RASSF1A基因在宫颈癌中的甲基化检测及

目的　探讨宫颈癌组织中RASSF1A(Ras association domain family1A)抑癌基因启动子甲基化状态及临床意义以及与高危型HPVs感染的关系。方法　甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测39例宫颈鳞癌及12例正常宫颈组织中RASSF1A基因甲基化状态。聚合酶链反应(PCR)方法检测宫颈癌组织中HPV16、18型的感染状况。结果　39 例宫颈癌组织中有11 例可见异常甲基化(28.2%);12例正常宫颈组织均未见甲基化;宫颈癌组HPV感染率为69.2%;RASSF1A基因甲基化在淋巴结转移组(75.0%)高于淋巴结未转移组(9.1 %),P<0.05。RASSF1A甲基化在患者年龄、肿瘤大小、病理组织学分级、临床分期和HPVs感染组之间差异无统计学意义, P>0.05。结论　RASSF1A基因启动子区5′CpG岛的高甲基化是导致RASSF1A基因失活的重要机制,可能参与宫颈癌的发生过程。     

RASSF1A 基因在宫颈癌中的甲基化检测及临床意义

 目的 探讨宫颈癌组织中RASSF1A(Ras association domain family 1A)抑癌基因启动子甲基化状态及临床意义以及与高危型HPVs感染的关系. 方法 甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测39例宫颈鳞癌及12例正常宫颈组织中RASSF1A基因甲基化状态.聚合酶链反应(PCR)方法检测宫颈癌组织中HPV16、18型的感染状况. 结果 39例宫颈癌组织中有11例可见异常甲基化(28.2%);12例正常宫颈组织均未见甲基化;宫颈癌组HPV感染率为69.2%;RASSF1A基因甲基化在淋巴结转移组(75.0%)高于淋巴结未转移组(9.1 %),P<0.05.RASSF1A甲基化在患者年龄、肿瘤大小、病理组织学分级、临床分期和HPVs感染组之间差异无统计学意义, P>0.05.结论 RASSF1A基因启动子区5′-CpG岛的高甲基化是导致RASSF1A基因失活的重要机制,可能参与宫颈癌的发生过程.     

人宫颈癌组织CDH1和PAX1基因甲基化研究

目的:检测上皮型钙黏附素(E-cadherin,CDH1)基因和配对盒基因家族PAX1基因在宫颈癌组织及人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)Ⅰ组织、CIN Ⅱ～Ⅲ组织和宫颈癌组织中的甲基化情况,评估是否可将其作为临床诊断的分子标志物.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应法(methylation specific PCR, MSP)对HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织、CINⅠ组织、CIN Ⅱ～Ⅲ组织以及宫颈癌组织中的CDH1和PAX1基因进行甲基化检测.结果:HPV感染的正常宫颈组织、宫颈炎组织和CINⅠ组织中未检出CDH1基因甲基化;CINⅡ～Ⅲ组织中检出CDH1基因甲基化2例(13.3%),宫颈癌组织中检出CDH1基因甲基化9例(22.5%),与HPV感染的正常宫颈组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).HPV感染的正常宫颈组织和宫颈炎组织中未检出PAX1基因甲基化,CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ和宫颈癌组织的PAX1基因甲基化阳性率分别为13.3%、46.7%和87.5%,CINⅡ～Ⅲ组织与CINⅠ和宫颈癌组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CINⅠ组织、CINⅡ～Ⅲ组织和宫颈癌组织的CDH1和PAX1基因甲基化总阳性率分别为13.3%、60.0%和97.5%.结论:CDH1和PAX1基因甲基化,尤其是PAX1基因甲基化对于宫颈癌临床诊断具有潜在价值.     

宫颈癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化对其表达水平的影响及临床意义

目的 研究宫颈癌组织中RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)启动子甲基化水平和RASSF1A基因mRNA表达水平,分析其与宫颈癌临床病理参数的关系及临床意义.方法 收集40例宫颈癌组织及相应癌旁组织,采用巢式特异性甲基化方法检测RASSF1A基因启动子甲基化水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌和癌旁组织中RASSF1A基因mRNA表达水平.结果 宫颈癌组织中RASSF1A基因mRNA表达水平(0.26±0.05)显著低于癌旁组织(0.28±0.03),差异有统计学意义(t=2.27,P=0.026);宫颈癌组织中RASSF1A基因启动子区的甲基化率(0.71%±0.04%)显著高于癌旁组织(0.66%±0.03%),差异有统计学意义(t=6.78,P=0.000);RASSF1A基因mRNA表达水平与病理分化程度(t=3.31,P=0.002)、国际妇产科联合会(FIGO)分期(t=2.13,P=0.040)、淋巴结转移(t=2.56,P=0.015)、浸润深度(t=2.93,P=0.006)有关;RASSF1A基因启动子区的甲基化水平与病理分化程度(t=2.08,P=0.045)、FIGO分期(t=2.66,P=0.011)、淋巴转移(t=2.22,P=0.033)、浸润深度(t=2.12,P=0.041)有关.结论 宫颈癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化和RASSF1A基因mRNA的表达水平与宫颈癌的恶性程度相关,RASSF1A基因甲基化水平有望成为宫颈癌转移风险的重要指标.     

宫颈癌前病变及宫颈癌组织Survivin和p16INK4A及p53表达的研究

目的:探讨Survivin、p16INK4A和p53与宫颈癌前病变及宫颈癌的关系及临床病理关系.方法:应用免疫组化EnVision法,检测107例宫颈癌、86例宫颈癌前病变(CIN)及35例宫颈炎组织中Survivin、p16INK4A和p53表达水平,并加以分析.结果:在35例宫颈炎、86例宫颈CIN、107例宫颈癌中,Survivin阳性表达率分别为0、48.8%(42/86)和88.9%(72/81);p53阳性表达率分别为2.8%(1/35)、40.7%(35/86)和83.9%(68/81),两者均呈增高趋势,而p16INK4A 的阳性表达率降低,分别为94.3%(33/35)、59.3%(51/86)和28.4%(23/81),三组间两两比较差异有统计学意义,P＜0.01.Survivin、p16INK4A表达在子宫颈癌的FIGO分期、间质浸润深度及淋巴结是否转移的表达,差异有统计学意义,P＜0.05;p16INK4A还在宫颈癌组织学分级间阳性表达,差异有统计学意义,P＜0.05;p53在组织学类型及分级中其阳性表达,差异有统计学意义,P＜0.05.结论:Survivin、p16INK4A和p53异常表达参与了宫颈癌的发生发展过程,其阳性表达可作为检测宫颈癌前病变的生物标志,并可用于判断宫颈癌患者的预后.     

OVCA1在宫颈病变中表达的意义及与CyclinD1、p16的相关性

目的:探讨宫颈病变中OVCA1与CyclinD1、p16蛋白表达的意义、相关性及与高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HR-HPV)感染的关系.方法:免疫组化法检测89例宫颈癌、30例宫颈鳞状上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)、21例正常宫颈组织中OVCA1、CyclinD1、p16的蛋白表达情况.结果:OVCA1在正常宫颈、CIN及宫颈癌中蛋白表达的阳性率分别为28.57%、60.00%、84.27%,差异有统计学意义(P<0.01).OVCA1的蛋白表达在低/高级别CIN、早/中晚期宫颈癌中均有统计学差异(P<0.05).OVCA1的蛋白表达与宫颈癌病理分型、分级及有无淋巴结转移无关(P>0.05).OVCA1与Cy-clinD1、p16的蛋白表达均存在正相关(P<0.01).OVCA1的蛋白表达在HR-HPV(+)组高于HR-HPV(-)组(P<0.05).结论:OVCA1蛋白表达异常参与了宫颈病变发生的全过程.OVCA1在宫颈病变发生中的作用机制与CyclinD1、p16的异常表达及HR-HPV感染相关.     

RAS相关家族1A基因在胃癌中的表达和启动子甲基化

目的分析散发性胃癌中RAS相关家族1A基因(RASSF1A基因)的表达、突变和启动子甲基化状况,探讨RASSF1A基因在胃癌发生、发展中的意义.方法采用定量PCR、RT-PCR和SSCP的检测90例胃癌组织和30例相应癌旁正常组织中RASSF1A基因表达水平以及基因突变的情况;采用甲基化特异性PCR (MSP)方法检测RASSF1A基因启动子甲基化情况.结果 90例胃癌中有52例(57.8%)RASSF1A无表达或表达低下.RASSF1A无表达或表达低下和肿瘤细胞的分化(P<0.05)以及分期(P<0.001)相关,但是和肿瘤的浸润深度以及淋巴结转移不相关(P>0.05).90例胃癌中52例启动子发生甲基化(57.8%),其中90.3%(47/52)的RASSF1A无表达或表达低下组织中检测到RASSF1A基因启动子的甲基化,然而癌旁正常组织未发现有RASSF1A基因启动子的甲基化,SSCP没有发现任何突变.结论胃癌中存在较多的启动子异常甲基化造成RASSF1A基因失活,这可能是胃癌发生发展的因素之一.     

上皮性卵巢癌组织中RASSF1A和BRCA1及p16基因异常甲基化检测及其临床意义的研究

目的：探讨RASSF1A、BRCA1和p16基因异常甲基化在上皮性卵巢癌发生及发展中的作用。方法：采用甲基化特异性PCR法检测63例上皮性卵巢癌组织和相应的41例盆腹腔转移灶及10例癌旁卵巢组织中RASSF1A、BRCA1和p16基因启动子区甲基化状态。结果：上皮性卵巢癌组织原发灶及转移灶中RASSF1A、BRCA1和p16基因启动子区甲基化发生率分别为49．2％、25．4％、20．6％及58．5％、26．8％、22．0％，均显著高于正常卵巢组织中的发生率，P值均〈0．05。RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率在临床Ⅰ、Ⅱ期显著低于Ⅲ、Ⅳ期，Х^2=13．018，P〈0．0001；在高、中分化癌的发生率均显著低于低分化癌，Х^2=8．481，P=0．004；Х^2=8．195，P=0．004。结论：RASSF1A、BRCA1和p16基因异常甲基化与上皮性卵巢癌的发生及发展相关，RASSF1A基因异常甲基化与上皮性卵巢癌临床分期及分化程度相关。     

鼻咽鳞癌组织RASSF1A基因表达失活及其临床意义的探讨

目的:研究鼻咽鳞癌组织中的抑癌基因RASSF1A的表达及其基因启动子区异常甲基化的情况.并分析DNA异常甲基化与鼻咽鳞癌临床病理因素之间的关系.方法:利用RT-PCR和MS-PCR的方法,分析38例鼻咽鳞癌组织标本、10例鼻咽炎性组织标本、4例正常鼻咽黏膜组织标本、两种鼻咽癌细胞株中RASSF1A基因的表达和其基因启动子区异常甲基化的情况.采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理鼻咽癌细胞株,观察RASSF1A重新表达的情况.结果:38例鼻咽癌组织标本和两种细胞株的RASSF1A基因表达显著低于对照组(P<0.05);71.05 %的鼻咽癌标本及两种鼻咽癌细胞株发生异常甲基化;甲基化与年龄、性别、临床分期和颈部淋巴结转移无相关性(P>0.05),与RASSF1A基因表达和肿瘤分化程度有关(P<0.05);用5-Aza-CdR处理的低表达RASSF1A基因的鼻咽癌细胞株,RASSF1A基因表达上调.结论:鼻咽癌患者肿瘤组织中存在RASSFIA基因的表达下调现象,基因转录启动区的异常甲基化是导致鼻咽癌组织中RASSF1A基因表达下调的主要原因.     

宫颈鳞癌组织中RASSF1A基因甲基化状态及其临床意义

背景与目的:Ras相关区域家族1A(ras associated domain family 1A,RASSF1A)基因是一种肿瘤候选抑痛基因,其启动子区高甲基化与多种人类上皮性肿瘤的发生有关.本研究通过检测宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态及其蛋白表达情况,旨在分析RASSF1A基因甲基化与基因失活的相关性,并探讨RASSF1A基因甲基化与CSCC发生的关系.方法:分别采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)及免疫组织化学方法检测15例正常宫颈组织和46例CSCC组织中RASSF1A基因的甲基化程度及RASSF1A蛋白的表达情况,并分析RASSF1A基因甲基化与RASSF1A蛋白表达及其与CSCC临床病理特征之间的关系.结果:正常宫颈组织中未见RASSF1A基因甲基化,而CSCC组织中RASSF1A基因甲基化率为43.5%(20/46),两者比较差异具有统计学意义(P＜0.05).CSCC中临床Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期的甲基化阳性率呈逐渐增高趋势(19.0%→58.8%→75.0%,P＜0.05),不同组织学分级、有无淋巴结转移与RASSF1A基因甲基化间未见明显相关性(P＞0.05).RASSF1A基因甲基化与RASSF1A蛋白的表达呈负相关(r=-0.469,P＜0.05).结论:RASSF1A基因启动子区甲基化是导致RASSF1A蛋白低表达的机制之一,可能与CSCC的发生发展有关.     

骨肉瘤细胞凋亡相关基因的表达及其临床意义

目的 探讨反映骨肉瘤预后的蛋白标记物。方法 对骨肉瘤石蜡组织作免疫组化和Tunel染色,研究p53 c-myc和bcl-2基因的表达与肿瘤细胞凋亡指数(Al)的关系,及其与病理类型和患者颅后的关系。结果 p53、c-myc和bcl-2的表达水平与细胞凋亡指数呈负相关,与病理类型无相关关性。p53、c-myc、bcl-2和细胞凋亡指数与患者远期生存密切相关。结论 p53、c-myc和bcl-2的表达水平以及细胞凋亡指数可作为判断骨肉瘤恶性程度和预后的指标,可指导临床进行治疗。     

hTERT1658-2070在大肠杆菌中的克隆及表达

目的　用基因工程的方法在大肠杆菌中表达人端粒酶逆转录酶 (hTERT)部分活性片段。方法　PCR扩增hTERTcDNA16 5 8 2 0 70片段 ,将其克隆至表达载体pGEX 5x 3上 ,转化大肠杆菌TG1,获得hTERT蛋白片段表达。并经DNA测序及Westernblot验证表达蛋白。结果　表达出的蛋白为GST hTERT融合蛋白 ,分子量为 38.8kD。经DNA测序及Westernblot证实表达蛋白即为所需蛋白。结论　在大肠杆菌中克隆并表达了hTERT部分片段。     

核糖核酸酶抑制因子基因在人乳腺癌中的表达及突变分析

目的　通过核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor,RI)基因在人乳腺癌中的表达及其是否突变的分析 ,进一步探讨RI与肿瘤细胞生长的关系。方法　采用Westernblotting方法检测人乳腺癌组织中RI的表达量 ;采用SSCP的方法分析肿瘤细胞RI基因中是否有突变。结果　人乳腺癌组织中RI的表达明显低于同体癌旁正常组织 ,但用MboI酶切及SSCP分析未发现人乳腺癌组织中RI基因有突变。结论　乳腺癌的生长可能与RI表达的下降有关 ,从而可能使癌组织周边新血管的形成未受到有效抑制的结果。     

EphA 2和KAI 1蛋白在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其意义

目的：探讨EphA 2蛋白和KAI 1蛋白的表达与膀胱移行细胞癌发生及浸润转移的关系以及两者表达的相关性。方法：采用免疫组织化学SP法,检测EphA 2蛋白和KAI 1蛋白在88例膀胱移行细胞癌组织及76例相应癌旁正常膀胱黏膜中的表达。结果：EphA 2蛋白在癌组织中的表达明显高于其癌旁正常黏膜（P〈0.01）;随着膀胱癌病理分级的升高,EphA 2蛋白的表达逐渐增加（P〈0.05）;在浸润性膀胱癌中的表达明显高于表浅性膀胱癌患者（P〈0.05）;有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组（P〈0.05）。KAI 1蛋白在癌组织中的表达明显低于癌旁正常膀胱黏膜（P〈0.01）;随着膀胱癌病理分级的升高,KAI1蛋白的表达逐渐减少（P〈0.01）;KAI 1在浸润性膀胱癌中的表达明显低于表浅性膀胱癌患者（P〈0.05）;有淋巴结转移组的表达明显低于无淋巴结转移组（P〈0.05）。EphA 2蛋白和KAI 1蛋白的表达在有淋巴结转移的患者中呈显著负相关（P〈0.05）。结论：EphA 2蛋白的高表达和KAI 1蛋白的低表达与膀胱移行细胞癌的发生及浸润转移有关。     

肺癌相关基因HLCDG1的克隆和表达分析

背景与目的：比较基因组杂交和微卫星多态性位点全基因组扫描结果显示肺癌患者在染色体3p、5q、6q、9p、10q、llp、13q、17p、19p等区域存在高频率的杂合性缺失,提示可能有多个未知的易感基因或抑癌基因与肺癌的发生、发展相关。本研究选用在mRNA差异显示研究中获得的在肺癌组织中表达下调且代表新基因的表达序列标签(expressed sequence tag,EST)LXDDl为进一步研究对象,克隆其全长cDNA。方法：采用Northern杂交验证LXDDl在肺癌中的表达差异。并用MTN(Multiple Tissue Northern Blots^TM)膜检测其在正常组织中的表达及其所代表基因的转录本大小;克隆其全长cDNA,并利用生物信息学对该序列进行初步分析;用差异RT-PCR检测新基因在肺癌组织、配对癌旁非癌组织、肺癌细胞系和其它肿瘤细胞系中的表达。结果：成功地克隆了一个在肺癌中表达下调的新基因。HLCDGl(human lung carcinoma deleted gene 1),GenBank登录号为AF447582,全长cDNA为3．113kb,预测其开放阅读框编码一个含166个氨基酸的跨膜蛋白质。通过电子-聚合酶链反应(electric-polymerase chain reaction,e-PCR)将该基因定位于5q33。结论：HLCDGl基因是一个在肺癌中表达下调的新基因。这提示HLCDGl可能与肺癌的发生、发展相关。     

肺癌靶向基因的研究及价值

肺癌的发生发展与众多肺癌相关基因的表达及突变有密切关系.近期国内外肺癌的相关基因研究显示,COPS3基因的表达在刺激肺癌细胞增殖的过程中可能发挥关键作用,棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶融合基因与表皮生长因子受体突变共存,GA733基因与肺癌的生存期密切相关.同时成纤维细胞生长因子受体1、高迁移率蛋白家族、类清道夫受体成员5和表皮生长因子受体为肺癌的基因靶向治疗提供了新思路.肺癌的治疗需要多基因联合治疗和基因治疗联合常规治疗.     

p16与Rb蛋白在骨肉瘤中的表达及相关性研究

为探讨骨肉瘤中ｐ１６和Ｒｂ蛋白的表达及其相关性，采用免疫组化ＡＢＣ法，对３２例骨肉瘤手术标本使用抗ｐ１６和Ｒｂ蛋白抗体进行检测。结果显示，ｐ１６和Ｒｂ蛋白阳性表达分别为３７．５％（１２／３２）和５６．３％（１８／３２）。在１２例Ｒｂ蛋白阳性或强阳性表达的骨肉瘤中，ｐ１６蛋白表达阴性或弱阳性表达８例（６６．７％）；相反，在１０例Ｒｂ蛋白阴性或弱阳性表达的骨肉瘤中，ｐ１６蛋白阳性或强阳性表达６例（６０．０％）。结果表明：ｐ１６和Ｒｂ蛋白参与骨肉瘤细胞的增殖过程并与骨肉瘤的进展和预后有关；ｐ１６和Ｒｂ蛋白之间阳性表达的相互抑制，可能是判断骨肉瘤恶性程度的标志之一。     

微小RNA与肿瘤

微小RNA(miRNA)是一类小分子的非编码调控的单链RNA,它参与有机体的生长、发育等多种生理过程.近年来研究表明肿瘤组织具有不同的miRNA表达,异常表达的miRNA影响了肿瘤细胞的发生、进展、分化、转移和复发.miRNA的不同表达不仅有助于肿瘤组织的诊断,而且可以指导预后.针对miRNA为靶点的动物学研究也发现,干扰某种miRNA表达可以减小肿瘤体积,抑制腹膜转移而发挥治疗作用.     

CDC 25A和CDC 25B基因在宫颈癌中的表达和临床意义

目的：检测及讨论CDC 25A和CDC 25B基因在宫颈癌中的表达水平及其临床意义。分析CDC 25A和CDC 25B基因剪切变异分子CDC 25A1—2、CDC 2581—4在宫颈组织中的表达分布规律。方法：采用RT—PCR和Western印迹法检测61例宫颈癌组织、18例宫颈良性病变组织中CDC 25的表达情况，并分析CDC 25的表达水平与宫颈癌临床病理参数之间的关系。结果：CDC 25A和CDC 25B基因在宫颈癌组织和宫颈良性病变组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05）；CDC 25的各剪切变异分子表达在宫颈癌患者不同年龄、癌组织病理类型、临床分期及癌细胞分化程度间差异有统计学意义（P〈0．05），而与宫颈癌的淋巴结转移无关（P〉0．05）。结论：宫颈癌组织中存在CDC 25A和B的高表达，CDC 25分子及其剪切变异体的表达异常可能是宫颈癌发生、发展的重要细胞内调控机制之一。     

转染人肿瘤坏死因子-α、白介素-2基因对肺癌细胞耐药基因MDR1、LRP表达的影响

目的 研究转染人体肿瘤坏死因子-α(huTNF-α)、白介素-2(hIL-2)基因对肺癌细胞耐药基因MDR1、LRP表达的影响，探讨基因治疗逆转肺癌多药耐药的可行性。方法 通过阳离子脂质体将克隆的huTNF-α和hIL-2基因导入肺癌细胞系A549、GLC-82、H446、H460，经筛选阳性单克隆，用半定量RT-PCR方法检测转染目的基因前后肺癌细胞系MDR1、LRP基因在mRNA水平的表达情况。结果 MDR1在A549、GLC-82、H446、H460，LRP在A549、GLC-82、H460中均呈阳性表达；转染huTNF-α目的基因后各肺癌细胞系MDR1、LRP基因的表达无影响，而转染hIL-2目的基因能够明显抑制A549、H446、H460细胞系MDR1的表达。结论 MDR1、LRP基因在肺癌细胞系中的阳性表达与肺癌的固有耐药性有关；huTNF-α、hIL-2目的基因能够在被转染细胞中获得表达，而且转染hIL-2目的基因能够明显抑制MDR1在A549、H446、H460的表达。该结果不仅为探讨肺癌多药耐药性的病理机制提供了一个新的线索，而且为基因治疗逆转肺癌的多药耐药性提供了一个新的实验依据。