塞来昔布抑制人结肠癌细胞Caco-2细胞增殖及其分子机制

目的研究塞来昔布在体外抑制人结肠癌细胞Caco-2生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,分组为正常组(无任何干预)及塞来昔布组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50)值;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检环氧化酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为:99.519±10.355μmol/L、71.546±6.446μmol/L、59.622±15.999μmol/L;RT-PCR结果显示:人结肠癌细胞Caco-2正常对照组及塞来昔布干预组COX-2mRNA灰度值分别为:0.808±0.021,0.101±0.002(t=19.037,P=0.000);MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.798±0.031,0.190±0.002(t=18.987,P=0.002)。结论塞来昔布可能通过抑制COX-2、MMP-9的mRNA的表达,从而抑制结肠癌细胞增殖。     

茶多酚诱导膀胱癌T24细胞株凋亡及上调PTEN表达

目的 探讨茶多酚抑制膀胱癌细胞生长的可能分子机制。方法 采用MTT法和流式细胞术,观察膀胱癌细胞系T24经不同浓度的茶多酚处理后对细胞生长以及PTEN蛋白表达的影响。结果茶多酚以剂量依赖的方式抑制膀胱癌细胞的生长,加入0、50、100、200、400μg/ml茶多酚的T24细胞抑制率分别为0%、11.2%、33.4%、36.9%、67.5%。流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰,癌细胞出现凋亡,凋亡率分别为6.8%、25.1%、28.6%、36.6%、41.1%;同时,随茶多酚作用浓度的增加,出现G1/S阻滞细胞逐渐增多,细胞分裂增殖指数（PI）降低;而细胞PTEN蛋白表达水平由（37.66±0.49）逐渐增加至（163.92±3.36）（P〈0.01）。结论 茶多酚对T24细胞生长具有抑制作用,其机制可能是通过上调PTEN蛋白表达影响细胞周期和诱导细胞凋亡。PTEN蛋白表达水平的上调可能具有逆转细胞恶性生物学行为作用。     

三氧化二砷及紫杉醇对人结肠癌细胞MTA1 mRNA表达水平影响研究

目的探讨三氧化二砷、紫杉醇对人结肠癌细胞Caco-2细胞株肿瘤转移相关基因1(MTA1)mRNA表达水平的影响。方法采用噻唑兰(MTT)法检测不同浓度三氧化二砷、紫杉醇对Caco-2细胞生长的抑制率,采用逆转录实时定量聚合酶链反应检测Caco-2细胞MTA1mRNA表达水平。结果随着药物浓度升高,三氧化二砷、紫杉醇对Caco-2细胞生长的抑制率逐渐升高,MTA1 mRNA表达水平则逐渐降低;药物对Caco-2细胞生长的抑制率与MTA1 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.636,P0.05)。结论三氧化二砷、紫杉醇对Caco-2细胞生长的抑制作用,以及对MTA1mRNA表达水平的调控作用具有浓度依赖性,对Caco-2细胞生长的抑制作用与MTA1mRNA表达水平呈负相关。三氧化二砷、紫杉醇对Caco-2细胞生长的抑制作用可能与降低MTA1mRNA表达水平有关。     

姜黄素体外抑制人结肠癌癌细胞Caco-2增殖

目的研究姜黄素在体外对人结肠癌细胞Caco-2生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测姜黄素在相同浓度下、不同时间对于结肠癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制量(IC50)值;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA的表达影响。结果 MTT:相同干预浓度姜黄素抑制人结肠癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为:205.737±14.929μmol/L、102.023±6.809μmol/L、86.627±9.005μmol/L;RT-PCR:人结肠癌细胞Caco-2正常对照组及姜黄素干预组MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.786±0.101、0.310±0.046,P<0.05;COX-2 mRNA灰度值分别为0.830±0.173、0.063±0.035,(P<0.05)。结论姜黄素可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来抑制结肠癌细胞Caco-2增殖。     

金雀异黄素对人结肠癌细胞株增殖的影响

目的 研究金雀异黄素（GEN）对人结癌细胞系（SW480）细胞的作用并探讨其作用机理。方法 采用细胞计数法MTT法、免疫组化等方法，观察GEN对体外培养的SW480细胞的生长抑制以覆COX2表达的影响。结果 GEN对体外培养SW480细胞具有明显的生长抑制效应且呈剂量-效应的依赖关系，当50μmol／LGEN作用SW480细胞24h，抑制率达28％。免疫组化的结果显示：GEN处理后的SW480细胞COX2表达下降。结论 CEN对体外培养SW480细胞具有增殖抑制作用，CEN通过下调SW480细胞COX2蛋白的表达，促进细胞凋亡。     

尼美舒利对结肠癌细胞株PGE2及VEGF表达的影响

目的:探讨选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂对COX-2高表达的结肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响,明确以COX-2为靶点治疗结肠癌的作用途径。方法:将选择性COX-2抑制剂尼美舒利(nimesulide)按不同浓度作用于结肠癌细胞系HT-29,用MTT(四甲基偶氮唑蓝比色法)法分别于0、24、48、72h检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察尼美舒利对细胞凋亡的影响,进一步采用ELISA法检测药物作用后前列腺素E2(PGE2)的表达,免疫组化法测定内皮细胞生长因子(VEGF)表达阳性率。结果:尼美舒利对结肠癌细胞系HT-29呈时间、剂量依赖性方式抑制细胞增殖,促进其凋亡。PEG2及VEGF表达水平随作用时间延长而下降。结论:选择性COX-2抑制剂可能通过PGE2与VEGF途径影响结肠癌细胞HT-29的增殖与凋亡,是其治疗结肠癌的分子机制。     

lncRNA结肠癌相关转录本2在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)结肠癌相关转录本2(CCAT2)在结肠癌细胞系中的表达水平及对细胞增殖和凋亡的影响。方法标本取自2016年1月至2018年12月南通市中医院收治的55例结肠癌门诊患者。通过体外实验研究,采集结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116和正常结肠上皮细胞系NCM460,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定lncRNA-CCAT2的表达情况。取lncRNA-CCAT2在结肠癌中相对表达量最高的细胞系,将其分为空白对照组(磷酸盐吐温缓冲液)、阴性对照组(经Lipofectamine~(TM)2000转染NC-siRNA序列)、CCAT2-siRNA组(经Lipofectamine~(TM)2000转染CCAT2-siRNA序列)。采用MTT实验检测三组细胞增殖能力,用流式细胞术检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞凋亡能力。通过蛋白印迹法检测CCAT2-siRNA组与阴性对照组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、裂解型聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及p53蛋白的表达水平。结果相比正常结肠上皮细胞系NCM460,结肠癌细胞系HT29、LOVO、SW620、HCT116中lncRNA-CCAT2相对表达量均明显上调(P 0. 05),其中SW620的表达量最高。经MTT实验显示,转染后0、1、2 d,CCAT2-siRNA组与阴性对照组、空白对照组于490 nm波长处的吸光度值(OD_(490nm))比较,均无显著差异(P 0. 05);转染后3、4 d,CCAT2-siRNA组OD_(490nm)较阴性对照组、空白对照组明显下降(P 0. 01);阴性对照组与空白对照组不同时间点OD_(490nm)值的比较,均无显著差异(P 0. 05)。流式细胞术检测显示,相比阴性对照组,CCAT2-siRNA组细胞凋亡率明显升高(P 0. 01)。CCAT2-siRNA组Bcl-2蛋白的表达水平明显低于阴性对照组,裂解型PARP和p53蛋白的表达水平明显高于阴性对照组(P 0. 01)。结论 lncRNA-CCAT2高表达于结肠癌细胞系,而通过敲低lncRNA-CCAT2的表达可起到阻滞结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,并且其作用机制与Bcl-2蛋白表达降低、裂解型PARP和p53蛋白表达升高可能存在密切关系。     

MTA2在结肠癌中的表达及意义的研究

目的研究转移相关蛋白2(MTA2)在结肠癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学Max Vision法检测86例结肠癌组织(观察组)和60例癌旁正常结肠黏膜组织(对照组)中MTA2的表达,并研究MTA2的表达与结肠癌临床病理指标间的关系。结果 1MTA2在结肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常黏膜组织;2结肠癌中MTA2的表达与分化程度、有无淋巴结转移、Dukes分期、肿瘤直径、浸润深度、有无脉管浸润、是否伴有黏液有密切关系。结论 MTA2可能在结肠癌的浸润及转移中起重要作用,推测其可能作为结肠癌的临床标志物及治疗靶点。     

槲皮素对人结肠癌细胞体外增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的研究植物化学药物槲皮素对人结肠癌细胞的生长抑制作用和凋亡诱导效应。方法分别用不同浓度的槲皮素对人结肠癌细胞（Lovo细胞株）进行干预,采用MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果与对照组相比,槲皮素对Lovo细胞具有显著的增殖抑制作用（P〈0.05）,细胞增殖抑制随浓度增加、时间延长逐渐降低,呈现量-效、时-效关系。槲皮素引起明显的细胞周期阻滞（P〈0.05）,将细胞周期阻滞在G2/M期。槲皮素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡（P〈0.05）。结论槲皮素对结肠癌Lovo具有增殖抑制效应及凋亡诱导效应,是一种具有发展潜力的抗结肠癌药物。     

尼莫地平对人结肠癌细胞系增殖的影响

目的：探讨分析尼莫地平对人结肠癌细胞系（HCT）增殖的影响。方法采用不同剂量的尼莫地平作用于HCT细胞,通过细胞的生长动力学检测、细胞凋亡的流式细胞仪测定、瑞士-吉姆萨染色观察细胞形态。结果0．1～20．0μmol/L的尼莫地平加入HCT细胞培养基和对照组比较,12、24h后吸光度值均有明显差异,说明不同浓度尼莫地平对HCT细胞的增殖均有一定抑制作用,而在48h后,20．0μmol/L的尼莫地平作用于HCT细胞,抑制率可达35．67％。尼莫地平的浓度增高,G0～G1期的HCT细胞百分率逐渐升高,当尼莫地平浓度为10．0、20．0μmol/L,G0～G1期的百分率明显高于对照组的百分率,而S期的百分率则明显低于对照组的百分率,差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论在一定剂量范围内,随着尼莫地平浓度的升高可以有效抑制HCT的增殖,为肿瘤的治疗提供新的方法。     

茶多酚在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的实验研究

目的探讨茶多酚在骨肉瘤细胞株顺铂化疗中的增效作用。方法骨肉瘤细胞株分别经茶多酚、顺铂、茶多酚+顺铂作用72h,采用体外细胞毒性试验观察三者的细胞毒性;应用流式细胞仪分析茶多酚、顺铂及二者配伍对骨肉瘤细胞株的细胞周期的影响。结果骨肉瘤细胞株与浓度为50、100、200、400μg/ml的茶多酚作用时,其细胞毒性指数分别为9.62%、12.30%、28.85%、46.15%,与空白对照组比较差异有统计学意义(F=128.82,P<0.05)。与浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μg/ml的顺铂作用时,其细胞毒性指数分别为24.04%、54.80%、65.38%、88.46%,与空格对照组比较,差异有统计学意义(F=75.97,P<0.05)。而低浓度茶多酚与顺铂联合作用,其细胞毒性指数明显增加,随着各自浓度的升高,其细胞毒性作用明显增加。应用流式细胞仪分析显示,茶多酚对细胞周期也有明显的影响,使G0与G1期细胞比例明显增加(F=32.50,P<0.05),G2与M期细胞比例明显减少(F=8.32,P<0.05),S期比例无明显改变。结论茶多酚在骨肉瘤细胞株顺铂化疗中有显著的增效作用,并能改变骨肉瘤细胞的细胞周期。     

Induction of glutathione-S-transferase-pi by short-chain fatty acids in the intestinal cell line caco-2

Glutathione S -transferases (GSTs) are a multigene family of detoxification and metabolizing enzymes that have been linked with the susceptibility of tissues to environmental carcinogens. In addition to their role as the main energy source in the colonic mucosa, short-chain fatty acids (SCFAs) have been found to act as potent antiproliferative and differentiating agents in various cancer cell lines. The objective of this study was to evaluate the effects of SCFAs on the induction of GSTpi in the intestine as a possible new anticarcinogenic mechanism of SCFAs. Studies were performed in Caco-2 cells, a cell line resembling functionally normal enterocytes. Cells, cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum, were studied from day 0 dpc (days post confluence) until 21 dpc and culture. SCFAs (acetate, propionate, butyrate) were added to give a final concentration of 5 mmol L ^-1. At 0, 3, 6, 9, 15, and 21 dpc, protein, lactate dehydrogenase (LDH), alkaline phosphatase (AP) and GSTpi were measured. Butyrate supplementation significantly ( P ≤ 0.01 ) increased GSTpi levels compared with controls in a concentration-dependent manner. The effect was detectable within 3 dpc with a maximum at 15 dpc. In contrast to butyrate, the other SCFAs tested had no (acetate) or little effect (propionate). In conclusion, the data suggest that the anticancer effect of butyrate in part may be based on the induction of GSTpi activity, resulting in an enhanced detoxification capacity of the gut.     

Subcellular distribution of small GTP-binding proteins in the intestinal cell line Caco-2

Abstract. The present study describes the subcellular distribution of low molecular weight GTP-binding proteins in the human carcinoma cell line Caco-2. Highly enriched subcellular fractions of basolateral and brush border membranes were prepared by differential density centrifugation and divalent cation precipitation. Small molecular weight GTP-binding proteins were identified after SDS-PAGE transfer to nitrocellulose using [α³²P]-labelled GTP. Smg-proteins with molecular masses of 28, 27, 25 and 24 kDa were detectable in all fractions. Homo-genate and brush border membrane fraction showed specific binding of [α³²P] GTP to proteins of a molecular mass of 21 kDa, while in the membrane fractions (apical, basolateral) a high enrichment of 24 kDa smg-proteins was detectable. Western blot analysis identified one of the 21 kDa proteins of the brush border membrane as rhoA. The homogenate of 4, 8, 11 and 14 days old Caco-2 cells showed different [α³²P]-GTP binding to 21, 27 and 28 kDa proteins. In conclusion, this study is the first showing the presence and asymmetrical distribution of smg-proteins among the various membrane components in the human carcinoma cell line Caco-2.     

RhoA基因转染对QZG肝细胞生物学行为的影响及其机制的研究

目的探讨RhoA基因转染QZG肝细胞系后细胞骨架和体外侵袭能力的变化。方法构建持续激活型的RhoA真核表达载体,以脂质体介导转染肝细胞系QZG,用RT-PCR检测RhoA mRNA表达水平,观察细胞骨架的变化和体外侵袭能力。结果RT-PCR表明稳定转染细胞株中有RhoA mRNA高表达,而且在荧光显微镜下可见到细胞株绿色荧光,细胞形态和骨架发生变化。Boyden小室体外侵袭试验中实验组比空白对照组侵袭能力增加41.4%（P=0.006）。结论RhoA影响细胞的骨架变化和侵袭能力,在肝癌发生和发展中发挥重要作用。     

Effects of deoxycholate on human colon cancer cells: apoptosis or proliferation

BACKGROUND: Deoxycholic acid has long been attributed as a tumour promoter in the colon. It exerts its growth-related actions in a phorbol ester-like manner, by stimulating protein kinase C. The aim of this study was to investigate the effect of deoxycholic acid on proliferation and apoptosis in the colon, by exposing colon cancer cells to it in increasing concentrations. METHODS: Human colon cancer cells (Caco-2 and HT-29) were treated with deoxycholate or its two structural isomers, 3-beta-12-alpha-dihydroxy-5-beta-cholan-24-oic acid and 3-alpha-12-beta-dihydroxy-5-beta-cholan-24-oic acid. Proliferation was evaluated by cell counting, and apoptosis by estimating percentage cell survival and assessment of nuclear morphology. RESULTS: Within the concentration range of up to 20 microM, deoxycholate stimulated growth of both human colon cancer cell lines. Its growth-promoting effect was abolished after inhibition of protein kinase C. At concentrations above 100 microM, deoxycholate induced apoptosis in both cell lines. Epimers of deoxycholate were significantly less potent in stimulating growth. CONCLUSION: Low-dose deoxycholate stimulates colon cancer cell proliferation while > 100 micromol L(-1) of this secondary bile acid induces apoptosis in colon cancer cells. Deoxycholate might promote the likelihood of malignant transformation by increasing epithelial cell turnover in the colon.     

Gab2对结肠癌细胞细胞外黏附作用的影响

;目的探讨Gab2对结肠癌细胞外黏附作用的影响。方法选取SW620和HCT116两种结肠癌细胞系,建立Gab2表达降低和Gab2表达升高的稳定细胞株。将实验NOD/SCID小鼠分为3组,每组10只。(1)对照组;接种scr/MGC803体结肠癌细胞;(2)Gab2降低组;接种Gab2降低的siGab2/MGC803结肠癌细胞;(3)Gab2升高组;接种Gab2升高的Gab2/MGC803结肠癌细胞。检测细胞迁移能力,测量肿瘤的大小和侵袭范围及细胞凋亡情况。结果处理后3组细胞迁移数计算结果显示,Gab2降低组的细胞迁移数显著低于Gab2升高组和对照组(P<0.05)。各组NOD/SCID小鼠均在接种40 d后处死,比较接种前与接种后小鼠体质量,Gab2降低组显著低于Gab2升高组、对照组,对照组低于Gab2升高组。测量瘤体积,Gab2升高组高于Gab2降低组、对照组。Gab2降低组瘤体积抑制率显著高于对照组(P<0.05)。相关分析发现,MMP-2、MMP-9蛋白的表达与Gab2蛋白表达呈正相关。结论 Gab2可有效调控体外细胞迁移数,显著抑制小鼠结肠癌细胞侵袭及转移,通过调节MMP-2、MMP-9蛋白表达,从而抑制结肠癌生长及转移。