急性白血病患者多药耐药相关蛋白基因表达及临床意义

目的：研究急性白血病（ＡＬ）多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因表达与临床耐药的关系。方法：应用半定量逆转录－聚合酶链反应，检测了６５例ＡＬ患者骨髓和１５名正常人外周血单个核细胞中ＭＲＰ基因的表达。以ＭＲＰ／β２微球蛋白（β２Ｍ）评价ＭＲＰ的表达水平，将ＭＲＰ／β２Ｍ≥０．３表示为ＭＲＰ阳性。结果：复发难治组ＭＲＰ的平均表达水平及阳性率最高，与正常对照组、初治组、长期生存组的ＭＲＰ平均表达水平及阳性率相比均有显著差异（Ｐ＜０．０５），而长期生存组与正常对照组之间无统计学差异。初治组ＭＲＰ阳性病例与ＭＲＰ阴性病例的首次完全缓解率（分别为２５％和８４％）之间有显著差异。ＭＲＰ表达水平在ＦＡＢ各亚型间略有差异。同时检测了６５例ＡＬ患者ｍｄｒ－１基因的表达，发现临床耐药组ＭＲＰ和ｍｄｒ－１的平均表达水平及阳性率均明显高于临床非耐药组，ＭＲＰ和ｍｄｒ－１基因的表达水平之间无相关性（ｒｓ＝０．１６８３）。结论：ＭＲＰ基因过度表达可导致临床耐药，是预后的重要不利因素。     

白血病患者SHIP和其他相关基因表达及其临床意义

目的 观察含有SH2结构域的肌醇5位磷酸酶(SHIP)基因在急性白血病(AL)患者的表达,评价SHIP基因的改变在急性白血病和慢性粒细胞白血病(CML)发病中的作用以及对预后的影响.方法 以半定量逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测78例AL患者、18例CML患者SHIP、半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶3(casepase-3)的表达.结果 在初治的AL组中,SHIP的阳性率为69.6%,平均表达水平为0.167±0.121,其表达水平明显低于正常对照组.复发AL组中患者SHIP的表达阳性率为54.5%,平均表达水平为0.211±0.224,其表达水平明显低于正常对照组(P＜0.05),较初治AL组相比表达水平低,差异无统计学意义(P＞0.05).在缓解AL组中,SHIP的阳性率为95.2%,平均表达水平为0.851±0.591,与正常对照组(1.945±1.804)相比表达水平显著降低(P＜0.05);同时表达高于初治AL组(P＜0.05).半胱氨酸蛋白酶1和半胱氨酸蛋白酶3在AL mRNA的阳性率为分别为80.0%和100.0%,表达水平分别为1.785±1.168和1.887±0.838,低于正常对照组(3.345±1.284)和(5.122±2.025)(P＜0.05).CML慢性期SHIP的表达阳性率为100.0%,表达水平为0.951±0.921,低于正常对照组(1.945±1.804)(P＜0.05);CML急变期SHIP mRNA表达阳性率为71.4%,表达水平为0.278±0.191,低于正常对照组(P＜0.05);SHIP的表达水平在CML慢性期和急变期比较,差异有统计学意义.AL组SHIP阳性缓解率为71.0%,AL组SHIP阴性缓解率为23.1%(P＜0.05).AL组半胱氨酸蛋白酶1阳性缓解率为63.9%,AL组半胱氨酸蛋白酶阴性缓解率为25.0%(P＜0.05).运用直线相关分析表明在AL中半胱氨酸蛋白酶1、半胱氨酸蛋白酶3与SHIP的相关系数分别为r=0.372,r=0.437,P＜0.05,半胱氨酸蛋白酶1、半胱氨酸蛋白酶3与SHIP表达呈正相关.结论 SHIP在急性髓系白血病患者中低表达或不表达,动态观察SHIP mRNA的表达可作为预测急性髓细胞白血病(AML)疗效的一个指标.     

急性白血病患者SHP-1与c-kit基因表达及其临床意义

为了探讨造血细胞磷酸酶（SHP—1）基因和原癌基因c—kit在急性白血病（AL）患者中的表达及其与AL的发生及预后的关系，应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测60例急性白血病患者及33名正常对照者单个核细胞的SHP-1、c-kit mRNA的表达。结果 显示：SHP—1在AML细胞中表达阳性率由高至低依次为缓解组、初治组、复发组，c—kit表达阳性率则相反，各组与正常对照组相比有显著性差异（P〈0.05），SHP-1在AML细胞中表达阳性率比ALL细胞高，有显著性差异（P〈0.05），c—kit在AML细胞中表达阳性率比ALL细胞中高，有显著性差异（P〈0.05）；SHP-1与c-kit表达成负相关（r=-0．502，P〈0．05）；30例初治AML患者SHP-1^＋与SHP-1^-的完全缓解率均有显著性差异（P〈0.05），c—kit^＋与c—kit^-的完全缓解率均有显著性差异（P〈0.05）。结论：SHP—1可能是一个潜在的抑癌基因，它负性调节c-kit基因而抑制肿瘤的发生，同时监测二者的表达可作为判断AL治疗转归的预测指标。     

肺耐药蛋白基因在急性白血病中的表达及临床意义

目的　检测急性白血病患者肺耐药蛋白 (Lungresistanceprotein ,LRP)基因mRNA表达 ,探讨其与多药耐药和预后的关系。方法　采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 47例急性白血病患者及 7例正常对照骨髓细胞LRP基因的表达。结果　正常骨髓细胞LRP基因表达阴性 ,2 5例初治急性髓细胞白血病 (AML)患者中 1 7例LRP基因表达阳性 ,1 2例初治急性淋巴细胞白血病 (ALL)中仅 1例阳性 ,1 0例复发难治患者 8例阳性 ,初治AML组及复发难治组较正常对照组相比表达率明显升高 ,差异有显著性 (P =0 .0 0 1 ) ,LRPmRNA表达水平与初次化疗不敏感及预后差有关 ,LRPmRNA阳性患者的完全缓解率明显低于表达阴性者 (分别为 3/1 1 ,4/5 ,P <0 .0 5)。结论　LRP基因表达水平与急性髓细胞白血病化疗效果及预后密切相关 ,是一项新的耐药指标 ,检测LRP的表达可以指导治疗 ,估计预后     

成人急性白血病患者细胞周期蛋白A基因表达与耐药的关系

目的 探讨细胞周期蛋白A（cyclin A)基因在成人急性白血病（AL）患者中的表达以及与耐药的关系。方法 采用半定量RT－PCR技术对32例多药耐药和32例化疗敏感的AL患者和20名正常人进行细胞周期蛋白A、mdr1、TopoⅡα、bcl-2 mRNA水平的测定。结果 耐药组患者细胞周期蛋白A及TopoⅡα mRNA的表达水平均明显低于敏感组患者（P＜0．01），20名正常人在同一实验条件下未检出细胞周期蛋白A mRNA的表达；耐药组患者mdrl及bcl-2 mRNA表达水平均明显高于敏感组（P＜0．01）；64例AL患者中，细胞周期蛋白A与TopoⅡα表达水平呈高度的正相关（r=0.794,P=0.000)；细胞周期蛋白A与TopoⅡα同时阳性低表达的10例AL患者全部耐药；经Binary逻辑回归分析显示细胞周期蛋白A与耐药显著相关。结论 细胞周期蛋白A可能会成为判断AL患者预后的新指标，联合TopoⅡα检测对判断AL耐药有意义。     

急性白血病患者周期蛋白D1mRNA表达及其临床意义

目的　检测急性白血病患者周期蛋白 (cyclin)D1mRNA的表达 ,并探讨其与临床的关系。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 6 5例急性白血病患者及 5名正常人骨髓细胞cyclinD1mRNA。结果　正常骨髓未检测到cyclinD1mRNA表达 ;急性白血病患者阳性率 2 6 2 % ,急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病之间差异无显著性 ;复发组患者的cyclinD1mRNA阳性率 (6 3 6 % )明显高于初治组 (2 1 4% )及缓解组 (8 3% )。结论　急性白血病患者中有cyclinD1mRNA过度表达的情况 ,且与临床复发关系较为密切。     

急性白血病患者WT1基因表达及其临床意义

目的 观察WT1基因在白血病细胞的表达及其临床意义,探讨WT1基因表达与白血病疗效关系。方法 用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测初治及复发急性白血病患者73例治疗前WT1基因的表达,结合临床观察WT1表达阳性与急性白血病治疗疗效关系,并观察缓解后患者WT1基因表达的变化。结果 73例急性白血病患者WT1阳性53例（72．6％）,其中46例急性髓细胞白血病阳性32例（69．6％）,23例急性淋巴细胞白血病阳性17例（73．9％）。3例急性混合细胞白血病及1例急性浆细胞白血病均表达阳性。在急性淋巴细胞白血病和非M3型急性髓细胞白血病中,WT1表达阳性对治疗缓解率无明显影响。对21例患者治疗后动态观察,当完全缓解时,WT1表达转阴性;复发时WT1表达又转阳性。结论 WT1在急性白血病阳性率较高,但阳性与否对临床疗效无明显影响。WT1基因作为白血病标志用于急性白血病微小残留病的检测有重要价值。     

白血病患者WT1基因表达的研究

目的：探讨WT1基因与白血病发病的关系和临床意义。方法：采用逆转录－巢式聚合酶链反应（RT－巢式PCR）方法检测了K562和HL－60两个白血病细胞系、49例急性白血病（AL）患者、33例慢性髓系白血病（CML）患者和25例正常对照的WT1基因表达。结果：K562和HL－60两个白血病细胞系、29例初治或复发AL患者中有21例、20例完全缓解（CR）期AL中有1例、18例CML急变期中有15例、5例CML加速期中有1例、10例CML慢性期患者中有1例表达WT1基因。WT1基因表达见于所有AL亚型，其相对水平与急性白血病的CR率有相关性。≥1．0的患者CR率低及生存期短。在CML中WT1基因表达表现出明显的阶段性，与慢性粒细胞白血病临床阶段及病情进展有关。结论：WT1基因表达与白血病发生有关，WT1基因高表达的患者CR率低、无病生存期短，可作为判断急性白血病预后和监测微量残留病的一项指标，也可作为CML急变的一项诊断指标。     

白血病患者可溶性耐药相关钙结合蛋白基因的表达及其临床意义

目的：探讨白血病患者可溶性耐药相关钙结合蛋白（Sorcin)基因的表达及其与临床耐药和疗效的关系。方法：应用半定量RT－PCR检测95例急性白血病患者、27例非白血病患者和健康人的Sorcin基因表达水平，并分析了Sorcin基因表达的临床意义。结果：白血病患者Sorcin基因表达高于对照组，差异有显著性（P＜0．001）；急性髓系白血病（AML）复发难治组高于初诊组和完全缓解（CR）组；临床耐药组Sorcin基因表达显著高于非临床耐药性（P＜0．001）；Sorcin基因阳性表达的CR率为20．0％，Sorcin基因阴性表达的CR率为80．0％，差异有显著性（P＜0．001）；AML各亚型Sorcin基因过度表达存在差异，以M5的阳性表达率最高。结论：Sorcin基因过度表达与白血病患者临床耐药密切相关，是影响预后的重要因素，可作为检测临床耐药和判断预后的指标之一。     

肺耐药相关蛋白基因和多药耐药基因测定在急性淋巴细胞白血病中的意义

目的:评价肺耐药相关蛋白基因和多药耐药基因在急性淋巴细胞白血病患者中的表达情况与临床多药耐药的关系。方法:将47例急性淋巴细胞白血病患者分为临床非耐药组(A)和耐药组(B),用RT-PCR方法检测患者骨髓中肺耐药相关蛋白基因和多药耐药基因的mRNA表达。结果:肺耐药相关蛋白基因在A、B组阳性表达分别占6/27和8/20。统计学分析显示组间差异无显著性意义(χ2=1.15,P>0.05)。多药耐药基因在A、B组阳性表达分别占3/27和9/20。统计学分析显示组间差异有显著性意义(χ2=2.98,P<0.05)。在所有20例临床耐药患者中,5例同时表达上述两个基因。而临床非耐药组患者中,无一例同时表达上述两个基本基因。结论:肺耐药相关蛋白基因不能作为独立判定急性淋巴细胞白血病多药耐药的发生指标,多药耐药基因在判定急性淋巴细胞白血病多药耐药的发生中有一定临床意义。     

GATA-2在白血病患者中的表达及其意义

目的 探讨白血病患者GATA－2基因的表达及其临床意义。方法 应用RT－PCR对各类白血病患者GATA－2的表达进行检测,慢性粒细胞白血病（CML）和急性早幼粒细胞白血病（APL）同时检测bcr/abl和PML／RARα的表达。结果 初治／复发的急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）GATA－2的阳性率分别为93％和70％,慢性粒细胞白血病慢性期（CML－CP）为83％。正常人骨髓和外周血未检测到GATA－2。缓解期AML患者GATA－2的表达与初治／复发AML相比,差异无显著性;移植治疗后患者GATA－2的表达率显著下降;移植治疗后的CML患者在bcr/abl转阴后仍可检出GATA－2,而移植治疗后APL患者PML／RARα和GATA－2都为阴性。结论 GATA－2基因转录产物在正常人骨髓和外周血中低表达,在各类白血病中高表达。缓解期骨髓中仍有GATA－2的高表达,移植治疗后GATA－2表达显著下降。GATA－2高表达反映了患者体内残存的白血病干细胞,自体或异基因骨髓移植可以更好地清除白血病干细胞。     

白血病患者WT1基因的表达及其与预后及多药耐药的关系

目的探讨ＷＴ１基因与白血病的预后、多药耐药性及细胞凋亡之间的关系。方法应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法测定６８例白血病患者及２３名正常人的ＷＴ１、ＭＲＰ及ｍｄｒ１基因的表达,同时采用免疫荧光流式细胞术（ＦＣＭ）观察了３２例急性髓系白血病（ＡＭＬ）患者抗凋亡基因ｂｃｌ２的表达。结果６８例白血病患者中３７例ＷＴ１基因表达阳性,２３名正常人ＷＴ１基因表达阴性。ＷＴ１基因表达阳性患者的完全缓解（ＣＲ）率低于表达阴性者（分别为５９．４６％和８７．１０％,Ｐ＝００１１）。ＷＴ１表达阳性患者的ＭＲＰ阳性率高于ＷＴ１表达阴性者（分别为５８．３３％和３２．２６％,Ｐ＝００３３）。联合ＷＴ１及ｂｃｌ２表达情况将ＡＭＬ患者分为高危、中危、低危三组,其ＣＲ率分别为３３３３％、４７．３７％及１００％,三组间差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论ＷＴ１基因的表达与白血病患者的化疗效果及预后密切相关,是影响白血病患者ＣＲ率的重要危险因素之一。ＷＴ１基因及ｂｃｌ２的共同表达情况可作为预测ＡＭＬ患者预后的重要指标     

中期因子在急性白血病中的表达及其意义

目的 检测中期因子(Midkine,MK)基因在白血病患者中的表达,初步探讨其与白血病的关系.方法 应用实时定量逆转录PCR(RQ-RT-PCR)方法,对181例急性白血病(AL)患者、31名正常人骨髓标本进行了中期因子转录本的检测.结果 中期因子在初治和复发AL患者、AL完全缓解(CR)患者及正常人骨髓细胞均有表达.初治和复发AL患者中期因子表达明显高于正常人及CR患者(P＜0.01及P＜0.05).而正常人与CR患者相比差异无统计学意义.中期因子的表达在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)各亚型(包括pro-B-ALL,common-B-ALL,pre-B-ALL)及各年龄段均有显著升高(P＜0.01),且与T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)、急性杂合性白血病及急性髓系白血病(AML)各FAB亚型问差异均有统计学意义(P值均＜0.01);与正常人相比,M2型患者中期因子表达明显升高(P＜0.01),与AML其他FAB亚型相比差异亦有统计学意义(P值均＜0.05);M3患者中期因子表达也较正常人明显升高(P＜0.05),但与除B-ALL和AML-M2外的其他白血病亚型间差异无统计学意义.CD34+患者较CD34-患者中期因子表达显著升高(P＜0.01),AML1-ETO融合基因阳性的M2患者较阴性的M2患者中期冈子表达显著升高(P＜0.05).结论 B-ALL、AML-M2和AML-M3型白血病患者中均存在中期因子基因不同程度的表达升高,为白血病诊断及其发病机制的研究提供了新的方向.     

抑癌基因PTEN mRNA在白血病细胞中的表达及意义

目的了解白血病细胞中PTEN基因的表达情况及其与临床的关系。方法采用RT-PCR法检测5个白血病细胞系,31例慢性粒细胞白血病(CML),87例初诊急性白血病(AL)[包括59例急性髓系白血病(AML),26例急性淋巴细胞白血病(ALL),2例急性混合细胞白血病],21例完全缓解期急性白血病(AL-CR)患者骨髓标本中PTEN mRNA表达情况,并分析了与临床指标的相关性。结果PTEN基因在K562细胞中有表达,而在Kasum i-1、HL-60、U937、Nalm-1细胞中均无表达。CML组阳性率(61.29%)与正常对照组(78.57%)相比,差异无统计学意义(P>0.05),AL组和AL-CR组阳性率(分别为18.29%和42.86%)均低于正常水平(P<0.01和P<0.05),AL组阳性率又低于AL-CR组(P<0.05)。PTEN基因的阴性表达与外周血高白细胞计数(≥20×109/L)、染色体异常呈显著的正相关。结论AL患者存在PTEN基因的表达缺失,PTEN基因在AL的发病中可能起一定作用。     

荧光定量PCR检测急性髓细胞白血病患者BAALC基因及临床意义

目的研究急性髓细胞白血病（AML）患者BAALC（brain and acute leukemia cytoplasmic）基因的表达水平及其临床意义。方法构建实时定量PCR检测BAALC基因表达的技术，并定量检测63例初治AML患者BAALC基因的表达水平及分析其与临床疗效的关系。结果建立的实时定量PCR方法的标准曲线相关系数大于0．99。49例（78％）初治AML患者存在BAALC基因表达；BAALC基因高表达患者发病时外周血WBC计数、Hb浓度、PLT计数及骨髓白血病细胞比例分别为：（26．3±18．1）×10^9／L、（78．3±21．8）g／L、（76．9±64．5）×10^9／L和（61．2±22．3）％，低表达患者发病时外周血WBC计数、Hb浓度、PLT计数及骨髓自血病细胞比例分别为：（30．2±21．7）×10^9／L、（81．6±30．9）g／L、（73．9±57．2）×10^9／L和（54．3±16．3）％，两组间差异无统计学意义（P〉0．05）；正常核型初治AML患者中BAALC高表达率为68％（25／37），高于非正常核型AML患者[23％（6／26）]，差异有统计学意义（Х^2=12．093，P=0．001）；正常核型初治AML患者中BAALC基因高表达患者化疗的完全缓解率（CR）为65％（20／31），低于低表达患者[84％（27／32）]，差异有统计学意义（Х^2=6．573，P=0．013）。结论BAALC基因高表达是正常核型AML患者一个重要不良预后因素。