高功率微波辐照对心肌细胞和心脏间质细胞生存能力和细胞活力的影响

目的：研究高功率微波(high power microwave，HPM)对心肌细胞和心脏间质细胞生存能力和细胞活性的影响。方法：实验选用出生后1～3d的二级Wistar大鼠，体外培养Wistar大鼠乳鼠心肌细胞和心脏间质细胞，于HPM辐照后，用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死；用MTT实验测定细胞活力。结果：HPM明显影响心肌细胞和间质细胞功能和形态结构，辐照后细胞活力降低，凋亡和坏死。辐照后6h，心肌细胞和间质细胞凋亡率分别为(36．76&;#177;5．12)％和(42．38&;#177;6．0)％，坏死率分别为(34．14&;#177;6．5)％和(22．98&;#177;7．4)％，与对照组相比，有显著的统计学意义(P&;lt;0．001)。结论：心脏是微波辐照的靶器官之一，HPM可对心肌细胞和间质细胞功能和形态产生明显影响。结果提示在探讨HPM对心脏损伤时，应同时关注对心脏间质细胞的影响。     

高功率脉冲微波对心肌酶谱的影响

目的：研究高功率脉冲微波(high power pulse microwave，HPPM)辐照对心肌酶谱的影响。方法：以实验犬30只和离体培养原代乳鼠心肌细胞为对象，检测HPPM辐照后不同时间点动物血清和细胞培养液中天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、乳酸脱氢酶同工酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、羟丁酸脱氢酶和碱性磷酸酶活性的变化。结果：HPPM辐照后，出现以酶活性显著降低为主的心肌酶谱紊乱。实验犬以肌酸激酶的变化最为敏感，于辐照后6h～1个月[辐照后6，24h，3d，1，2周，1个月实验犬的肌酸激酶分别为(796．9&;#177;756．70)，(287．8&;#177;274．87)，(367．2&;#177;241．16)，(324．4&;#177;128．81)，(336．5&;#177;152．36)．(257．5&;#177;105．86)，(165．8&;#177;99．00)mmol／L]一直显著降低(t=2．67～4．77，P&;lt;0．01)；细胞培养液心肌酶多于辐照后0～1h下降到最低水平。24h时大多恢复到正常水平，48h时酶活性出现显著性增高。结论：HPPM辐照可明显影响实验动物和心肌细胞的心肌酶活性。     

脱脂对异体皮质骨生物力学的影响

背景:脱脂的目的在于通过清除脂肪和脂蛋白,减少特殊细胞表面抗原,以降低免疫排斥反应,改善异体骨的生物相容性,提高异体骨移植的成骨能力,但目前有关脱脂对骨生物力学性能的影响尚无统一观点.目的:探讨脱脂对异体皮质骨生物力学性能的影响.设计、时间及地点:随机分组自身对照观察实验,于2006/2008在广东医学院附属福田人民医院完成.材料:新鲜宰杀的成年健康牛股骨8对.从每一对牛股骨相应位置中挑取约50 mm长,10 mm宽的骨块,将骨块打磨成7 mm×7 mm×40 mm长方体牛皮质骨试件24对.方法:将24对试件随机抽签法分成2组(n=12),每对中随机抽取一个试件为实验组,另一个试件为对照组.实验组试件在1:1的三氯甲烷:甲醇混合液500 mL中脱脂24 h:对照组标本按同样流程在去离子水中浸泡24 h.两组分别选取6个试件进行抗压缩试验及三点弯试验.主要观察指标:力学试验中每一试件所能承受的载荷、挠度.结果:压缩试验显示,与对照组比较,实验组的试件所能承受的最大压力明显减小,且脱脂后每个试件间所受最大应力的差别明显缩小,试件的脆性增加,最大应变减小,弹性模量增大(P均<0.05);三点弯试验显示,与对照组比较,实验组的试件所能承受的最大载荷明显减小,所受最大应力的差别明显缩小,最大挠度减小,弹性模量增大(P均<0.05).结论:脱脂后皮质骨的力学强度下降,脆性增加.     

微动对骨折端骨痂生物力学的影响

【目的】研究骨折端微动时应力对骨痂的弯曲刚度、扭转刚度和扭转强度的影响。【方法】60只新西兰大白兔随机分为微动组与固定组,利用万能材料实验机检测两组动物骨折端骨痂弯曲刚度、扭转刚度和扭转刚度的变化。【结果】①术后14d、21d、56d时固定组、微动组弯曲刚度差异无显著性;28d、42d时两组差异有显著性（P〈0．05）。②术后14d、21d时固定组、微动组扭转刚度差异无显著性;28d、42d、56d时差异有显著性（P〈0．05）。③术后28d、42d、56d时固定组、微动组扭转强度差异有显著性（P〈0．05）。     

螺钉孔对长管状骨生物力学的影响

目的:探讨板钉内固定物拆除后的螺钉孔对长管状骨的生物力学影响。方法:实验于2004-11/2005-08在北京大学人民医院创伤骨科实验室完成。取76根三黄鸡胫骨,随机分7组,分别是对照组,1.5mm孔径的单皮质(只钻透单侧皮质)1孔组、双皮质(钻透双侧皮质)3孔组和双皮质5孔组,以及2.5mm孔径的单皮质1孔组、双皮质3孔组和双皮质5孔组,对照组即正常的皮质完整组,1.5mm孔径和2.5mm孔径的单皮质1孔、双皮质3孔和双皮质5孔组分别作为鸡胫骨中段的直径为1.5mm和2.5mm的相应数目的钉道模型,上述7组标本均进行三点弯曲单一实验。结果:①1.5mm的单皮质1孔组[占管状骨平均外径[(横径 纵径)/2]的(16.69±0.66)%]及双皮质3孔组鸡胫骨达到结构破坏时的最大载荷与正常组最大载荷比较差异无显著性[(366.61±53.23),(364.23±51.26),(362.26±41.40)N,P=0.438,0.273],双皮质5孔组的最大载荷[(314.72±57.61)N]较正常组降低13%左右(P=0.033)。②2.5mm的单皮质1孔组[占管状骨平均外径的(29.36±2.07)%]、双皮质3孔组和双皮质5孔组的最大载荷[依次为(315.55±51.09),(315.83±31.00),(280.81±49.18)N]较正常组分别降低12%,12%,22%左右,差异有显著性(P=0.02,0.015,0.001)。结论:长管状骨皮质上的螺钉孔直径在管状骨外径的(16.69±0.66)%以内,且穿过双侧皮质的钉孔数量为3个以下时,可不影响其弯曲性能;当螺钉孔直径超过管状骨外径的(29.36±2.07)%时,将降低长管状骨的弯曲负荷。钉孔数目与弯曲载荷降低的幅度并不呈比例,双皮质钉孔数目较少时载荷的降低幅度与单皮质1孔大致相同。     

骨密冲剂对骨质疏松症大鼠骨生物力学的影响

目的　研究骨密冲剂对骨质疏松症大鼠骨生物力学的影响。方法　SD大鼠 90只 ,随机分成 5组 ,1组为正常组 ,其余各组采用维甲酸造模成功后 ,分为模型组、骨密冲剂小剂量组、骨密冲剂大剂量组、特乐定组 ,到 60d时处死 ,作骨生物力学检测。结果　骨密冲剂治疗组骨弯曲强度、弯曲刚度和扭转强度、扭转刚度明显好于模型组。结论　骨密冲剂能提高骨质疏松症大鼠骨生物力学性能。     

电磁脉冲辐射对小鼠生精细胞能量代谢的影响

目的探讨电磁脉冲(EMP)辐射对小鼠生精细胞能量代谢的影响. 方法 6～8周龄二级雄性昆明小鼠114只,随机分为辐射组和对照组.辐射组小鼠分别接受8×103 V/m,2×104 V/m和6×104 V/m EMP全身重复照射5次,于照射后6 h,1 d,3 d,7 d,14 d和28 d,检测睾丸组织乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、谷氨酸脱氢酶(GDH)和山梨醇脱氢酶(SODH)活性,外周血红细胞及其参数、血红蛋白浓度,同时观察睾丸组织的病理变化. 结果 3种场强的EMP照射后28 d内,各级生精细胞水肿、坏死和脱落,精子减少或缺失,间质水肿,蛋白水肿液积聚,毛细血管充血、出血;4种酶的活性在照射后14 d内与对照组比较均有不同程度降低,尤其在照射后7 d内显著降低(P<0.05或P<0.01),8×103 V/m 和2×104 V/m EMP照射后,28 d内大多数时间点的红细胞数、红细胞压积及血红蛋白浓度明显增加,6×104 V/m EMP照射后28 d,红细胞数、红细胞压积及血红蛋白浓度显著增加(P<0.05或P<0.01). 结论睾丸生精细胞的缺血、缺氧及能量代谢障碍,可能在EMP照射所致的生精细胞损伤过程中发挥重要作用.     

制备工艺对同种异体骨生物力学特性的影响

背景:同种异体骨材料经过灭菌和降低免疫原性等物理方式和化学方法处理后,要求其保留一定的生物活性和生物力学特性.目的:观察5种不同制备工艺对同种异体骨生物力学特性的影响.设计、时间及地点:对比观察实验,于2008-10在上海理工大学生物力学与康复工程研究所完成.材料:新鲜尸体的股骨,由上海亚朋生物技术有限公司合作医院提供.方法:将新鲜尸体的股骨经过预处理后,制成形状大小相同的骨块移植材料,采用Y射线辐照、高压冲洗后短超声、切割后长时间超声、化学处理后短超声和常规工艺5种不同制各工艺进行处理,经深低温冷冻保存1个月后取出,在Instron实验机上进行轴向压缩实验,加载过程为匀速准静态,速度为0.1 mm/min.主要观察指标:同种异体骨轴向压缩下载荷一位移曲线和应力-应变曲线.结果:不同制备工艺下同种异体骨所承受的最大压缩载荷范围在1.1～2.1 kN,其中,Y射线辐照骨承受的载荷最大,常规工艺处理骨承受的载荷最小,高压冲洗后短超声骨的承载能力与v射线辐照骨的承载能力较接近.在骨的弹性限度范围内,化学处理后短超声骨的弹性变形区最小,刚度最大,切割后长时间超声骨的刚度最小,其余处理方法位于这两者之间.此外形状和结构相似的同种异体骨,应力一应变曲线的变化趋势相同,所承受的最大屈服应力值为4.5～9.5 MPa.结论:不同制备工艺对骨的屈服应力、弹性应变量及弹性模量等生物力学参数均有不同程度的影响.     

黄芩茎叶总黄酮对U937细胞增殖的影响

目的研究黄芩茎叶总黄酮（TF）对人类单核肿瘤细胞U937增殖的影响。方法U937细胞以5×10^4个／ml的浓度，培养于含胎牛血清（FCS）10％的RPMI 1640全培养液中，TF浓度分别为0、25、50、100、150、2130mg／L组，每组8孔接种于24孔培养板中孵育7d。每天计数各孔细胞密度，第7天测定细胞悬液中乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果TF 25～200mg／L组U937细胞密度均低于TF 0mg／L组，浓度越高细胞密度越低（P〈0．05）。TF 0～150mg／L组细胞悬液LDL活性差别无统计学意义（P〉0．05），TF 200mg／L组LDL与其他5组相比均具有统计学意义（均P〈0．05）。结论TF具有抑制U937细胞增殖的作用，高浓度的TF（〉1200mg／L）对体外培养的U937细胞具有毒性作用。     

氟化物对幼年大鼠股骨生物力学参数的影响

背景:氟化物治疗骨质疏松一直备受争议,其对幼年大鼠的股骨生物力学参数影响的文献报道较少.目的:观察氟化钠对幼年大鼠股骨骨生物力学参数的影响.方法:SPF级的2月龄SD大鼠共90只,雌雄各半,被随机分成9组:对照组(幼年组、成年组、长期组)和用药组(幼年高氟组、幼年低氟组、成年高氟组、成年低氟组、幼年长期高氟组、幼年长期低氟组).对照组灌胃生理盐水,用药组分别按相应时间给予不同剂量的氟化钠灌胃.实验结束后,大鼠被异戊巴比妥钠麻醉后,心脏取血处死大鼠.取大鼠左侧股骨进行三点弯曲力学试验,观察氟化物对幼年大鼠股骨最大载荷和刚度的影响.结果与结论:与幼年对照组相比,幼年高氟组股骨的最大载荷和刚度分别下降13.18%和13.61%(P＜0.05),幼年低氟组的两项指标变化差异无显著性意义.与长期高氟组相比,幼年高氟组的最大载荷和刚度分别下降17.22%和17.17%(P＜0.05):长期低氟组的最大载荷和刚度分别增加了18.33%和19.15%(P＜0.05);成年高氟组和成年低氟组的最大载荷和刚度也有明显增加(P＜0.05).提示幼年大鼠对高剂量的氟化物更为敏感,高剂量的氟化物可降低大鼠的骨质量,随着氟化钠使用时间的延长,逐渐表现出对生长期大鼠骨质量的负作用.     

去势大鼠骨密度与生物力学间关系的改变

目的 骨密度与骨的生物力学间存在着相关关系已被许多学者所证实。但骨密度与骨折的发生率间却不具有很强相关关系。为此,我们研究了骨密度与骨生物力学间在去卵巢SD大鼠模型与对照组的线性关系是否相同,且这种关系是否受到雌激素的影响。方法 120只10月龄SD大鼠按体质量随机分为3组：去卵巢组（OVX组）去卵巢加雌二醇替代组（EST组,雌二醇10μg/kg,im,QD）和假手术组（SHAM组）。术后第3周、15周、18周和21周处死大鼠,取下后肢,分离软组织,应用双能X线骨密度测量仪（DEXA）分别测量第6腰椎和左侧股骨的骨密度（BMD）。再对相同的骨骼进行骨生物力学实验。结果 无论是股骨中段BMD与股骨最大负荷,还是第6腰椎BMD与最大负荷间都是一种正向的线性关系。在股骨中,OVX组的相关曲线较SHAM组向右下平移,而EST组较SHAM组的平移不明显;在第六腰椎中,OVX组和EST组的相关曲线较SHAM组向右下平移,而它们之间变化不大。结论 雌激素的缺乏不但可以导致骨量的丢失,还有可能导致骨质量的改变,包括构成骨的矿物晶体结构或纤维结构的改变。     

带血管自体骨膜与同种脱钙骨基质移植修复骨缺损的生物力学研究

目的 研究带血管自体骨膜（ＶＡＰ）与同种脱钙骨基质（ＤＨＢＭ）移植修复大段骨缺损的生物力学特征。方法 以兔双侧桡骨中段２５ｍｍ的骨缺损为模型，测试了ＶＡＰ＋ＤＨＢＭ移植和自体骨移植后桡骨的最大扭距（Ｍｎｍａｘ）的抗扭刚度（ＧＩＰ）。结果 术后４、８、１２周ＶＡＰ＋ＤＨＢＭ侧及自体骨转移侧的Ｍｎｍａｘ和ＧＩＰ均低于正常桡骨（Ｐ〈０．０１）；术后１６周两侧ＧＩＰ与正常桡骨已无差异（Ｐ〉０．０５），但Ｍ     

A laboratory-scale device for the straightforward production of uniform, small sized cell microcapsules with long-term cell viability

Microencapsulated and genetically engineered cells may be used for prolonged delivery of therapeutically active proteins. The objective of this study was to develop a simple, inexpensive and flexible laboratory-scale device for the production of cell microcapsules, especially capsules of small diameter (<300 μm). Many microencapsulation devices are expensive, difficult to assemble and to use, and often more suitable for large-scale experiments. However, the simplicity and low price of the encapsulation system should not limit the quality of capsules and reproducibility of the process: for successful in vitro and in vivo experiments it is important to be able to produce uniform, spherical microcapsules without deformities with high reproducibility. In addition, an advantage of the present procedure compared to other similar, co-axial laminar gas flow systems is the possibility to produce also small microcapsules, less than 200 μm in diameter, with narrow size distribution. First, design, optimization and reproducibility testing of this custom-built device were carried out. Second, microencapsulated retinal pigment epithelial cells (ARPE-19) capable of secreting soluble vascular endothelial growth factor receptor 1 (sVEGFR1) were engineered. The cells remained viable in alginate-poly-L-lysine-alginate microcapsules and secreted sVEGFR1 for prolonged periods.     

芍药苷对骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景：研究显示芍药苷具有补血及治疗自身免疫性疾病的功效,骨髓间充质干细胞对机体的造血及免疫功能也起着重要的作用,但芍药苷对骨髓间充质干细胞的增殖及细胞因子的分泌和表达有何影响报道较少。目的：探讨芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖及白细胞介素6表达的影响。方法：采用密度梯度离心法和贴壁培养法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,用流式细胞术和成脂及成骨诱导法鉴定人骨髓间充质干细胞生物学特性, MTT法检测不同浓度芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖的影响, EL ISA 法测定芍药苷干预人骨髓间充质干细胞后培养上清液中白细胞介素6的分泌水平,RT-PCR 检测芍药苷干预后白细胞介素6 mRNA的表达情况。结果与结论：成功分离出骨髓间充质干细胞,具有成骨、成脂分化潜能。与对照组相比,芍药苷浓度为2μmol/L和10μmo l/L可明显促进骨髓间充质干细胞增殖。10μmol/L 芍药苷干预骨髓间充质干细胞后, G0/G1期细胞比例显著降低, S期细胞比例显著升高。10μmol/L 芍药苷干预组骨髓间充质干细胞白细胞介素6 的分泌和mRNA表达均显著高于对照组(P <0.01)。由此得出,一定浓度的芍药苷可促进骨髓间充质干细胞增殖,并提高骨髓间充质干细胞分泌白细胞介素6水平和基因表达。     

Effects of single-variable biofeedback on wheelchair handrim biomechanics

Richter WM, Kwarciak AM, Guo L, Turner JT. Effects of single-variable biofeedback on wheelchair handrim biomechanics.

Objective

To determine the effects of single-variable biofeedback on select wheelchair propulsion variables.

Design

Within-subject comparisons.

Setting

Biomechanics laboratory.

Participants

Manual wheelchair users (N=31).

Interventions

Biofeedback on braking moment, cadence, contact angle, peak force, push distance, and smoothness were presented on a large monitor during propulsion on a motor-driven treadmill. For each variable, subjects were asked to make a maximum improvement, as well as a targeted 10% improvement for cadence, contact angle, peak force, and push distance.

Main Outcome Measures

Relative differences (%) in each variable between the normal propulsion trial and the biofeedback trials.

Results

Subjects were able to interpret and respond to the biofeedback successfully. For the maximum change conditions, significant improvements were made to all variables except smoothness, with individual improvements of 11% in peak force, 31% in contact angle, 44% in braking moment, 64% in cadence, and 255% in push distance. For the 10% target conditions, improvements were achieved to within 1% for all variables except peak force, which was a difficult variable for most subjects to control. Cross-variable interactions were found for most variables, particularly during the maximum change conditions. Minimizing cadence led to a 154% increase in peak force, suggesting the need for multi-variable feedback if multiple training objectives, such as reducing cadence and peak force simultaneously, are desired. While subjects were unable to significantly change smoothness, efforts to push more smoothly led to improvements across most outcome variables.

Conclusions

Biofeedback can be used to improve specific aspects of wheelchair propulsion. Cadence, contact angle, and push distance are well controlled by wheelchair users, and may be useful for clinical propulsion training. Clinicians should be aware of and comfortable with any cross-variable effects resulting from single-variable biofeedback training.     

Effects of exercise on bone growth mechanical and physical properties studied in the rat

Thirty-four pubescent male rats were divided into exercise and control groups to examine the effects of a 1-month intensive exercise programme on the mechanical, physical (group 1) and histological properties (group 2) of the tibia and femur. At the completion of training, rats were sacrificed and the right hind-limbs dissected and stored at −60°C prior to torsional-testing at a speed of 180/s. Left tibiae and femora were measured for length and weight' Values for the width of the epiphyseal plate were also obtained from animals in group 2. Following the exercise programme the tibiae showed significant reductions in energy absorbed to failure, bone length and width of the proximal epiphyseal plate. No change was observed for the mechanical properties of the femora, but significant reductions occurred in bone length and weight.     

微波热凝固对肿瘤杀伤及免疫效应的实验研究

目的：观察微波热凝固对肿瘤的杀伤及其作用后荷瘤体免疫机能的动态变化。方法：用袖珍插入式针形辐射器为无线，对荷ＳＣＣ－８９１乳腺癌小鼠进行微波热凝固处理（ＭｉｃｒｏｗａｖｅＴｉｓｓｕｅＣｏａｇ－ｕｌａｔｉｏｎ，ＭＴＣ），病理切片观察微波对肿瘤的杀伤，ＭＴＣ作用后０、５、１０、１５天检测脾细胞ＩＬ－２，ＩＬ。２Ｒ，ＳＩ变化，观察细胞免疫反应。结果：ＭＴＣ能直接杀伤肿瘤细胞，在ＭＴＣ作用后第１５天，各免疫指标均显著高出阳性对照，结论：ＭＴＣ对荷瘤鼠细胞免疫功能的进行性下降有抑制，具有类似免疫活性剂的作用。     

对探针式同轴探头在骨肿瘤微波热疗中电磁场分布的数值模拟分析

目的研究探针式热疗探头在骨肿瘤微波热疗中产生电磁场分布的模拟数值结果。方法取分层柱状结构骨肿瘤模型，将同轴电缆剥掉外导体后构成探针式探头。采用有限元数值分析方法，对不同插入深度及不同尺寸的同轴探头在组织中产生的电磁场进行数值模拟计算。结果当探头外导体的截断面处于组织内部时，辐射能量能较好地集中于被辐射组织中；当探头接近被辐射组织顶端但又不穿透时，可使顶端辐射增强。结论热疗时探头不同的插入深度及规格，可使被辐射组织的电磁场发生相应变化，故在临床微波热疗操作中，应根据肿瘤大小、部位等特性合理选择探头尺寸进行治疗。     

低功率微波辐射对抗氧化物酶活性及细胞膜流动性的影响

目的观察微波辐射对人脐静脉内皮细胞株ECV304、红细胞及纯化的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性的影响及对ECV304。细胞膜流动性的影响。方法（1）ECV304。细胞（18个200ml的玻璃培养瓶），随机分为3组（n=6）：微波假辐射组（A组）、微波辐射1次组（B组）及微波辐射3次组（C组）。分别测定细胞SOD、CAT活性和还原性谷胱甘肽（GSH）含量。（2）离体昆明种雄性小白鼠红细胞，随机分为3组（n=9），组别同前。分别测定细胞SOD、CAT活性。取纯化的CAT、SOD酶，随机分为3组（n=9），组别同前。微波辐射后，测定酶活性。（3）ECV304细胞（48个200ml的玻璃培养瓶），随机分为3组（n=8），组别同前。微波辐射后，在样品液中分别加入膜蛋白标记物MAL-1和脂肪酸标记物5-Doxyl，电子白旋共振（ESR）法检测波谱并计算膜流动性参数。结果与A组比较，C组ECV304。细胞CAT活性明显降低（P〈0．05），ECV304。细胞的SOD活性和GSH含量也呈降低趋势，而B组红细胞SOD、CAT及纯化的CAT活性明显增加（P〈0．01）。C组ECV304。细胞膜脂的运动参数与A组比明显降低（P〈0．01），膜蛋白运动性变化不明显。结论微波辐射可使红细胞内SOD、CAT和纯化CAT活性增强，使ECV304。细胞内CAT活性代偿性降低。微波辐射可导致ECV304。细胞膜膜脂流动性降低。     

鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化肝干细胞的研究

目的:探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)定向分化为肝干细胞的可行性。方法:采用全骨髓培养法体外培养rBMSCs,设实验组及对照组,应用肝细胞生长因子(HGF)诱导分化,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,免疫组化检测CK18、CK19及波形蛋白Vimentin;ELASA等方法检测甲胎蛋白,白蛋白及碱性磷酸酶。结果:rBMSCs经体外培养诱导后呈多角形、卵圆形改变,白蛋白,AFP,CK18、CK19表达阳性,碱性磷酸酶出现明显改变。结论:rBMSCs体外经HGF诱导下,具有向肝干细胞分化的能力,可成为肝组织工程主要种子细胞来源。