人胎儿喉黏膜上皮细胞的发育分化特点

【目的】研究中国人胎儿喉黏膜上皮细胞发育分化的特点。【方法】收集9—40周胎儿喉标本33例。应用连续切片HE染色、细胞角蛋白免疫组化染色、扫描电镜和透射电镜观察其黏膜上皮。【结果】9周胎喉黏膜由1—2层低柱状细胞组成，仅表层细胞表达微弱的角蛋白，13周后出现多种类型的上皮细胞．上皮全层均表达细胞角蛋白；会厌舌面、声带被覆鳞状上皮，会厌喉面、室带、喉室及声门下区被覆假复层纤毛柱状上皮，其基底细胞和中间细胞的胞浆内含有丰富的胞浆泡状系统、张力原纤维和桥粒：过渡上皮和纤毛上皮中均散在岛状鳞状上皮但出现时间不一致。【结论】人喉黏膜上皮细胞的分化发生于胎儿9-13周期间；纤毛上皮的基底细胞和中间细胞具有双向分化的潜能；过渡上皮和纤毛上皮中出现岛状鳞状上皮是生理现象，前者由复层立方上皮分化而来，后者由纤毛上皮分化而来。     

国人胎儿肺泡发育与上皮细胞分化的透射电镜观察

目的 观察国人胎儿肺泡发育及肺泡上皮的分化过程。方法 自愿水囊引产的国人胎儿10~34周肺组织,HE染色光镜及透射电镜观察。结果 胎儿10~16周,胎肺的发育以支气管树分支和管壁结构的逐渐完善为主,终蕾上皮为柱状的未分化细胞。17~24周,支气管树的分支明显增多,上皮细胞的分化趋于成熟。胎儿25周以后,支气管远端形成许多内壁光滑的原始肺泡,其上皮细胞以一种胞核较大,胞质核细胞器较少的原始细胞为主,但开始分化出Ⅱ型肺泡细胞。此时,肺泡上皮亦出现少量扁平的Ⅰ型肺泡细胞,但以Ⅱ型肺泡细胞为主。32周时,肺泡的发育逐渐成熟,Ⅰ型肺泡细胞逐渐增多。结论 在人胎肺的发育过程中,Ⅱ型肺泡细胞的出现并不明显早于Ⅰ型肺泡细胞,原始肺泡上皮所衬的较幼稚的细胞,可能是成熟肺泡上皮细胞的干细胞或祖细胞,Ⅰ型肺泡细胞的出现是胎肺开始具有换气功能的标志,32周时换气功能趋于完善。     

国人胎儿12～40周喉发育动态变化

目的：观察国人胎儿喉发育变化及进一步探讨声带肌出现时间和声带固有层分化程度。方法：对３２例国人健康胎儿尸体（１２～４０周）的喉进行形态学观察 和测量。结果：胎儿期喉的生长与胎龄密切相关且具有显著性（ｒ≥０．８４，Ｐ〈０．０５）。１２～３０周胎喉匀速生长，未见生长高峰附段，３０周后生长速度减慢。１２～２８周胎儿喉左右径与前后径之比２：１，２８～４０周近似１．６：１，其形态和组织学方面均与新生儿相近。     

人喉上皮细胞的体外培养及生物学特性

目的建立一种有效的培养体系并提供一个研究人喉上皮细胞的体外模型。方法采用胎牛血清(2%)并添加促生长因子的培养基,对中晚期引产胎儿的喉黏膜进行组织块原代、传代培养,并通过倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜、细胞角蛋白免疫组化染色观察培养细胞的特性。结果组织块接种后3d即可见生长晕,10～14d时汇合成片,传代后24h即见细胞贴壁并开始增殖,约12d左右连接成片,可传代2～4代;组织块表层、深层细胞呈现不同的表现;培养细胞呈扁平、多角形,胞浆含张力原纤维,细胞间可见丰富的桥粒连接,细胞角蛋白表达阳性。结论本实验采用的培养方法和条件适宜人喉上皮细胞的生长;从生物学行为来看,体外培养的人喉上皮细胞来自于组织块的基底细胞和中间细胞,并与其来源细胞一样具有增殖能力和分化潜能,具有广阔的应用前景。     

国人胎儿肺泡发育与上皮细胞分化的透射电镜观察

目的 观察国人胎儿肺泡发育及肺泡上皮的分化过程。方法 自愿水囊引产的国人胎儿10～34周肺组织，HE染色光镜及透射电镜观察。结果 胎儿10～16周。胎肺的发育以支气管树分支和管壁结构的逐渐完善为主，终蕾上皮为柱状的未分化细胞。17～24周。支气管树的分支明显增多，上皮细胞的分化趋于成熟。胎儿25周以后，支气管远端形成许多内壁光滑的原始肺泡。其上皮细胞以一种胞核较大。胞质核细胞器较少的原始细胞为主，但开始分化出Ⅱ型肺泡细胞。此时，肺泡上皮亦出现少量扁平的I型肺泡细胞。但以Ⅱ型肺泡细胞为主。32周时，肺泡的发育逐渐成熟，I型肺泡细胞逐渐增多。结论 在人胎肺的发育过程中，Ⅱ型肺泡细胞的出现并不明显早于I型肺泡细胞，原始肺泡上皮所衬的较幼稚的细胞，可能是成熟肺泡上皮细胞的干细胞或祖细胞，I型肺泡细胞的出现是胎肺开始具有换气功能的标志，32周时换气功能趋于完善。     

胎儿喉室粘膜的扫描电镜观察

应用扫描电镜观察了６例不同胎龄胎儿的喉室粘膜上皮,发现胎儿的喉室粘膜上皮有４型细胞,即纤毛细胞、扁平细胞、无分泌颗粒无纤毛细胞和有分泌颗粒无纤毛细胞。声带粘膜上皮主要为扁平细胞,其它部位主要为纤毛细胞,但纤毛细胞的纤毛方向并不完全一致,间有无分泌颗粒无纤毛细胞和有分泌颗粒无纤毛细胞。提示在婴儿出生时,喉部的粘液纤毛系统已基本建立,声带的自洁作用远较其它部位差。     

胎儿输卵管上皮细胞分化观察

采用光镜和电镜技术观察了10周～38周胎儿输卵管上皮细胞特别是纤毛细胞的发育和分化。光镜下10周胎儿输卵管壶腹部管腔狭小,上皮为较原始的单层柱状上皮,12周粘膜上皮出现小的皱褶,16周～17周形成短的绒毛样突起,19周～32周渐形成较复杂的粘膜皱襞,至38周粘膜皱襞已接近成体。电镜下17周上皮中偶见单纤毛的细胞,胞质内细胞器较发达,糖原含量丰富,19周出现少量纤毛细胞,胞质细胞内器发达,可见溶酶体,此时纤毛较短,不具9×2+2微管结构,非纤毛细胞也有各种细胞器,但不含溶酶体。20周～30周纤毛细胞仍稀少,至32周以后纤毛细胞数量逐渐增多,其胞质中细胞器发达,糖原丰富,纤毛具典型的9×2+2微管结构,36周～38周可见形态分化较完好的纤毛细胞,非纤毛细胞顶端明显突向管腔,甚至落入管腔中,胞质内未见膜包的分泌颗粒。     

体外培养人胚鼻咽上皮生物学特性的观察——Ⅱ、人胚鼻咽上皮细胞分化的光镜、电镜研究

人胚鼻咽粘膜主要由假复层纤毛柱状上皮被覆,伴有少量过渡型上皮,未见典型的复层鳞状上皮。前者为鼻咽上皮的原基型,由纤柱细胞、杯状细胞、表面未分化细胞、中间细胞和基底细胞组成。纤柱细胞和杯状细胞均由基底细胞、中间细胞和表面未分化细胞分化而来。过渡型上皮由基底细胞向纤毛细胞和杯状细胞分化过程中不同分化阶段的中间细胞及表面未分化细胞所组成。基底细胞和中间细胞的胞浆内含有胞浆泡状系统和张力原纤维,具有双向分化的能力。过渡型上皮是演变为复层鳞状上皮或发生鳞状上皮化生的基础。     

中国人胎儿脊髓发育的观测

在１９３例正常胎尸标本上观测了脊髓颈膨大、腰骶膨大、脊髓长、终丝、脊髓重及脊髓体积等指标。至胎龄４个月，脊髓已脱离骶管；至出生前，脊髓圆锥下端相对于Ｌ２￣Ｌ３椎体之间；硬脊膜囊下界相对Ｓ１￣Ｓ２椎体之间；外终丝止点基本保持在Ｃｏ１￣Ｃｏ２椎体之间；脊髓长与身长之比显示逐月下降趋势；至出生前，脊髓长为身长的１／３；脊髓重与体重之比保持在０．１％左右。上述各项脊髓发育指标的性差无显著性。     

喉上皮性肿瘤与人乳头状瘤病毒的关系

目的：研究ＨＰＶ与喉上皮性肿瘤的关系。方法：采用一对ＨＰＶ Ｌ１区通用引物及６、１１、１６、１８型特异Ｅ６区引物多聚酶链反应,对１２８例喉癌及喉上皮增生性病变样本进行ＨＰＶ检测。结果：２４例检出ＨＰＶ,１６例为ＨＰＶ６型,４例ＨＰＶ１１例,１例ＨＰＶ１８型,２例未定型。６０例喉癌中５例阳性。其中３例６、１１、型均为整合状态,另２例为未定型。结论：大部分喉癌和上皮增生性病变与ＨＰＶ感染无关;良性型Ｈ     

神经干细胞接种密度对其增生和分化的影响

为探讨神经干细胞不同接种密度对其增生和分化的影响,取10～12周龄胎儿的大脑皮质用胰酶消化获得单细胞,分别以1×10~2/mL、1×10~4/mL和1×10~6/mL的细胞密度接种,用无血清培养基DMEM/F12、上皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和白血病抑制因子(LIF)培养;用MTT法测OD值并观察神经干细胞的存活和增生情况。从培养基中剔除生长因子,继尔以10％胎牛血清诱导分化,用免疫细胞化学(ICC)方法,研究不同细胞密度培养后神经干细胞的分化能力。结果:在1×10~6/mL细胞密度下培养,神经干细胞增生活跃,形成神经球,Nestin表达阳性,10％胎牛血清诱导后神经干细胞可分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞;低细胞密度(低于1×10~4/mL)培养不利于神经干细胞的存活和增生,血清诱导未见分化的细胞。提示:适宜的神经干细胞接种密度有利于其增生和分化。     

人胎回肠树突状细胞的形态发生分析

目的：探索人胎回肠树突状细胞（dendritic cell,DC）的形态发生规律。方法：应用免疫组织化学术和体视学方法对人胎回肠DC的出现时间、形态参数进行分析。结果：第11w时人胎回肠固有层开始出现阳性DC,其数量随胎龄的增大而逐渐增多;回肠固有层及集合淋巴小结（Peyer’s Patches,PP）阳性DC的数密度均随胎龄的增加而增大,而集合淋巴小结DC的数密度比同期固有层的要高（P〈0．05）;平均表面积随胎龄的增加呈现逐渐减小的趋势,而集合淋巴小结DC的平均表面积比固有层的要小（P〈0．001）;集合淋巴小结DC的表面积体积比比固有层的要小（P〈0．05）。结论：人胎回肠DC的数量随胎龄的增加而增多,固有层DC的形状、大小和数量均与集合淋巴小结DC有差异。     

人、兔结膜上皮细胞的原代培养

目的探索结膜上皮细胞体外培养的最佳方法,研究其生长特性,为毒理实验及体外结膜上皮移植提供基础。方法分别用3种培养方法：(1)组织块培养法;(2)混合肖化法;(3)组织块消化后贴壁法来培养人、兔的结膜上皮细胞,观察细胞状态、不同部位的长生特性等,并尝试在羊膜、饲细胞层上培养建系。结果3种培养方法中,组织块培养法能获得较纯的结膜上皮细胞但生长缓慢,消化法能获得大量细胞,生长较快,但常常混有其它杂细胞,组织块消化后贴壁法获得细胞量较少。观察到来自兔、睑结膜及穹隆部结膜上皮的细胞生长速度较快,细胞量多,来自球结膜的细胞生长较慢。应用间接免疫荧光染色,人结膜上皮细胞K13染色阳性。结论组织块培养法及混合消化法皆能培养结膜上皮细胞,各有利弊。     

重组人表皮生长因子促人角膜缘上皮细胞生长的研究

目的：探讨重组表皮生长因子（rhEGF)对人角膜缘上皮细胞生长的影响。方法：采用rhEGF作用于体外培养的人角膜缘上皮细胞，记录细胞生长曲线，并用四只氮盐（MTT）法测定细胞增殖状况。结果：rhEGF浓度为10ng/ml时对人角膜缘上皮铁促增殖作用最强（P＜0．05）。MTT法48h的吸光度值实验组均高于对照组（P＜0．01）。结论：rhEGF对体外培养人角膜上皮细胞有明显促增生作用。     

胎儿胃、小肠内分泌细胞的分布及形态学观察

目的探讨胎儿胃、小肠内分泌细胞的分布。方法采用银浸染色方法，对12例胎儿的胃、小肠内分泌细胞行光学显微镜观察。结果胃、小肠中的内分泌细胞（嗜银细胞）呈锥体形、柱形、圆形、梭形、不规则形等。在小肠固有膜结缔组织中有散在的嗜银细胞。该细胞主要分布于小肠绒毛上皮、小肠腺及十二指肠腺，胃部较少，其中以十二指肠最多，空肠、回肠顺次递减，而十二指肠乳头又明显高于十二指肠其他部位，在这些部位有时可见该细胞抵达腺腔，并有颗粒释放于腺腔内。结论胎儿胃肠道含有内分泌细胞，其形态多样，主要分布于小肠及十二指肠乳头部。     

人孕中期胎儿结膜上皮干细胞定位特征的免疫组化研究

目的研究孕中期不同胎龄胎儿结膜上皮细胞中,角蛋白7、14、19p63和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及分布情况,探讨人胎儿结膜上皮干细胞的定位特征。方法取正常引产6h内的孕中期不同胎龄胎儿眼球前部组织,采用HE、免疫组化染色法,观察角蛋白p63和PCNA的表达及分布情况。结果PCNA及p63表达情况一致,主要表达在睑缘皮肤黏膜交界处及角膜缘上皮深层细胞。角蛋白19主要表达在穹窿部及球结膜上皮细胞。角蛋白14表达在睑缘皮肤黏膜交界处及睑结膜上皮细胞。角蛋白7表达在穹隆部至角膜缘上皮细胞。结论细胞角蛋白7、14、19和p63及PCNA在人孕中期不同胎龄的胎儿结膜上皮细胞的特征性表达表明,人孕中期胎儿结膜上皮细胞普遍具有增殖的活性,干细胞位于睑缘皮肤黏膜交界处和角膜缘上皮细胞的深层。     

胎膜干细胞的分离方法和特性

胎膜由绒毛膜和羊膜组成,胎膜可以分离出多种具有可塑性和免疫耐受的细胞,因而在再生医学和细胞治疗的临床应用中备受关注。胎膜是胎儿的附属组织,出生后成废弃物,所以容易获得,不需要侵袭性操作,而且它的应用不违背伦理道德。目前已经有很多关于胎膜干细胞的分离和特性的报道。现就目前这些细胞的分离方法和特性研究进行综述,为实验研究和临床应用提供指导。     

苯丁酸钠对人脑胶质瘤细胞的诱导分化作用

目的评价新药苯丁酸钠对胶质瘤细胞的诱导分化作用，为胶质瘤诱导分化相关基因研究作前期准备。方法 采用MTT法，软琼脂克隆形成率，形态学，流式细胞术，GFAP免疫荧光等方法鉴定分化程度，用划痕实验检测细胞运动能力的改变。结果 2mM苯丁酸钠即可明显诱导人脑胶质瘤低分化细胞株SHG-44-9的细胞分化，表现为增殖抑制，克隆形成能力丧失，细胞突起增长，G1期阻滞，GFAP表达量升高，细胞运动能力下降。结论 苯丁酸钠可以高效诱导人脑胶质瘤细胞分化，并使细胞运动能力下降，有可能发生分化相关基因表达改变。     

PAP法观察人胎甲状腺C细胞

9例胎儿甲状腺,取自13～38周胎龄,用PAP免疫组化方法研究C细胞的分布、位置和形态。C细胞主要分布于甲状腺两侧叶的后上区城,常单个分散存在。人胎C细胞居不同位置,有滤泡内位、滤泡旁位和滤泡间位,以滤泡内位为主。有三型C细胞见于胎儿期:(1)圆形或卵圆形,(2)多边形或梭形以 (3)具一胞质突的大胞体细胞。