CD40、CD40L在人单核细胞和在动脉粥样硬化斑块中共同表达的意义

目的：探讨CD40、CD40L在人单核细胞和在动脉粥样硬化斑块中共同表达的意义。方法：CD40及CD40L在单核2细胞表面的表达分别采用荧光技术，RT－PCR，流式细胞信和Western blotting检测。人的动脉粥样硬化斑块中CD40及CD40L的表达采用免疫组织化学方法。结果：人单核细胞能连续表达CD40及CD40L，并且细胞因子IL－1，IL－6，TNF和TNF－γ能明显上调单核细胞表达CD40、CD40L的水平。人动脉粥样硬化斑块中能共同表达CD40及CD40L，而动脉壁的其它部分不表达。结论：人单核细胞表面及粥样硬化斑块中能共同高表达CD40及CD40L，提示CD40及CD40L相互作用在动脉粥样硬化形成及其发展中起重要作用。     

细胞因子对人单核/巨噬细胞表达CD40和CD40L的影响

目的：探讨细胞因子在γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF）和白介素-1（IL-1）对人单核/巨噬细胞表达CD40和CD40L的影响。方法：应用RT-PCR方法半定量测定CD40和CD40LmRNA含量,流式细胞技术检测细胞表面CD40和CD40L表达水平。结果：IFN-γ,TNF和IL-1既增加CD40和CD40LmRNA表达,又能诱导单核/巨噬细胞表面CD40和CD40L高表达,而抗氧化剂VitE能下调细胞因子引起的CD40和CD40L表达,但作用不完全,结论：细胞因子（IFN-γ,TNF和IL-1）能刺激单核/巨噬细胞高表达CD40和CD40L,这种作用可被VitE部分抑制。     

急性冠脉综合征患者外周血单个核细胞CD40、CD40L的表达

目的 探讨外周血单个核细胞表达免疫介质细胞分化抗原40(CD40)及其配体CD40L与急性冠脉综合征(ACS)的关系.方法 采用间接免疫荧光流式细胞术和酶联免疫吸附法(ELISA)测定ACS组(23例)、稳定性心绞痛(SA)组(16例)和对照组(15例)3组外周血单个核细胞表达CD40、CD40L和血清C-反应蛋白(CRP)水平.结果 ACS组外周血单个核细胞表达CD40平均荧光强度(MFI)19.12±4.96明显较SA组9.99±2.55和对照组11.50±2.21高,3组相比差异有统计学意义(F=34.137,P＜0.05).ACS组CD40L MFI 0.21±0.27与SA组0.10±0.18、对照组0.19±0.25相比差异无统计学意义(F=1.047,均P＞0.05).ACS组血清CRP水平(12.07±15.83)mg/ml与SA组(1.58±1.19)mg/ml、对照组(1.43±1.10)mg/ml相比差异有统计学意义(F=3.854,P＜0.05).CD40与CRP之间呈显著相关性(r=0.406,P＜0.05).结论 ACS患者外周血单个核细胞CD40表达增高,可能是冠状动脉粥样硬化病变活动性的血清学标志物.     

辛伐他汀与罗格列酮对动脉粥样硬化大鼠CD40和CD40L表达的影响

目的　观察辛伐他汀与罗格列酮对动脉粥样硬化大鼠CD40 和CD40L表达的影响。方法　通过高脂饮食和采用维生素D负荷法复制早期动脉粥样硬化大鼠模型,分别予辛伐他汀、罗格列酮(剂量分别为10 mg·kg-1·d-1、2.5 mg·kg-1·d-1,n=10)干预;采用酶法测定大鼠血脂、苏木精伊红(HE)染色观察大鼠胸主动脉病理变化、半定量逆转录聚合酶链反应检测大鼠腹腔巨噬细胞CD40 和CD40L mRNA的表达。结果　动脉粥样硬化组大鼠主动脉出现形成纤维增生性动脉硬化斑块,经辛伐他汀和罗格列酮干预后病变程度减轻;与动脉粥样硬化组相比,辛伐他汀或罗格列酮干预后的大鼠血总胆固醇均显著下降(P<0.01),低密度脂蛋白胆固醇逆转录聚合酶链反应及三酰甘油亦明显降低(P<0.05);CD40 和CD40L mRNA表达分别由0.96±0.24降至0.76±0.15和0.89±0.22、由0.73±0.18降至0.62±0.17和0.54±0.12(P<0.05)。结论　辛伐他汀与罗格列酮均能降低血脂,并通过降低巨噬细胞CD40和CD40L表达发挥抗动脉粥样硬化作用。     

CD40-CD40L相互作用对人脐静脉内皮细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨CD40-CD40配体相互作用对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖及迁移的影响。方法 采用Ⅱ型胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞，以^3H-胸腺嘧啶脱氧核苷（^3H-TdR）、^3H-亮氨酸（^3H-Leu）掺入法分别测定HUVEC增殖，内皮细胞的迁移采用琼脂糖凝胶刮取法，倒置显微镜观察。结果 CD40-CD40配体相互作用能明显促进HUVEC ^3H—TdR．^3H—Leu的掺入，两者具有时间、剂量依赖性，CD40-CD40配体相互作用随CD40L浓度的增加及刺激时间延长（30h内），能明显增加内皮细胞迁移率，anti-CD40单克隆抗体能明显抑制上述效应。结论 CD40-CD40配体相互作用能促进内皮细胞增殖、迁移。     

ox-LDL对内皮细胞CD40信号表达的影响及黄芪甲苷的抗炎作用

[目的]观察氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的血管内皮细胞(ECV-304)CD40信号的影响及黄芪甲苷的抗炎作用。[方法]100 mg/L ox-LDL刺激ECV-304细胞24 h后,以实时定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)测定细胞CD40 mRNA和蛋白的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性血管细胞间黏附因子-1(sVCAM-1)、白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的含量。以拮抗性抗CD40抗体,抑制CD40的作用后,再次观察上清液TNF-α、sVCAM-1、IL-6和IL-8的含量变化。20μg/mL的黄芪甲苷预孵育4 h,再以100 mg/L ox-LDL刺激ECV-304 24 h,测定细胞CD40 mRNA、CD40蛋白的表达及上清液TNF-α、sVCAM-1、IL-6和IL-8的含量。[结果]1)ox-LDL上调细胞CD40 mRNA和CD40蛋白的表达。2)ox-LDL促进细胞分泌TNF-α、sVCAM-1、IL-6和IL-8;而抑制CD40蛋白则抑制细胞分泌TNF-α、sVCAM-1、IL-6和IL-8。3)黄芪甲苷下调CD40 mRNA、CD40蛋白表达,抑制内皮细胞分泌TNF-α、sVCAM-1、IL-6和IL-8。[结论]黄芪甲苷通过抑制CD40信号下调ox-LDL所致内皮细胞炎症介质的表达,是其抗动脉粥样硬化的潜在机制。     

CD40／CD40L信号系统与动脉粥样硬化的关系

动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是危害人类身体健康及生活质量的主要疾病之一,同时也是导致脑血管疾病的重要危险因素。对于动脉粥样硬化机制的研究一直是心脑血管疾病研究领域的热点。近年来研究表明,白细胞分化抗原（CD40）及其配体（CD40L）广泛存在于动脉粥样硬化斑块的各种细胞及血小板中,其相互作用显著影响动脉粥样硬化相关细胞功能,并与斑块的发生、发展关系密切。阻断这一系统的相互作用对预防动脉粥样硬化的发生意义重大。     

CD40-CD40L系统与斑块稳定性的相关性研究

目的:研究CD40-CD40L系统在兔腹主动脉粥样硬化斑块进展过程中的表达以及与斑块稳定性的相关性.方法:50只健康新西兰大白兔,随机均分为10组:正常对照1～5组(C1～5组)、动脉粥样硬化模型1～5组(AS1～5组).C1～5组分别予兔标准饲料喂养至8周、10周、12周、14周、16周取腹主动脉标本;AS1～5组均在高脂饲养1周后予腹主动脉球囊导管损伤术造模,并分别持续高脂饮食至8周、10周、12周、14周、16周取标本.各组均于实验前及取标本前检测血清C反应蛋白(CRP),各组腹主动脉标本通过免疫及特殊染色定位、光镜下摄片并计算机图像分析软件测定斑块内CD40、CD40L、MMP-1阳性染色的面积占血管内膜面积百分比值及胶原/脂质含量比值,分析CD40-CD40L系统的表达与斑块稳定性的相关性.结果:AS1～5组均形成腹主动脉粥样硬化斑块.与C1～5组对应比较,AS1～5各组血清CRP均显著增高(P＜0.01),斑块内CD40、CD40L、MMP-1的表达显著增加(P＜0.01).在动脉粥样硬化进程中,CD40、CD40L表达与CRP、MMP-1表达呈正相关,与胶原/脂质含量比值负相关.结论:斑块中CD40-CD40L系统表达随着动脉粥样硬化进展而逐渐增高,其高表达与斑块的不稳定性增加密切相关.     

CD40L高表达在急性冠脉综合征病人中的临床意义

目的 :探讨急性冠脉综合征 (ACS)病人外周血单核细胞表达CD40L及血清可溶性CD40L(sCD40L)变化的临床意义。方法 :应用间接免疫荧光流式细胞术和双抗夹心酶联免疫测定法 (ELISA)分别对正常对照组 16例、稳定心绞痛 (SA) 2 4例 (包括 8例PTCA)、不稳定心绞痛 (UA) 2 0例、急性心肌梗塞 (AMI) 12例患者血单核细胞表达CD40L及血清可溶性sCD40L水平进行检测。结果 :(1)UA组及AMI组血单核细胞表达CD40L明显较SA和对照组高 (P <0 .0 1) ,SA与对照组相比无差异 (P >0 .0 5 )。 (2 )UA组及AMI组血清sCD40L水平明显较SA和对照组高 (P <0 .0 1) ,而SA与对照组相比亦有明显差异 (P <0 .0 5 )。 (3)AMI患者血清sCD40L水平与UA组无差异(P >0 .0 5 ) ,但AMI发病后 2 4hsCD40L有一峰值。 (4 )PTCA后血清sCD40L明显高于PTCA前 (P <0 .0 1) ,但血单核细胞表达CD40L无差异 (P >0 .0 5 )。结论 :血清可溶性CD40L升高是判断ACS的可靠血清学指标 ,且可能是冠脉病变的活动性标志物。     

低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素的影响

目的探讨低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素(ADM)的影响.方法利用培养的内皮细胞株ECV-304细胞,分别与不同浓度的低密度(50 100mg/L)、氧化低密度脂蛋白(50 100mg/L)及低密度脂蛋白(50 mg/L) 氧化低密度脂蛋白(50 mg/L)进行孵育,24 h后分别收集培养上清及细胞,用放免分析检测上清及细胞内肾上腺髓质素的含量.结果低密度脂蛋白对肾上腺髓质素的分泌无影响,而氧化型低密度脂蛋白能明显刺激ADM的分泌,二者合用的作用接近于100mg/L的OX-LDL.结论OX-LDL可能具有氧化LDL使其成为OX-LDL的作用,ADM的分泌可能是对细胞损伤的一种反应.     

氧化低密度脂蛋白对人肾小球系膜细胞增殖周期的影响

目的　研究氧化低密度脂蛋白 (Oxidizedlowdensityliporotein ,Ox LDL)对培养的人肾小球系膜细胞 (Humanme sangialcell ,HMC)增殖周期的影响。方法　将与不同浓度Ox LDL共培养后的HMC制成单细胞悬液 ,经流式细胞仪检测后 ,计算出细胞周期中的G0 G1 期、S期、G2 +M期各时期的百分比及S期抑制百分比、细胞增殖指数。结果　低浓度 ( <10 0 μg ml)的Ox LDL明显刺激HMC增殖 ,表现为G0 G1 期细胞百分比减少及S期细胞增加 ;细胞的S期抑制百分比明显下降 ,而细胞的增殖指数则显著增高 (P <0 .0 1) ;高浓度 ( >15 0 μg ml)的Ox LDL明显抑制HMC增殖 ,表现为G0 G1 期细胞百分比增加及S期细胞减少 ,细胞的S期抑制百分比明显增加 ,而细胞的增殖指数则显著降低 (P <0 .0 1)。结论　不同浓度的Ox LDL可能通过对MC增殖周期的不同影响 ,参与肾小球硬化过程中从MC过多状态到MC过少状态的一系列病理过程     

植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体介导氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞存活和功能的影响

目的 研究植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（LOX—1）是否介导氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）对内皮祖细胞（EPC）的存活及功能产生影响。方法 分选脐血CD34^＋细胞,培养于内皮细胞生长培养基（EGM-2）中。培养14d后,部分EPC与10、25、50μg/ml的oxLDL孵育48h;部分EPC先与LOX-1单克隆抗体（LOX—1mAb）预处理24h,再与50μg／ml oxLDL孵育48h;对照组不作处理。检测EPC存活率及EPC迁移、黏附和管状结构形成能力,并检测LOX-1的蛋白及mRNA表达。结果oxLDL浓度为25和50μg／ml时,凋亡率分别为（15．8±1．0）％和（18．8±2．0）％,显著高于对照组的（9．0±1．2）％（P〈0．05）;迁移率分别为（5．7±1．0）％和（5．1±0．8）％,显著低于对照组的（9．5±0．8）％,（P〈0．05）;黏附细胞数分别为（33±2）和（30±3）个,显著少于对照组的（37±5）个（P〈0．05）;形成的管状结构分别为（2．9±0．5）和（1．8±0．5）mm,显著短于对照组的（5．0±0．6）mm（P〈0．05）。OxLDL可增加LOX—1mRNA及蛋白的表达,oxLDL浓度为50μg／ml时,LOX—1mRNA表达由100％增加为（174±39）％,蛋白表达由100％增加为（172±8）％。OxLDL的上述作用能被LOX1mAb所阻断。结论OxLDL可降低EPC存活,抑制EPC功能,其作用是由LOX—1介导的。     

高糖和氧化型低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞转化的影响

目的探讨高糖和氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）对THP-1源性巨噬细胞转化的影响。方法体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯作用使其转化为巨噬细胞,并随机分为四组（n=6）：对照组、高糖组（30mmol／L葡萄糖）、ox—LDL组（100μg／mL ox—LDL）和高糖／ox—LDL（G—ox—LDL）组（30mmol／L葡萄糖＋100μg／mL ox—LDL）。应用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质。结果ox—LDL组和G—ox—LDL组细胞胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,差异有统计学意义（P〈0．05）;且两组胆固醇酯含量均大于总胆固醇含量的50％。对照组和高糖组细胞胞质内可见少量红染颗粒或脂质空泡,两组细胞内总胆固醇和胆固醇酯比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组胆固醇酯含量均小于总胆固醇含量的50％。结论ox—LDL能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞,而高糖不能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞。提示ox—LDL可能是THP-1源性巨噬细胞转化为泡沫细胞的必要条件。     

高糖和氧化型低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞转化的影响

目的 探讨高糖和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对THP-1源性巨噬细胞转化的影响.方法 体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯作用使其转化为巨噬细胞,并随机分为四组(n=6):对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、ox-LDL组(100μg/mLox-LDL)和高糖/ox-LDL(G-ox-LDL)组(30 mmol/L葡萄糖+100 μg/mL ox-LDL).应用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质.结果 ox-LDL组和G-ox-LDL组细胞胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);且两组胆固醇酯含量均大于总胆固醇含量的50%.对照组和高糖组细胞胞质内可见少量红染颗粒或脂质空泡,两组细胞内总胆固醇和胆固醇酯比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组胆固醇酯含量均小于总胆固醇含量的50%.结论 ox-LDL能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞,而高糖不能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞.提示ox-LDL可能是THP-1源性巨噬细胞转化为泡沫细胞的必要条件.     

Effects of oxidized low density lipoprotein on the growth of human artery smooth muscle cells

Atherosclerosis(AS)isacommonandbasicpathologicalchangeofmanycardiovasculardiseases.1Amongtheriskfactorscontributingtohuman AS,oxidizedlowdensitylipoprotein(ox LDL)is consideredtostimulateASdirectlyandplaysanovelrole inthepathogenesisanddevelopmentofAS.2,3Despite proliferation,migrationandphenotypealterationof vascularsmoothmusclecells(vSMCs)arecritical changesinAS,4,5itisstillpoorlyunderstoodwhether ox LDLparticipatesinthepathologicalprocessof vSMCs.6WeisolatedandpurifiedhumanLDL,pro…     

氧化低密度脂蛋白对大鼠心肌成纤维细胞胶原的影响

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响.方法 体外培养乳鼠心肌成纤维细胞,加入ox-LDL(10、20、50、100μg/ml)干预24 h,3H-胸腺嘧啶核苷掺人法观察细胞DNA合成,3H-脯氨酸掺入法观察胶原的合成,酶谱法测定基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达.结果 和对照组比较,ox-LDL作用于心肌成纤维细胞24 h后,呈浓度依赖性促进细胞DNA合成,同时抑制细胞胶原合成.ox-LDL显著增加MMP-2和MMP-9活性,但各组间作用无明显区别;同时MMP-2和MMP-9蛋白表达也显著性增加,以100μg/ml组作用最强.50μg/ml ox-LDL能显著增加MMP-2和MMP-9的mRNA表达,100μg/ml组作用更强.结论 ox-LDL作用于心肌成纤维细胞能减少胶原的合成并增加胶原的降解,提示其在心肌重构过程巾起一定的作用.     

CD40与其配体的连接对于肺癌细胞调节功能的研究

目的 研究CI40与其配体(CD40L)的连接对于肺癌细胞的调节功能,评价CI40作为治疗靶抗原的潜能。方法 通过基因克隆技术、Western蛋白印迹、流式细胞术等研究CD40L对于7株肺癌细胞系(包括1例转染CD40 cDNA细胞系)的细胞表型、细胞生长、细胞周期和凋亡的影响。结果 CD40L使高表达CI40的肺癌细胞系上主要组织相容性抗原—Ⅰ类分子(MHC—Ⅰ)、CD54和Fas分子的表达增强,上皮生长因子受体(EGFR)的表达减弱;CD40L作用5d后,CD54平均荧光强度(mean值)大约上调了4—10倍,MHC—Ⅰ上调了4—8倍,Fas上调了2．7—6倍,EGFR下调了2—3倍。细胞生长受到抑制,第5天受抑最明显(受抑率≥30％);CD40L停用后,这些变化有所恢复;CD40L对于CD40中低表达和不表达的细胞系无明显影响;所有细胞系均无凋亡发生。结论 CI40高表达肺癌细胞上CI40的表达具有免疫导向治疗靶抗原的潜能。     

急性冠状动脉综合征患者oxLDL和CRP的变化及其相关性

目的观察急性冠状动脉综合征(ACS)不同类型患者氧化低密度脂蛋白(oxLDL)水平的变化及其与C反应蛋白(CRP)之间的关系,探讨两者在ACS发病中的作用和临床意义。方法采用酶联免疫吸附法测定ACS组(n=95)和正常对照组(n=66)血浆oxLDL和CRP的水平。结果ACS组oxLDL和CRP水平均显著高于正常对照组(P<0.01);ACS患者血浆oxLDL水平与CRP呈显著正相关(r=0.622,P<0.01)。结论ACS患者血浆oxLDL和CRP水平均明显升高,且呈显著正相关;升高的水平可以作为病情严重程度判断的指标之一。