ghrelin调控ERK信号通路对乳腺癌细胞多药耐药的影响及机制

目的:探讨ghrelin调控ERK信号传导通路对乳腺癌细胞多药耐药的影响及机制.方法:人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞培养,设立对照组、多柔比星组、gbrelin组、ghrelin联合多柔比星组、ghrelin联合多柔比星加PD098059抑制剂组,采用流式细胞法检测细胞凋亡,Western-blot方法检测细胞ERK、p-ERK、P-gp蛋白的表达.结果:在ghrelin干预下人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率最低(P＜0.01),在多柔比星的干预下人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率最高(P＜0.01),ghrelin联合多柔比星能够抑制多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的促凋亡作用(P＜0.01),ghrelin联合多柔比星加ERK信号通路特异性阻滞剂PD98059能够减弱ghrelin联合多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的抑制作用(P＜0.01).多柔比星组与ghrelin组相比ERK表达及p-ERK水平明显下降(P＜0.05)、且ghrelin组与多柔比星组相比P-gp蛋白表达明显上升(P＜0.05),ghrelin联合多柔比星组与多柔比星组相比ERK表达及p-ERK水平明显增加(P＜0.05)、且P-gp蛋白表达明显增加(P＜0.05),ghrelin联合多柔比星加抑制剂组与ghrelin联合多柔比星组相比ERK表达及p-ERK水平明显下降(P＜0.01),P-gp蛋白表达无显著性差异(P=0.07).结论:一定浓度的ghrelin激活乳腺癌细胞ERK信号通路增加P-gp蛋白表达,从而抑制多柔比星诱导乳腺癌细胞凋亡而诱发耐药的产生,阻断ghrelin-ERK信号通路可能逆转乳腺癌细胞多药耐药的发生.     

microRNA-21对乳腺癌MCF-7/ADR细胞株多柔比星耐药性影响的研究

目的:探讨microRNA-21(miR-21)基因表达改变对乳腺癌细胞多柔比星化疗耐药的影响.方法:人工合成miR-21模拟序列或干扰序列,以脂质体为载体,转染乳腺癌细胞MCF-7及其多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADR;应用荧光定量RT-PCR检测miR-21的表达;应用MTT法检测细胞转染前后对多柔比星的耐药性;应用流式细胞仪检测细胞凋亡;应用蛋白质印迹法检测PTEN、BAX及Bcl-2蛋白的表达.结果:MTT检测结果示,MCF-7及其耐药株MCF-7/ADR细胞多柔比星半数抑制浓度(IC50)分别为(0.28±0.03)和(17.5±0.12) μmol/L.miR-21表达上调,MCF-7细胞对多柔比星的IC50明显增高为(3.65±0.12) μmol/L;miR-21表达下调,MCF-7/ADR细胞对多柔比星的IC50明显降低为(7.53±0.11) μmol/L.流式细胞分析显示,miR-21下调后MCF-7/ADR细胞凋亡率明显增加.同时,细胞内PTEN、BAX蛋白表达水平增加,Bcl-2表达降低.结论:miR-21在乳腺癌化疗耐药中具有重要作用,抑制miR-21的表达可以逆转乳腺癌多柔比星耐药细胞株对多柔比星的耐药性.     

木香烃内酯通过p38-MAPK通路影响慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞对多柔比星敏感性的研究

目的探讨木香烃内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/ADR多柔比星敏感性的影响及其机制。方法取对数生长期K562/ADR细胞,分别以不同浓度木香烃内酯、多柔比星以及两药联合作用72 h,CCK-8法检测细胞增殖情况,计算细胞增殖率,获得两药半数抑制浓度(IC50)。以10μmol/L木香烃内酯、10μmol/L多柔比星及两药联合作用于K562/ADR细胞48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测p38-MAPK通路相关蛋白的表达水平。结果木香烃内酯与多柔比星联用组细胞增殖率均低于相应浓度两药单用组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多柔比星对K562/ADR细胞的IC50为(13.50±0.86)μmol/L,木香烃内酯为(7.30±0.55)μmol/L,差异有统计学意义(t=7.044,P=0.002)。流式细胞术检测结果显示,10μmol/L木香烃内酯和10μmol/L多柔比星联用组K562/ADR细胞凋亡率均高于空白对照组、木香烃内酯单用组以及多柔比星单用组[(19.68±3.21)%比(2.96±0.87)%、(9.34±2.89)%、(9.18±2.13)%],差异均有统计学意义(均P<0.01)。与10μmol/L木香烃内酯单用组和10μmol/L多柔比星单用组相比,两药联用组凋亡抑制蛋白bcl-2表达下调,bad、p-p38、cleaved-caspase-3及cleaved-PARP蛋白的表达水平上调。结论木香烃内酯可增强多柔比星对慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞增殖的抑制作用,促进多柔比星诱导细胞凋亡,其可能通过调控p38-MAPK通路逆转K562/ADR细胞的耐药性。     

双硫仑/铜通过MAPK通路诱导凋亡逆转白血病细胞多柔比星耐药的研究

目的:探讨丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)通路诱导凋亡在双硫仑/铜逆转耐多柔比星的人急性白血病细胞株(HL60/ADM)耐药分子机制中的作用。方法:流式细胞仪检测加入MAPK通路抑制剂SP600125后多柔比星单药组、双硫仑/铜单药组及双硫仑/铜联合多柔比星组HL-60/ADM凋亡细胞比例的改变;倒置显微镜下观察上述各个处理组作用后HL60/ADM细胞24h后形态学变化;蛋白质印迹法检测上述各组作用HL60/ADM细胞后JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)和Bcl-2蛋白表达变化。结果:SP600125将双硫仑/铜联合多柔比星组凋亡细胞比例从(73.24±10.58)%降至(40.70±6.03)%,差异有统计学意义,t=6.218,P=0.025。形态学观察显示,多柔比星和双硫仑/铜单药组HL60/ADM细胞凋亡特征不明显,双硫仑/铜联合多柔比星组出现明显的细胞凋亡现象,且SP600125能减轻双硫仑/铜联合多柔比星组细胞的凋亡程度。蛋白质印迹法显示,双硫仑/铜联合多柔比星处理HL60/ADM细胞后MAPK通路中磷酸化-JNK及其下游分子c-Jun和磷酸化c-Jun表达较其他组显著增加并能被SP600125显著抑制;此外,双硫仑/铜联合多柔比星还能下调抗凋亡Bcl-2蛋白的表达。结论:双硫仑/铜可通过MAPK通路诱导凋亡逆转HL60/ADM对多柔比星耐药。     

Snail沉默和过表达对ADM诱导MDR作用的研究

目的:研究乳腺癌细胞MCF-7中Snail表达与多柔比星(ADM)诱导的多药耐药(MDR)的关系,揭示上皮-间质转化(EMT)对乳腺癌细胞多药耐药的影响.方法:构建snail真核表达载体pCDNA-Snail和RNA干扰载体pSUPER-siRNA,将载体转染乳腺癌细胞MCF-7;用多柔比星对细胞进行诱导.利用细胞毒性实验和多柔比星外排实验,对细胞的耐药状况进行评价;通过流式细胞术测量耐药细胞中P-糖蛋白(P-gP)表达,Real-Time PCR测量耐药细胞中MDR1、Snail mRNA的表达.结果:细胞毒性实验和多柔比星外排实验结果显示,细胞转染pCDNA-Snail和pSUPER-siRNA后经多柔比星诱导相对耐药指数(RR)分别为111. 3和13.7,细胞内药物荧光强度分别为9.30±0.97和87.40±9.13;Real-Time PCR显示相对于未转染细胞,转染pCDNA-Snail后MDR1,Snail mRNA的表达明显升高,P＜0.01,P-gp表达也显著升高,P＜0.01;转染pSUPER-siRNA细胞则出现相反变化(P＜0.01).结论:Snail沉默和过表达分别使乳腺癌细胞的耐药能力降低或升高.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对急性髓系白血病细胞株HL60/ADM增殖、凋亡及耐药的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对急性髓系白血病细胞株HL660/ADM的增殖、凋亡和耐药的影响.方法 采用不同浓度LBH589处理耐药的HL60/ADM细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖和多柔比星作用24h IC50值,AnnexinV-FITC/PI荧光染色流式细胞术检测细胞凋亡、多柔比星摄取率和多药耐药蛋白1（MRP1）表达,评估LBH589逆转耐药效应.Westemblot检测p53、Akt、p-Akt、组蛋白-3、乙酰化组蛋白-3、β-actin蛋白表达.结果 10～80 nmol/L LBH589能够抑制HL60/ADM细胞增殖和诱导凋亡,70 nmol/LLBH589作用60 h抑制效果最佳.20 nmol/LLBH589显著下调HL60/ADM细胞表面MRP1的表达[（93.90±4.20）％比（76.19±6.53）％,P＜0.05]、提高HL60/ADM细胞多柔比星摄取率[（8.53±0.68）％比（25.67±1.34）％,P＜ 0.01]、降低多柔比星24 hIG0值[（6.833±0.319） μg/ml比（1.382±0.104）μg/ml,P＜ 0.01],其逆转耐药倍数为4.9倍.LBH589处理HL60/ADM细胞24、48 h,乙酰化组蛋白-3相对表达水平均高于LBH589处理前（P＜0.01）,处理后24h和48 h p-Akt相对表达水平分别为1.07±0.09和0.59±0.01,低于处理前表达水平（2.03±0.12）（P＜0.01）,p53蛋白相对表达水平分别为0.57±0.04和1.31±0.09,明显高于处理前的表达（0.21±0.02）（P＜ 0.01）.结论 LBH589通过阻断PI3K-Akt通路、下调其MRP1的表达及提高多柔比星摄取率有效地抑制HL60/ADM细胞的增殖和诱导其凋亡,并逆转其耐药.     

塞来昔布预防MCF-7细胞获得性耐药发生

目的:观察环氧合酶-2 (cyclooxygenase-2, Cox-2) 抑制剂塞来昔布(celecoxib)对乳腺癌细胞株MCF-7获得性耐药的预防作用,并对其机制进行初步探讨.方法:采用小剂量多柔比星 (doxorubicin, Doxo) 对MCF-7细胞进行诱导,建立获得性耐药诱导模型,同时以此模型,联合应用塞来昔布进行耐药预防研究.MTT法检测多柔比星对MCF-7细胞的生长抑制效应及半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)值; RT-PCR方法检测MDR1、MRP1、GST及TopoⅡ等多药耐药相关基因的变化;Western印迹法检测蛋白的变化; FCM法检测细胞膜P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达及功能. 结果:多柔比星(0.05 μg/mL)作用7 d,MCF-7细胞内MDR1及MRP1在mRNA及蛋白水平均上调,而GST及TopoⅡ未见明显变化;联合塞来昔布(10 和20 μmol/L)进行干预,可有效抑制多柔比星诱导的MDR1及MRP1在mRNA及蛋白水平的上调,细胞膜P-gp功能均降低.多柔比星与塞来昔布(10 μmol/L)联合作用组,MCF-7细胞对多柔比星的IC50值为(0.38±0.04) μg/mL与多柔比星单药组的 (0.67±0.03) μg/mL相比,差异有统计学意义(P<0.01). 结论:选择性Cox-2抑制剂塞来昔布可有效预防MCF-7细胞获得性耐药的发生, 且具有明显的化疗增敏作用,其初步作用机制部分涉及塞来昔布抑制多柔比星引起的P-gp及MRP1的上调.     

阿托伐他汀增加乳腺癌细胞对多柔比星敏感性的研究

目的探讨他汀类药物增加乳腺癌细胞对多柔比星敏感性的机制。方法(1)用不同浓度的多柔比星(0、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28μg/ml)与0、2μmol/L的阿托伐他汀联合处理MDA-MB-231细胞,通过细胞计数检测试剂盒(CCK-8)检测450 nm波长下的吸光度值,从而计算细胞活力。(2)分别用0.3μg/ml多柔比星、2μmol/L阿托伐他汀单药及两药联合处理MDA-MB-231细胞,并以未经任何药物处理的细胞作为对照组,通过Hoechst染色检测MDA-MB-231细胞凋亡情况,通过细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,通过Western blot检测MDA-MB-231细胞中caspase 3、caspase 9、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、甾醇调节元件结合蛋白转录因子2(SREBP2)及低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达。细胞活力比较采用析因分析,未凋亡细胞数、划痕面积百分比、穿膜细胞数及不同蛋白表达等指标的多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法。结果(1)与多柔比星单药相比,阿托伐他汀与多柔比星联合应用可以显著抑制MDA-MB-231细胞活力(F=243.043,P<0.001);不同浓度多柔比星组细胞活力比较,差异有统计学意义(F=1803.617,P<0.001);两个因素存在交互作用(F=21.030,P<0.001)。(2)各组的未凋亡细胞数比较,差异具有统计学意义(对照组:94.00±4.24:阿托伐他汀组:57.00±1.41,多柔比星组:34.50±2.12,阿托伐他汀+多柔比星组:19.00±2.83,F=261.021,P<0.001),两两比较结果显示,组间差异均有统计学意义(P均<0.050)。各组间的划痕面积百分比比较,差异具有统计学意义[对照组:(28.94±3.59)%,阿托伐他汀组:(31.00±2.99)%,多柔比星组:(40.16±2.38)%,阿托伐他汀+多柔比星组:(60.86±3.60)%,F=42.080,P<0.050]。与对照组、阿托伐他汀组及多柔比星组相比,阿托伐他汀+多柔比星组划痕面积均增加(P均<0.050)。各组穿膜细胞数比较,差异具有统计学意义(对照组:101.20±14.55,阿托伐他汀组:75.80±7.33,多柔比星组:32.40±4.78,阿托伐他汀+多柔比星组:8.80±2.50,F=118.031,P<0.001),两两比较结果显示差异均具有统计学意义(P均<0.050)。各组MDA-MB-231细胞中凋亡相关蛋白caspase 3、caspase 9的表达比较,差异均有统计学意义(F=128.854、247.530,P均<0.001)。与多柔比星组相比,阿托伐他汀+多柔比星组caspase 3、caspase 9蛋白的表达显著增加(P均<0.050)。4组MDA-MB-231细胞中HMGCR、SREBP2、LDLR蛋白的表达量比较,差异均具有统计学意义(F=183.193、227.470、586.087,P均<0.001)。两两比较结果显示,与对照组比较,阿托伐他汀+多柔比星组中HMGCR表达明显升高,SREBP2、LDLR表达明显降低(P均<0.050);与对照组相比,多柔比星组HMGCR的表达无明显改变(P>0.050),SREBP2、LDLR的表达明显降低(P均<0.050),阿托伐他汀组HMGCR表达高于对照组(P<0.050);与多柔比星组相比,阿托伐他汀+多柔比星组HMGCR表达增加(P<0.050),SREBP2的表达降低(P<0.050),LDLR的表达无明显变化(P>0.050)。结论阿托伐他汀通过抑制HMGCR表达,减少细胞内胆固醇的合成,使细胞更依赖于外源性胆固醇的摄取;多柔比星通过抑制LDLR表达减少外源性胆固醇的摄取;因此,当两药联用后由于细胞内胆固醇合成减少,使细胞更依赖于外源性胆固醇的摄取,对多柔比星更加敏感。     

长程多柔比星化疗富集乳腺肿瘤干细胞

目的:探讨长程多柔比星( adriamycin,ADR)作用乳腺癌细胞株MCF-7对富集肿瘤干细胞的可能性.方法:采用长程ADR诱导的方法建立ADR耐药细胞株MCF-7/ADR'.ALDEFLUOR法检测亲本MCF-7细胞及ADR耐药细胞MCF-7/ADR'中乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)阳性的肿瘤干细胞亚群的比例,然后采用无血清悬浮培养和裸鼠成瘤实验分别检测两者在体外形成干细胞微球体和体内成瘤能力的差异.结果:MCF-7和MCF-7/ADR'细胞中ALDH1+肿瘤干细胞亚群的比例分别为(0.82±0.77)％和(8.21±2.38)％,两者差异有统计学意义(P＜0.05);两者经无血清悬浮培养形成干细胞微球体的比例分别为(2.17±0.70)％和(7.87±1.39)％,差异有统计学意义(P＜0.05).MCF-7/ADR'细胞在裸鼠体内的成瘤能力明显强于MCF-7细胞.结论:长程ADR作用MCF-7后可富集肿瘤干细胞.     

米非司酮逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR耐多柔比星机制的探讨

目的 探讨米非司酮对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR的逆转耐药作用.方法 以亲本乳腺癌细胞MCF-7和耐多柔比星(阿霉素)乳腺癌细胞MCF-7/ADR为研究对象,分别应用MIF进行干预后,流式细胞仪检测MIF作用前后瘤细胞P-gp的表达、细胞内阿霉素蓄积量的变化以及细胞周期的分布.结果 (1)10 μmol/L MIF作用72小时后,MCF-7/ADR细胞P-gp表达率[(23.21±1.80)％]明显高于MCF-7细胞[(19.37±2.37)％,P＜0.05].(2)5 μmol/L ADR处理后,MCF-7/ADR细胞内ADR蓄积量为(47.13±4.11)％,低于MCF-7细胞[(60.24±2.61)％,P＜0.05].(3) 10 μmol/L MIF联合5 μmol/L ADR处理细胞,MCF-7/ADR和MCF-7细胞内ADR的蓄积量分别为(82.72±2.42)％及(88.63±2.75)％ (P ＞0.05);但均较单用ADR时升高(均P＜0.01).(4) MIF作用前,MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例[(77.21±3.10)％]高于MCF-7细胞G0/G1期比例[(59.05±2.16)％,P＜0.05];MCF-7/ADR细胞S期比例明显低于MCF-7细胞(P＜0.05).经10 μmol/L MIF作用后,MCF-7细胞G0/G1期比例(75.28±2.53)％较MIF作用前明显升高(P＜0.05);S期比例则较MIF作用前显著降低(P＜0.05);MCF-7/ADR细胞G0/G1期比例和S期比例分别为(80.13±2.72)％及(13.52±1.03)％,与MIF作用前比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);两种瘤细胞的G2/M期比例与MIF作用无关(P＞0.05).结论 (1)MIF可以逆转MCF-7/ADR的耐药性,其作用机制与降低细胞P-gp含量、增加细胞内ADR蓄积量有关.(2) 10 μmol/L浓度的MIF对MCF-7/ADR细胞周期分布影响不大.     

雷帕霉素联合5-氮-2'-脱氧胞苷对急性白血病Nalm-6细胞生长抑制作用及其机制研究

目的 探讨雷帕霉素(RAPA)联合5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-dC)对急性白血病Nalm-6 细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 培养复苏后的Nalm-6细胞至对数生长期,采用不同浓度的RAPA、5-Aza-dC单药及两药联用处理Nalm-6细胞.CCK-8比色法检测细胞增殖,AnnexinV-PE/7-AAD标记及流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞TSC2及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达.结果 RAPA及5-Aza-dC均能抑制Nalm-6细胞增殖和诱导Nalm-6细胞凋亡(P＜0.05),RAPA联合5-Aza-dC对Nalm-6细胞的增殖抑制和凋亡诱导具有协同作用(P＜0.05).5-Aza-dC上调Nalm-6细胞的TSC2蛋白表达,RAPA及5-Aza-dC降低mTOR的磷酸化水平,RAPA联合5-Aza-dC可提高对mTOR磷酸化的抑制.结论 RAPA联合5-Aza-dC可增强对Nalm-6细胞增殖的抑制作用及凋亡的诱导作用,作用机制可能是抑制了mTOR的磷酸化.     

盐霉素对人黑色素瘤M21细胞增殖及自噬流的影响

目的 探讨盐霉素对人黑色素瘤M21细胞增殖及自噬流的影响。方法 采用MTS法检测细胞生存率,计算半数抑制浓度IC₅₀值。观察给药后细胞形态学变化。采用流式细胞仪检测细胞的凋亡率。Western blot检测给药后M21细胞内自噬相关蛋白LC3B表达情况。透射电镜下观察给药后M21细胞内是否有自噬小体产生。Western blot和免疫荧光检测p62蛋白水平和定位变化。结果 盐霉素对人黑色素瘤M21细胞具有明显的增殖抑制作用,IC₅₀值为(1.38±0.18)μM。给药后细胞增殖速度减慢,同时细胞中出现明显的空泡。盐霉素不能促进细胞发生凋亡,但能使细胞内LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的比值逐渐增加。在透射电镜下观察到自噬小体的增多与堆积。盐霉素作用后p62蛋白水平些许升高,逐渐在胞质内聚集成团状,表明自噬流被抑制。结论 盐霉素能够抑制人黑色素瘤M21细胞的增殖,其机制可能与诱导自噬小体增多、抑制自噬流有关。     

131I-GMBP1对胃癌多药耐药细胞的细胞毒和诱导凋亡作用

目的:探讨131I-GMBP1对胃癌多药耐药细胞的细胞毒和诱导凋亡作用。方法:应用Iodogen方法将GMBP1与131I进行放射性标记,并检测其稳定性。应用MTT试验检测131I-GMBP1对胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR的细胞毒作用。流式细胞仪及Hoechst染色试剂盒检测131I-GMBP1诱导的胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR的凋亡作用。结果:131I-GMBP1的放射性标记率为9 3%-9 8%,放射性比活度为906.5GBq/mmol。131I-GMBP1对胃癌多药耐药细胞SGC7901/ADR具有明显的细胞毒作用,能够显著抑制其增殖。在SGC7901/ADR与131I-GMBP1共孵育96h后,其IC50值为0.83μg/ml。SGC7901/ADR与不同浓度GMBP1、131I及131I-GMBP1共孵育60h后,131I-GMBP1处理过的SGC7901/ADR细胞出现明显的细胞凋亡,呈药物浓度依赖性。131I-GMBP1最高浓度时细胞凋亡率约34.1%。131I-GMBP1对胃癌多药耐药细胞的细胞毒及凋亡作用与131I-GMBP1的浓度及耐药细胞共孵育时间有关。结论:131I-GMBP1对胃癌多药耐药细胞具有很强的细胞毒及凋亡作用,可为进一步探讨131I-GMBP1单独或联合传统的抗肿瘤药物治疗胃癌多药耐药临床应用的可行性提供了实验依据。     

Tautomycetin诱导乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR的凋亡及其机制

目的:研究tautomycetin对乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR增殖及凋亡的影响及其机制.方法:MTr法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞增殖的影响,流式细胞术检测MCF-7/ADR细胞的凋亡,Western blotting法检测tautomycetin对MCF-7/ADR细胞caspase相关蛋白、Bcl-2、Cyto-C、P53蛋白表达和Akt磷酸化的影响.结果:Tautomycetin可剂量(0.01～100μmol/L)依赖性地抑制MCF-7/ADR细胞的增殖(P＜0.05),IC50值为(1.26±0.12)μmol/L;与对照组相比,tautomycetin (1 μmol/L)可诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,早期凋亡比例由(0.67±0.18)％升高至(17.2±3.8)％,晚期凋亡比例由(0.96±0.23)％升高至(28.4±5.7)％(P＜0.05).Tautomycetin可活化MCF-7/ADR细胞中caspase-7和caspase-9,降低Bcl-2蛋白的表达,促进线粒体释放Cyto-C,降低p-Akt的水平,但对caspase-8和P53的表达没有影响.结论:Tautomycetin可阻断Akt活化,以P53非依赖的方式通过Cyto-C介导的通路诱导MCF-7/ADR细胞凋亡.     

耐药株LoVo/Adr细胞pH与药物分布的关系研究

目的：探讨耐药株LoVo/Adr细胞pH与药物分布的关系。方法：采用免疫组化法检测P－gp的表达；在共聚焦显微镜下测细胞内SNAFL－calcein-AM荧光强度，其强度与胞浆的pH成正比；利用荧光显微镜观察阿霉素在细胞内的分布。结果：敏感LoVo株细胞P-gp染色为阴性，而耐药株LoVo/Adrk细胞呈强阳性；LoVo/Adr细胞内pH显著高于LoVo细胞；LoVo/Adr细胞内阿霉素含量显著低于LoVo细胞，且阿霉素在核区分布明显减少，相对在胞浆中增多；而在敏感LoVo细胞中，阿霉素集中分布在核区，胞浆中很少。结论：P-gp过度表达可能通过影响胞浆的pH而导致药物在耐药细胞中异常分布，可增进其对化疗药物的耐受性，是肿瘤细胞发生耐药的原因之一。     

人结肠癌LoVo/Adr细胞耐药性与细胞内Ca2+浓度的关系

背景及目的：基于在耐药细胞中Ca^2 增高,且钙通道拮抗剂维拉帕米可逆转多药耐药性,推测Ca^2 可能在耐药性中起一定的作用。本文的目的是探讨人结肠癌LoVo/Adr细胞耐药性与细胞内Ca^2 浓度之间的关系。方法：以Fluo-3/AM标记LoVo和LoVo/Adr细胞内Ca^2 ,用共聚焦显微镜观察其浓度变化;采用MTT法检测维拉帕米逆转细胞耐药性的伤脑筋和流式细胞仪检测细胞内阿霉素的浓度。结果：LoVo细胞和LoVo/Adr细胞Fluo-3/AM的荧光强度分别为850.45和1495.88;加用5mg/L维拉帕米后,LoVo细胞和LoVo/Adr细胞荧光强度分别为813.25和1284.14。说明耐药株LoVo/Adr细胞内Ca^2 浓度显著高于敏感株LoVo细胞,维拉帕米不能明显显著LoVo/Adr细胞内Ca^2 浓度,但5mg/L维拉帕米可显著增加LoVo/Adr细胞内阿霉素的浓度,对阿霉素和长春新碱的增敏倍数分别是8.85倍和5.31倍。结论：细胞内Ca^2 浓度增高可能是耐药株LoVo/Adr的表型特征之一,但与该细胞株耐药性无直接关系。     

RNA干扰 Rac1基因表达对结直肠癌LoVo细胞骨架和细胞周期的影响

目的:观察Rac1蛋白在结直肠癌细胞中的表达,并分析其与结直肠癌LoVo细胞骨架、细胞周期和细胞凋亡的相关性.方法:Western blotting测定5种结直肠癌细胞株(LoVo,SW480,SW620,SW1116,HT29)中Rac1蛋白的表达;Rac1-shRNA质粒转染LoVo细胞后,激光共聚焦显微镜观察LoVo细胞骨架的变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化.结果:5种结直肠癌细胞株中均有Rac1蛋白的高表达.Rac1基因沉默后,LoVo细胞中交联状态的F-actin网明显减少且紊乱,G0/G1期细胞比例较对照组显著增加[(74.63 ±4.40)％ vs(56.46 ±3.09)％,P＜0.05],而S期细胞比例较对照组显著减少[(12.87±1.77)％vs(29.66±1.92)％,P＜0.05];Rac1-shRNA转染组LoVo细胞凋亡率较对照组显著增加[(25.31±2.05)％vs(9.38±1.16)％,P＜0.05].结论:RNA沉默Rac1基因的表达影响了LoVo细胞骨架的形成和细胞周期,为以Rac1为靶点治疗结直肠癌提供了实验依据.     

Baicalin induces apoptosis in leukemia HL-60/ADR cells via possible down-regulation of the PI3K/Akt signaling pathway

Background: The effect and possible mechanism of traditional Chinese medicine, baicalin, on the PI3K/Akt signaling pathway in drug-resistant human myeloid leukemia HL-60/ADR cells have been investigated inthis current study. Methods: HL-60/ADR cells were treated by 20, 40, 80 μmol/L baicalin followed by cell cycleanalysis at 24h. The mRNA expression level of the apoptosis related gene, Bcl-2 and bad, were measured byRT-PCR on cells treated with 80 μmol/L baicalin at 12, 24 and 48hr. Western blot was performed to detect thechanges in the expression of the proteins related to HL-60/ADR cell apoptosis and the signaling pathway beforeand after baicalin treatment, including Bcl-2, PARP, Bad, Caspase 3, Akt, p-Akt, NF-κB, p-NF-κB, mTOR andp-mTOR. Results: Sub-G1 peak of HL-60/ADR cells appeared 24 h after 20 μmol/L baicalin treatment, andthe ratio increased as baicalin concentration increased. Cell cycle analysis showed 44.9% G0/G1 phase cells24 h after baicalin treatment compared to 39.6% in the control group. Cells treated with 80 μmol/L baicalindisplayed a trend in decreasing of Bcl-2 mRNA expression over time. Expression level of the Bcl-2 and PARPproteins decreased significantly while that of the PARP, Caspase-3, and Bad proteins gradually increased. Nosignificant difference in Akt expression was observed between treated and the control groups. However, theexpression levels of p-Akt, NF-κB, p-NF-κB, mTOR and p-mTOR decreased significantly in a time-dependentmanner. Conclusions: We conclude that baicalin may induce HL-60/ADR cell apoptosis through the PI3K/AKTsignaling pathway.