SH-SY5Y细胞α7尼古丁受体基因抑制对APP代谢的影响

目的采用RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7神经型尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达,了解对β淀粉样前体蛋白(APP)代谢中的γ-分泌酶两个重要组分早老蛋白(PS)及单过性跨膜蛋白(NCT)水平的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7nAChR的小干扰RNA(siRNA),用实时PCR法和Western印迹法分别测定细胞中α7 nAChR、PS及NCT在mRNA和蛋白表达水平的变化。结果转染α7 nAChR siRNA后,与对照组相比,α7 nAChR mRNA及蛋白表达水平明显降低;PS蛋白mRNA及蛋白水平均升高,而NCT水平无明显变化。结论α7 nAChR基因表达抑制后γ-分泌酶组分之一PS的水平明显升高,这种改变可能与α7 nAChR基因表达抑制后β-淀粉样蛋白(Aβ)的产生增多有关,可能与阿尔茨海默氏病(AD)的发病有一定的关系。     

甲状腺素对大鼠海马细胞凋亡和AMPA、NMDA受体的影响

目的观察甲状腺素对大鼠海马细胞凋亡和α-氨基-3-羧基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响。方法选取健康SD大鼠20只,随机分为对照组、甲状腺功能亢进症(甲亢)组各10只,腹腔注射L-甲状腺素35 d建立大鼠甲亢模型。检测两组大鼠血清三碘甲腺原氨酸(T3)、血清总甲状腺素(T4)水平;水迷宫检测大鼠学习记忆力;免疫组化检测两组大鼠海马细胞Bax、Bcl-2蛋白及AMPA及NMDA受体变化。结果与对照组比较,甲亢组血清T3、T4水平明显升高(P0.01),逃避潜伏期明显延长(P0.05);Bax蛋白表达明显升高(P0.01);Bcl-2蛋白及AMPA、NMDA受体表达均显著减少(P0.01)。结论甲状腺素可促进海马细胞Bax蛋白表达;降低Bcl-2蛋白、AMPA、NMDA受体的表达;这可能是甲亢大鼠学习记忆力降低的分子生物学机制之一。     

褪黑素对阿尔茨海默病模型大鼠NOS、Ca~(2+)和神经元凋亡的影响

目的研究褪黑素(melatonin,MT)对阿茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)的NOS、Ca2+及神经元凋亡的影响。方法Wistar大鼠48只随机分为AD组、AD-MT大剂量干预组、AD-MT小剂量干预组和假AD组。应用β-淀粉样蛋白(Aβ)注入大鼠海马CA1区,建立大鼠AD模型。AD-MT干预组以MT灌胃,每日一次直至试验结束。应用电迷宫检测大鼠学习记忆情况,用比色法,硝酸还原法和Tunel法检测海马钙离子(Ca2+),一氧化氮合酶(NOS)含量以及海马神经元凋亡情况。结果MT可以明显改善AD大鼠的学习记忆能力,同时可不同程度的抑制因Aβ在脑内的沉积所导致海马的Ca2+超载,NOS的异常增高以及海马神经元的凋亡。结论MT对AD有显著的脑保护作用。     

α7尼古丁受体mRNA表达抑制对SH-SY5Y细胞氧化应激水平的影响

目的探讨通过RNA干扰技术抑制神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)中α7尼古丁乙酰胆碱受体(nAChR)基因表达后细胞氧化应激水平的变化,以了解该受体的神经保护作用。方法 SH-SY5Y细胞转染针对α7 nAChR的小分子干扰RNA,Real-time PCR法检测转染细胞中α7 nAChR mRNA水平蛋白质印迹方法检测蛋白表达水平;并用Aβ1～42处理培养细胞,比色法测定细胞脂质过氧化产物水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果转染siRNA后,α7 nAChR mRNA水平和蛋白表达水平分别降低了81.7%和76.9%;细胞脂质过氧化水平升高38.4%;SOD和GSH-PX活性分别降低30.3%和21.1%。用Aβ1～42处理细胞后氧化应激水平升高,且转染siRNA后能增强Aβ的神经毒性作用。结论α7 nAChR基因表达抑制后能增强细胞氧化应激水平,同时增强Aβ的神经毒性作用。     

心房细胞Ca~(2+)调控与心房颤动

心房颤动(简称房颤)时心房细胞L型钙电流显著下调;心房细胞肌质网调节钙释放的受体,罗纳丹受体2型表达降低,IP3受体包括Ⅰ型和Ⅱ型上调;心房细胞能量代谢异常,大量糖原堆积和细胞凋亡,从而影响心房细胞的兴奋性和Ca2+交替。对心房细胞钙调控的一些关键部位干预可能可以成为房颤的治疗靶点。     

人参糖蛋白对Aβ_(25～35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的探讨不同组分人参糖蛋白对β-淀粉样蛋白25~35(Aβ25~35)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法采用超滤、透析等方法分离得到人参糖蛋白P1,采用葡聚糖凝胶对P1分离纯化得到P2和P3。采用苯酚-硫酸法测定3个组分中性糖含量,间羟基联苯法测定中酸性糖含量,Lowry法测定蛋白含量,高效液相色谱法测定纯度和分子量分布。采用MTT法考察人参糖蛋白对细胞损伤的保护作用。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测人参糖蛋白对细胞凋亡的影响。结果 P1中性糖含量为25.95%,酸性糖含量6.80%,蛋白含量为71.25%,重均分子量分布在700~45 000 D。P2中性糖含量为13.25%,酸性糖含量10.45%,蛋白含量为63.65%,重均分子量分布在4 500~20 000 D。P3蛋白含量为88.18%,重均分子量分布在5 000 D。组成糖和氨基酸分析结果:人参糖蛋白主要由甘露糖、岩藻糖、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖及N-乙酰葡萄糖(或N-乙酰半乳糖)以及17种氨基酸。人参糖蛋白对Aβ25~35诱导的细胞凋亡均有抑制作用,其中P1作用最强,当浓度为2.5μg/ml时即表现出显著抑制细胞凋亡活性(P0.05)。结论人参糖蛋白对Aβ25~35诱导SH-SY5Y细胞凋亡具有抑制作用,可有效保护神经细胞。     

柴胡皂苷 d 对SH-SY5Y细胞体外抑制作用及机制

目的 探究柴胡皂苷(SS)d对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的体外抑制作用及分子机制。方法 体外常规培养神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分别在浓度0、4、8、10μmol/L SSd的杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)中作用48 h,设为对照组及4、8、10μmol/L SSd组,荧光探针(DCFH-DA)法检测各组细胞中活性氧(ROS)的产生情况,试剂盒检测不同浓度SSd对SH-SY5Y细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量的影响;Western印迹法检测细胞内细胞周期蛋白(Cyclin)D1、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2及Bcl-2相关X基因(Bax)表达水平。结果 与对照组相比,8、10μmol/L SSd组ROS水平、MDA含量显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),且有浓度依赖趋势;4、8、10μmol/L SSd组LDH活性、Bax蛋白表达明显升高,CyclinD1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论 SSd能够通过提高细胞的氧化应激水平,抑制CyclinD1信号转导通路而促进SH-...     

Fas/FasL途径在氟致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

目的 探讨Fas/FasL途径在氟致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用.方法 用不同剂量氟化钠[NaF,0(对照)、20、40、80 mg/L].SH-SY5Y细胞进行染毒,24 h后检测细胞存活率、凋亡率和Fas、FasL mRNA表达;选择40 mg/L NaF组,观察在Fas受体激动剂(CH11)或拮抗剂(ZB4)作用下细胞凋亡率及Fas、FasL mRNA表达水平的改变.结果 40、80 mg/L组细胞存活率[(84.63±2.57)%、(69.04±5.63)%]明显低于对照组(100.00%),组间比较差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势.40、80 mg/L组细胞凋亡率[(8.54±1.95)%、(17.94±2.71)%]明显高于对照组[(3.32±1.33)%],组间比较差异有统计学意义(Jp<0.05);NaF能不同程度地上调Fas、FasL mRNA表达,使Fas/β-actin[40mg/L组(0.94±0.51)、80 mg/L组(0.99±0.12)]和FasL/β-actin[40 mg/L组(0.96±0.42)、80 mg/L组(0.99±0.24)]比值增加.与对照组[Fas/β-actin(0.50±0.33)、FasL/β-actin(0.58±0.23)]比较,差异均有统计学意义(P<0.05).在对细胞凋亡率和Fas、FasL mRNA表达水平的影响中,NaF与CH11之间存在协同作用(,值分别为32.89、18.46、14.69,P<0.01),NaF与ZB4之间存在拈抗作用(F值分别为5.73、24.26、10.17,P<0.05或<0.01).结论 NaF可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,Fas/FasL途径在NaF诱导SH-SY5Y细胞凋亡中起重要作用.     

脑梗死患者血清Mg~(2+)、Ca~(2+)含量动态变化及临床意义

目的观察脑梗死患者血清钙(Ca2+)、镁(Mg2+)含量变化,探讨其在脑梗死患者病理生理过程中的潜在作用及与病情的关系。方法检测40例脑梗死患者发病后6h、24h、72h及10d时血清Mg2+、Ca2+含量,根据病情将病例组分为稳定型脑梗死组和进展型脑梗死组,同时检测40例健康对照组血清Mg2+、Ca2+含量。结果脑梗死组发病6h、24h、72h时的血清Mg2+、Ca2+含量与对照组和脑梗死组发病10d时比较显著减少(P<0.01),Ca2+/Mg2+明显增加(P<0.01),发病后10d血清Mg2+、Ca2+含量及Ca2+/Mg2+与对照组比较无统计学差异(P>0.05);而进展型脑梗死组与稳定型脑梗死组血清Mg2+含量在发病72h、10d比较显著减少(P<0.01)。结论脑梗死急性期血清Mg2+、Ca2+含量显著降低,Mg2+/Ca2+明显增加,提示Mg2+、Ca2+可能参与脑梗死后脑损伤的病理生理过程,血清清Mg2+、Ca2+含量的变化可作为评估其病情进展的一项指标。     

丁苯酞对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨丁苯酞对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP~+)诱导的人体神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞凋亡途径的保护作用及其机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡模型。应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量丁苯酞对MPP~+诱导的SHSY5Y细胞存活率的影响;筛选出丁苯酞的最佳作用浓度;Annexin-V/PI流式细胞分析术检测细胞凋亡率;倒置相差显微镜观察细胞形态的变化;Western印迹法检测线粒体相关凋亡蛋白P53、Bcl-2、Bax的表达。结果丁苯酞预处理的细胞比单纯MPP~+处理的细胞存活率增加(P<0.05),且呈一定的剂量依赖性;丁苯酞可以降低MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡率(P<0.05)。丁苯酞下调P53、Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达(P<0.05)。结论丁苯酞对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能是调节P53、Bcl-2、Bax的表达,抑制细胞凋亡的发生。     

白术、附子、肉桂合剂对老年小鼠脑线粒体Ca~(2+)和脑细胞凋亡的影响

目的从Ca2+与细胞凋亡角度探讨白术、附子、肉桂合剂对老年小鼠脑细胞保护作用。方法将昆明种小鼠分为青年组、对照组和合剂组,合剂组按11.6 g/kg灌服白术、附子、肉桂合剂(简称合剂),30 d后检测脑线粒体Ca2+,以及脑细胞凋亡率。结果与青年组比较,对照组脑线粒体Ca2+的含量减低(P0.01);与对照组比较,合剂组脑线粒体Ca2+的含量升高(P0.01),脑凋亡细胞减少(P0.05)。结论白术、附子、肉桂合剂能增加老年小鼠脑线粒体Ca2+含量,降低脑细胞凋亡数,改善脑细胞功能。     

运动康复训练对老年骨骼肌细胞Ca~(2+)通道调控能力的影响

目的研究对运动康复训练对老年骨骼肌细胞Ca~(2+)通道调控能力的影响。方法将20名体重相近的老年人作为研究对象,随机将其划分成对照组和运动训练组,每组10人,对照组不进行任何处理,正常饮水饮食,对运动训练组进行7 w运动训练。结果第4、5周运动训练组老年人体重显著低于对照组(P0.05),第6、7周运动训练组老年人体重显著低于对照组(P0.01)。第3、4周运动训练老年人骨骼肌细胞Ca~(2+)浓度显著高于对照组(P0.05),第5～7周运动训练组老年人骨骼肌细胞Ca~(2+)浓度显著高于对照组(P0.01)。第4周运动训练组老年人骨骼肌细胞Ca~(2+)-ATP酶水解活性显著低于对照组(P0.05),第5～7周运动训练组老年人骨骼肌细胞Ca~(2+)-ATP酶水解活性显著低于对照组(P0.01)。第3、4周运动训练组老年人骨骼肌细胞Ca~(2+)摄取率显著低于对照组(P0.05),第5～7周运动训练组老年人骨骼肌细胞Ca~(2+)摄取率显著低于对照组。实验后运动训练组老年人膜电位明显低于对照组(P0.05),运动训练组老年人Ca~(2+)活度明显高于对照组(P0.05)。结论运动训练能够降低骨骼肌细胞Ca~(2+)通道的调控能力。     

Notch信号通路阻断对SH-SY5Y细胞α3神经型尼古丁受体水平的影响

目的研究Notch信号通路阻断对SH-SY5Y细胞α3神经型尼古丁受体(nAChR)水平的影响。方法用Notch信号通路阻断剂DAPT阻断细胞Notch信号通路后用Real Time PCR和Western印迹方法分别检测细胞中α3神经型尼古丁受体mRNA和蛋白水平的变化。结果 Notch信号通路阻断之后α3神经型尼古丁受体蛋白和mRNA表达都增加。结论 DAPT能抑制SH-SY5Y细胞Notch信号转导通路,Notch信号转导通路的活化可能与神经细胞α3神经型尼古丁受体的正常分泌及胆碱能信号传递密切相关。Notch信号通路阻断也可能通过减少γ-分泌酶导致SHSY5Y细胞中Aβ1⁴2/43的表达量减少,最终通过反馈调节导致α3神经型尼古丁受体水平表达增加。     

SH-SY5Y细胞p38 MAPK信号转导通路对α7尼古丁受体蛋白水平的影响

目的研究p38 MAPK信号传导通路激动及抑制对SH-SY5Y细胞α7神经型乙酰胆碱受体(n AChR)蛋白水平的影响并探讨受体蛋白与p38通路之间的关系。方法分别用p38 MAPK激活剂Anisomycin和p38 MAPK阻断剂SB203580激动和阻断SH-SY5Y细胞p38 MAPK通路蛋白的活化及其表达,Western印迹方法检测α7 n AChR蛋白水平。结果细胞经Anisomycin处理后,p38 MAPK蛋白表达不变,p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)蛋白水平升高了71%(P<0.01),同时细胞α7 n AChR蛋白表达升高了80%(P<0.01).细胞经SB203580处理后,p38 MAPK蛋白表达不变,p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)蛋白水平降低了62%(P<0.01),提示p38 MAPK信号通路被抑制,同时细胞α7 n AChR蛋白表达降低了80%(P<0.01)。结论 Anisomycin能激动SH-SY5Y细胞p38 MAPK信号转导通路,引起α7 n AChR蛋白表达明显增强;SB203580能阻断SH-SY5Y细胞p38 MAPK信号转导通路,引起α7 n AChR蛋白水平显著降低。     

5-氮杂-2-脱氧胞苷对百草枯诱导SH-SY5Y细胞神经毒性的影响

目的探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5'-aza-d C)对百草枯所诱导的SH-SY5Y细胞神经毒性的影响。方法 SH-SY5Y细胞预先用5'-aza-d C处理24 h,然后暴露于百草枯12 h。对细胞凋亡比例、相关蛋白Bcl-2和Bax表达以及培养液上清中活性氧簇(ROS)进行检测。结果和百草枯加5'-aza-d C干预后SH-SY5Y细胞活性显著降低,凋亡增加。此外,与单独百草枯处理相比,在暴露于百草枯加5'-aza-d C的联合作用后,ROS水平显著增加(P<0.05)。抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,凋亡诱导蛋白Bax表达增加,Bcl-2/Bax的比例下降,同时,细胞色素C的表达增加。结论 5'-aza-d C通过干预调节DNA甲基化,引起细胞氧化应激增加,并启动线粒体凋亡途径,这些进一步加重百草枯对SH-SY5Y细胞的神经毒作用。     

抗Aβ抗体清除Aβ寡聚体后BV2细胞对SH-SY5Y细胞损伤的影响及机制

目的研究抗Aβ_(_(1~42))抗体清除Aβ_(1~42)寡聚体后的BV2细胞对SH-SY5Y细胞损伤的影响及机制。方法 2μmol/L Aβ_(1~42)寡聚体处理BV2细胞为激活组,2μmol/L Aβ_(1~42)寡聚体处理BV2细胞6 h后加入12μl抗Aβ_(1~42)抗体清除Aβ_(1~42)为抗体组,对照组加入等量的生理盐水,各组培养24 h。将各组收集的条件培养液分别处理SH-SY5Y细胞24 h,MTT法检测神经细胞活力。ELISA法检测BV2细胞上清液肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹法检测磷酸化p38 MAPK的表达情况。结果抗体组对神经细胞的损伤较激活组严重(P<0.01),抗体组TNF-α的释放水平与激活组相当(P>0.05),且抗体组中磷酸化p38 MAPK蛋白仍能持续表达。结论抗Aβ抗体清除Aβ寡聚体后神经退行性变依然存在,而这种退行性变可能由p38 MAPK通路激活引起的免疫炎症介导。     

H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞继发性氧化应激反应的分子机制

目的探讨过氧化氢(H_2O_2)对诱导SH-SY5Y细胞继发性氧化应激反应的分子机制。方法正常培养的SH-SY5Y细胞,分别用不同浓度H_2O_2(0、200、400、600μmol/L)处理24 h,以0μmol/L组为正常对照组。各组处理完毕后提取细胞总蛋白。Western印迹检测p-P38、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)1等蛋白的表达水平。结果与正常对照组相比,高、中、低剂量H_2O_2处理组p-P38蛋白的表达水平随H_2O_2浓度增高呈剂量依赖性增加(P<0.01);SOD1蛋白的表达水平随H_2O_2浓度增高呈剂量依赖性增加(P<0.01);而CAT蛋白的表达水平随H_2O_2浓度增加呈剂量依赖性降低(P<0.01)。结论 H_2O_2通过诱导SH-SY5Y细胞内P38的磷酸化增强,激活P38/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,引起SOD1蛋白表达增强,CAT蛋白表达抑制,导致细胞内源性H_2O_2产生过多,而不能被及时彻底清除,从而引起神经元继发性氧化应激反应。     

雌二醇对冈田酸诱导的SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化的影响

目的研究雌二醇(E2)对冈田酸(OA)诱导的人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化的影响。方法 MTT法观察OA对SH-SY5Y细胞活力的影响,制备阿尔茨海默病(AD)时tau蛋白过度磷酸化细胞模型;Western印迹检测OA及各浓度E2对Thr231位点tau蛋白磷酸化的影响。结果 MTT结果显示:当OA浓度大于40 nmol/L时,细胞活力受到明显的抑制,且随着OA浓度的增加而增强,而低于此浓度的OA对细胞活力没有明显的影响;Western印迹检测结果显示:SH-SY5Y细胞经40 nmol/L OA处理后,tau蛋白磷酸化的水平明显增加,而这种作用可被不同浓度的E2所抑制。结论 E2抑制了OA处理细胞的tau蛋白磷酸化水平。     

过表达parkin基因对蛋白酶体抑制剂致SH-SY5Y细胞损伤的影响

目的探讨过表达parkin基因能否抵抗蛋白酶体抑制剂lactacystin对SH-SY5Y细胞的特异性损伤。方法不同浓度的lactacystin(1、5、10、15、20μmol/L)分别作用于人多巴胺能SH-SY5Y细胞和人胶质瘤U251细胞24 h,用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)法检测细胞活力。选取10μmol/L和20μmol/L lactacystin处理SH-SY5Y细胞,Western印迹法检测细胞内多泛素化蛋白的含量。瞬时转染parkin至SH-SY5Y细胞,并以MTT法检测10μmol/L和20μmol/L lactacystin作用下的细胞活力,Western印迹法检测细胞内多泛素化蛋白的含量,以及用免疫荧光法检测泛素阳性包涵体的形成。结果lactacystin呈剂量依赖性地损伤多巴胺能SH-SY5Y细胞(细胞活力分别为104%、82%、72%、60%、50%),而对胶质瘤U251细胞则无毒性作用。parkin过表达不能缓解lactacystin的毒性作用,也没有增加细胞内多泛素化蛋白生成,但却促进泛素阳性包涵体的形成(增加5%)。结论蛋白酶体功能障碍有可能在多巴胺能神经元的选择性死亡中起关键作用,而Parkin蛋白在路易小体的形成过程中可能起重要作用。