螺旋神经节社会元体外培养及提高细胞产率和活性的探讨

目的：在体外建立大鼠耳蜗螺旋神经节神经元培养模型，并提高其产出率及细胞活性。方法：将出生后5天的大鼠耳蜗螺旋神经节神经元在体外培养3－5天，用神经丝蛋白（Neurofilament protein,NFP)单克隆抗体进行免疫组化染色。结果：显示耳蜗螺旋神经节社会元在体外无血清培养条件下，可以存活并进行正常分化。结论：耳蜗螺旋神经节神经元在体外有稳定的可塑性及轴突再生修复能力。     

大鼠耳蜗螺旋神经节神经元GABA_A受体激活电流的特性

目的研究大鼠耳蜗螺旋神经节神经元GABAA受体激活电流的特性。方法采用全细胞膜片钳记录技术,观察离体培养大鼠螺旋神经节神经元上GABAA受体激活电流的特点。结果不同浓度的GABA可诱出螺旋神经节神经元的内向电流,该电流可被10μM荷包牡丹碱可逆性阻断。GABA诱导出的内向电流幅度随着浓度（10、50、100、500μM）的增大而增大。结论耳蜗螺旋神经节神经元可诱出GABAA受体电流,GABA诱导的GABAA受体电流呈浓度依赖关系。     

水杨酸钠抑制大鼠螺旋神经节神经元电压门控钾通道的研究

目的研究水杨酸钠对大鼠螺旋神经节神经元电压门控钾通道电流(Ik)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术分析水杨酸钠对急性分离大鼠SGN电压门控钾通道电流的影响。结果水杨酸钠抑制电压门控钾通道电流幅值,其抑制强度与水杨酸钠浓度呈正相关,1mmol/L水杨酸钠可导致Ik激活曲线向超级化方向移动10.5885mV。结论水杨酸钠对大鼠SGN电压门控钾通道电流具有抑制作用,使其电流峰值减低、激活曲线向超级化方向移动。     

铅对大鼠海马神经元培养细胞ERK活性的影响

目的 观察不同浓度和不同时间染铅对大鼠海马神经元培养细胞细胞质ERK活性的影响。方法 出生4－8d Wistar大鼠海马神经元原代细胞培养,抑制剂PD098059预处理培养细胞,不同浓度及不同时间染铅,应用改良的Takai法测定ERK活性的变化。结果 0．1、0．5、1．0、5．0μmol染铅,ERK活性依浓度依赖方式被激活,比活性倍数分别为2．36、3．16、7．00、3．19（P＜0．05）;PD098059抑制铅激活ERK活性,1．0μmol染铅30min时ERK活性最高,为2．66（P＜0．05）,120min时降至正常,为1．72（P＞0．05）。结论 低浓度染铅可短暂激活大鼠海马神经元原代培养细胞ERK。     

嗅球神经元的体外培养研究

目的 :建立稳定的、产出率高的嗅球神经元离散细胞培养系统。方法 :取出生后5～6d大鼠的嗅球于体外培养。48h后随机分为对照组和阿糖胞苷(Ara -C)组连续培养14d。动态观察细胞生长情况 ,进行免疫细胞化学染色。结果 :嗅球神经元可以在体外培养成功 ,且对神经元有特异性的标志蛋白抗神经丝蛋白 (NFP)呈阳性反应。加入抗有丝分裂剂Ara-C后2组标本计数第1d差别无统计学意义 (P>0.05) ;第5,7,14dAra-C组较对照组明显增高(P<0.01)。其神经突生长指数随着时间的延长而增长 ,于7d后逐渐下降。结论 :在有血清的培养条件下 ,离散后的嗅球神经元仍可在体外存活 ,并有神经突生长、标记蛋白的表达。为生理学、分子生物学及药理学研究提供了一个有用的实验模型。     

神经节苷脂GM1对谷氨酸介导的基底前脑神经元损伤的保护作用

目的 观察神经节苷脂GM1对谷氨酸造成的基底前脑神经元损伤的保护作用.方法 取出生后1 d乳鼠前脑基底神经元培养,随机分为正常对照组、模型组(谷氨酸损伤组)、神经节苷脂GM1保护组.用倒置相差显微镜进行活细胞观察,采用RT-PCR技术检测前脑基底神经元神经生长相关蛋白-43(Growth associated protein-43,GAP-43)的表达.结果 谷氨酸损伤组神经元在倒置相差显微镜下可见胞体回缩,突起消失或断裂.神经节苷脂GM1保护组的神经元绝大多数胞体饱满,突起明显,细胞间的网络联系仍清晰可见,接近于正常对照组;神经节苷脂GM1大脑基底神经节GAP-43的mRNA表达比谷氨酸损伤组高,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 神经节苷脂GM1能保护基底神经元免受谷氨酸兴奋性毒性的损伤.     

黄芩苷对庆大霉素致耳蜗螺旋神经节细胞损伤作用的影响

目的：探讨黄芩苷(baicalin，BA)对庆大霉素(gentamicin，GM)致小鼠耳蜗螺旋神经节(spiral ganglion，SG)细胞毒性的拮抗作用。方法：用MTT法检测庆大霉素对SG细胞的毒性作用以及黄芩苷对此作用的影响，用紫外分光光度法分别测定各实验组SG细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果：黄芩苷可显著抑制GM所导致的SG细胞中T-SOD和GSH-PX活性降低及MDA含量升高。结论：黄芩苷通过清除耳蜗螺旋神经节细胞内氧自由基和抑制脂质过氧化反应，拮抗庆大霉素耳毒性作用。     

SD新生大鼠耳蜗螺旋神经元的原代培养

目的建立用自制的鼠尾胶原联合胰酶消化法原代培养SD新生大鼠耳蜗螺旋神经元。方法采用出生3 d内的SD大鼠,取螺旋神经节组织,通过胰酶消化后在自制鼠尾胶原包被的培养皿中进行原代培养,应用神经微丝蛋白进行免疫组化鉴定。结果获得的螺旋神经元细胞在体外能较快地贴壁,可以存活、生长,细胞形态良好。结论自制鼠尾胶原联合胰酶消化的培养方法可获得良好状态的螺旋神经元细胞,为原代培养螺旋神经元提供了新思路。     

青光安颗粒剂含药血清对体外培养大鼠视网膜神经节细胞调亡的实验研究

目的为初步探讨中药青光安含药血清对体外培养视网膜神经节细胞(RGCs)的作用机制和为中药对青光眼的体外疗效研究提供一种新的研究方法。方法:不同浓度青光安颗粒剂和益脉康片剂给3月龄SD大鼠灌胃,获取不同含药浓度的大鼠血清;建立视网膜神经节细胞纯化培养的常压和高压模型,并用流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞百分率;利用流式细胞仪进行细胞凋亡中Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的检查。结果:成功获取中药的含药血清,并将其用于视网膜神经节细胞的体外培养;成功分离并培养了视网膜神经节细胞纯化培养模型,RGCs的混合培养最长可存活3-6周,RGCs的纯化培养可存活时间4-7天;成功对纯化培养的细胞进行压力造模。压力20mmHg、40mmHg、60mmHg、80mmHg,加压时间1-4小时均能促进RGCs的凋亡,其凋亡细胞的数目以80mmHg、4小时为最多(P<0．01)。含药血清作用于纯化培养的视网膜神经节细胞后,Bcl-2的表达随青光安含药浓度的增高而增高,Bax的表达随青光安含药浓度的增高而降低。结论:压力能促进RGCs的凋亡,其凋亡细胞的数目随压力的增大、加压时间的延长而增加;青光安含药血清能延缓RGCs的凋亡,对其有保护作用;利用含药血清对体外培养的细胞进行试验,是中药药效试验的重要方法之一。     

黄芩苷对庆大霉素致小鼠耳蜗螺旋神经节细胞毒性拮抗作用

目的:探讨黄芩苷(baicalin,BA)对庆大霉素(gentamicin,GM)致小鼠耳蜗螺旋神经节(spiralganglion,SG)细胞毒性作用 的拮抗机制。方法:用紫外分光光度法分别测定各实验组小鼠SG细胞中总超氧化物歧化酶(T SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。 结果:黄芩苷可显著抑制GM所导致的SG细胞中T SOD活性降低及MDA含量升高。结论:黄芩苷通过清除氧自由基和抗脂质 过氧化作用,拮抗庆大霉素致耳蜗螺旋神经节细胞毒性作用。     

Eugenol Inhibits ATP-induced P2X Currents in Trigeminal Ganglion Neurons

Eugenol is widely used in dentistry to relieve pain. We have recently demonstrated voltage-gated Na⁺ and Ca²⁺ channels as molecular targets for its analgesic effects, and hypothesized that eugenol acts on P2X₃, another pain receptor expressed in trigeminal ganglion (TG), and tested the effects of eugenol by whole-cell patch clamp and Ca²⁺ imaging techniques. In the present study, we investigated whether eugenol would modulate 5''-triphosphate (ATP)-induced currents in rat TG neurons and P2X₃-expressing human embryonic kidney (HEK) 293 cells. ATP-induced currents in TG neurons exhibited electrophysiological properties similar to those in HEK293 cells, and both ATP- and α ,β-meATP-induced currents in TG neurons were effectively blocked by TNP-ATP, suggesting that P2X₃ mediates the majority of ATP-induced currents in TG neurons. Eugenol inhibited ATP-induced currents in both capsaicin-sensitive and capsaicin-insensitive TG neurons with similar extent, and most ATP-responsive neurons were IB4-positive. Eugenol inhibited not only Ca²⁺ transients evoked by α ,β-meATP, the selective P2X₃ agonist, in capsaicin-insensitive TG neurons, but also ATP-induced currents in P2X₃-expressing HEK293 cells without co-expression of transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1). We suggest, therefore, that eugenol inhibits P2X₃ currents in a TRPV1-independent manner, which contributes to its analgesic effect.     

利多卡因对背根节神经元诱发簇放电的影响及机制

【摘要】目的探讨低浓度利多卡因对慢性背根节压迫（CCD）模型大鼠背根节（DRG）神经元诱发簇放电（EB）的影响及电流机制。方法24 只 SD 大鼠分为正常对照组和 CCD 组, 每组 12 只。 CCD 组用小钢柱在左侧腰 4、5 背根节行慢性压迫, 正常对照组未做任何处理。 应用在体细胞内技术记录 2 组大鼠 EB 放电的发生率及利多卡因对阈下膜电位振荡的影响, 用离体全细胞膜片钳技术记录不同浓度利多卡因对持续性钠电流（INaP）的影响。 结果 CCD组 EB 发生率增高, 达 45.97%（57/124）, 和正常对照组相比差异有统计学意义（χ² = 26.810, P<0.01）; DRG 局部给予低浓度（50 μmol/L）利多卡因抑制 INaP, 致阈下膜电位振荡幅度抑制, 进而影响 EB 发生。结论 低浓度利多卡因通过阻断 INaP抑制 EB     

小脑皮层神经细胞的体外原代培养

本文探讨了神经细胞培养的方法,建立了稳定的神经细胞培养模型。对培养各阶段的神经细胞进行了观察且系统地描述了它们的形态特征。并对培养的神经细胞的来源、轴突的形成、生长锥的形态和特点、神经细胞和突起聚集的原因等方面进行了讨论。     

大剂量放疗后豚鼠内耳螺旋神经节细胞Caspase3的表达

目的:探讨一次性大剂量放射治疗(放疗)后豚鼠内耳螺旋神经节细胞(SGC)的损伤情况。方法:白化豚鼠40只随机分为5组,每组8只,右耳为放疗组,左耳为对照组。豚鼠右耳颞部做一次性60Co照射70Gy。分别于放疗后1、4、7、14和30d处死,行耳蜗中轴切片HE染色及免疫组织化学染色。结果:HE染色显示放疗组的SGC在放疗后不同时间点均出现萎缩,放疗后各不同时间点螺旋神经节细胞萎缩率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。放疗组SGC的Caspase3的阳性表达比对照组增强,放疗后不同时间点SGC的Caspase3光密度值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:放疗可引起内耳SGC的损伤,Caspase3在SGC的表达上调可能与细胞损伤有关。     

焦亚硫酸钠对大鼠背根节神经元胞内钙离子浓度的影响

目的:探讨一种食品添加剂焦亚硫酸钠(SMB)对大鼠背根节神经元(DRG)的生理作用和毒性效应。方法:急性分离大鼠背根节神经元细胞后,应用Ca2+荧光指示剂Fura-2/AM标记细胞检测大鼠DRG神经元细胞内钙离子浓度的变化。结果:SMB可增大大鼠背根神经元胞内钙离子浓度。结论:SMB可以引起大鼠背根神经元胞内钙超载,进而可能导致一系列与钙离子浓度有关的中枢神经系统损伤。     

Primary Culture of Rat Gastric Epithelial Cells as an in Vitro Model to Evaluate Antiulcer Agents

Primary rat gastric cell cultures were investigated as an in vitro model for evaluating antiulcer agents. Following exposure to concentrations of up to 5 mg/mL of an antiulcer agent sucralfate, an aluminum hydroxide complex of sucrose octasulfate, cultured cells were treated with either pH 3.5 medium or 3.5 mM indomethacin. Cytoprotection was evaluated by colony forming efficiency, neutral red uptake, and 3-(4,5-dimethyl-2-thiazoyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) hydrolysis. By each measure, and depending on damaging agent, 2 and 5 mg/mL sucralfate provided partial (50% of untreated control) to near-complete (90% of untreated control) cytoprotection, respectively. Aluminum hydroxide also provided partial (55% of untreated control) to near-complete (more than 90% of untreated control) cytoprotection at 2 and 5 mg/mL, respectively, for the pH 3.5 medium-induced damage. Over a concentration range of 0.05 to 5 mg/mL, the potassium salt of sucrose octasulfate, KSOS, stimulated cell growth up to 40–60% over untreated controls but had little or no cytoprotective action in the presence of either 3.5 mM indomethacin or pH 3.5 medium. Overall results suggested that sucralfate may have at least two roles in influencing gastric epithelial cell function, cytoprotection and stimulation of cell growth in vitro. These observations serve as a basis for further study of in vitro models in evaluating the cytoprotective activity of antiulcer agents and their respective mechanisms of action.     

可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：研究可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺( OGD)损伤的保护作用。方法取培养8 d的皮质神经元,分为正常对照组、模型对照组、可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)预处理组。神经元氧糖剥脱损伤模型通过化学性缺氧、孵育液缺糖的方法建立。神经元损伤程度采用噻唑蓝( MTT)染色法和检测乳酸脱氢酶( LDH)的释放量来进行评价,观察预给予可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)对神经元损伤的保护作用。结果显微镜下,正常对照组细胞密集,胞体饱满,边缘光滑,有较强折光性;神经元存活率(100.00±32.12)％,LDH释放比率(100.00±37.51)％。模型对照组细胞核固缩,细胞膜不完整,折光性差,MTT染色吸光度值明显降低,神经元存活率(53.61±7.62)％,LDH释放量显著增加,释放率为(166.07±9.65)％。可乐定(1.0,3.0,10μmol·L-1)预处理可明显逆转ODG损伤所致细胞形态的改变,剂量依耐性升高MTT染色吸光度值,神经元存活率分别为(67.53±10.54)％,(71.50±9.79)％和(87.48±5.29)％,同时可明显降低LDH的释放量,释放率分别为(136.45±25.72)％,(130.92±24.94)％和(121.63±32.68)％。结论可乐定对原代培养大鼠皮质神经元ODG损伤具有良好的保护作用。     

大鼠肝细胞的原代培养及鉴定

目的：探讨大鼠肝细胞原代培养的方法及细胞的鉴定。方法：采用胶原酶消化获取大鼠肝细胞进行纯化、培养。并采用免疫组织化学方法对其进行鉴定。结果：培养的肝细胞产量高、活力好，用相差显微镜对不同生长时期的肝细胞进行观察证实了细胞贴壁后变平变薄，双核细胞和多核细胞呈岛状连接的形态学特性，采用抗大鼠细胞角蛋白（ck18）的特异抗体进行免疫组化细胞爬片鉴定，经SP染色DAB显色后，阳性着色部位在胞浆呈棕黄色颗粒，阴性对照未见着色。结论：成功地体外培养了大鼠肝细胞并对其进行了鉴定，为进一步的实验研究奠定了基础。     

体外培养人眼结膜上皮细胞

目的探索体外分离培养人眼结膜上皮细胞的方法。方法用组织块培养法培养人眼结膜上皮组织，分别种植于培养皿及处理过的羊膜上，培养2周，观察结膜上皮细胞的生长特性。结果接种在培养皿的结膜上皮约6 d组织块之间可融合成膜状，细胞为单层上皮细胞。接种在羊膜上的结膜组织生长较慢，约2周组织块之间可互相连接，融合成膜状，细胞为复层上皮细胞。免疫组化鉴定，结膜上皮细胞CK13染色阳性。结论组织块培养法是人眼结膜上皮细胞培养的较好方法，种植在羊膜上可获得复层上皮细胞。