慢性牙周炎牙龈组织中细胞凋亡的研究

目的：观察慢性牙周炎牙龈组织中的凋亡细胞,并探讨其发生凋亡的机制。方法：采用透射电镜法观察牙龈组织凋亡细胞的超微结构、利用免疫组化方法检测20例慢性牙周炎患者及20例牙周健康者牙龈组织中凋亡蛋白Casepase-9、Cyt-C的表达并进行统计学分析。结果：慢性牙周炎患者牙龈组织中可观察到凋亡细胞,Case-pase-9、Cyt-C的阳性表达显著高于牙周健康组（P〈0.05）。结论：慢性牙周炎较牙周健康者龈组织发生明显的细胞凋亡现象,并依赖于线粒体途径。     

慢性牙周炎牙龈组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达

目的:研究慢性牙周炎牙龈组织中细胞凋亡的发生情况和Caspase-3蛋白的表达,探讨其在慢性牙周炎病变发生中的意义。方法:应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL法)、免疫组织化学方法检测21例慢性牙周炎牙龈组织和21例健康牙龈组织中的细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)及Caspase-3蛋白的表达。结果:慢性牙周炎组牙龈组织中细胞凋亡指数明显高于正常对照组(P<0.05)。与正常组相比,慢性牙周炎组牙龈组织中细胞caspase-3表达明显增强,两组间有显著性差异(P<0.05)。结论:慢性牙周炎病人牙龈组织细胞发生凋亡,且通过激活细胞凋亡信号传导途径中的Caspase-3而导致慢性牙周炎发生。     

糖尿病型牙周炎牙龈组织中炎症因子表达及与细胞凋亡关系

目的:探讨糖尿病型牙周炎(diabetes associated periodontitis,DAP)牙龈组织中凋亡细胞发生及与IL-1β和TNFα表达的关系.方法:纳入DAP患者和健康龈(H)受试者各20例,用HE染色和Tunnel法观察牙龈细胞凋亡,透射电镜观察凋亡细胞超微结构;用免疫组化(IHG)检测牙龈组织炎症因子IL-1β和TNFα表达.结果:DAP组牙龈上皮棘细胞层和基底细胞层见明显细胞凋亡,固有层凋亡细胞较少;DAP组牙龈上皮棘细胞和基底细胞凋亡百分率高于H组(P＜0.01);IHC染色发现DAP组IL-1β和TNFα表达明显高于H组,主要阳性表达细胞为巨噬细胞、浆细胞和淋巴细胞.结论:DAP患者牙龈组织中IL-1β和TNFα在细胞凋亡中起重要作用.     

老年人牙周炎牙龈组织中凋亡细胞免疫组织化学研究

目的 :观察老年人牙周炎牙龈组织中凋亡细胞分布特点。方法 :采用特异性凋亡细胞免疫组织化学染色法 (TUNEL染色 ) ,对 15例老年人牙周炎患者 ,10例慢性成人牙周炎患者 ,10例青少年牙周炎患者和 11例健康老年人牙龈组织中阳性凋亡细胞的分布及计数进行比较研究。结果 :老年人牙周炎组阳性凋亡细胞总例数明显高于健康老年人组和慢性成人牙周炎组 (P <0 .0 5 ) ;慢性成人牙周炎组和青少年牙周炎组阳性凋亡细胞总例数也明显高于健康老年人组 (P <0 .0 5 ) ;老年人牙周炎组阳性凋亡细胞计数明显高于慢性成人牙周炎组、青少年牙周炎组和健康老年人组 (P <0 .0 5 )。结论 :感染性炎症因素和衰老因素均能促进老年人牙周炎时牙龈组织细胞凋亡 ,这两个因素的双重协同作用造成了老年人牙周炎患者局部牙龈组织对刺激做出过强的细胞凋亡反应。     

老年牙周炎牙龈组织诱导型一氧化氮合酶分布研究

目的 :观察慢性老年牙周炎患者牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)分布。方法 :采用免疫组织化学方法对 10例慢性老年牙周炎患者、10例慢性成人牙周炎患者、10例青少年牙周炎患者和 10例健康老年人牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶分布进行了检测并比较研究。结果 :(1)牙周炎时牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶主要在鳞状上皮细胞胞浆核周区颗粒状阳性表达 ,毛细血管壁内皮细胞、老化的胶原纤维及上皮下基底膜共同形成了一种乳头状轮廓样阳性表达形态 ,结缔组织和肉芽组织中各类炎症细胞也显阳性表达 ;(2 )慢性老年牙周炎组血管壁内皮细胞、结缔组织内炎症细胞、上皮乳头阳性表达例数明显低于青少年牙周炎组和慢性成人牙周炎组 (P <0 .0 5 )。血管壁内皮细胞和胶原纤维阳性表达例数低于健康老年人组 (P <0 .0 5 )。结论 :慢性老年牙周炎患者牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶的表达明显降低 ,造成了局部一氧化氮(NO)合成减少 ,引起了局部牙龈组织免疫功能降低和免疫调节功能紊乱     

老年牙周炎牙龈组织Fas/Apo-1(CD95)抗原表达的免疫组织化学研究

目的 :观察慢性老年牙周炎牙龈组织中Fas/Apo - 1(CD95 )抗原表达和分布情况。方法 :采用免疫组织化学染色方法对 10例慢性老年牙周炎患者、10例慢性成人牙周炎患者、10例青少年牙周炎患者和 10例健康老年人牙龈组织中Fas/Apo - 1(CD95 )抗原阳性表达和分布情况进行了观察和比较。结果 :在慢性老年牙周炎组完整的牙龈鳞状上皮间桥、核周胞浆Fas/Apo - 1(CD95 )抗原阳性表达和结缔组织中淋巴细胞Fas/Apo - 1(CD95 )抗原阳性表达为 4组中最强 ;健康老年人组上皮角化层Fas/Apo - 1(CD95 )抗原阳性表达为 4组中最强 ;慢性成人牙周炎组和青少年牙周炎组结缔组织中淋巴细胞和吞噬细胞Fas/Apo - 1(CD95 )抗原阳性表达强于健康老年人组 ;慢性老年牙周炎组上皮细胞和上皮细胞的细胞间桥Fas/Apo - 1(CD95 )抗原阳性表达例数明显高于慢性成人牙周炎组和青少年牙周炎组 (P <0 .0 5 ) ;健康老年人组结缔组织中淋巴细胞和吞噬细胞Fas/Apo - 1(CD95 )抗原阳性表达例数明显低于其它 3组 (P <0 .0 5 )。结论 :由于感染性炎症和衰老的影响 ,①牙周炎患者和健康老年人牙龈组织中鳞状上皮凋亡细胞发生部位与身体其他器官鳞状上皮细胞凋亡发生部位不同 ;②在慢性老年牙周炎患者牙龈组织中上皮细胞和炎性细胞对细胞凋亡易感性     

慢性牙周炎患者和健康人牙龈成纤维细胞细胞活性和凋亡的比较研究

目的:探索慢性牙周炎患者和健康人牙龈成纤维细胞(HGFs)细胞活性和凋亡之间的差异性,为阐明牙周炎的易感性提供实验依据。方法:收集慢性牙周炎患者和健康人的健康牙龈,进行体外培养获得HGFs,采用MTT法比较两组细胞的细胞活性,实时荧光定量PCR检测抗凋亡基因Bcl-2和促凋亡基因Bax在两种细胞中的表达水平及其比值。结果:与健康组相比,慢性牙周炎组HGFs细胞活性在培养4 d后明显下降(P＜0.05),而且在体外培养2 d、4 d细胞中Bcl-2/Bax的比值下降(P＜0.05),具有时间依赖性。结论:慢性牙周炎患者HGFs细胞活性下降,细胞凋亡增强,从细胞水平说明其存在牙周炎易感性。     

基于生物信息学分析鉴定人牙周炎牙龈组织中的关键生物标志物及相关免疫细胞浸润

目的:通过生物信息学分析鉴定牙周炎牙龈组织中的关键生物标志物和相关免疫细胞浸润,探索牙周炎的发病机制。方法:从GEO数据库下载GSE10334、GSE16134和GSE23586三个数据集,通过“limma”程序包筛选差异基因,利用STRING和Cytoscape构建蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络来获取毂基因,利用CIBERSORT算法分析牙周炎和健康对照之间牙龈组织的免疫细胞浸润。结果:共筛选出129个差异表达基因,构建PPI网络后获取10个毂基因,其显著富集于趋化因子和细胞因子活性等多种细胞生理活动,和细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路、趋化因子信号通路、IL-17信号通路。与健康对照组相比,牙周炎牙龈组织中初始B细胞、浆细胞、初始CD4+T细胞、活化的记忆CD4+T细胞、单核细胞,M1巨噬细胞和中性粒细胞的比例更高(P<0.05)。结论:毂基因的功能分析及探究牙周炎和健康牙龈中所浸润的免疫细胞之间的差异可以为研究牙周炎的发生发展机制提供新的见解和思路。     

慢性牙周炎患者牙龈组织内诱导型一氧化氮合酶表达的研究

目的:研究牙周健康者和慢性牙周炎患者牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶的表达强度,探讨一氧化氮在牙周病发病过程中的作用.方法:选择牙周健康组、慢性牙周炎活动期组,慢性牙周炎静止期组各20例,采取免疫组织化学的方法染色,光镜下观察牙龈组织内诱导型一氧化氮合酶的表达强度.结果:慢性牙周炎时牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶主要在鳞状上皮和间质组织的细胞胞浆中阳性表达,正常组表达强度弱于慢性牙周炎静止期组和活动期组,慢性牙周炎静止期组表达强度弱于慢性牙周炎活动期组.结论:一氧化氮参与了慢性牙周炎的发生和发展过程,牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶的表达强度与慢性牙周炎的炎症程度密切相关.     

釉基质衍生物对牙周炎症组织中凋亡发生的影响

目的：探讨釉基质衍生物（EMD）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg—LPS）龈沟内注射形成的牙周炎症组织中细胞凋亡的影响。方法：隔日向SpragueDawley大鼠双侧上颌第一及第二磨牙间腭侧龈沟内注射Pg—LPS2wk建立牙周炎模型;牙周炎形成后,龈沟内注射EMD或磷酸盐缓冲液;截取上颌骨标本,行HE染色观察牙周组织破坏情况,TUNEL染色观察牙周组织中细胞凋亡,免疫组织化学染色观察凋亡酶caspase--3和波形蛋白的表达。结果：在大鼠龈沟内注射Pg—LPS后,牙周组织形成明显的炎症和附着丧失;TUNEL染色显示EMD可以抑制Pg—LPS所致牙周组织中的细胞凋亡;免疫组织化学染色显示EMD降低凋亡酶caspase--3的表达,并且促进牙周组织中波形蛋白的表达。结论：EMD可以抑制Pg—LPS所致牙周组织中的细胞凋亡,从而促进牙周组织再生。     

年龄对NK细胞在牙周炎龈组织中分布影响的免疫组化研究

目的：观察老年牙周炎牙龈组织中自然杀伤（NK）细胞的分布。方法：采用免疫组织化学方法对15例老年牙周炎患者10例慢性成人牙周炎患者牙龈组织中NK细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞的分布及阳性计数进行比较研究。结果：慢性成人牙周炎组NK阳性细胞计数明显高于老年牙周炎组（P＜0.01)，慢性成人牙周炎组NK阳性细胞表达率也高于老年牙周炎组。结论：由于年龄增加的影响，老年牙周炎患者局部牙龈组织中出向免疫调节功能的紊乱，NK细胞功能降低。     

凋亡相关基因在牙龈瘤中的特征性表达

目的：比较不同类型凋亡基因在牙龈瘤中的特征性表达,探讨细胞凋亡在牙龈瘤发病中的作用机制。方法：2017年12月—2018年5月治疗36例牙龈瘤患者,收集对应的牙龈瘤组织和正常牙龈组织。其中6对用PCR芯片检测84个凋亡相关基因的表达,30对用实时荧光定量PCR验证芯片结果。根据内参基因ΔΔCt法计算基因表达改变,采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果：与正常牙龈组织相比,牙龈瘤组织中AIFM1、BCL2、BCL2L1、BCL2L2、BFAR、BIRC2、BIRC3、BIRC6、BNIP2、BNIP3、CD40LG、XIAP表达升高,TNFRSF25表达下降。结论：BCL-2家族抗凋亡基因和IAP家族基因过表达,抑制牙龈组织正常凋亡的发生,最终引起牙龈瘤。     

牙周炎牙龈组织基质金属蛋白酶活性及蛋白表达的研究

目的：探讨来源于宿主的基质金属蛋白酶（MMPs)在牙周炎发病机制中的作用。方法：利用明胶酶活性分析（zymography)和免疫组化方法，检测15例牙周炎患者牙龈组织中和4例健康牙龈中MMP－2、MMP－9的酶活性及蛋白表达。结果：牙周炎牙龈组织以及正常的牙龈组织中均能检测到MMP－2、MMP－9的前体形式（pro-MMP-2和pro-MMP-9)，只有在牙周炎牙龈组织中发现活化形式的MMP－2，没有见到活化形式的MMP－9。免疫组化结果显示：15例成人牙周炎牙龈组织中MMP－2在炎性结缔组织中较正常牙龈阳性表达，而且经图像分析较正常牙龈组织MMP－2阳性细胞表达显著增强（P＜0．05）。结论：提示基质金属蛋白酶MMP－2参与牙周组织破坏过程，在细胞外基质的降解、牙周组织破坏过程中起重要作用。     

IgE介导的超敏反应对青少年牙周炎致病作用的研究

目的：对１３例青少年牙周炎患者和５例健康牙龈对照组的牙龈组织进行免疫球蛋白的定量定性分析。方法：本实验用６种单克隆抗体，采用免疫组织化学技术。结果：青少年牙周炎牙龈组织内ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、λ阳性细胞数比对照组有显著差异（Ｐ＜０．０１），ＩｇＥ阳性细胞数比对照组有显著差异（Ｐ＜０．０５）。结论：表明Ｂ淋巴细胞、浆细胞有关的抗原、抗体参与的体液免疫在青少年牙周炎致病中起重要作用，ＩｇＥ介导的超敏反应在青少年牙周炎致病的免疫机制中起作用。青少年牙周炎活动期的综合治疗中采用抗过敏药治疗可能有效。     

牙周炎患者牙龈组织中IL-21表达的研究

目的：研究不同类型牙周炎患者牙龈组织中IL-21基因的表达,探讨其在牙周炎发病中的作用。方法：选择慢性牙周炎患者12例,侵袭性牙周炎8例,健康对照组8例,采用实时定量PCR方法定量检测IL-21 mRNA在牙龈组织表达情况。结果：慢性牙周炎、侵袭性牙周炎、健康对照组牙龈组织中均有IL-21 mRNA的表达,慢性牙周炎组和侵袭性牙周炎组IL-21 mRNA相对表达量分别为0.000534±0.000504和0.00602±0.000137,显著高于健康对照组0.000161±0.000352,差异有统计学意义(P<0.05)。慢性牙周炎和侵袭性牙周炎牙龈组织IL-21mRNA表达没有显著性差异（P>0.05）。结论：IL-21在慢性牙周炎发病机制中可能发挥重要作用。     

CXCL16及其受体CXCR6在中重度牙周炎患者牙龈组织中的表达

目的 观察趋化因子CXCL16及其受体CXCR6在中重度牙周炎牙龈组织和健康牙龈组织中的表达及相互关系。方法收集辽宁省人民医院口腔科门诊就诊和住院患者的牙龈组织79例,其中健康牙龈组40例,中、重度牙周炎组39例,年龄35~74岁。采用免疫组织化学染色法观察牙龈组织中CXCL16和CXCR6的阳性细胞百分率和染色强度。采用SPSS15.0软件包对数据进行统计学分析。结果与健康牙龈组相比, CXCL16在中重度牙周炎组中的表达显著升高（P<0.05）,CXCR6在中重度牙周炎组中的表达较健康牙龈组显著升高（P<0.05）。经相关性分析,CXCLl6与CXCR6在中重度牙周炎患者牙龈组织中的表达呈正相关（r=0.580,P<0.05）;而在健康牙龈组织中,两者的表达无相关性。结论趋化因子CXCLl6及其受体CXCR6可能与牙周炎的发病有关,两者在牙周炎的发病过程中可能共同发挥作用。     

β-防御素基因在牙龈组织中的表达

目的:检测人β-防御素(HBD-1,-2,-3)基因在牙周炎病变和健康牙龈组织中的表达。方法:应用反转录多聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测健康牙龈(HC组,11例)、慢性牙周炎(CP组,12例)和侵袭性牙周炎(AgP组,9例)牙龈组织中HBD-1、HBD-2和HBD-3mRNA表达水平。结果:HBD-1,-2,-3在所有牙龈组织样本中均有mRNA表达;HBD-3mRNA在HC组、CP组、AgP组的表达水平分别为0.53±0.12,0.30±0.17和0.40±0.17,3组间差异有统计学意义(P<0.01),健康牙龈中HBD-3mRNA表达相对强度明显高于慢性牙周炎组;HBD-2和HBD-3基因的mRNA表达水平呈正相关(P<0.01,r=0.48)。结论:牙龈上皮表达的β-防御素(HBD-1,-2,-3),尤其是HBD-3在健康牙龈组织较高水平的mRNA表达,提示其在牙周宿主免疫防御反应中可能发挥重要作用。     

趋化因子受体CXCR7在牙周炎中的表达及其作用机制

目的:探讨CXCR7在牙周炎中的表达、分布及SDF-1/CXCR7生物学轴在牙周炎中的作用。方法:运用免疫组化的方法检测SDF-1、CXCR4、CXCR7在15例正常的牙龈组织和15例牙周炎组织中的表达,同时运用PCR方法检测15例正常的牙龈组织和15例牙周炎组织中的表达情况。结果:免疫组化和PCR的结果均显示SDF-1、CXCR4、CXCR7在牙周炎组织中表达增高,高于正常牙龈组织(P<0.05)。SDF-1与CXCR7呈正相关关系(γ=0.533,P=0.041)。CXCR4和CXCR7的表达呈正相关关系(γ=0.533,P=0.041)。结论:CXCR7在牙周炎微环境中的不同细胞群过表达,在牙周炎的病理过程中发挥作用,可能是治疗牙周炎的一个新的作用靶点。     

慢性牙周炎患者IL-17mRNA的表达及意义

目的：观察TL-17mRNA基因在慢性牙刷炎和健康牙龈组织中的表达水平变化,探讨TL-17在慢性牙周炎发生发展巾的作用。方法：选择慢性牙周炎患者23例,正常对照组15例,记录才周临床指标,采用Real—time PCR方法定量检测TL-17mRNA在牙龈组织中的表达。结果：慢性牙周炎组TL-17mRNA相对表达晕（0．00147＋0．00055）显著高于正常牙龈组（O．00047±0．00019）（P〈0．01）,并且慢性牙周炎组TL-17mRNA表达水平与牙龈指数（r=0．58,P〈0．01）、牙周袋探诊深度（r=0．57,P〈0．01）、附着丧失水平（r=0．49,P〈0．05）呈正相关。结论：Th17相关细胞凶子IL—17呵能住慢性牙周炎发病机制中发挥致炎作用。     

老年牙周炎患者牙龈组织NO水平研究

目的：观察老年牙周炎患者牙龈组织中NO水平变化并与健康老年人、慢性成人牙周炎患者、青少年牙周炎患者比较。方法：采用硝酸还原酶法测量老年牙周炎患者、健康老年人、慢性成人牙周炎患者和青少年牙周炎患者牙龈组织中NO含量并比较。结果：老年牙周炎组NO水平明显低于健康老年人组、慢性成人牙周炎组和青少年牙周炎组（P＜0．05）。结论：由于衰老和牙周炎症的双重作用,老年牙周炎患者牙龈组织生成和分泌NO明显减少,导致抗感染和免疫调节功能的改变,非特异性免疫功能降低。