AZGP1表达水平显著下降。MTT实验显示:敲低AZGP1可降低结直肠癌细胞的增殖能力,差异有统计学意义。细胞克隆实验显示:敲低AZGP1可降低结直肠癌细胞的克隆形成能力。流式细胞术检测结果显示:敲低AZGP1后G_1期细胞数增加,S期细胞数减少,差异有统计学意义。Western blotting实验显示:敲低AZGP1可降低cyclin D1表达,增加active-caspase-3表达;同时发现,敲低AZGP1后,PI3K和p-AKT蛋白表达下降。结论 AZGP1蛋白在结直肠癌组织中高表达,并可能与结直肠癌的转移及不良预后相关。敲低AZGP1可阻断结直肠癌细胞G_1/S期,抑制结直肠癌细胞的恶性增殖,促进凋亡;并且PI3K/AKT信号通路可能参与其中。     

miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTPBP2基因靶向调控的研究

［摘要］　目的　探讨miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTP结合蛋白2（GTPBP2）的调控作用。方法　选择2022年1月至12月在新乡医学院附属商丘市第一人民医院行结直肠癌根治性切除术的44例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织。选择人正常结直肠黏膜细胞FHC、结直肠癌细胞HCT116进行基础实验。采用荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测癌组织、癌旁组织及细胞的miR-145-5p和GTPBP2 mRNA的表达水平。采用Western blot法检测细胞GTPBP2蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-145-5p与GTPBP2基因的靶向关系。分析结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与患者临床病理特征的关联性。结果　与癌旁组织相比,癌组织中miR-145-5p表达水平显著降低（t=8.189,P<0.001）,GTPBP2 mRNA表达水平显著升高（t=11.230,P<0.001）。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与GTPBP2 mRNA表达水平呈负相关（r=-0.503,P<0.001）。miR-145-5p表达水平与结直肠癌远处转移、淋巴结转移以及TNM分期存在显著关联（P<0.05）,但与患者性别、年龄、病灶部位、临床T分期、肿瘤直径的关联性不显著（P>0.05）。与FHC细胞相比,HCT116细胞miR-145-5p表达水平显著降低（P<0.05）,GTPBP2 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。过表达miR-145-5p可下调HCT116细胞GTPBP2 mRNA和蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验结果提示miR-145-5p和GTPBP2基因之间存在靶向关系。结论　miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达,并与远处转移、淋巴结转移和TNM分期存在显著关联,其可能通过靶向调控GTPBP2表达而影响结直肠癌的发生、发展。     

骨形态发生蛋白-2调控MAPK信号通路在肝癌干细胞特征维持中的机制研究

目的:探究骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在肝癌干细胞特征维持中的作用及其相关机制。方法:采用qRT-PCR检测肝癌患者癌组织及其癌旁组织BMP-2和CD133的表达水平。通过慢病毒将PLK-NC和PLK-BMP-2转染至HepG2细胞,设空白对照组(未转染)、PLK-NC组(转染PLK-NC)、PLK-BMP-2组(转染PLK-BMP-2)与PLK-BMP-2+PNU-120596组(转染PLK-BMP-2后给予5μmol/L PNU-120596孵育24 h)。采用qRT-PCR检测各组细胞BMP-2、EpCAM、CD133、CD24基因表达水平,Western blot检测BMP-2、p-MAPK蛋白表达水平。通过有限稀释法测定各组干细胞的成球频率差异。结果:与癌旁组织比较,癌组织BMP-2和CD133表达水平升高。与PLK-NC组比较,PLK-BMP-2组BMP-2、EpCAM、CD133、CD24基因表达水平升高,BMP-2、p-MAPK蛋白表达水平升高,细胞成球频率增加(均P<0.05)。与PLK-BMP-2组比较,PLK-BMP-2+PNU-120596组BMP-2...     

转录因子FOXO1和干细胞标志物CD133与神经母细胞瘤临床病理因素相关性

目的探究叉头框转录因子O亚族(FOXO)1与干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤(NB)中的表达及其相关性分析。方法使用免疫组织化学方法检测53例NB组织(病例组)和27例癌旁正常组织(对照组)中FOXO1和CD133蛋白表达情况;应用Western印迹检测3例NB组织及3例癌旁组织FOXO1和CD133蛋白表达情况。结果 FOXO1在病例组中阳性表达率显著低于对照组;CD133在病例组中阳性表达率显著高于对照组;FOXO1、CD133与临床分期、组织类型和病理分型存在相关性(P<0.05);FOXO1在NB组织显著低于癌旁组织,而CD133在NB组织显著高于癌旁组织;FOXO1和CD133在蛋白表达水平上有明显相关性(P<0.05)。结论 FOXO1可能通过负性调节CD133表达来调节NB干细胞特性,是NB发生发展的重要机制。     

QHF复方对人肝癌Huh7细胞生长凋亡、侵袭能力的作用及其对肿瘤干细胞表面标志物的影响

目的研究QHF复方对人肝癌Huh7细胞生长凋亡、侵袭能力的作用,并初步研究其对肿瘤干细胞表面标志物的影响。方法体外培养人肝癌Huh7细胞,MTT法检测QHF复方对细胞生长、增殖的影响,流式细胞仪检测QHF复方对Huh7细胞周期及凋亡的影响,Transwell实验检测QHF复方对Huh7细胞侵袭能力的影响,并采用流式细胞仪检测肿瘤干细胞表面标志物CD133、CD44的表达情况。结果 QHF复方能抑制Huh7细胞增殖,且这种抑制作用在一定程度上具有剂量和时间依赖性; QHF复方能诱导细胞凋亡,使其生长周期阻滞在S期; QHF复方能够降低Huh7细胞的侵袭能力; QHF复方能够下调肿瘤干细胞表面标志物CD133、CD44的表达。结论中药QHF复方能够抑制Huh7细胞的生长、侵袭,这种抑制作用可能与肿瘤干细胞表面标志物CD133、CD44表达的下调有关。     

结直肠癌组织COX-2 mRNA表达的临床病理意义

目的检测环氧合酶-2(COX-2)mRNA在结直肠癌、癌旁及正常组织中的表达情况.探讨其表达与临床病理特征的关系.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测24例结直肠癌、癌旁和正常组织中COX-2的mRNA表达.结果 24例结直肠癌中,COX-2 mRNA表达阳性者17例,癌旁和正常组织阳性者分别为9例和3例,癌组织中的表达率明显高于癌旁和正常组织(P＜0.01);COX-2 mRNA的阳性表达与结直肠癌的淋巴结转移、远处转移、Duke′s分期呈正相关.结论结直肠癌组织中COX-2 mRNA表达水平高于癌旁和正常组织,其表达与结直肠癌侵袭转移密切相关.因此COX-2mRNA可作为预测结直肠癌细胞转移潜能的敏感指标.     

miR-19-3p靶向TC-1对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的研究miR-19-3p对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用机制。方法 qRT-PCR法检测口腔鳞癌组织和细胞中miR-19-3p的表达;将miR-19-3p组(转染miR-19-3p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-TC-1组(转染pcDNA-TC-1)、miR-19-3p+pcDNA组(共转染miR-19-3p mimics和pcDNA)、miR-19-3p+pcDNA-TC-1组(共转染miR-19-3p mimics和pcDNA-TC-1)均用脂质体法转染至CAL27细胞;Western印迹检测细胞中TC-1、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、P21、Bax、Bcl-2、E-钙黏蛋白(cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达;MTT、流式细胞术、Transwell检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测miR-19-3p与TC-1的结合力。结果与癌旁组相比,口腔鳞癌组miR-19-3p表达下调;上调miR-19-3p可抑制CAL27细胞的增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,下调Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2,上调P21、Bax、E-cadherin;miR-19-3p下调野生型TC-1细胞荧光素酶活性;上调TC-1部分逆转miR-19-3p的癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡调控作用。结论 miR-19-3p可抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,其机制之一为靶向TC-1。     

LncRNA SOX21-AS1靶向调控miR-202-5p影响结直肠癌细胞生物学行为的实验研究

背景:长链非编码RNA(lncRNA)可通过调控miRNA的表达来参与肿瘤发生、发展过程,但lncRNA在结直肠癌发展和转移中的分子机制尚未阐明。目的:探讨lncRNA SOX21-AS1通过调控微小RNA-202-5p(miR-202-5p)的表达影响结直肠癌细胞生物学过程的分子机制。方法:以SOX21-AS1小分子干扰RNA(si-SOX21-AS1)、miR-202-5p模拟物及其抑制剂转染结直肠癌HCT116、SW480细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株SOX21-AS1、miR-202-5p mRNA表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况,双萤光素酶报告实验检测SOX21-AS1与miR-202-5p的靶向调控关系,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、MMP-2、cleaved caspase-3蛋白表达。结果:结直肠癌细胞中SOX21-AS1 mRNA表达显著高于人正常结肠黏膜上皮细胞(P 0. 05),miR-202-5p mRNA表达显著降低(P 0. 05)。沉默SOX21-AS1或上调miR-202-5p表达可显著抑制HCT116、SW480细胞增殖、迁移和侵袭,细胞凋亡率显著增加(P 0. 05),并可抑制cyclin D1、MMP-2蛋白表达(P 0. 05),促进cleaved caspase-3蛋白表达(P 0. 05)。SOX21-AS1可靶向结合miR-202-5p,并可负向调控miR-202-5p的表达和活性;抑制miR-202-5p表达可逆转沉默SOX21-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:沉默SOX21-AS1表达可通过上调miR-202-5p的表达从而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,并可诱导细胞凋亡。