连翘舒张大鼠离体胸主动脉环作用的研究

目的:观察连翘对大鼠离体胸主动脉环的作用,并探讨其作用机制.方法:取雄性Wistar大鼠,制备胸主动脉环置于浴槽内恒温灌流并记录收缩活动.结果:连翘浓度依赖性舒张去甲肾上腺素(NE)引起的血管收缩,IC50为8.60g/L,其作用是非.内皮依赖性的;连翘浓度依赖性舒张KCI引起的血管收缩,IC50为8.92g/L,其作用是内皮依赖性的.连翘的舒张大鼠离体胸主动脉环作用可被L-NAME部分阻断,但是不被心得安或格列苯脲阻断.连翘显著抑制NE诱发的细胞内钙收缩幅度和细胞外钙收缩幅度.结论:连翘显著舒张大鼠离体胸主动脉,作用机制可能是:阻断细胞膜上的受体调控性钙通道和电压门控钙通道或作用于其相关途径,增加NO浓度;抑制肌浆网释放Ca2+和抑制细胞外的Ca2+通过细胞膜进入细胞内.     

黄芩舒张大鼠离体胸主动脉环作用的研究

目的:观察黄芩对大鼠离体胸主动脉环的作用,并探讨其作用机制。方法:取雄性Wistar大鼠,制备胸主动脉环置于浴槽内恒温灌流并记录收缩活动。结果:黄芩浓度依赖性舒张去甲肾上腺素(NE)引起的血管收缩,IC50为7.45g/L,其作用是非内皮依赖性的;黄芩浓度依赖性舒张KCl引起的血管收缩,IC50为6.57g/L,其作用是内皮依赖性的。黄芩的舒张大鼠离体胸主动脉环作用可被L-NAME部分阻断,但是不被心得安和格列苯脲阻断。黄芩显著抑制NE诱发的细胞内钙收缩幅度和细胞外钙收缩幅度。结论:黄芩显著舒张大鼠离体胸主动脉,作用机制可能是:阻断细胞膜上的受体调控性钙通道和电压门控钙通道或作用于其相关途径,增加NO浓度;抑制肌浆网释放Ca2+和抑制细胞外的Ca2+通过细胞膜进入细胞内。     

西洋参茎叶皂苷对大鼠心肌细胞Ca2+内流的影响

目的:研究西洋参茎叶皂苷(PQS)对大鼠心肌细胞Ca2 内流的影响.方法:应用钙离子荧光指示剂Fura-2/AM检测.结果:PQS(1.5mg/ml)和维拉帕米(0.5μmol/L)对静息状态下心肌细胞内Ca2 浓度均无明显影响,但PQS使心肌细胞内Ca2 浓度有下降趋势;两药可明显抑制高钾(50mmol/L)引起的心肌细胞内Ca2 浓度的升高.结论:PQS对心肌细胞电压依赖性钙通道有阻断作用.     

茉莉花水提物对大鼠胸主动脉的舒张作用及机制

 目的 观察中药茉莉花水提物（AEJ）的血管舒张效应并探讨其机制。方法 采用大鼠胸主动脉环灌流,记录张力的变化;激光扫描共聚焦显微镜技术检测血管平滑肌细胞内 Ca2+浓度。结果 AEJ（0.375～6 g·L-1）能够浓度依赖性降低苯肾上腺素（PE,10 μmol·L-1)及 KCl (60 mmol·L-1)引起的主动脉环张力。在无钙环境下,AEJ 能抑制高浓度氯化钾 (KCl 60 mmol·L-1)环境下累计加入 CaCl₂(0.5～8 mmol·L-1)引起的收缩,抑制 PE (10 μmol·L-1) 引起的去内皮主动脉环的短暂收缩 (P<0.01)。钾通道阻断剂 4-氨基吡啶(5 mmol·L-1)可显著抑制 AEJ 的舒血管作用。激光扫描共聚焦检测细胞内 Ca2+的结果表明,AEJ 浓度依赖性（6,12 g·L-1）降低了 KCl 除极诱导的滑肌细胞胞浆内 Ca2+的升高幅度（P<0.05）。结论 AEJ 能够浓度依赖性舒张大鼠胸主动脉,其作用机制可能是减少 Ca2+经电压依赖性钙通道和受体操纵性钙通道流入血管平滑肌细胞及抑制内质网内 Ca2+释放有关;电压敏感型 K+通道（K_V）的激活部分参与了 AEJ 舒血管作用。     

作用于钙通道中药的研究现状

195 8年Fatt和Katz等最早发现钙离子通道 (L型钙通道 ) ,1970年Fleckenstein博士首先提出钙阻滞或钙拮抗 (calciumantagonist ,Ca A)一词。随着膜片钳技术的发明、改进与完善 ,钙通道药理学[1] 的研究进入了一个崭新的阶段。目前认为细胞膜有 5大类钙通道[2 ] :①电压依赖性钙通道 (voltage operatedCa2 + channels ,VOCs ;亦称voltage dependentCa2 + channels ,VDCCs) ;②受体依赖性钙通道 (receptor operatedCa2 + channels ,ROCs) ;③第二信使活化钙通道 (secondmessengeroperatedCa2 + channels ,SMOCs ) ;④机械活化钙通道(…     

丹参酮ⅡA抗过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡作用及机制研究

目的:观察丹参酮ⅡA对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:采用差数贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以200μmol/L过氧化氢作用2h模拟心肌细胞氧化应激模型,分别以丹参酮ⅡA高、中、低剂量在造模前干预24h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内游离钙及心肌细胞线粒体膜电位的变化,检测心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果:模型组心肌细胞经200μmol/L过氧化氢作用2h后,凋亡率显著增高。与模型组比较,丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞凋亡率。过氧化氢可导致心肌细胞内游离钙显著增加,线粒体膜电位、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著降低。丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞内游离钙浓度,增加线粒体膜电位、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结论:丹参酮ⅡA可以抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡,这可能与其增强细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,降低细胞内钙超载有关。     

天钩降压胶囊对家兔主动脉血管条收缩反应的影响

目的:观察天钩降压胶囊对家兔主动脉条收缩反应的影响,探讨其降压作用机制.方法:将家兔离体主动脉条置于灌流肌槽中,记录天钩降压胶囊提取物对去甲肾上腺素(NE)、氯化钾(KCl)、氯化钙(CaCl2)诱导的主动脉条收缩作用的影响,以及对NE诱导的主动脉条细胞内钙及细胞外钙依赖性收缩反应的影响.结果:天钩降压胶囊1,3,5g·L-1剂量组均能使NE,CaCl2引起的主动脉条最大收缩反应降低(P＜0.01);对NE诱发主动脉条细胞内钙及细胞外钙依赖性收缩均有明显抑制(P＜0.01),对细胞外钙依赖性收缩的抑制作用更显著;对KCl引起的动脉条收缩反应无明显影响.结论:天钩降压胶囊可通过影响细胞内钙离子浓度促进血管平滑肌舒张从而发挥降压作用.其机制可能主要通过影响受体操纵的Ca2+通道(ROC),对电压依赖性Ca2+通道(PDC)作用不显著.对NE诱发主动脉条细胞外钙依赖性收缩的抑制作用优于对细胞内钙依赖性收缩的作用.     

三七总皂苷对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究三七总皂苷(PNS)对大鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其可能机制.方法:应用激光共聚焦显微荧光技术探测细胞内游离钙浓度,结果用相对荧光强度[(FI-FI0)/FI0 (%);FI0:对照;FI:给药]表示.结果:(1)PNS ( 40、80、120 mg/L )可浓度依赖性地降低模拟缺血液中心室肌细胞[Ca2+]i的增加.(2)预先应用L型钙通道开放剂Bay k8644,可取消PNS (80 mg/L) 在模拟缺血液中的作用.(3)PNS (80 mg/L)能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine引起的[Ca2+]i增加.结论:PNS可通过抑制电压门控性钙通道的外钙内流和减少肌浆网内钙释放从而降低[Ca2+]i.     

萜烯类经皮促透剂对皮肤活性表皮层的影响及其机制研究

该文选择Ha Ca T皮肤角质形成细胞测定萜烯类经皮促透剂对皮肤活性表皮层的影响,探讨其促进药物透皮吸收的作用机制。选择具良好经皮促透效果的萜烯类化合物,即薄荷醇、柠檬烯、1,8-桉树脑、薄荷酮、4-萜品醇和长叶薄荷酮;采用MTT试验测定萜烯类经皮促透剂的细胞毒性,利用荧光漂白恢复技术(FRAP)考察不同萜烯类促透剂对细胞膜流动性的影响,采用流式细胞仪测定不同萜烯类促透剂对细胞膜电位的改变,同时考察了萜烯类促透剂对Ha Ca T细胞内Ca2+浓度的影响,采用超微量Ca2+-ATP酶试剂盒测定萜烯促透剂对Ha Ca T细胞内Ca2+-ATP酶活性的影响。实验结果表明,相对于常用化学促透剂氮酮,6种萜烯类促透剂均显示较低细胞毒性;所选择的萜烯类促透剂可显著增加Ha Ca T细胞膜流动性、降低细胞膜电位,同时可降低Ha Ca T细胞Ca2+-ATP酶活性和细胞内Ca2+浓度而影响细胞Ca2+平衡。因此,萜烯类促透剂可能通过改变细胞内Ca2+平衡而影响细胞膜流动性及膜电位,增加皮肤活性表皮流动性而降低皮肤屏障作用,从而利于药物的透皮吸收。     

黄芪对感染病毒大鼠心肌细胞L型钙通道的效应

目的:了解黄芪对感染柯萨奇病毒心肌细胞 L 型钙通道的影响,以探讨黄芪用于心肌炎治疗的作用机制。方法:以柯萨奇 B_3病毒感染急性分离的成年大鼠心肌细胞,利用膜片钳技术记录 L 型钙通道电流。结果:黄芪不影响正常心肌细胞 L 型钙通道电流的幅度,但可减缓 L 型钙通道电流的衰减。病毒感染增加心肌细胞 L 型钙通道电流的幅度,并改变其电压依赖性而使电流电压曲线向左下偏移。黄芪可抑制病毒感染细胞 L 型钙通道电流的增加。结论:黄芪通过抑制感染细胞经 L 型钙通道的跨膜钙内流和稳定 L 型钙通道的作用,可防止病毒感染可能导致的细胞内钙超载和异常电活动,从而对感染细胞起到保护作用     

复脉Ⅰ号对大鼠心肌和主动脉~(45)Ca跨膜流动的影响

目的采用血清药理学方法,研究复脉汤有效部位(复脉Ⅰ号)对大鼠心肌和主动脉45Ca内流和外溢的影响规律,探讨复脉Ⅰ号抗心律失常的药理机制。方法应用45Ca跨膜测量技术研究复脉Ⅰ号含药血清对大鼠心肌和主动脉电压依赖钙通道(PDC)的影响。结果复脉Ⅰ号含药血清对大鼠心肌和主动脉45Ca跨膜流动的影响显著,既能阻滞45Ca大量内流,又能促进已流入细胞内的45Ca外溢。结论复脉Ⅰ号抗心律失常的机理可能与阻滞细胞膜外Ca2+内流,促进膜内Ca2+外溢,维持细胞内Ca2+浓度的稳定有关。     

五种中草药对钙通道阻滞作用的初步研究

目的:初步研究黄芩、牛膝、杜仲、山楂、豨莶草五种中草药对血管平滑肌细胞(VSMCs)钙通道的影响。方法:大鼠离体胸主动脉环观察对去甲肾上腺素(NA)诱导的内钙依赖性与外钙依赖性缩血管作用的影响。结果:上述五种药材均能不同程度的抑制NA诱导的细胞外Ca2 内流产生的血管平滑肌的收缩;其中黄芩还能够显著地抑制NA诱导的细胞内"钙储库"中Ca2 的释放。结论:五种药材对VSMCs钙通道具有阻滞作用,这可能与其扩张血管、降血压作用机制有关;其中牛膝、杜仲、山楂和豨莶草等对VSMCs钙通道的阻滞作用为首次研究发现。     

黄芩甙对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

采用Ｃａ２＋指示剂Ｆｕｒａ２作为细胞内钙离子的荧光探针，用荧光分光光度计检测了黄芩甙对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞内游离钙浓度Ｃａｉ＋２的影响。结果表明，随黄芩甙浓度的增加，可剂量依赖性地显著降低平滑肌细胞静息Ｃａｉ＋２，并显著抑制去甲肾上腺素和高Ｋ＋引起的细胞Ｃａｉ＋２的升高，提示黄芩甙可通过阻断平滑肌细胞膜上的电压依赖型钙通道和受体操纵型钙通道，抑制细胞Ｃａｉ＋２的增高，这可能与其降压作用机制有关。     

海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca~(2 )]_i的影响

目的　揭示海嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法　采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca2 ]i 的影响及 [Ca2 ]i 变化时 Ca2 的来源 ,采用定磷法测定海嘧啶对肿瘤细胞膜钙泵活性的影响。结果　海嘧啶可显著升高肿瘤细胞内 [Ca2 ]i 的浓度 ,[Ca2 ]i 升高时 ,Ca2 同时来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。海嘧啶可显著降低肿瘤细胞膜钙泵活性。结论　海嘧啶通过升高肿瘤细胞内 [Ca2 ]i 的浓度 ,从而启动肿瘤细胞凋亡机制 ,诱导肿瘤细胞凋亡 ;海嘧啶升高肿瘤细胞内的作用是通过开放肿瘤细胞膜钙通道、引起肿瘤细胞内钙库释放、降低肿瘤细胞钙泵活性 3条途径达到的。     

益心酮调控细胞膜钙通道的实验研究

目的 :观察中药益心酮片调控细胞膜钙通道的特性 ,从细胞和亚细胞水平探讨其改善心肌缺血再灌注损伤的作用机理。方法 :采用大鼠主动脉平滑肌细胞模型 ,用放射性⁴⁵Ca跨膜流动测定技术分别观察益心酮片对溢流钙通道 (LC)、受体调控钙通道 (ROC)和电压依赖钙通道 (PDC)Ca²⁺ 内流的影响。结果 :益心酮片对LCCa²⁺ 内流无明显影响 ,对ROC和PDCCa²⁺ 内流有明显抑制作用。结论 :益心酮可以抑制慢通道Ca²⁺ 内流 ,且抑制作用呈现剂量依赖关系。     

蜂胶体外诱导喉癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨蜂胶对喉癌细胞珠Hep-2凋亡的影响及作用机制.方法 用流式细胞仪、原位末端标记法、激光共聚焦显微镜等技术,观察蜂胶对细胞的抑制、凋亡情况及细胞内Ca2+变化.结果 蜂胶能抑制Hep-2细胞的生长、诱导喉癌细胞凋亡,非特异性地阻滞Hep-2细胞周期的全过程.原位末端标记检测出细胞凋亡率亦有时间、剂量依赖性.细胞内Ca2+随蜂胶浓度的增加而升高,且具有统计学意义.结论 蜂胶能够抑制喉癌细胞生长,其抑制作用是通过诱导喉癌细胞凋亡而起作用的.     

乌头碱致SD乳鼠心肌细胞心律失常模型的研究

目的建立一种细胞水平的心律失常模型,以用于抗心律失常药物的筛选和评价。方法采用胰酶消化法体外培养SD乳鼠心肌细胞,通过差速贴壁的方法纯化后,在细胞水平给予传统诱发心律失常药物乌头碱,应用试剂盒测定给予乌头碱后心肌细胞内Na+、K+、Ca2+离子含量及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力的变化。结果乌头碱作用心肌细胞15 min后,使细胞内Na+、Ca2+离子含量增加,K+含量有减少,并呈一定的剂量依赖关系,其中1、2μmol/L乌头碱使细胞内Na+离子含量明显增加,与空白组比较有显著差异(P0.01);能抑制细胞Na+-K+-ATP酶活力,其中0.5,1.0,2.0μmol/L乌头碱与空白组比较有差异(P0.05),1.5μmol/L乌头碱与空白组比较有显著差异(P0.01);有降低细胞Ca2+-ATP酶活力的趋势。结论在细胞水平给予乌头碱能引起细胞内离子含量及酶活性的改变,与心律失常发生机制基本一致。因此乌头碱心肌细胞模型是一种稳定可靠的抗心律失常药物筛选模型。     

辣椒素通过提高ROS、Ca2+水平诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡

目的:探讨辣椒素(Cap)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的抑制作用、凋亡率、细胞周期、氧自由基(ROS)、细胞内钙离子(Ca2+)的影响。方法:CCK-8法检测辣椒素(50、100、150、200μmol/L)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的抑制作用;PI染色法检测细胞周期变化;Annexin V-FITC、PI双染检测细胞凋亡;DCFHDA检测ROS水平;Fluo 3-AM检测细胞内Ca2+变化。结果:辣椒素显著抑制SH-SY5Y细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性。辣椒素处理12h后:G2/M期、S期减少,G0/G1期细胞增多(P<0.01),表明辣椒素将SH-SY5Y细胞限定于G0/G1期;早期凋亡率显著增加,为48.35%;辣椒素处理12h后ROS、Ca2+水平显著上调(P<0.01)。结论:辣椒素通过提高细胞内ROS、Ca2+水平,抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖,将其限定于G0/G1期,促进其凋亡,有潜力成为新型抗肿瘤天然药物。     

附子水溶性生物碱对心衰细胞模型的治疗作用

目的:研究附子水溶性生物碱对心力衰竭大鼠心肌细胞膜ATP酶以及相关离子的影响,以揭示其对急性心力衰竭细胞的治疗作用。方法:取新生大鼠心室肌细胞原代培养5 d至细胞成熟,用0.8%戊巴比妥钠作用5 min造模后,分别给予附子水溶性生物碱0.01,0.02,0.04 g·L-1,以及阳性药物去乙酰毛花苷注射液4 mL·L-1,作用1.5 h后检测心肌细胞ATP酶活性以及各相关离子浓度。结果:模型组与正常组比较,心肌细胞活力明显减小,细胞内Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性与Na+,Mg2+含量降低,K+,Ca2+的含量与Na+-K+-ATP酶的活性上升;去乙酰毛花苷4 mL·L-1以及附子水溶性生物碱各剂量组均能提高心衰细胞的细胞活性,并能升高模型细胞Na+,Mg2+含量,提高细胞内Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,降低K+,Ca2+的含量与Na+-K+-ATP酶的活性。结论:附子水溶性生物碱能调节心衰细胞内酶的活力与离子浓度使之趋于正常,对戊巴比妥钠致心衰细胞模型具有一定的治疗作用。     

推拿滚对骨骼肌细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率的影响

目的:推拿(滚)法对骨骼肌细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率的影响.方法:采用细胞培养技术,培养大鼠四肢骨骼肌细胞,建立骨骼肌细胞损伤模型,将正常细胞和损伤细胞分别分为对照组、推拿组、推拿+维拉帕米组及损伤细胞学员推拿组,分别对各组细胞内Ca2+浓度和细胞凋亡程度进行检测.结果:损伤细胞内游离Ca2+浓度显著增高,细胞凋亡程度明显改善,但加入钙离子拮抗剂维拉帕米后,各项指标的改变均受到显著的抑制.结论:推拿(滚)法对细胞内Ca2+浓度和细胞凋亡率有影响作用.