造血生长因子对脐血CD34^＋细胞的体外扩增作用

为探讨造血生长因子不同组合方式对脐血ＣＤ３４＋细胞的扩增作用、扩增细胞性能改变及合理的扩增时机，利用吸附单克隆抗体——磁珠分离系统分选出９５％～９９％纯度的脐血ＣＤ３４＋细胞，在体外液体培养体系中，经重组人干细胞因子（ｒｈＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）３、ＩＬ－６、粒－巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）和红细胞生成素（Ｅｐｏ）的不同组合扩增１～３周。结果表明，脐血ＣＤ３４＋细胞具有良好的扩增效应，细胞总数、集落形成细胞（ＣＦＣｓ）和ＣＤ３４＋细胞可分别扩增５００．０±８２．５倍、９４．０±２８．６倍和２４．０±３．８倍；ＳＣＦ是扩增最重要的生长因子，ＳＣＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋Ｇ－ＣＳＦ＋Ｅｐｏ组合的扩增效率最高；ＣＦＣｓ和ＣＤ３４＋细胞在１～２周维持在较高水平，以后即快速衰减；此外，扩增也加速了细胞的分化，至第３周时９３％ＣＦＣｓ为ＣＦＵ－ＧＭ，极少部分形成ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＥＭＭ。因此，合理组合生长因子，把握适宜扩增时机，将有助于扩增细胞在质和量上满足移植和基因治疗等的要求。     

不同造血生长因子对脐血有核细胞体外扩增作用的实验研究

目的：探讨造血生长因子不同组合方式对脐血有核细胞的扩增作用以及脐血扩增后Ｔ淋巴细胞和ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞变化情况。方法：在脐血有核细胞体外培养体系中分别加入不同组合的细胞因子，观察细胞数、ＣＤ３４＋细胞、ＣＦＵ－ＧＭ、Ｔ４（ＣＤ４＋ＣＤ８－ＣＤ３＋）细胞、Ｔ８（ＣＤ４－ＣＤ８＋ＣＤ３＋）细胞以及ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞的变化。结果：脐血有核细胞在体外液体培养体系中，经重组人干细胞因子（ｒｈＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）－３、ＩＬ－６、粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和红细胞生成素（Ｅｐｏ）的作用下扩增效果最佳。结论：脐血有核细胞在各种造血生长因子的协同作用下可以在体外扩增。脐血扩增后Ｔ４、Ｔ８细胞减少，可能会降低脐血移植急性ＧＶＨＤ发生，但ＨＬＡ－ＡＢ和ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞数急剧上升，增加了免疫排斥的可能性。     

脐血CD34^＋细胞体外扩增的研究

采用ＤｙｎａｌＭ－４５０ＣＤ＿（３４）免疫磁珠分离纯化脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞，并探讨了不同细胞因子［干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素６（ＩＬ－６）、白细胞介素３（ＩＬ－３）及红细胞生成素（Ｅｐｏ）］组合对脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞的体外培养和扩增作用。结果表明：①经ＤｙｎａｌＭ－４５０ＣＤ＿（３４）免疫磁珠分离的脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞，其纯度达８５％～。９５％；②甲基纤维素培养体系中，在不同组合的细胞因子作用下，脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞的集落产率明显不同，单用ＩＬ－６最低，ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－３及Ｅｐｏ联用产率最高；③在低氧液体培养体系中，ＩＬ－６和ＩＬ６＋Ｅｐｏ不能有效地扩增脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞，而其它细胞因子组合均可产生明显的扩增作用；其中加Ｅｐｏ的组合扩增效果显著高于无Ｅｐｏ的相应组合。脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞分离、纯化及其体外扩增的研究对于脐血造血细胞库的建立，脐血造血细胞移植和基因导入的研究均具有重要意义。     

FLT3配基—FL研究进展

ＦＬＴ３配基（ＦＬ）是一种新近发现的与造血调控密切相关的细胞因子。在体外单独ＦＬ对造血的调控作用有限，但ＦＬ可与ＩＬ－３，Ｇ－ＣＳＦ，ＣＳＦ－１，ＧＭ－ＣＳＦ，ＳＣＦ及ＩＬ－６协同促进骨髓及脐血ＣＤ３４＾＋细胞形成粒－巨噬细胞集落，粒细胞集落或巨噬细胞集落；可与ＳＣＦ，ＩＬ－７或ＩＬ－１１协同促进Ｂ淋巴祖细胞的增殖与分化。ＦＬ有望用作造血干祖细胞体外扩增的辅助因子，在临床上用作造血细胞动员剂、免疫     

圹增人脐血造血干／祖细胞重建SCID小鼠造血的实验研究

目的 探讨Ｆｌｔ－３配基（ＦＬ）、Ｔｐｏ、ＳＣＦ等细胞因子组合对人脐血干／祖细胞的扩增及自我更新能力的维持作用。方法 用ＦＬ＋Ｔｐｏ＋ＳＣＦ－ＩＬ－６＋ＩＬ－３＋Ｇ－ＣＳＦ组合,体外扩增脐血ＣＤ３４＾＋细胞１４天,将其移植给亚致死剂量照射的ＳＣＩＤ小鼠。结果 扩增的脐血造血细胞可顺利植入ＳＣＩＤ小鼠并重建造血,１８只小鼠移植后存活６周的有８只,其骨髓中仍可检测到人的造血细胞,死亡率５６％,与对照组     

人胎盘无细胞是悬液对骨髓造血干／祖细胞的体外扩增作用

为了探讨人胎盘无细胞悬液对骨髓造血干／祖细胞的体外扩增作用及与已知的几种细胞因子进行比较,用人胎盘无细胞悬液及ＩＬ－３,ＧＭ－ＣＳＦ,ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＦＰＯ作为刺激因子,并应用甲基纤维素半固体培养体 对骨髓ＧＭ－ＣＦＵ,ＧＭ－ＧＥＭＭ和ＢＦＵ－Ｅ进行了培养和比较,研究结果表明,人胎盘无细胞悬液对骨髓ＣＦＵ－ＧＭ,ＣＦＵ－ＧＥＭＭ和ＢＦＵ－Ｅ体外扩增最适蛋白浓度是２００－３００μｇ／Ｌ,人胎盘无细胞悬液作刺激因子对骨髓血干／祖细胞的体外扩增效果优于单独ＩＬ－３,单独ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＥＰＯ组。结论提示,人胎盘无细胞悬液可能含有多种细胞因子,用人胎盘无细胞悬液作扩增剂体外扩增骨髓造血干／祖细胞细胸具有有效而价廉的特点。     

扩增人脐血造血干/祖细胞重建SCID小鼠造血的实验研究

目的　探讨Ｆｌｔ３ 配基（ＦＬ） 、Ｔｐｏ、ＳＣＦ等细胞因子组合对人脐血干／ 祖细胞的扩增及自我更新能力的维持作用。方法　用ＦＬ＋ Ｔｐｏ＋ ＳＣＦ＋ＩＬ６ ＋ＩＬ３＋ ＧＣＳＦ组合,体外扩增脐血ＣＤ３４ ＋ 细胞１４天,将其移植给亚致死剂量照射的ＳＣＩＤ小鼠。结果　扩增的脐血造血细胞可顺利植入ＳＣＩＤ小鼠并重建造血,１８ 只小鼠移植后存活６ 周的有８ 只,其骨髓中仍可检测到人的造血细胞,死亡率５６ ％ ,与对照组（ 死亡率１００％） 比较,χ２ ＝１０．０８,Ｐ＜０．０１。结论　ＦＬ＋ Ｔｐｏ＋ ＳＣＦ＋ＩＬ６ ＋ＩＬ３ ＋ ＧＣＳＦ组合在有效扩增造血细胞的同时可保留造血干／祖细胞的自我更新及造血重建能力。     

中枢神经系统疾病患者脑脊液中的IL—2R

本文采用双抗体夹心酶标法检测了１０２例中枢神经系统疾病病人ＣＳＦ及３５例正常人ＣＳＦ中ｓＩＬ－２Ｒ水平。结果显示：结核性脑膜炎组（ＴＢＭＧ）、病毒性脑炎（ＤＭＧ）脱髓鞘性疾病组（ＤＭＤＧ）ｓＩＬ－２Ｒ水平明显高于其它神经系统疾病（ＯＮＤ）和正常人（ＮＣ）组（Ｐ〈０．０１）。ＴＢＭＧ进展期与恢复期比较，ｓＩＬ－２Ｒ水平有非常显著差异（Ｐ〈０．０１）。缓解期ＶＭＧ、ＤＭＤＧ的ｓＩＬ－２Ｒ水平与进展期比     

骨髓增生异常综合征CD34^＋细胞对不同生长因子的反应性研究

目的：更准确地研究造血生长因子对骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）造血干、祖细胞的影响及临床治疗效果。方法：利用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统分离纯化ＭＤＳ患者ＣＤ３４＋细胞，在体外半固体培养体系中，研究ＭＤＳＣＤ３４＋细胞对粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素３（ＩＬ－３）、红细胞生成素（Ｅｐｏ）、干细胞因子（ＳＣＦ）单独及联合应用的反应。结果：ＭＤＳＣＤ３４＋细胞在增殖分化过程中存在一定程度缺陷，单独应用生长因子不能有效地改善其缺陷，ＳＣＦ与ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、Ｅｐｏ等生长因子的联合应用可提高一部分患者造血祖细胞的集落形成能力，但在ＭＤＳ高危组，部分患者在正常集落形成能力改善的同时，白血病细胞集落也有不同程度的增长。结论：治疗ＭＤＳ患者须合理地联合应用造血生长因子。     

脐血造血祖细胞培养及细胞周期的研究

应用造血祖细胞体外培养和流式细胞术（ＦＣＭ），观察了脐血中粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）和红系爆式集落（ＢＦＵ－Ｅ）的数量和特性，并对其细胞增殖周期和成人骨髓及外周血做比较。结果显示，脐血中含丰富的ＣＦＵ－ＧＭ和ＢＦＵ－Ｅ，其数量低于骨髓而超过外周血水平；脐血ＢＦＵ－Ｅ对红细胞生成素和爆，式促进活素表现出更高的敏感性；脐血Ｓ期、Ｇ＿２＋Ｍ期及Ｓ＋Ｇ＿２Ｍ期细胞数均明显低于骨髓，虽略高于外周血各期细胞数，但差别无显著性意义。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞与CD34+CD59-细胞生物学性能的研究

目的 探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患CD34^ CD59^ 细胞的特性及PNH克隆呈优势造血的可能原因，以探索PNH发病的内在机制。方法 用免疫磁珠吸附法富集纯化CD34^ 细胞，再用流式细胞仪分选出PNH患的CD34^ CD59^ 细胞、CD34^ CD59^ 细胞及正常对照CD34^ 细胞。分别进行体外扩增液体培养2周，并对扩增前、后的细胞进行半固体培养。结果 ①PNH患CD34^ CD59^ 细胞与正常对照CD34^ 细胞形成集落形成单位(CFU)均在第7天达到扩增高峰，并且扩增后的细胞仍能保持CD59抗原，无GPI锚连蛋白的丢失。②正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于FHN患的CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^-细胞.③PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养，其形成CFU的能力无明显差异。④PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞在SCF IL3 IL6 FL Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo组合下液体培养，其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异。但在SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo GM-CSF组合下液体培养，CD34^ CD59^ 细胞的生存、增殖、扩增能力均明显强于CD34^ CD59^ 细胞。结论 ①正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于PNH患的CD34^ CD59^ 细胞。②PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养，以及在SCF IL3 IL6 LF Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Ep组合下液体培养，其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异，说明CD34^ CD59^ 细胞在造血能力上并无内在的优势。GM—CSF或许是使PNH克隆呈造血优势的原因之一。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞的体外扩增

目的研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者CD34+CD59+细胞的分离、纯化及其体外扩增的条件和性能,为探索PNH新的治疗途径提供实验依据.方法利用免疫磁珠-流式细胞仪二步分选法,从PNH患者骨髓中分选出CD34+CD59+细胞,然后对CD34+CD59+细胞在不同造血生长因子组合条件下,进行体外扩增培养2周.结果体外扩增的最适宜的生长因子组合为SCF+IL-3+IL-6+FL+Tpo+Epo,最适宜的扩增时机为第7天,在此条件下,CD34+CD59+细胞的扩增倍数为22.42±3.73倍.CD34+CD59+细胞在扩增以后,仍保持较好的形成集落形成单位的能力,但是其向多系分化的潜能有所下降.结论 PNH患者CD34+CD59+细胞能够进行体外扩增.按照最佳扩增条件,在对PNH患者进行自体骨髓移植或自体外周血干细胞移植时有一定的应用价值.     

Ex vivo expansion of CD34+ umbilical cord blood cells in a defined serum-free medium (QBSF-60) with early effect cytokines

To investigate the clinically applicable conditions that support substantial expansion of both primitive and more mature hematopoietic cells of umbilical cord blood (UCB) for transplantation in adults, enriched CD34+ cells from 8 fresh UCB samples and 4 expanded UCB products were cultured in defined serum-free medium (QBSF-60) in the presence of a cytokine combination of SCF, Flt-3-ligand (FL), thrombopoietin (TPO), IL-3 for up to 2 weeks. Fresh medium with cytokines was supplemented or exchanged at day 4, day 7, and day 10. The proliferative response was assessed at day 7, day 10, and day 14 by evaluating the following parameters: nucleated cell (NC), clonogenic progenitors (colony-forming unit-granulocyte-macrophage [CFU-GM], burst-forming unit-erythrocyte [BFU-E], CFU-GEMM, and high-proliferative potential colony-forming cell [HPP-CFC]), immunophenotypes (CD34+ cells and CD34+ subpopulations), and LTCIC. Simultaneously numerical expansion of various stem/progenitor cells, including primitive CD34+CD38-HLA-DR- subpopulation and LTCIC, CD34+ cells, and clonogenic progenitors to mature nucleated cells, were continuously observed during the culture. An average 103.32 +/- 71.37 x 10(6) CD34+ cells (range 10.12 x 10(6)-317.9 x 10(6)) could be obtained from initial 1.72 +/- 1.13 x 10(6) UCB CD34+ cells after 10-14 days cultured under the described conditions. Sufficient CD34+ cells (>50.0 x 10(6)) for transplantation in adults would be available in all but one UCB collections after 10-14 days expansion. The expanded CD34+ cells sustained most of the in vitro characteristics of initial unmanipulated CD34+ cells, including clonogenic efficiency (of both primitive and committed progenitors), the proportion of CD34+CD38-HLA-DR- subpopulation, and the expansion potential. Initial addition of IL-3 to the cocktail of SCF + FL + TPO had positive effects on the expansion of both primitive and, especially, the more mature hematopoietic cells. It accelerated the expansion speed and shortened the optimal culture time from 14 days to 10 days. These results indicated that our proposed short-term culture system, consisting of QBSF-60 serum-free medium with a simple early acting cytokine combination of SCF + FL + TPO, could substantially support simultaneous expansion of various stem/progenitor cell populations involved in the different phases of engraftment. It would be a clinically applicable protocol for ex vivo expansion of CD34+ UCB cells.     

不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响

为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化，将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天，在0天，7天检测有核细胞数，CD34^＋细胞数及CD34^＋CXCR4^＋，CD34^＋CD49d^＋的细胞数和集落形成单位（CFU）数．根据不同细胞因子组合实验分组为：对照组；SF组（SCF＋FL）；SFT组（SCF＋FL＋TPO）和SFT6组（SCF＋FL＋TP0＋IL-6）。结果表明，和对照组相比，SF组合仅能低水平支持脐血造血细胞扩增，加入TPO后即SCF／FL／TPO组合能有效的扩增脐血细胞，但SFT和SFT6两组之间差异却无明显发生（P〉0．05）；SF，SFT和SFT63组的细胞因子组合均可提高脐血CD34^＋细胞CD49d，CXCR4的表达，但3组之间差异无显著性（P〉0．05）。结论：SF组合可协同扩增人造血细胞，但协同作用较弱；TPO在脐血造血干／祖细胞体外扩增中起重要调节作用，而IL-6作用不显著；SCF／FL／TPO 3种因子组合不仅可促进脐血造血祖细胞的扩增，而且可上调脐血造血细胞CD49d，CXCR4表达。     

Serum supplement, inoculum cell density, and accessory cell effects are dependent on the cytokine combination selected to expand human HPCs ex vivo

BACKGROUND: The prolonged periods of pancytopenia associated with cord blood transplants suggest that in some cases cell numbers may be limiting. The possibility that limiting cell numbers may be overcome and prolonged periods of pancytopenia abrogated by the transplantation of human umbilical cord blood cells expanded ex vivo has led to efforts to define optimal culture conditions for these cells. STUDY DESIGN AND METHODS: Cord blood CD34+ cells were cultured with three cytokine combinations: SCF+G-CSF+GM-CSF+MGDF (SGGM); IL-6+ SCF+MGDF+Flt3-ligand (6SMF); and IL-1+IL-3+IL-6+G-CSF+GM-CSF+SCF+Epo (GFmix). Serum effects, inoculum concentration (cells/mL) seeding density (cell/cm(2)) and accessory cell effects on the expansion of CD34+ cells were determined. RESULTS: Cellular outputs were significantly higher with fetal calf serum (FCS) than with cord blood serum (CBS) or adult group AB serum (ABS) in the presence of 6SMF, however, CBS was as effective as FCS. The best seeding concentrations varied for each of the cytokine combinations, and inoculum densities exceeding 1000 cells per cm(2) proved detrimental for cultures containing GFmix and SGGM. Accessory cell studies indicated that populations expressing the CD33 antigen inhibited the expansion of purified CD34+ cells in the presence of GFmix or SGGM, but not in the presence of 6SMF. CONCLUSION: Serum supplement, inoculum cell concentration, seeding densities, and accessory cell effects are dependent upon the cytokine combination selected to expand cord blood HPCs ex vivo. Thus, each of these measures should be assessed to establish reproducible and reliable conditions for the selection of different cytokine combinations to culture cord blood HPCs.     

脐血体外同时诱导扩增T,NK和CD34+细胞

体外研究表明,人脐血含有比骨髓细胞更原始更早期的造血干细胞群。移植后所引起的GVHD发生率及程度都比骨髓及外周血要低,但其相应的GVL效应也较低,容易复发。单份脐血所含有的造血细胞量仅可以满足一定体重以下的儿童患者需求,对需移植的大部分成人患者则要进行体外扩增。脐血体外扩增后进行干细胞移植是一种新的设想和尝试,移植物中免疫细胞的组成和功能是决定干细胞移植能否成功重建造血与免疫、以及平衡GVHD和GVL的重要因素。为了研究脐血体外同时诱导扩增T、NK和CD34 细胞的可能性,本实验无菌采集健康正常足月产新生儿脐血,并分离出单个核细胞,在不同的细胞因子组合作用下用IMDM培养液培养14天。在培养0、3、7、14天时收集细胞,用FCM分析扩增前后脐血干/祖细胞及T、NK免疫细胞含量。结果表明,与无细胞因子的对照组相比,所有细胞因子SCF,IL3,IL6,IL7,IL2组合组别均能显著扩增脐血中的单个核细胞。所有细胞因子组合组别均能显著增加脐血中的CD34 细胞比例,使其含量从新鲜脐血中的1.6%升高到最高D组的11.9%。第7天时CD34 细胞平均增加10至50倍不等。新鲜脐血中CD3 T细胞平均为(18.7±4.3)%,在无细胞因子的对照组中CD3 T细胞下降明显,而在含细胞因子的组别中CD3 T有不同程度的增加,扩增最高的组别中CD3 T细胞是新鲜脐血的2倍。在新鲜脐血中含(3.6±1.9)?56 细胞。CD56 细胞数量仅在含细胞因子IL2的组别中有显著增加,其它组则无明显变化。结论:脐血中T细胞、NK细胞在一定细胞因子组合下,可与干/祖细胞同时在体外被扩增和诱导分化。     

提高多药耐药基因导入人CD34^＋细胞转导效率的探讨

目的 探讨逆转录病毒介导的多药耐药基因导入人ＣＤ３４＾＋细胞的影响因素,以提高基因转导效率。方法 用流式细胞术（ＦＣＭ）检测不同组合细胞因子及人骨髓基质细胞＋细胞因子支持的基因转导效率;用造血祖细胞集落培养观察耐药性;用ＦＣＭ检测不同浓度柴杉醇素对基因转导细胞的作用。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓造血干/祖细胞体外单个细胞培养

目的 研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者单个不同表型骨髓造血干／祖细胞体外生长特性。方法 用免疫磁珠富集C34^ 细胞，用流式细胞仪自动分选系统将患者CD34^ CD59^ 和CD34^ CD59^-造血干／祖细胞单个分选入96孔培养板，进行单个细胞培养，观察不同细胞各个生长指标，并与正常对照细胞比较。结果 ①单个细胞培养条件下，患者CD34^ CD59^-细胞在细胞发生分裂（细胞数≥2个）的比率、形成集落（细胞数≥50）的比率及扩增的总数（所有细胞发生分裂的孔的细胞数的总和）都超过了其CD34^ CD59^ 细胞（P＜0．05）。②PNH CD34^ CD59^-细胞单个细胞扩增的数目及细胞扩增的总数代于正常对照（P＜0．05）。③PNH CD34^ CD59^ 细胞在较大集落（细胞数≥500）形成、单个细胞扩增的数目及细胞扩增总数均低于正常对照（P＜0．01）。④患者异常与正常表型细胞单个细胞次级集落的形成能力差异无显著性（P＞0．05），但都明显低于正常对照。（P＜0．001）。结论 在单个细胞培养条件下，患者异常表型的造血干／祖细胞较其正常表型的造血干／祖细胞具有一定的生长优势。但它们与正常骨髓细胞相比，都存在一定的生长缺陷，正常表型细胞的缺陷尤为明显。     

Expansion of human NOD/SCID-repopulating cells by stem cell factor, Flk2/Flt3 ligand, thrombopoietin, IL-6, and soluble IL-6 receptor

Here, we demonstrate a significant ex vivo expansion of human hematopoietic stem cells capable of repopulating in NOD/SCID mice. Using a combination of stem cell factor (SCF), Flk2/Flt3 ligand (FL), thrombopoietin (TPO), and a complex of IL-6 and soluble IL-6 receptor (IL-6/sIL-6R), we cultured cord blood CD34(+) cells for 7 days and transplanted these cells into NOD/SCID mice. Bone marrow engraftment was judged successful when recipient animals contained measurable numbers of human CD45(+) cells 10-12 weeks after transplantation. When cells were cultured with SCF+FL+TPO+IL-6/sIL-6R, 13 of 16 recipients were successfully engrafted, and CD45(+) cells represented 11.5% of bone marrow cells in engrafted recipients. Cells cultured with a subset of these factors were less efficiently engrafted, both as measured by frequency of successful transplantations and prevalence of CD45(+) cells. In animals receiving cells cultured with all 4 factors, human CD45(+) cells represented various lineages, including a large number of CD34(+) cells. The proportion of CD45(+) cells in recipient marrow was 10 times higher in animals receiving these cultured cells than in those receiving comparable numbers of fresh CD34(+) cells, and the expansion rate was estimated at 4.2-fold by a limiting dilution method. Addition of IL-3 to the cytokine combination abrogated the repopulating ability of the expanded cells. The present study may provide a novel culture method for the expansion of human transplantable hematopoietic stem cells suitable for clinical applications.