鹦鹉热嗜衣原体蛋白酶样活性因子免疫优势区基因重组蛋白的诊断应用研究

目的 检测鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)蛋白酶样活性因子(chlamydial protease-like activity factor,CPAF)免疫优势区基因在E.coli BL21中高效表达的产物在Cps感染诊断中的应用,为建立Cps感染的快速诊断奠定实验基础.方法 利用生物信息学软件筛选出Cps CPAF免疫优势区基因序列(CPAFm,A196～A450),设计特异性引物,PCR扩增目的基因,将其克隆入pGEX6p-2载体后转化E.coli BL21,利用IPTG诱导表达重组蛋白,Western blot鉴定重组蛋白.以纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立血清学诊断的间接ELISA法;同时用商品ELISA试剂盒与建立的间接ELISA法检测180份可疑Cps感染的病鸭血清标本,将检测结果进一步用Western blot方法验证.结果 构建原核重组质粒pGEX6p-2/CpsCPAFm,表达相对分子质量约为54×103的目的蛋白产物.以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法检测Cps参考血清,其阴、阳性符合率均为100％;与肺炎嗜农原体(C.pneumoniae,Cpn)、沙眼衣原体(C.trachomatis,Ct)无交叉反应.对180份可疑病鸭血清标本进行检测,与商品Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA试剂盒比较,以Western blot方法作对照,自建的ELISA法符合率均为100％,Birds Chlamydia Psittaci IgG ELISA Kit符合率为77.5％～95.0％.结论 以Cps CPAF免疫优势区(A196～A450)作为诊断抗原,建立血清学诊断的间接ELISA法具有较好的临床诊断价值.     

重组主要表面抗原1用于弓形体病IgG免疫诊断的研究

目的　用纯化的重组刚地弓形虫RH株主要表面抗原 1(SAG1)作为检测抗原 ,建立间接法rSAG1 ELISA ,检测弓形虫IgG抗体并与国外进口试剂盒进行比较 ,以观察其阳性和阴性符合率 ;并对rSAG1 ELISA检测的精确度、灵敏度和特异性进行评价。方法　接种重组菌至LB肉汤中 ,IPTG诱导表达后 ,用Ni2 螯合柱进行亲和纯化 ;分别用不同浓度的重组抗原rSAG1包被聚苯乙烯酶标条 ,检测不同稀释度的阳性和阴性血清 ,以辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG为二抗 ,采用正交试验确定rSAG1 ELISA的最佳检测条件 ;按rSAG1 ELISA法的最佳检测条件对混合弓形虫IgG阳性和阴性血清重复测 2 0次进行精确度的检测 ;采用抗体抑制试验检测其特异性 ;同时对用进口试剂盒筛得的 5 2份弓形虫IgG阳性血清和 4 0份弓形虫IgG阴性血清进行检测。结果　制备的rSAG1重组蛋白纯度在90 %以上 ;以该重组抗原建立的rSAG1 ELISA的最佳检测条件为 :重组抗原rSAG1的包被浓度为 5 μg/ml,血清稀释度 1∶10 0 ,酶标记的羊抗人IgG 1∶2 0 0 0稀释 ;用rSAG1 ELISA对混合弓形虫IgG阳性和阴性血清的重复检测表明 :IgG阳性血清的检测值的变异系数 (CV值 )为 10 .9% ,IgG阴性血清的CV值为 10 .7% ;灵敏度检测表明血清稀释度在 1∶5 0～ 1∶2 0 0均可检出阳性 ;特异性     

嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用

目的 表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强(MIP)蛋白,研究其在军团菌肺炎血清学诊断中应用价值.方法 将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coli BL21感受态细胞,诱导MIP蛋白表达,运用SDS-PAGE分析和亲和层析法纯化.用DRG军团菌IgG/IgM/IgA的ELISA检测试剂盒筛出40份阳性血清和30份阴性血清,用纯化的MIP蛋白建立间接ELISA,同时与R＆D的ELISA IgG、IgM、IgA试剂盒分别检测已筛选血清中的IgG、IgM、IgA抗体,然后对这两种方法进行比较,通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性,来评价该方法的应用价值.结果 诱导相对分子质量(Mr)大约40 000的MIP融合蛋白在E.coli BL21中表达并纯化.纯化蛋白建立的间接ELISA分别检测筛选血清中IgG、IgM、IgA抗体与国外ELISA试剂盒(R＆D)进行比较,IgG抗体的灵敏度88.5％,特异度95.5％,一致性Kappa值0.846(P ＜0.05),ROC曲线下面积0.927.IgM抗体的灵敏度89.3％,特异度97.6％,一致性Kappa值0.88(P ＜0.05),ROC曲线下面积0.947.IgA抗体的灵敏度90％,特异度95.2％,一致性Kappa值0.856(P＜0.05),ROC曲线下面积0.931.结论 成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化,运用MIP作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值.     

重组弓形虫P30抗原诊断弓形早病的初步探讨

为探讨重组弓形虫P30抗原（rP30)对弓形虫病的诊断价值。将rP30包被于酶标反应板微孔,用常规ELISA检测血清抗体。结果4例染色试验阳性血清,抗-rP30IgG全部阳性,阳性符合率为100%;27例虫体IgG/IgM抗体阳性血清中,22例rP30I-ELISA阳性,符合率为85.2%;100例门诊病人和50例献血员血清的阳性检出率分别为9.0%和8.0%。说明rP30检测弓形虫病患血清具有一定的敏感性和特异性,可望替代天然的弓形虫抗原用于弓形虫病的诊断。     

建立一种用重组蛋白检测抗口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法

目的研究以重组蛋白作为包被抗原检测口蹄疫病毒（FMDV）感染后的动物血清中特异性抗体的可能性,为建立一种非病毒颗粒的ELISA检测试剂盒提供实验依据。方法利用自行构建表达的O型口蹄疫病毒VP1表位肽重组蛋白（VP1epi）作为包被抗原,采用间接ELISA方法确定抗原的最佳工作浓度和包被方法,优化各项实验条件,并以FMDV感染后的豚鼠血清作为标准阳性血清确定ELISA方法的特异性和灵敏度。结果FMDV感染后的阳性豚鼠血清可以很好地识别VP1epi重组蛋白,用此蛋白包被检测抗FMDV抗体的灵敏度可达1∶3200,并证明所检测的抗体是FMDV特异性的。结论VP1epi重组蛋白可以替代FMDV颗粒用于建立检测抗FMDV抗体的ELISA试剂盒。     

人类巨细胞病毒IgG抗体ELISA检测试剂的研制

目的建立并评价人类巨细胞病毒PP65 Ig G抗体间接ELISA检测试剂。方法原核表达并纯化重组HCMV PP65332~561蛋白,包被酶标板,优化试剂检测条件,试制HCMV-Ig G间接ELISA试剂,分析试剂的精密度,并通过对100份样本的检测,与市售进口HCMV-Ig G间接ELISA试剂比较,分析了自制试剂的特异性、敏感性和符合率。结果试制的ELISA试剂批内和批间变异度均小于10%,与其他疱疹病毒感染血清均无交叉反应;与进口试剂的总符合率达到95%。结论该方法具有良好的特异性、敏感性,稳定性和可重复性,为HCMV病毒感染的流行病学调查提供了新的备选方法。     

检测人博卡病毒抗体间接酶联免疫吸附法的建立及临床应用

目的 建立间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测人博卡病毒(HBoV)抗体,探讨其临床应用的可行性.方法 以重组表达的HBoV融合蛋白VP2作为包被抗原,建立检测HBoV抗体的间接ELISA,优化该检测方法的最佳条件,观察其精密度、敏感度和特异性,并与荧光定量PCR方法对比检测40份临床样本,同时采用免疫印迹法(Western blot)确认其符合率.结果 所建立的间接ELISA最佳抗原包被浓度为2 mg/L,酶标二抗工作浓度为1∶5000,血清标本最佳稀释度为1∶200.该方法平均批内变异系数为6.87%,平均批间变异系数为4.67%.40份临床样本间接ELISA检测结果与荧光定量PCR及免疫印迹结果一致,符合率100%.结论 利用VP2融合蛋白作为抗原,建立的检测血清HBoV抗体间接ELISA方法特异性强、重复性好,可用于HBoV抗体的定量和定性检测.     

检测人博卡病毒抗体间接酶联免疫吸附法的建立及临床应用

目的 建立间接酶联免疫吸附法(ELISA)检测人博卡病毒(HBoV)抗体,探讨其临床应用的可行性.方法 以重组表达的HBoV融合蛋白VP2作为包被抗原,建立检测HBoV抗体的间接ELISA,优化该检测方法的最佳条件,观察其精密度、敏感度和特异性,并与荧光定量PCR方法对比检测40份临床样本,同时采用免疫印迹法(Western blot)确认其符合率.结果 所建立的间接ELISA最佳抗原包被浓度为2 mg/L,酶标二抗工作浓度为1∶5000,血清标本最佳稀释度为1∶200.该方法平均批内变异系数为6.87%,平均批间变异系数为4.67%.40份临床样本间接ELISA检测结果与荧光定量PCR及免疫印迹结果一致,符合率100%.结论 利用VP2融合蛋白作为抗原,建立的检测血清HBoV抗体间接ELISA方法特异性强、重复性好,可用于HBoV抗体的定量和定性检测.     

TpN17重组抗原的表达及在梅毒血清学诊断中的初步应用

目的用基因工程技术表达梅毒螺旋体TpN17重组抗原,并建立操作简便、特异性好、敏感性高的梅毒血清抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。方法采用PCR技术扩增梅毒螺旋体TpN17基因,再进行T-A克隆及测序,然后亚克隆到原核表达载体中,以亲和层析法纯化重组蛋白。将重组蛋白包被于反应板,建立检测血清中梅毒抗体的ELISA间接检测法,利用该法与梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)同时检测血清样品,对其结果进行比较研究。结果TpN17重组蛋白在大肠杆菌BL21中得到稳定表达,并成功建立了检测血清中梅毒抗体的ELISA间接检测法及试剂。对135例梅毒可疑患者血清进行检测,ELISA、TPHA和TRUST的检出阳性率分别为82.96%、98.52%和71.11%,而TRUST测出的8例可疑样品及31例阴性样品中,TPHA结果全部阳性、而ELISA只有2例阴性。结论TpN17重组抗原ELISA试剂在特异性和敏感性上明显优于TRUST法。     

用酶标Ig交叉反应性单抗作间接ELISA检测肾综合征出血热(HFRS)病毒抗体

<正> 自Tkachenko等和Gavrilovskaya等应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了HFRS病毒抗体以来,ELISA在HFRS的诊断与血清流行病学调查上的应用得到不断的发展。1986年,柴瑞珍等建立了ELISA抗IgM固相法检测人血清中的IgM抗体,但若用于不同种属血清的检测则需选用不同的固相包被抗体。本文在制备了Ig交叉反应性单抗(McAb)的基础上,制备了可用于人、猪、兔血清IgG检测的酶标McAb,建立了检测人、猪、兔血清中HFRS病毒抗体的ELISA间接法。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

局部注射辛伐他汀对骨质疏松大鼠股骨髁骨小梁的改建效应

背景：局部注射具有成骨作用的辛伐他汀,可显著增加骨质疏松大鼠股骨颈及股骨髁部的骨密度及力学强度,分析局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。 目的：进一步研究骨质疏松大鼠股骨内局部注射辛伐他汀对股骨髁骨小梁的影响。为将辛伐他汀应用于临床骨质疏松局部治疗提供实验基础。 方法：18只雌性SD大鼠双侧卵巢切除后3个月,制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机数字表法均分为3组,分别在实验大鼠的右侧股骨髓腔内单次注射辛伐他汀溶液5 mg、10 mg,对照组单纯注射空白载体。分别在注射后1个月处死大鼠并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态变化。 结果与结论：给药后1个月,Micro-CT扫描结果显示,辛伐他汀治疗组的骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁密度及连接率明显优于对照组。说明疏松骨骼单次注射小剂量辛伐他汀可显著促进股骨髁部骨小梁改建,改善骨骼微结构,可为强化局部、防治骨质疏松骨折的新选择进一步提供实验基础。     

石斛属民族药用植物的分类及生药学研究

中药石斛早在《神农本草经》中就被列为上品,其应用历史悠久,具有养阴生津、补肾益气、润喉护嗓、活血明目、抗癌防老等功效。本文对国内外石斛属民族药用植物的分类及生药学研究进行了综述。     

膝关节骨性关节炎的关节镜治疗体会

目的我科自2001～2005年4月对59例67膝的骨性关节炎（0A），进行关节镜检查及镜下清理术。方法镜检：膝关节骨性关节炎伴不同程度滑膜炎，滑膜皱壁粘连纤维片，关节软骨不同程度破坏。镜下清除增生滑膜，松解粘连，去除剥脱软骨、修复关节面。结果随访2月～4年，平均1.5年，术后综合评估2月～1年，优良率94％；1～2年，优良率79.2％；2年以上优良率54.8％。结论关节镜对膝关节骨性关节炎诊断能提供了比较全面的资料，并对骨性关节炎早期有良好疗效，具有创伤小、恢复快、并发症少和重复治疗等优点。     

Anatomical study of distribution of valves of the cutaneous veins of adult''s limbs

Since the cutaneous veins of the four limbs have been used as autogenous grafts in the treatment of cardiovascular disorders, knowledge of distribution of the valves is increasingly required depending upon the use. In the gross anatomical study of distribution of valves of the trunci venae, there has been argument about locational relationships between the venous roots and the valves in the vicinity of the roots and the inter-valvular distance. However, there have been only few reports discussing detailed information about valves of the cutaneous veins of the four limbs. The authors observed patterns of distribution of the cutaneous venous valves of the four limbs of cadavers prepared for practice in anatomy. The following parts were excised from each cadaver: the cephalic, basilic, and the great saphenous veins, which originate from the acral venous network and flow into the proximal deep veins, and the venous roots communicating with these veins. An incision was made on each excised vein in the direction of the long axis under observation with a stereoscopic microscope, and the inter-valvular distance and the distance between the valve and the orifice of venous root in the vicinity of the valve were measured. The inter-valvular distance varied with type of the truncus venae, and it varied according to area even in the same truncus venae.     

Pathways of the realization of immunomodulating effects of neurotransmitters

Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 115, N ^o 4, pp. 401–404, April, 1993     

Characterization of sterols of three digenetic trematodes of buffalo

Sterols of three digenetic trematodes were isolated and characterized by infrared and 1H nuclear magnetic resonance spectroscopies, and gas-liquid chromatography and gas chromatography-mass spectrometry. Sterols identified were cholesterol, cholestanol, 24-methylcholesterol, 24-methylcholestanol, 24-ethyl-22-dehydrocholesterol, 24-ethyl-22-dehydrocholestanol, 24-ethylcholesterol and 24-ethylcholestanol.     

Mechanisms of generation of slow components of bioelectric activity in diagnostics of functional state of the gastrointestinal tract

New electrophysiologic devices were used for the diagnostics of the state of excitable structures in the gastrointestinal tract and correction of their motor functions. Bioelectrical and biomechanical activities form the basis of functioning of internal organs. The mechanisms of generation of slow bioelectrical activity that are important for clinical and physiological studies are described. One of these mechanisms is a capacitance parametric transducer converting the energy of contractions into specific electric signals reflecting muscle functions. Another mechanism results from slow oscillations of resting potentials of interrelated excitable cells in large neuromuscular structures of internal organs. The elaborated procedure is efficient for preventing early postoperative paresis of the gastrointestinal tract. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 128, No. 10, pp. 448–452, October, 1999     

胃小弯侧血管弓的MDCT解剖

目的：研究正常胃小弯侧血管弓及其属支血管的多排螺旋CT表现。方法：回顾性分析51例正常成人的上腹部CT资料,观察胃小弯侧血管弓及其属支血管的显示情况、血管弓形态及其与胃壁的关系。结果：51例均显示胃小弯侧血管弓,血管弓贲门部属支、胃体部属支和幽门部属支分别显示46例、15例和10例;血管弓与胃壁紧邻41例。结论：MDCT检查可良好显示正常胃小弯侧血管弓及其属支血管。     

Assessment of the efficacy of treatment of hemangiomas

Assessment of the aftereffects of cryoexposure and ultrahigh-frequency cryoexposure on hemangioma tissue of various types, cavernous and squamous, showed a higher cryogenic effect in hemangiomatous tissue preexposed to ultrahigh-frequency waves. A quantitative criterion is proposed for assessing the efficacy of the studied methods of exposure. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 119, N ^o 6, pp. 669–672, June, 1995