芪仙通络方及其拆方对脑梗死大鼠室管膜下区神经发生及p38MAPK活化的影响

目的观察芪仙通络方及其拆方对脑梗死大鼠室管膜下区神经发生及p38MAPK活化的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芪仙通络方组(全方组)、补肾活血拆方组(拆方1组)、益气温阳拆方组(拆方2组)和胞磷胆碱组,线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,造模后第3日开始灌胃给药,同时腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)标记脑内增殖细胞,每日1次,连续12d。于造模后第3、7、14日对大鼠神经功能进行评分;免疫荧光染色观察大鼠缺血侧室管膜下区巢蛋白(Nestin)/Brd U、双肾上腺皮质激素(doublecortin,DCX)/BrdU、神经元核抗原(NeuN)/Brd U双标阳性细胞数;免疫组化检测大鼠缺血侧室管膜下区磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白表达;Pearson相关分析法分析Nestin/BrdU、DCX/Brd U和NeuN/BrdU双标阳性细胞数与神经功能评分和p-p38MAPK蛋白表达的相关性。结果与假手术组比较,模型组大鼠各时间点神经功能评分明显升高(P0.01),大鼠缺血侧室管膜下区Nestin/BrdU、DCX/Brd U和Neu N/BrdU双标阳性细胞数明显增加(P0.05),p-p38MAPK蛋白表达升高,但差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,各给药组大鼠第7、14日神经功能评分明显降低(P0.01),大鼠缺血侧室管膜下区Nestin/BrdU、DCX/BrdU、NeuN/BrdU双标阳性细胞数明显增多(P0.01),p-p38MAPK蛋白表达显著上调(P0.01),全方组作用最显著(P0.05)。全方组大鼠缺血侧室管膜下区Nestin/BrdU、DCX/BrdU、Neu N/BrdU双标阳性细胞数与神经功能评分呈显著负相关,与p-p38MAPK蛋白表达呈显著正相关。结论芪仙通络方及其拆方可改善脑梗死大鼠受损神经功能,其机制可能与促进缺血侧室管膜下区p38MAPK活化、上调内源性神经发生水平有关。     

养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞表达的影响

目的观察养阴通脑颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠内源性神经干细胞表达的影响。方法线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,缺血90 min后再灌注。大鼠随机分为假手术组、模型组、养阴通脑颗粒组(1. 65 g/kg),再灌注后24 h灌胃给药。给药后第1、7、14天,Longa法进行神经功能评分,同时各组随机选择6只大鼠处死,免疫荧光检测缺血侧室管膜下区(SVZ)、颗粒下层区(SGZ) Brd U、Brd U/Nestin、Brd U/Neu N、Brd U/GFAP阳性细胞数。结果与模型组比较,给药后第7、14天养阴通脑颗粒组Longa评分显著降低(P 0. 05,P 0. 01),Brd U/Nestin阳性细胞数显著增加(P 0. 01);第1、7、14天Brd U阳性细胞数显著增加(P 0. 01),Brd U/GFAP阳性细胞数显著减少(P 0. 01);第14天Brd U/Neu N阳性细胞数显著增加(P 0. 05)。结论养阴通脑颗粒可通过激活内源性神经干细胞来促进其增殖,并分化为成熟的神经元,同时能减轻神经胶质细胞过度增殖,促进神经发生,减轻神经功能缺损。     

益气化痰通络方对急性脑缺血模型大鼠缺血海马区神经再生及脑内脑源性神经营养因子表达的影响

目的观察益气化痰通络方对急性脑缺血模型大鼠缺血海马区神经再生及脑内脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组,每组10只,分别为假手术组、模型组、尼莫地平组和益气化痰通络方组,采用改良线栓法制备急性脑缺血大鼠模型。Ayelet Levy评分法测评大鼠神经功能评分,观察大鼠缺血海马区神经再生情况以及脑内BDNF表达的变化。结果模型组大鼠的海马神经元密度和神经功能缺损评分、Caspase-3蛋白含量明显下降(P 0.05),而海马神经元细胞脱落率、Bcl-2蛋白含量、BrdU阳性细胞数目以及BDNF mRNA、BDNF阳性表达和BDNF蛋白明显上升(P 0.05);给予尼莫地平和益气化痰通络方治疗后大鼠海马神经元密度和神经功能缺损评分、Caspase-3蛋白含量以及BDNF m RNA、BDNF阳性表达和BDNF蛋白明显提升(P 0.05),海马神经元细胞脱落率、Bcl-2蛋白含量明显下降(P 0.05),且尼莫地平组与益气化痰通络方组神经功能评分、细胞脱落率、BrdU阳性细胞数目以及BDNF m RNA和BDNF阳性表达比较,差异有统计学意义(P 0.05)。结论益气化痰通络方可改善急性脑缺血模型大鼠缺血海马区神经再生和神经功能损伤,提高BDNF表达。     

醒脑通络片对脑缺血损伤大鼠内源性神经干细胞的影响

目的观察醒脑通络片(黄芪、川芎、桃仁、红花、鸡血藤等)对脑缺血损伤大鼠内源性神经干细胞的影响。方法将120只SD大鼠随机分为假手术组和模型组(生理盐水灌胃),醒脑通络片小、中、大剂量组5组,每组各24只,采用线栓法致大鼠脑缺血再灌注损伤模型。脑缺血再灌注后3、7、14、28 d时,神经功能评分后处死动物,用免疫组化法观察缺血侧海马溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)、巢蛋白(Nestin)的表达。结果假手术组海马区仅有少量Brd U、Nestin阳性细胞表达,模型组及醒脑通络片各组再灌注3 d后Brd U、Nestin阳性细胞表达开始增多,7~14 d达高峰,28 d明显下降。和模型组比较,醒脑通络片各组Brd U、Nestin阳性细胞明显增多(P0.05或0.01)。醒脑通络片各组在再灌注14和28 d神经功能均显示恢复,和模型组比较有显著性意义(P0.05或0.01)。结论醒脑通络片可以促进内源性神经干细胞增殖、分化,可能为其治疗缺血性脑血管病的机制之一。     

柔肝通络汤对MCAO大鼠内源性干细胞表达的影响

目的观察柔肝通络汤对缺血再灌注脑损伤大鼠内源性神经干细胞增殖分化表达的影响。方法采用改良Longa法制作大鼠大脑中动脉堵塞(MCAO型)所致缺血再灌注脑损伤模型;将120只SD雄性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组(蒸馏水灌胃)和柔肝通络汤组(柔肝通络汤灌胃),其中按照缺血2 h再灌注6 h、1 d、3 d、7 d、14 d各分为5个亚组,每组6只。动态观察各时间点大鼠神经功能学评分;腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记脑组织内增殖细胞,分别采用BrdU/NeuN神经元核抗原(Neu N)、BrdU/GFAP胶质纤维酸性蛋白(GFAP)标记大脑皮质缺血区域新生神经元和星形胶质细胞,并计算阳性细胞数目。结果与模型组比较,柔肝通络汤组术后3、7、14 d神经功能缺损评分明显降低(P 0.05);柔肝通络汤组BrdU、BrdU/NeuN的阳性细胞数目均明显升高(P 0.05),BrdU阳性细胞数在第7日达到高峰,随后呈下降趋势,BrdU/NeuN在第3～7日增加迅速,第7日后增加缓慢;给药后BrdU/GFAP的阳性细胞数较模型组减少(P 0.05)。结论柔肝通络汤可以促进缺血再灌注脑损伤大鼠内源性神经干细胞增殖,并分化为成熟神经元,同时抑制星形胶质细胞的过度增殖,促进神经再生和修复,改善神经功能。     

电针对MCAO模型大鼠海马区内源性神经干细胞表达的影响

目的观察电针对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)后缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)不同时间点大鼠海马区内源性神经干细胞(endogenous neural stem cells,e NSCs)表达的影响,探讨电针对急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)远隔损害的可能机制。方法雄性SPF级SD大鼠用线栓法制作MCAO模型,采用随机数字表法分为假手术组、脑梗死组、电针组,每组30只;假手术组仅做手术创伤,脑梗死组仅作MCAO缺血再灌注处理;电针组选取"百会"和"大椎"行电针治疗,每天1次,每次30 min;治疗后第1、7、14天分别评定神经功能缺损程度,同时在各组随机选取6只大鼠处死,分离出缺血侧海马组织,采用免疫荧光法检测海马组织e NSCs增殖与分化表达。结果 (1)大鼠神经功能缺损评分方面:与假手术组比较,脑梗死组在第1、7、14天神经功能缺损评分增高(P0.05);与脑梗死组比较,电针组在第1、7、14天神经功能缺损评分降低(P0.05)。(2)Brd U阳性细胞表达:与假手术比较,脑梗死组缺血侧海马CA1、CA3、DG处Brd U阳性细胞数在第1、7、14天均增多(P0.05);与脑梗死组比较,电针组Brd U阳性细胞数均增多(P0.05)。(3)Nestin阳性细胞表达:与假手术组比较,脑梗死组海马齿状回Nestin阳性细胞数在第1、7、14天均增多(P0.05);与脑梗死组比较,电针组Nestin阳性表达增加,但仅第7天差异明显(P0.05)。(4)DCX阳性细胞表达:与假手术组比较,脑梗死组第1、7天DCX阳性细胞增多(P0.05);与脑梗死组比较,电针组第7、14天DCX阳性细胞增多(P0.05)。(5)Neu N阳性细胞表达:与假手术组比较,脑梗死组海马齿状回Neu N阳性细胞表达在第1、7、14天均增加,但仅第14天时差异明显(P0.05);与脑梗死组比较,电针组Neu N阳性细胞表达增多,但仅第1、14天时差异明显(P0.05)。(6)GFAP阳性细胞表达:与假手术组比较,脑梗死组缺血侧海马齿状回GFAP阳性细胞表达在第1、7、14天均明显增多(P0.05);与脑梗死组比较,电针组GFAP阳性细胞表达增多不显著,仅第14天时差异明显(P0.05)。结论大鼠脑梗死后海马区存在e NSCs增殖与分化,电针治疗可促进脑梗死后神经缺损功能恢复,其机制可能与电针促进脑梗死海马区e NSCs增殖与分化,抑制e NSCs过度分化为星形胶质细胞,及早长时程促进e NSCs分化为神经元,促进神经再生等机制密切相关。     

补阳还五汤对脑梗死大鼠内源性神经干细胞增值分化作用的研究

目的:研究补阳还五汤对内源性神经干细胞(NSC)归巢缺血脑组织的作用。方法:将240只雄性大鼠随机分为模型组、假手术组、补阳还五汤治疗组、正常对照组,采用线栓法制作脑梗死模型,分别给予不同处理,于术后1、3、7、14、21、28天6个时间点分批处死大鼠。用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马区Brd U标记的阳性细胞情况和梗死区域及相对应区域的Neu N标记的阳性细胞情况。结果:正常组和假手术组大鼠的海马区可见到少量的Brd U标记阳性细胞,与模型组脑缺血区域相对应区域可见大量的Neu N标记阳性细胞,差异均无明显统计学意义(P0.05),与假手术组相比,模型组和补阳还五汤治疗组大鼠Brd U标记阳性细胞数目增多,Neu N标记阳性细胞数目减少,差异均具有统计学意义(P0.05),与模型组相比,补阳还五汤治疗组大鼠Brd U、Neu N标记阳性细胞数目均增多,且第7天时Brd U标记阳性细胞数目达到高峰,第14天时Neu N标记阳性细胞数目达到高峰,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:补阳还五汤可以诱导脑梗死大鼠内源性神经干细胞的增殖分化,在一定程度上具有促进神经再生的作用。     

夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠神经干细胞分化趋势的影响

目的:观察夹脊电针对急性脊髓损伤大鼠脊髓组织神经干细胞增殖分化的影响,探究其与急性脊髓损伤后神经细胞再生的关系。方法:选用72只体重在200~220 g之间的雄性SD大鼠。随机将大鼠分为假手术组,模型组,电针组和药物组,每组分术后1 d、7 d、14 d等时间点,每个时间点有6只。采用改良的Allen法建立大鼠T9~T10段脊髓急性中度损伤模型,用免疫荧光双标法检测各组大鼠脊髓组织中Brd U/nestin阳性细胞的共表达,用BBB评分反映大鼠的运动功能恢复。结果:治疗结束后,模型组、电针组和药物组BBB评分和Brd U/nestin阳性细胞数呈逐级增高趋势,其中与模型组相比,电针组Brd U/nestin阳性细胞数明显增多(P0.05),BBB评分明显提高(P0.05)。结论:夹脊电针干预后,Brd U/nestin表达增多,BBB评分提高,促进了大鼠神经干细胞的分化和运动功能的恢复。     

三七总皂苷对全脑缺血成年大鼠侧脑室室管膜区神经再生的影响

目的探讨三七总皂苷(TSPN)对全脑缺血后成年大鼠侧脑室室管膜区(SVZ)神经再生的影响。方法采用四血管阻断法制作全脑缺血模型。大鼠分成假手术组、模型组和TSPN组。TSPN组大鼠全脑缺血后30 min ip给予剂量为75mg/kg的TSPN,每天1次,模型组给予等体积的生理盐水,连续14 d。分别于再灌注1、3、7、14 d处死大鼠,免疫组织化学染色观察SVZ区Brd U和微管相关蛋白Doublecortin(DCX)的表达,免疫荧光双标观察SVZ区Brd U/DCX、DCX/Ki67、GFAP/DCX的共表达情况。结果 TSPN组SVZ区7、14 d的Brd U+细胞数目均显著高于模型组对应的时间点(P0.01、0.001);TSPN组和模型组SVZ区DCX+细胞的平均光密度值在7、14 d有统计学差异(P0.01、0.001);TSPN组SVZ区14 d的Brd U/DCX细胞,均显著多于模型组(P0.01);TSPN组SVZ区Ki67/DCX细胞在7、14 d的表达多于模型组,差异显著(P0.01、0.001);两组SVZ区GFAP/DCX细胞与DCX的比值在3、7、14 d差异显著(P0.05、0.001)。结论 TSPN促进全脑缺血后大鼠SVZ区神经再生,加速全脑缺血后大鼠SVZ区神经祖细胞增殖和分化,促进全脑缺血后大鼠SVZ区星形胶质细胞转化新生未成熟神经元。     

补阳还五汤对Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中的作用

目的探讨Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖中的作用及补阳还五汤促神经再生的机制。方法采用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制小鼠脑缺血模型,将野生型(wild type,WT)和小凹蛋白-1基因敲除小鼠(caveolin1 gene knockout,Cav1 KO)分别随机分为假手术组、模型组、补阳组,每组12只,腹腔注射Brd U标记增殖细胞,干预7 d后,采用免疫荧光Brd U/Nestin双标法检测小鼠缺血侧海马NSCs增殖情况,Western blot法检测Notch1、NICD、Hes1蛋白表达,Real time PCR法检测Notch1、Hes1m RNA表达。结果 MCAO法成功复制了小鼠脑缺血模型;WT模型组、补阳组和KO模型组、补阳组缺血侧海马Brd U/Nestin双标阳性细胞,Notch1、NICD、Hes1蛋白表达及Notch1、Hes1m RNA表达均增加,与相应假手术组比较,差异有统计学意义(P0.01,P0.05),同时,WT模型组要高于KO模型组(P0.05),WT补阳组要高于WT模型组和KO补阳组(P0.01,P0.05)。结论Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中发挥重要调控作用;通过上调Cav1/Notch1/Hes1通路活性是补阳还五汤促进缺血海马神经再生作用机理之一。     

补阳还五汤及其拆方对大鼠脑缺血后神经发生的影响

目的研究补阳还五汤及其拆方对大鼠局灶性脑缺血后神经发生（neurogenesis）的影响及作用机制。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,缺血90min后再灌注,分假手术组、模型组、补阳还五汤组、补气组、活血组,缺血后24h灌胃给药,连续14天。并腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bro-modeoxyuridine,BrdU）,1次,天,连续14天。在缺血后第1、7、14天,采用改良的神经症状严重程度评分（mNSS）和角实验评价神经功能;缺血后第14天,采用免疫荧光双标检测BrdU／Nestin、BrdU／NeuN和BrdU／GFAP免疫阳性细胞,Westernblot检测脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达。结果与模型组比较,全方组及补气组大鼠mNSS评分降低和右转次数减少（P〈0．05,P〈0．01）,侧脑室下区BrdU／Nestin免疫阳性细胞、缺血皮层周边区BrdU／NeuN和BrdU／GFAP免疫阳性细胞数量增多（P〈0．05,P〈0．01）,BDNF和VEGF蛋白表达增加（P〈0．01）;但补气组BrdU／GFAP差异无统计学意义（P〉0．05）,活血组各项指标差异无统计学意义（P〉0．05）。与全方组比较,补气组和活血组大鼠BrdU／Nestin、BrdU／NeuN和BrdU／GFAP免疫阳性细胞显著减少（P〈0．01）,BDNF和VEGF蛋白表达下降（P〈0．01）。结论补阳还五汤能显著促进脑缺血后神经发生和神经功能恢复,机制可能与上调BDNF和VEGF蛋白有关,方中补气药和活血药具有协同作用。     

Electroacupuncture Intervention Combined with Rat Nerve Growth Factor on Expression of Nestin and NeuN in MCAO Rats

Objective:To observe the effect of electroacupuncture(EA) on the expression of Nestin and Neuron specific nuclear protein antigen(neuron-specific protein,NeuN) at different time points after cerebral ischemia reperfusion injury.Methods:One hundred and fifty SD male rats were used to generate a one-side middle cerebral artery occlusion(MCAO) model using thread embolism method,then randomly divided them into the sham operation group,MCAO group,EA group,Nerve Growth Factor(NGF) group and EA+NGF group.The three benzene chloride tetrazolium(TTC) staining was used to detect the volume of cerebral infarction in the rats.Immunohistochemical staining was used to observe the expression of immune positive cell markers such as endogenous neural stem cell(NSC) marker protein Nestin,bromodeoxyuridine(Brdu) and NeuN on 1,7 and 14 days after cerebral ischemia in rats,and compared with the sham operation group.Results:TTC detection of the cerebral infarction volume showed that the nerve function injury score of the EA+ NGF group was significantly lower than MCAO group(P < 0.01).Ischemia led to severe loss of brain function,and EA+ NGF helped in the recovery of cerebral ischemia.Immunohistochemical results showed almost no expression of Nestin in the sham operation group;positive cells was expressed significantly higher Nestin on the 7th day(P < 0.05);then was peaked on the 14 th day.Nestin/BrdU labeled cells in the sham operation group showed minor expression,which was increased on the 7th day(P < 0.05) and was peaked on the 14 th day after ischemia.The differences were statistically significant on the 7th and 14 th day among the EA group,NGF group,EA+NGF group and MCAO group(P< 0.05).NeuN expression was higher in the sham operation group,and was increased on the 7th day after ischemia.NeuN/BrdU labeled cells showed higher expression in the sham operation group,the most obvious improvement was in the EA group,and the NGF and EA+NGF groups also showed significantly increased expression,while MCAO group showed the least.Conclusion:Protective effect of EA combined with NGF on cerebral ischemia reperfusion injury may induce nerve cell regeneration,accelerate proliferation of newborn cells,and promote differentiation of newborn cells,which is important for the recovery of nerve function.     

通窍化栓汤对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织超微结构的影响

目的: 观察不同剂量的通窍化栓汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型脑组织超微结构的影响,并探讨其可能的作用机制,为临床通窍化栓汤治疗急性脑梗死提供实验依据。方法: 将SD大鼠随机分为5组:通窍化栓汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、模型组、假手术组。采用可逆性大脑中动脉线栓法制备成局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO大鼠模型),给予相应的剂量按17.50,8.75,4.35 g·kg^-1·d^-1、生理盐水治疗15 d后,观察脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量变化及脑组织超微结构变化。结果: 与假手术组比较,模型组MDA含量显著增加,SOD活性显著降低(P<0.05);与模型组相比,通窍化栓汤各剂量组均能降低脑组织中MDA含量,升高SOD活性,有极显著差异(P<0.01)。通窍化栓汤高剂量组与中、低剂量组相比有显著性差异(P<0.05),并能够减轻脑组织损伤后细胞凋亡。结论: 高剂量通窍化栓汤能明显减轻神经细胞变性坏死,减少细胞凋亡,从而改善神经功能缺损,其机制可能与清除自由基有关。     

化痰通络方对急性脑梗死大鼠溶栓后脑微血管内皮细胞构成蛋白基因表达的影响

目的： 观察化痰通络法对急性脑梗死大鼠重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）溶栓后脑微血管内皮细胞构成蛋白基因表达的影响,为化痰通络法防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤提供实验依据。 方法： 240只健康SD大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络方低、中、高剂量联合rt-PA组（联合组）,每组40只,采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）,rt-PA组与化痰通络方联合rt-PA组于血栓注入后3 h一次性予以rt-PA溶栓治疗,后者联合给予低、中、高剂量（生药3.6,7.2,14.4 g·kg^-1）化痰通络方灌胃治疗,每日2次,分别于造模后6,24,72 h,7 d 4个时点,应用RT-PCR法观察不同时相大鼠皮质及海马紧密连接蛋白Occludin,claudin-1,Zonula occludins protins-1（ZO-1）基因的表达。 结果： 在不同时点,各实验组在不同脑组织中Occludin,claudin-1,ZO-1基因表达量均在6 h最高,24 h最低,72 h,7 d数值逐渐升高,且联合组升高趋势更明显。与组内6 h时比较,rt-PA组、联合低、中、高剂量组Occludin,claudin-1,ZO-1基因表达量多于24,72 h（P < 0.05）。而同一时点与模型组相比,联合中、高剂量组各时点Occludin,claudin-1基因表达量均明显升高（P < 0.05）。而ZO-1基因表达量虽具有相似变化趋势,但仅在24,72 h,7 d差异具有统计学意义（P < 0.05）。 结论： 化痰通络方联合rt-PA溶栓,可通过调控微血管内皮细胞构成蛋白Occludin,claudin-1,ZO-1基因的表达,进而保护血脑屏障完整性,防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注损伤的发生与发展。     

脑缺血预处理对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及对神经营养因子表达的影响

目的:观察脑缺血预处理(CIP)对再次缺血损伤大鼠的保护作用及脑组织中神经营养因子脑源性神经营养因子(BDNF),胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的变化,探讨脑缺血耐受的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为3组,分别为假手术组(Sham),脑缺血再灌注损伤组(I/R),脑缺血预处理再次损伤组(CIP+MCAO)。采用神经缺损评分(NDS)法评价行为学的改变,苏木素-伊红(HE)染色法评价脑组织病理形态的改变、酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的水平,免疫组化法观察BDNF,GDNF,VEGF在皮质、海马CA1区的表达变化。结果:与Sham组比较,I/R组大鼠神经缺损评分明显升高,脑组织病理损伤程度较明显,血清中NSE水平明显升高(P0.01),大鼠患侧脑组织皮层、海马CA1区BDNF阳性表达面积和积分吸光度IA均明显降低,但仅有脑组织皮层与Sham组比较有统计学差异(P0.01);与I/R组比较,CIP+MCAO组可明显降低大鼠的神经缺损评分(P0.05),明显减轻脑组织病理损伤程度(P0.05),降低血清中NSE水平(P0.01),CIP+MCAO组大鼠患侧脑组织皮层、海马CA1区BDNF,VEGF阳性表达面积和IA均明显增加(P0.05,P0.01)。GDNF的阳性表达虽有增加的趋势但没有统计学差别。结论:脑缺血预处理的神经保护作用与上调BDNF,VEGF内源性保护蛋白的表达有关。     

祛痰通络中药对大鼠脑梗死后原位干细胞增殖 分化及神经功能恢复的影响

目的：观察大鼠脑梗死后脑内自体神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）的增殖、迁移与分化以及祛痰通络中药对其影响。方法：Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为假手术组（N组）、生理盐水组（A组）、祛痰通络中药治疗组（B组）,比较各组大鼠在脑梗死模型建立后24h、3天、7天、14天各时间点神经功能缺损评分,并应用免疫组化法检测并比较各时间点自体神经干细胞增殖情况、免疫荧光双标后观察增殖干细胞的分化情况。结果：脑梗死后第14天祛痰通络中药治疗组评分低于生理盐水组（P〈0.05）,第3天开始增殖细胞、第7天开始分化为神经元样细胞数均多于A组（P〈0.05）。结论：祛痰通络中药可促进脑梗死后自体神经干细胞的增殖并且更多的分化为神经元,从而促进脑梗死大鼠的神经功能恢复。     

不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后神经干细胞增殖的影响

目的: 研究不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后室下区神经干细胞增殖的影响。 方法: 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血24 h后分别ig黄芪剂量为120, 60, 30, 15 g的补阳还五汤(剂量分别为13.07, 7.61, 4.88, 3.55 g·kg^-1),并ip 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU,50 mg·kg^-1),1次/d,连续14 d。在缺血后第1, 7, 14天,采用改良的神经症状严重程度评分和角实验评价感觉运动功能;缺血后第14天,采用BrdU/Nestin免疫荧光双标检测室下区神经干细胞增殖情况。 结果: 与模型组比较,在缺血后第7, 14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著改善神经症状评分和减少大鼠右转次数(P<0.01或P<0.05);缺血后第14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著促进室下区神经干细胞增殖(P<0.01)。 结论: 大剂量黄芪组方的补阳还五汤能显著促进脑缺血后室下区神经干细胞增殖和神经功能恢复,以黄芪剂量为120 g的效果最佳。     

三七总皂苷对全脑缺血大鼠海马脑水肿及GFAP表达的影响

目的探讨三七总皂苷(TSPN)对全脑缺血后成年大鼠海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达及脑水肿的影响。方法采用四血管阻断法制作全脑缺血模型,大鼠被随机分成假手术组、模型组和TSPN组。TSPN组大鼠全脑缺血后30 min ip 75 mg/kg TSPN,每天1次,假手术组和模型组ip给予等体积的生理盐水,连续14 d。分别于再灌注1、3、7、14 d后处死。采用干湿法计算各组大鼠脑组织含水量,免疫组织化学染色观察海马齿状回(SGZ)区GFAP的表达,免疫荧光双标观察SGZ区GFAP/DCX的共表达情况,免疫印迹技术检测海马CA1区GFAP蛋白表达水平。结果 TSPN组大鼠脑组织含水量显著低于模型组(P0.05);TSPN组、模型组SGZ区GFAP+细胞密度值在3、7、14 d有统计学差异(P0.05);两组SGZ区GFAP/DCX共表达细胞与DCX阳性表达细胞数目的比值在第7、14天差异显著(P0.05);免疫印迹结果显示TSPN组海马CA1区GFAP蛋白表达水平在第3、7、14天显著高于模型组(P0.05)。结论 TSPN可通过促进全脑缺血后大鼠SGZ区星形胶质细胞活化、促进神经再生、减轻脑水肿而发挥神经保护作用。     

脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注海马齿状回细胞增殖分化的影响及量效作用

目的:从海马齿状回(dentate gyrus,DG)细胞增殖和分化的变化揭示脑脉通抗老年脑缺血再灌注损伤的保护机制及其量效关系.方法:采用MCAO方法制作脑缺血(缺血3 h再灌注12 d)动物模型,观察脑脉通(大、中、小剂量)对脑缺血再灌注大鼠神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、海马齿状回细胞增殖、分化及其变化的影响.结果:老龄模型组脑组织含水量、神经症状积分、Brdu阳性细胞、BrdU/NeuN双标阳性细胞、BrdU/GFAP双标阳性细胞数目均高于假手术组;脑脉通组(大、中、小剂量)、尼莫地平组脑组织含水量、神经症状积分均低于模型组,脉通组(大、中、小剂量)、尼莫地平组Brdu阳性细胞、BrdU/NeuN双标阳性细胞数目高于模型组,BrdU/GFAP双标阳性细胞数目低于模型组;脑脉通中剂量组神经症状积分、Brdu阳性细胞数目高于尼莫地平组;脑脉通中剂量组大鼠神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、均低于脑脉通小剂量组,Brdu阳性细胞、BrdU/NeuN双标阳性细胞数目高于脑脉通小剂量组.结论:脑缺血可激活大鼠DG神经干细胞增殖;脑脉通拮抗脑缺血再灌注损伤机制与其促进DG区神经干细胞增殖和分化有关,且以脑脉通中剂量效果最全面.