RNA干涉(RNAi)及其应用

基因沉默（gene silencing）是指生物体内的特定基因由于种种原因不表达的遗传现象,它有两方面的功能：一方面,它是生物遗传操作创造新的遗传修饰生物（genetically modified organisms）的障碍;另一方面,它是植物抵御外来核酸入侵（如病毒）的一种反应,为植物抗病毒的遗传育种提供了具有实用价值的策略。近年来,不同的研究领域和生物中发现了许多新的使基因关闭或者沉默的类型,并赋予其不同的名称：植物中称为RNA共抑制（co-suppression）,真菌中叫RNA压制（RNA quelling）,动物中则为RNA干涉（RNA interference,RNAi）。     

人类基因组多样性(HGD)与人类基因组多样性计划(HGDP)(2) 小核糖核酸(miero-RNA)和RNA干扰(RNAi)

micro -RNA和RNAi被美国Science《科学》杂志和英国Nature《自然》杂志评为 2 0 0 2年度重要的科技成果的首位 ,是RNA研究的突破性进展 .是生物医学领域近 2 0年来与HGP相提并论的最重大成果之一 .micro -RNA和RNAi主要特点是调节和关闭基因的表达 ,删除一些不需要的基因 .继而调控细胞的各种高级生命活动 .在细胞分裂过程中也能发挥重要的控制作用 ,引导染色体中的物质形成正确的结构 ,推动基因组结构与功能的研究 ,为研制治疗癌症等由基因错误所致疾病提供新方法、新药物 .     

RNA干扰技术(RNAi)在医学上的应用研究

RNA干涉是指短的dsRNA可以降解内源的同源RNA，而使相应基因沉默的现象，简称RNAi。RNAi的研究有着非常重要的意义，它可能被应用在功能基因组研究、作物的品种改良、基因治疗及其他的很多领域里。RNAi，作为一种调控特定基因表达的手段，被称为基因组的免疫现象，已成为当前生物医学领域的研究热点之一。本文就RNAi技术在生物医学领域的研究情况作一个简要综述。     

RNA干扰技术(RNAi)在疾病治疗中的应用前景

简述了RNAi在疾病治疗中的应．用前景：包括神经疾病的治疗[例如：应用于亨丁顿舞蹈症（Huntington’s disease）和脊髓性小脑萎缩症（SCA）等遗传性疾病中，应用于抑制突变型超氧化物歧化酶（SOD1）延迟肌萎缩侧索硬化症（ALS）]、癌症治疗（例如：治疗子宫颈癌和乳腺癌；抑制端粒酶生产）、SARS治疗。     

小分子干扰RNA(siRNA)表达载体沉默靶基因的研究

目的研究siRNA表达载体在体外培养细胞中对目的基因的干扰作用,建立利用RNA干扰技术研究基因功能的平台。方法构建针对β-actin基因的表达siRNA载体,转染HeLa细胞,然后在mRNA水平、蛋白水平和细胞形态水平评价siRNA表达载体对β-actin基因表达的抑制作用。结果siRNA表达载体可以有效的抑制体外培养细胞β-actin基因的表达,使β-actin基因的mRNA和蛋白表达量显著下降,细胞形态发生显著变化。结论siRNA表达载体可以在体外培养细胞中有效的沉默β-actin基因,为研究基因功能提供了一个快速、有效的系统。     

RNase Ⅲ制备的小分子干扰RNA(esiRNA)文库构建及优势分析

目的 建立KIF4A核糖核酸内切酶Ⅲ酶切制备的小分子干扰RNA(esiRNA)文库,并探讨这种新型siRNA制备方法的优势.方法 制备502 bp的KIF4A基因组序列作为转录模板;体外转录获得双链RNA;用核糖核酸内切酶ⅢGST融合蛋白(GST-RNaseⅢ)酶切双链RNA,制备KIF4A esiRNA文库;应用KIF4A esiRNA和化学合成的KIF4A siRNA转染胃癌细胞株SGC-7901,应用Q-RT PCR和WesternBlot分别检测KIF4A的mRNA和蛋白水平.结果 利用GST-RNaseⅢ成功制备了KIF4A esiRNA文库,该文库可有效抑制SGC-7901细胞内的KIF4A表达,且抑制效果明显优于化学合成的KIF4A siRNA.结论 用生物学方法制备的KIF4A esiRNA文库可有效抑制KIF4A在细胞内的表达,且抑制效果优于化学合成的siRNA.     

国产新型抗炎药物萘普酮对大鼠肝脾核糖核酸(RNA)及脱氧核糖核酸(DNA)含量的影响

由于同种动物相同的器官体细胞中的DNA含量相对恒定,损伤DNA的药物可能影响细胞中的DNA合成速度(修复速度)及含量。RNA在体细胞中的含量与细胞的功能和活动状态有密切关系,对蛋白质合成有重要影响。因此观察药物作用后器官中的DNA及RNA含     

微小核糖核酸病素(Picornaviruses)与疾病

微小核糖核酸病毒包括一大类最微小的RNA病毒.引起人类疾病的的微小核糖核酸病毒主要有4属肠道病毒(enteroviruses)、鼻病毒(rhinoviruses)、嗜肝病毒(hepatovirus)和标准ECHO病毒(parechoviruses).肠道病毒寄居于人体消化道,能从咽喉或下部肠道分离到.鼻病毒主要从鼻腔和咽喉分离.微小核糖核酸病毒能引起人类的疾病病种很多,累及的器官脏器很多,包括麻痹症、无菌性脑膜炎、流行性胸痛、多发性肌炎、心肌炎、呼吸道感染、眼结膜炎和严重的全身性疾病等.     

RNA干预与microRNA

RNA干预(RNA-mediated interference，RNAi)已逐渐成为基因功能研究的重要工具。RNAi主要通过双链RNA的介导，特异性地降解相应序列的靶mRNA，从而阻断相应基因表达的转录后水平的基因沉默(gene silencing)。microRNAs(miRNAs)是近年才研究发现的一类新型的小分子RNAs。随着对miRNAs进一步研究，表明miRNAs具有组织特异性，并在生物生长发育阶段中起到重要的调控作用，但具体机制还在进一步研究中。随着对microRNAs功能及RNAi作用机理的深入研究，人们期望在不久的将来能从基因水平上控制人类疾病的发生发展。     

RNA干预与microRNA

RNA干预 (RNA mediatedinterference,RNAi)已逐渐成为基因功能研究的重要工具。RNAi主要通过双链RNA的介导 ,特异性地降解相应序列的靶mRNA ,从而阻断相应基因表达的转录后水平的基因沉默 (genesilencing)。microRNAs(miRNAs)是近年才研究发现的一类新型的小分子RNAs。随着对miRNAs进一步研究 ,表明miRNAs具有组织特异性 ,并在生物生长发育阶段中起到重要的调控作用 ,但具体机制还在进一步研究中。随着对microRNAs功能及RNAi作用机理的深入研究 ,人们期望在不久的将来能从基因水平上控制人类疾病的发生发展     

耐核糖核酸酶内含HCV RNA病毒样颗粒的表达

目的 构建可以表达耐核糖核酸酶(RNase)的内含HCV RNA病毒样颗粒的载体质粒。方法 将表达载体pI NCCL用Hind Ⅲ酶切后，与用相同内切酶酶切的HCV RNA非编码区(5′-UTR)扩增产物，在T4 DNA连接酶的存在下连接，构建一新的表达载体pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR，再转化BL21-DE3 E．coli进行原核表达。结果 成功构建得到了新的表达载体pI NCCL-HCV RNA5′-UTR，经原核表达为耐RNase的内含HCV RNA病毒样颗粒。结论 得到的pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR表达载体及原核表达系统，可作为一个耐RNase的HCV RNA标准品和质控品的构建和制备表达载体平台。     

携带DREAM基因小分子干扰RNA重组质粒的构建

背景：DREAM是一种多功能蛋白,在细胞中不同位置与不同靶蛋白结合,体外细胞培养和动物实验均证明DREAM参与了许多疾病的发病机制。 目的：构建携带DREAM基因的小分子干扰RNA重组质粒。 方法：设计并合成shRNA对应的两条互补的寡核苷酸链,pDC316-EGFP-U6质粒经BamHⅠ和HindⅢ双酶切与退火后的寡核苷酸连接,转化感受态E.coli DH5α,获得阳性克隆进行PCR和测序鉴定。 结果与结论：经PCR、酶切及测序证实,重组质粒pDC316-EGFP-DREAM-shRNA-U6片段大小为473 bp,其中插入的片断序列和位点与预期完全一致,说明pDC316-EGFP-DREAM-shRNA-U6重组质粒构建成功。     

小分子干扰RNA对新生鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1的干预效果及意义

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)小分子干扰RNA(siRNA)体外转染新牛鼠肺成纤维细胞的干预效果,研究TGF-β1 siRNA的最佳干预剂量及维持时间. 方法 首先采用化学合成TGF-β1 siRNA对新生鼠肺成纤维细胞进行干预,通过实时定量PCR检测技术筛选出有效干扰片段;然后构建TGF-β1 siRNA腺病毒载体,体外转染新生鼠肺成纤维细胞,半定量PCR检测体外转染后TGF-β1基因的抑制效果,确定其最佳干预剂量及维持时间. 结果 (1)化学合成siRNA抑制TGF-β1基因表达的效果:siRNA剂量为20 pmol,转染后24 h检测抑制效果,第2、3、4条siRNA均有不同效果,其中第3条siRNA抑制效率>70%;(2)TGF-β1 siRNA腺病毒载体转染细胞,观察20、50μl不同剂量转染后24 h抑制情况,并与20μl阴性和空白对照比较,结果显示20、50μl均有明显抑制效果;观察转染后24、48、72 h的抑制效果,比较显示转染后24 h有明显抑制效果,72 h抑制效果最强,说明随着转染时间延长,抑制作用越明显. 结论 TGF-β1 siRNA腺病毒载体体外转染新生鼠肺成纤维细胞对TGF-β1的表达均有明显抑制效果.     

miRNA、RNAi和siRNA

最近，上述3个词很热闹。对此有些人还不是太明白。就笔者所理解，将它尽可能简洁地讲清楚，供大家参考。     

U族小分子细胞核RNA沉淀抗体谱的检测及其临床意义

本文应用免疫沉淀技术,通过对15例混合性结缔组织病(MCTD)及23例抗Sm和(或)抗RNP阳性的系统性红斑狼疮(SLE)患者血清的RNR沉淀抗体谱的检测,观察到单一U_1RNA的沉淀抗体存在于66.7％MCTD患者,而82.6％抗Sm阳性的SLE患者血清能沉淀U_1,U_2,U_4,U_5和U_6RNA,因此根据U族RNA的沉淀抗体谱特征有助于SLE与MCTD的诊断与鉴别诊断。     

分析信息核糖核酸(mRNA)决定α-地贫的表现型

目前对各种不同人群中α-地中海贫血(以下称地贫)的分子基础了解得并不完全清楚,关于α-地贫基因型亦缺乏正确的,可重复的诊断标准。血液学检查及血红蛋白合成研究可受各种因素(诸如缺铁等)的影响,使其结果难以解释。即使最近创建的限制性内切酶技术亦有一定的局限性,因为某些类型α-地贫具有完整的α-珠蛋白的基因。作者在本     

环状RNA(circRNA)与自身免疫性疾病

环状RNA(circRNA)是近几年研究的热门基因,它主要存在于真核生物体内,具有广泛、稳定且保守的特征,可以作为微小RNA(miRNA)的"分子海绵",或作为翻译模板编码蛋白质,这些特征使得circRNA成为疾病诊断、治疗及预后的理想的分子生物标志物。自身免疫性疾病中circRNA的研究尚处于初步阶段,大多数circRNA作用机制仍不清楚,在致病性T、 B淋巴细胞中筛选差异表达的circRNA、寻找其作用的靶基因是研究者们主要的研究方法之一。我们主要总结了circRNA的来源、功能、可能发挥的作用,以及目前在系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化、原发性胆汁性胆管炎等自身免疫性疾病中circRNA的研究现状。     

针对AKT2的小分子干扰RNA抑制胶质瘤细胞的增殖

目的比较靶向性丝/苏氨酸激酶2(AKT2)不同的小分子干扰RNA构建体对脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用.方法选择大鼠AKT2的3个siRNA靶序列构建靶向AKT2的siRNA表达质粒,进行对C6细胞的AKT2表达及增殖抑制的研究,蛋白印迹检测AKT2的表达水平,TUNEL法分析细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期变化,3H-TdR掺入法分析细胞增殖.结果转染siRNA表达质粒组AKT2表达下调72%、88%和91%.各转染组的凋亡率明显增加(x2=34.218,P＜0.001),转染后S期指数较对照细胞明显减少,转染组细胞自第2天起存活率均明显下降(P＜0.01),且各个转染组之间存活率也有极显著性差异(P＜0.01),以尾部调节结构域转染组最显著.结论靶向AKT2的siRNA表达质粒可以特异性地抑制AKT2的表达,显著抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡.