肝纤维化大鼠肝细胞内质网形态及GRP78表达的研究

目的: 观察四氯化碳(CCl₄)致大鼠肝纤维化过程中内质网形态及内质网应激标志性蛋白——葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化, 探讨内质网应激在肝纤维化发病机制中可能的作用。方法: 雄性Wistar大鼠皮下注射CCl₄制备肝纤维化模型,分别在4周及8周处死大鼠测定肝脏指数、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性, 观察肝组织病理改变和肝细胞内质网形态, 免疫组化和real-time PCR分别检测肝组织GRP78蛋白及mRNA表达变化。结果: 肝纤维化组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性显著高于正常对照组(P<0.01),肝纤维化明显, 电镜下见肝细胞内质网扩张,数量明显减少; 肝细胞胞浆中GRP78蛋白表达量及mRNA表达量较正常组显著增加(P<0.01)。结论: 在CCl₄诱导的肝纤维化发生过程中肝细胞内质网形态有明显损伤性变化, 内质网应激蛋白GRP78蛋白及基因表达水平明显增加, 提示内质网应激参与肝纤维化发生发展。     

葡萄糖调节蛋白78促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其机制

 目的： 探讨葡萄糖调节蛋白78/免疫球蛋白重链结合蛋白(GRP78/BiP)是否促进肝硬化大鼠心肌细胞凋亡及其发生机制。方法： 采用复合致病因素法建立肝硬化大鼠模型,在4周、6周和8周分别取材。实验1：取心脏称重并测量左室壁厚度,计算左室壁厚度与心脏重量比值及心脏指数。实验2： TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况;免疫组化方法检测心肌组织中GRP78/BiP蛋白以及凋亡相关蛋白CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白/生长停滞及DNA诱导蛋白153（CHOP/GADD153）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（caspase-12）、核转录因子κB p65（NF-κB p65）、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白2（Bcl-2）的表达。结果： 随肝硬化病程进展,左室壁厚度与心脏重量比值以及心脏指数逐渐增加,8周组增加显著(P<0.05);心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153和caspase-12阳性蛋白表达指数逐渐升高,8周组差异显著(P<0.05);NF-κB p65和Bcl-2阳性蛋白表达指数呈一致性变化,在4周组较其它组明显增高(P<0.05); GRP78/BiP蛋白阳性表达指数与心肌细胞凋亡指数、CHOP/GADD153、caspase-12蛋白阳性表达指数呈显著正相关,CHOP/GADD153与NF-κB p65、Bcl-2蛋白阳性表达指数呈显著负相关。结论： GRP78高表达在内质网应激介导的肝硬化心肌病发病中可能发挥重要作用。     

内质网应激对微囊化HepG2细胞脂代谢影响及调控研究

研究内质网应激发生对微囊化细胞脂代谢调节的影响,探讨内质网应激拮抗剂对微囊化细胞生长代谢调控的可行性.采用静电液滴法制备微囊化细胞,Real-time PCR法检测微囊化对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达影响;通过MTT法检测细胞活性,ELISA法检测白蛋白含量,乙烷-丙酮法抽提测定胞内总胆固醇和甘油三酯含量,并比较拮抗剂四苯基丁酸(4-PBA)干预后相关指标变化.结果显示,微囊细胞中内质网应激标识蛋白GRP78和CHOP表达量分别为同天数下平面细胞3.6倍和1.9倍(P＜0.05),胞内总胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)含量分别为平面细胞1.7倍和3.2倍(P＜0.05).内质网应激拮抗剂4-PBA在1.0 mM可显著增加微囊化细胞活性.干预后GRP78和CHOP基因表达水平降低50％和30％ (P ＜0.05),胞内CHO和TG含量降低30％和15％ (P ＜0.05),并使白蛋白水平较对照组显著提高(P＜0.05).结果提示微囊内存在内质网应激,且与微囊细胞脂代谢失调有关;内质网应激拮抗剂能缓解微囊对细胞的以上作用.     

吸烟COPD模型大鼠肺组织内质网相关凋亡蛋白CHOP的表达

目的:研究吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的情况。方法:40只成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、吸烟2个月组、吸烟4个月组及戒烟组。采用单纯被动吸烟法复制大鼠COPD模型,测各组大鼠0.3秒用力呼气容积与用力肺活量比(FEV0.3/FVC)和最高峰值流速(PEF);采用TUNEL法检测肺结构细胞凋亡情况;采用原位杂交和RT-PCR检测肺组织CHOP的mRNA表达水平;免疫组化和Western blot检测其蛋白质水平;同时采用Western blot检测蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、p-PERK、真核生物起始因子(e IF)2α和p-e IF2α的蛋白水平。结果:大鼠吸烟2个月后,肺功能较对照组明显下降(P0.05),肺结构细胞凋亡明显增加,凋亡细胞主要是肺泡上皮细胞、血管内皮细胞和支气管上皮细胞,肺结构出现破坏;吸烟4个月后,FEV0.3/FVC显著下降(P0.05),肺结构凋亡细胞进一步增加,肺结构破坏明显;戒烟组肺功能较4个月组稍好转,肺结构破坏仍明显。与对照组相比,p-PERK、p-e IF2α和CHOP表达在吸烟2个月大鼠中升高(P0.05),在吸烟4个月大鼠中进一步升高(P0.05);戒烟组大鼠CHOP较吸烟4个月大鼠稍下降但差异无统计学意义;PERK和e IF2α在各组大鼠中表达的差异无统计学显著性。肺结构细胞凋亡与CHOP表达呈正相关;结论:吸烟可通过PERK/e IF2α/CHOP信号通路促进CHOP表达,从而促进COPD的发生与发展。     

单侧输尿管梗阻的大鼠内质网应激相关蛋白表达上调

目的探究内质网应激(ERS)相关凋亡通路在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化中的作用机制。方法将大鼠随机分为假手术组及UUO模型组,UUO组行左侧输尿管结扎术,于术后3、7和14 d HE和Masson染色观察肾脏病理变化;眼底静脉丛取血,分离血清测定血尿素氮及肌酐;Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网源性转录因子(CHOP)、凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及caspase-12蛋白表达。结果与假手术组相比,UUO模型组可见:1)肾小管扩张和肾间质纤维化程度随输尿管梗阻时间延长而渐进性加重;2)GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-12蛋白表达在术后3 d均有上调,随着梗阻时间延长,上述蛋白表达更显著(P0.01)。结论内质网应激相关标志性蛋白在UUO大鼠肾间质纤维化的早期即存在表达上调,可能促进了肾间质纤维化不断进展。     

四氯化碳诱导性肝硬化大鼠肝组织葡萄糖调节蛋白78表达的研究

目的研究四氯化碳(CCl4)诱导性肝硬化大鼠肝组织内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的变化。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和肝硬化组(n=5),对照组皮下注射植物油0.12ml/100g体重,肝硬化组以0.3ml/100g体重皮下注射60%CCl4植物油。在实验第21周的第1d杀死鼠,右心室取血检测肝功能指标。鼠肝中叶取材,石蜡切片行苏木精-伊红(HE)染色和天狼猩红组织化学染色,光镜观察形态学改变,行GRP78免疫组织化学显色,无菌下取肝组织行Western blotting及RT-PCR检测肝组织GRP78的表达。结果肝硬化组的血清ALT含量(278.2±88.42)明显高于对照组(154.8±9.94,t=3.10,P<0.05);ALB含量(1.68±0.62)明显低于对照组(3.02±1.96,t=2.62,P<0.05)。对照组肝小叶结构和肝细胞状态正常,仅在中央静脉及汇管区可见少量胶原纤维。20周肝硬化组的肝细胞脂肪变性明显,胶原纤维大量增生,假小叶形成。GRP78免疫组织化学呈色显示,肝硬化组肝组织中阳性细胞数明显多于对照组,棕黄色着色定位于细胞质中。Western blotting和RT-PCR显示肝硬化组肝组织GRP78的表达明显增强。结论在CCl4诱导性肝硬化的肝组织中,GRP78表达明显增强,这可能与肝细胞的内质网应激有关。     

β_1-肾上腺素受体自身抗体通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡

目的:探讨内质网应激在β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)引起心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用β_1-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段主动免疫大鼠,应用SA-ELISA法检测大鼠血清中β_1-AA的水平,TUNEL染色检测心肌组织的凋亡水平,Western blot法和免疫组化法检测心肌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12的蛋白表达。利用亲和层析法纯化的β_1-AA处理H9c2心肌细胞,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡;采用内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理H9c2心肌细胞,再给予β_1-AA干预,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡的变化情况。结果:与对照组相比,主动免疫大鼠血清中β_1-AA水平在免疫2周时显著增加,进一步增加至8周,并且主动免疫2周大鼠心肌组织凋亡率明显升高,持续升高至8周。与对照组相比,主动免疫大鼠心肌组织中GRP78、CHOP及caspase-12的蛋白表达在免疫4周和8周时均明显增加。β_1-AA引起H9c2心肌细胞活力持续降低,凋亡明显增加。与β_1-AA单独处理组相比,内质网应激抑制剂4-PBA预处理H9c2心肌细胞可以有效逆转β_1-AA诱导的细胞凋亡增加和活力下降。结论:β_1-AA可以通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡。     

内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78及增强子结合蛋白同源蛋白在高血压大鼠全脑缺血海马区的表达变化

目的:观察血压正常大鼠和高血压大鼠全脑缺血再灌注后海马区CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达变化,探讨内质网应激在高血压增加脑缺血再灌注神经易损性中的作用.方法:60只雄性血压正常Wistar-Kyoto(WKY)大鼠随机分为假手术组(Sham)和全脑缺血再灌注组(I/R);另取30只雄性自发性高血压大鼠为高血压全脑缺血再灌注组(SHR+I/R).应用改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注模型.各组分别在术后6、24、48 h,H-E染色观察海马区神经细胞形态变化;免疫组织化学和免疫印迹检测海马区CHOP、GRP78的表达;48 h八臂迷宫检测动物行为学变化.结果:与Sham组比较,I/R组各时间点存活神经元数量降低;GRP78表达增高,24 h达高峰;CHOP表达增高,24 h达高峰,高表达持续至48 h;与I/R组比较,SHR+ IR组各时间点存活神经细胞数量降低;GPR78表达6h增高,24、48h显著减少;6、24 h CHOP表达增高,48 h明显减少;八臂迷宫结果显示SHR+I/R组与I/R组比较,各检测指标变化差异有统计学意义.结论:高血压可增加脑缺血再灌注神经易损性,与加重缺血再灌注后GRP78表达下降、CHOP活体表达增高有关.     

氨氯地平减轻腹主动脉缩窄性高血压大鼠心肌内质网应激

目的观察高血压大鼠心肌组织葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达,探讨氨氯地平与内质网应激高血压大鼠心室肥厚的关系。方法将SD大鼠随机分为假手术组、腹主动脉缩窄术(AAB)组和氨氯地平干预(AAB+Aml)组,每组40只。给予氨氯地平10 mg/(kg·d)。随机分为2、4和8周3个亚组,测定平均动脉压(MAP);计算左心室质量/体质量(LVM/BW);HE染色观察心肌细胞的形态;免疫组化及Western blot检测心肌组织GRP94和CHOP的表达。结果随着术后时间的延长,AAB组MAP逐渐升高,明显高于假手术组[2周(144±10)比(118±9)、4周(163±8)比(120±7)、8周(177±10)比(120±6)mm Hg](P<0.05);AAB组LVM/BW显著高于假手术组[2周(2.21±0.17)比(1.91±0.12)、4周(2.45±0.16)比(2.01±0.14)、8周(2.68±0.15)比(2.05±0.09)mg/g](P<0.05);AAB组心肌细胞较假手术组明显肥大;术后2周AAB组心肌组织GRP94明显表达,4周达最高值,8周减低;AAB组GRP94表达量高于假手术组(P<0.05);随术后时间的延长,CHOP蛋白含量逐渐增加,8周达最高值。使用氨氯地平后,AAB+Aml组较AAB组MAP降低[2周(126±6)比(144±10)、4周(125±8)比(163±8)、8周(128±5)比(177±10)mm Hg](P<0.05);使用氨氯地平后,AAB+Aml组较AAB组LVM/BW降低[2周(2.21±0.17)比(1.94±0.15)、4周(2.45±0.16)比(2.13±0.08)、8周(2.68±0.15)比(2.18±0.10)mg/g](P<0.05);使用氨氯地平后AAB+Aml组较AAB组心肌细胞肥大程度减低。AAB+Aml组心肌组织GRP94及CHOP表达量低于AAB组(P<0.05)。结论氨氯地平可能通过减弱高血压触发的内质网应激而保护心肌细胞及减弱心室肥厚。     

肝纤维化大鼠肝脏中内质网应激相关分子CHOP和TRB3的表达变化

 目的： 观察内质网应激相关分子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP）和Tribbles同源蛋白3（TRB3）在四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纤维化过程中的表达变化,探讨其在肝纤维化过程中的可能作用。方法： 体重180～200　g的雄性Wistar大鼠随机分为正常4周组、正常8周组、肝纤维化4周组和肝纤维化8周组,肝纤维化组大鼠皮下注射40%CCl4制备肝纤维化模型,分别在4周和8周处死大鼠,观察肝组织病理改变,Western blotting检测肝脏活化转录因子6（ATF6）蛋白,免疫组化、Western blotting和real-time PCR分别检测肝脏CHOP和TRB3蛋白和mRNA表达变化,TUNEL法检测肝脏细胞凋亡。结果： 肝纤维化组大鼠肝脏可见假小叶形成,p90ATF6蛋白表达量较正常组明显减少（P<0.01）,p50ATF6蛋白表达量较正常组明显增加（P<0.01）,肝细胞胞浆CHOP和TRB3蛋白及mRNA表达量较正常组显著增加（P<0.01）,细胞凋亡率较正常组显著增加（P<0.01）。结论： 内质网应激相关分子CHOP和TRB3在CCl4致大鼠肝纤维化过程中蛋白及mRNA表达水平明显增加,其变化趋势与大鼠肝细胞凋亡率一致,提示内质网应激可能通过CHOP和TRB3促进肝细胞凋亡,参与肝纤维化发生发展。     

内质网分子伴侣GRP78在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达变化

目的观察在大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)过程中内质网分子伴侣GRP78的表达变化,并探讨其意义。方法健康成年Wistar大鼠55只,随机分为两组:(1)脊髓压迫缺血再灌注组50只,每个时间点10只,采用自制压迫装置制备脊髓压迫缺血再灌注模型;(2)假手术对照组5只,只做全椎板切除不做脊髓压迫。用免疫组化、West-ernblot和TUNEL等方法,分别于缺血再灌注后30min、3、7、11和23h,检测压迫段脊髓组织中GRP78的表达变化及细胞凋亡情况。结果再灌注30min后,GRP78在压迫段脊髓开始表达上调,7h达峰值,11h表达回落,23h显著减少。TUNEL染色显示,神经细胞的凋亡指数随着再灌注时间的延长而升高。结论GRP78在脊髓缺血再灌注损伤中呈现时序性的表达变化,这可能是脊髓内源性保护机制之一。     

不同+Gz重复持续暴露对大鼠肝脏组织损伤及GRP78的表达影响

目的探讨不同正加速度(+Gz)暴露下大鼠肝脏损伤及葡萄糖调节蛋白78(GRP78/Bip)在肝脏组织内分布和表达的变化。方法将SD大鼠24只,随机分为对照、+6Gz、+9Gz和+12Gz组,每组6只,峰值作用时间3 min,加速度增长率0.5 G/s,间隔30 min,重复间断连续5次。HE染色观察肝组织,并测定血浆天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT),用免疫组化法和Western blot测定肝脏组织中GRP78的表达。结果与对照组相比,+9Gz组、+12Gz组转氨酶水平均显著升高;且在ALT水平上,+12Gz组高于+9Gz组(P0.05);HE染色显示正加速度组肝细胞排列紊乱,形态不规则,细胞间隙不清晰,空泡样改变,且随G值增长而加重。与对照组相比,GRP78/Bip表达分布主要集中在细胞胞质内;各实验组的GRP78表达均显著升高(P0.05)。且+12Gz组明显高于+6Gz组和对照组(P0.05),肝脏组织中GRP78/Bip蛋白表达水平随G值升高而升高;+12Gz组和+9Gz组都高于+6Gz组和对照组(P0.05)。结论 GRP78/Bip的表达可能在加速度引起的肝脏应激反应有着正相关的作用。     

GRP78 counteracts cell death and protein aggregation caused by mutant huntingtin proteins

The ER-localized chaperone glucose-regulated protein (GRP78) protects neurons against excitotoxicity and apoptosis. Here we show that overexpressing GRP78 protects N2a cells against mutant huntingtin proteins, reduces formation of mutant huntingtin aggregates, inhibits caspase-12 activation and blocks cell death. Our data suggest that GRP78 may be a promising therapeutic target for the treatment of Huntington's disease.     

Hydroxytyrosol and olive leaf extract exert cardioprotective effects by inhibiting GRP78 and CHOP expression

Myocardial infarction triggers massive biochemical changes, even cardiac cell death. Endoplasmic reticulum stress is involved in the pathology of myocardial infarction-mediated apoptosis. In the present study, myocardial cell line H9c2 cells were treated with cobalt chloride (CoCl2) to induce hypoxia. Isoproterenol was used for two successive days to induce myocardial infarction in SD rats. The cardioprotective effect of olive leaf extract (OLE) and its main constituent hydroxytyrosol and the underlying mechanisms were evaluated. The results showed that hydroxytyrosol markedly protected H9c2 cells against CoCl2-induced apoptosis. Hydroxytyrosol could reduce the mRNA and protein expression of GRP78 and CHOP induced by CoCl2 in vitro. In vivo, the decreased ejection fraction and fractional shortening, increased heart weight/body ratio, the formation of infarction, disordered cardiac muscle fibers and infiltration of inflammatory cells induced by isoproterenol could be significantly ameliorated by pretreatment with OLE for a month. Similarly, OLE could also reverse the increase of GRP78 and CHOP expression induced by isoproterenol. Therefore, OLE and hydroxytyrosol exert a cardioprotective effect through endoplasmic reticulum stress, which could be a new target for the prevention and treatment of cardiovascular diseases.     

沉默CHOP基因降低衣霉素诱导的小鼠肝癌Hepa 1-6细胞凋亡

目的构建有效针对小鼠C/EBP同源蛋白(CHOP)的shRNA真核表达载体,基因沉默后对Hepa 1-6细胞凋亡的影响。方法设计合成针对CHOP的shRNA靶序列及无同源性的shRNA序列作为阴性对照,退火后重组入p LKO.1-TRC载体,转化扩增后进行快速双酶切鉴定;慢病毒包装法转染293T细胞获得的病毒上清转染Hepa 1-6细胞,用含嘌呤霉素的培养基连续筛选10获得稳定株,Western blot检测Caspase9和c-PARP蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期。结果各shRNA载体构建成功;与阴性对照组相比,sh CHOP组能显著抑制CHOP蛋白的表达(P0.05);且CHOP基因沉默后明显降低了衣霉素诱导的细胞凋亡(P0.05)。结论 CHOP基因沉默能减缓衣霉素诱导内质网应激产生的Hepa 1-6细胞凋亡。     

Increased expression of 78 kD glucose-regulated protein promotes cardiomyocyte apoptosis in a rat model of liver cirrhosis

Aims: This study was to investigate the role and underlying mechanism of 78 kD glucose-regulated protein (GRP78) in cardiomyocyte apoptosis in a rat model of liver cirrhosis. Methods: A rat model of liver cirrhosis was established with multiple pathogenic factors. A total of 42 male SD rats were randomly divided into the liver cirrhosis group and control group. Cardiac structure analysis was performed to assess alterations in cardiac structure. Cardiomyocytes apoptosis was detected by TdT-mediated dUTP nick end labeling method. Expression of GRP78, CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein (CHOP), caspase-12, nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells p65 subunit (NF-κB p65) and B cell lymphoma-2 (Bcl-2) was detected by immunohistochemical staining. Results: The ratios of left ventricular wall thickness to heart weight and heart weight to body weight were significantly increased with the progression of liver cirrhosis (P < 0.05). Apoptosis index of cardiomyocytes was significantly increased with the progression of liver cirrhosis (P < 0.05). The expression levels of GRP78, CHOP and caspase-12 were significantly increased in the progression of liver cirrhosis (P < 0.05). The expression levels of NF-κB p65 and Bcl-2 were highest in the 4-wk liver cirrhosis, and they were decreased in the 6-wk and 8-wk in the progression of liver cirrhosis. GRP78 expression levels were positively correlated with apoptosis index, CHOP and caspase-12 expression levels (P < 0.05). CHOP expression levels were negatively correlated with NF-κB p65 and Bcl-2 expression levels (P < 0.05). Conclusion: Increased expression of GRP78 promotes cardiomyocyte apoptosis in rats with cirrhotic cardiomyopathy.     

PI3K/Akt信号通路及内质网应激在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的作用

目的观察磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长停滞及DNA损伤基因(CHOP/GADD153)在四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化中的表达并探讨其可能的作用。方法将30只SD大鼠随机分为正常组、肝纤维化模型(皮下注射40%CCl4橄榄油溶液)4及8周组。HE染色法观察肝组织病理形态学;用real-time PCR技术检测肝脏内GRP78及CHOP mRNA的表达;用Western blot检测肝脏内PI3K/Akt信号通路中Akt1、磷酸化Akt1及内质网应激相关蛋白GRP78及CHOP的表达;用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测细胞凋亡。结果与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝脏内GRP78及CHOP mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05),而肝脏内Akt1和磷酸化Akt1蛋白的表达则较正常大鼠显著降低(P0.05);与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝细胞凋亡显著升高(P0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路及内质网应激可能在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中发挥了重要作用。     

GRP78 and CHOP modulate macrophage apoptosis and the development of bleomycin‐induced pulmonary fibrosis

Endoplasmic reticulum (ER) stress and the unfolded protein response (UPR) have been associated with fibrotic lung disease, although exactly how they modulate this process remains unclear. Here we investigated the role of GRP78, the main UPR regulator, in an experimental model of lung injury and fibrosis. Grp78^+/?, Chop^?/? and wild type C57BL6/J mice were exposed to bleomycin by oropharyngeal intubation and lungs were examined at days 7 and 21. We demonstrate here that Grp78^+/? mice were strongly protected from bleomycin‐induced fibrosis, as shown by immunohistochemical analysis, collagen content and lung function measurements. In the inflammatory phase of this model, a reduced number of lung macrophages associated with an increased number of TUNEL‐positive cells were observed in Grp78^+/? mice. Dual immunohistochemical and in situ hybridization experiments showed that the macrophage population from the protected Grp78^+/? mice was also strongly positive for cleaved caspase‐3 and Chop mRNA, respectively. In contrast, the administration of bleomycin to Chop^?/? mice resulted in increased quasi‐static elastance and extracellular matrix deposition associated with an increased number of parenchymal arginase‐1‐positive macrophages that were negative for cleaved caspase‐3. The data presented indicate that the UPR is activated in fibrotic lung tissue and strongly localized to macrophages. GRP78‐ and CHOP‐mediated macrophage apoptosis was found to protect against bleomycin‐induced fibrosis. Overall, we demonstrate here that the fibrotic response to bleomycin is dependent on GRP78‐mediated events and provides evidence that macrophage polarization and apoptosis may play a role in this process. Copyright © 2016 Pathological Society of Great Britain and Ireland. Published by John Wiley & Sons, Ltd.     

小肠缺血时间与GRP78表达的相关性研究及意义

目的 研究不同缺血时间下小肠组织细胞凋亡程度与GRP78表达量之间的关系。 方法 选用4周龄雌性SD大鼠,随机分为对照组,损伤组（缺血20、40、60、80和100 min）,于再灌注6 h后处死,检测血清中DAO的表达水平,取小肠组织检测细胞凋亡情况以及GRP78表达情况,并观察大鼠两周内的存活情况。 结果 与对照组相比,损伤组GRP78的表达量随着缺血时间的延长逐渐升高,在80 min时达到峰值;与损伤组缺血80 min时相比,在100 min时GRP78 mRNA表达水平显著下降;与损伤组缺血80 min时相比,在100 min时GRP78蛋白表达水平略有下降;与对照组相比损伤组随着缺血时间的增加,细胞凋亡程度逐渐增加;与对照组相比,缺血时间越长大鼠的两周存活率越低。 结论 随着缺血时间的延长,大鼠小肠组织细胞绒毛层及粘膜层的细胞凋亡程度逐渐增加;在80 min之前随着大鼠小肠缺血时间的延长,GRP78表达水平逐渐升高,100 min时虽然小肠组织损伤程度较80 min时增大,但GRP78表达水平较80 min时降低,GRP78的表达水平与不同缺血时间小肠组织细胞凋亡程度密切相关。