基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在临床微生物检验的应用进展

<正>基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)是一种新型的质谱技术,具有灵敏度高,样品用量少,分析速度快的特点。目前,MALDI-TOF已开始应用于多项微生物的检测,为临床疾病的诊疗提供有效的指导。1 MALDI-TOF鉴定微生物的特点及优势MALDI-TOF系统由基质辅助激光解吸电离离子源(MALDI)、飞行时间质量分析器(TOF)和检测器组成,属于一种软电离技术,适用于混合物及生物大分子的测定〔1〕。其原理是利用激光照射待测物与基质形成的共结晶薄膜,通过基质吸收能量并将能量转移至待测物分子,使分子解离成离子,利用离子在     

Bruker Biotyper和Vitek MS系统质谱分析鉴定革兰阴性菌临床分离株的比较研究

目的比较并评价两种基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)系统——Bruker MALDI Biotyper系统(以下简称Bruker Biotyper系统)和MALDITOF Vitek MS系统(以下简称Vitek MS系统)在革兰阴性菌临床分离株鉴定中的应用。方法收集沈阳军区总医院2012年3月—2013年1月分离自血液、尿液、脑脊液、分泌物、伤口拭子和痰液临床标本的革兰阴性菌共120株。应用Vitek 2 Compact生化鉴定系统将每株细菌鉴定到种,而后采用Bruker Biotyper和Vitek MS系统对其进行鉴定,三者鉴定结果存在差异的菌株经16S rDNA测序最终确认菌种。结果对于120株革兰阴性菌临床分离株,Bruker Biotyper和Vitek MS系统在属的水平上正确鉴定率分别为95.0%和92.5%,在种的水平上正确鉴定率分别为89.2%和86.7%,差异均无统计学意义。结论 Bruker Biotyper和Vitek MS系统对革兰阴性菌临床分离株的正确鉴定率不存在差异,两种系统的鉴定结果与各自的图谱数据库有密切关系。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在直接鉴定血流感染病原菌中的应用

目的探讨利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立血流感染病原菌快速、准确的鉴定方法。方法收集郑州大学附属儿童医院检验科2017-07～2017-12血培养仪阳性报警血培养瓶524个,抽吸血培养瓶中血液至血清分离胶管,采用差速离心法富集细菌,利用MALDI-TOF MS对富集后的菌液进行快速鉴定,并与传统培养24～48 h后形成的菌落最终鉴定结果进行比较。结果阳性报警血培养瓶524个,496个为单菌株血流感染,16个为混合菌感染,12例血培养报警假阳性结果。在496个单菌株所致血流感染样本中,菌株的属、种鉴定符合率分别为98.6%(489/496)和95.8%(475/496)。其中,120株革兰阴性菌属、种鉴定符合率分别为99.2%(119/120)和98.3%(118/120); 376株革兰阳性菌属、种鉴定符合率分别为98.4%(370/376)和94.9%(357/376)。16个混合菌感染样本及12个血培养报警假阳性样本均未得到鉴定结果。结论该研究利用MALDI-TOF MS对差速离心富集后的菌液进行直接鉴定,与传统的培养鉴定方法相比,对血流感染中主要病原菌的鉴定符合率较高,且方法快速、简便,成本低廉,有效缩短了检测时间,而且鉴定准确率高,适合在临床微生物实验室中推广应用。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定沙门菌临床分离株

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在沙门菌鉴定中的临床应用,并研究其影响因素。方法用传统血清学方法鉴定沙门菌的血清型,用MALDI-TOF MS对哥伦比亚血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h、72h、120h和168h的179株沙门菌进行鉴定。结果 179株沙门菌可分为38种血清型,肠炎沙门菌(21.2%)、斯坦利沙门菌(17.3%)和Ⅰ4,5,12:i:-沙门菌(16.2%)居前3位。所有菌株在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h和72h均能被MALDI-TOF MS准确鉴定为沙门菌。MALDI-TOF MS的耗材成本约为微生物自动生化鉴定系统(Vitek 2)的1/3,检测时间约为Vitek 2的1/7。结论在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板培养3d以内的沙门菌,MALDI-TOF MS均可以准确鉴定。与Vitek 2相比,MALDI-TOF MS检测的速度更快,消耗的成本更低,并且可以直接鉴定生长在选择性培养基的沙门菌。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在幽门螺杆菌检测中的应用

目的 建立并评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对幽门螺杆菌(Hp)的鉴定能力及Hp耐药性菌株对检测结果的影响.方法 MALDI-TOF MS自建库中的Hp来源于样本库中经传统方法鉴定和药物敏感试验并已进行全基因测序确认的菌株,随机取其中对药物全敏感的Hp菌株10株,用MALDI-TOF M...     

MALDI-TOF-MS技术应用于非肝癌肝病蛋白质组学的研究进展

蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象的一门新兴学科,其研究技术主要包括双向凝胶电泳、质谱（主要包括MALDI-TOF-MS和SELDI-TOF-MS技术）和生物信息学技术。目前我国慢性肝病主要是以乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染所导致的慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化以及肝癌等为主,蛋白质组学技术在肝癌中的研究较多,而对非肝癌肝病文献较少也比较零散。因此,本文从MALDI-TOF-MS技术在该领域研究应用方面对肝病蛋白质组学研究作一综述。     

MALDI-TOF-MS技术应用于消化道肿瘤蛋白组学的研究进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)技术作为一种生物质谱技术，可广泛应用于基因突变检测、基因多态性研究、微生物鉴定、肿瘤生物学标志物检测等方面，其对于早期疾病的发现、治疗以及评估预后有着重要指导意义，已成为精准医学领域不可缺少的分子诊断技术。本文对MALDI-TOF-MS技术在消化道肿瘤蛋白质组学的应用方面进行综述。     

MALDI-TOF-MS技术应用于肝细胞癌蛋白质组学的研究进展

蛋白质组学（proteomics）是从整体水平对蛋白质进行研究的一门重要学科。蛋白质组学技术为开展HCC研究建立了新的技术平台并已经做了大量工作，筛选出有潜在价值的用于HCC诊断和预后的蛋白及发现新的治疗药物靶点，为HCC的诊断和治疗带来新的机遇。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱是蛋白质组学研究的核心技术之一。作者拟从MALDI—TOF-MS技术在肝细胞癌蛋白质组学研究中的应用方面作一综述。     

帕金森病脑脊液蛋白质组学研究

目的寻找头痛和帕金森病(PD)患者用药前、后脑脊液差异蛋白质点,确定PD疾病特异性蛋白(DSPs)和药物治疗对蛋白质表达谱的影响。方法收集2004—2006年重庆医科大学附属第一医院神经内科收治的24例PD患者及12例对照组头痛患者脑脊液。用双向凝胶电泳(2D-PAGE)分离蛋白质,银染染色,分析图像寻找有意义的差异蛋白点;进行质谱(MS)鉴定。结果脑脊液蛋白质点主要集中在pH 4~7,头痛组与帕金森用药前后脑脊液电泳图谱蛋白质点分布基本一致,符合临床脑脊液生化常规检查,甲状腺激素结合蛋白、载脂蛋白E在PD患者用药前后相对于对照组都消失,血清转铁蛋白在PD患者用药前后相对于对照组都明显上调。结论用药前后PD患者脑脊液蛋白质点与头痛组脑脊液蛋白质点存在差异,药物治疗对PD患者脑脊液蛋白质表达谱影响不明显。     

WCX磁珠联合MALDI-TOF-MS技术在结直肠癌诊断中的应用

目的:比较结直肠癌与正常人血清蛋白质谱的变化,筛选特异性蛋白标志物,建立结直肠癌诊断分类树模型.方法:收集血清样本133例(其中结直肠癌67例,正常人66例),随机分为建模组和验证组.运用弱阳离子纳米磁珠(magnetic bead-weak cation exchange,MB-WCX)联合基质辅助激光解吸离子飞行质谱(matrix-assistedlaser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF-MS),建立结直肠癌与正常人血清蛋白质谱.用Flex Analysis2.4软件收集数据,应用ClinproTools2.2软件对建模组34例结直肠癌和33例正常人血清差异蛋白质谱进行定量分析,应用Genetic Algorithm算法建立结直肠癌诊断模型,应用所获取的诊断模型对验证组样本(33例结直肠癌和33例正常人)进行分类诊断,以评价诊断模型的诊断价值.结果:通过比较分析结直肠癌与正常人血清蛋白质谱,发现共有33个差异蛋白峰(P<0.05),其中在结直肠癌中表达上调25个,表达下调8个.利用其中5个差异峰(Mr分别为759,3316,4645,4248,2645Dr)建立诊断模型,获得了94.12%(32/34)敏感性和96.97%(32/33)的特异性,经独立样本双盲验证,其灵敏度为93.94%(31/33),特异度为96.97%(32/33).结论:基于磁珠分离和MALDI-TOF-MS技术能直接检测出结直肠癌患者血清差异表达蛋白,建立的诊断模型具有较高的敏感性和特异性,对提高结直肠癌的诊断具有一定的临床意义.     

Candida albicans meningitis: clinical case

Candida spp. meningitis is still a rare clinical situation, although it is becoming more frequent. Literature references to it and therapeutic options are scarce. We present a case of a young male, HIV-positive drug addict, with Candida albicans meningitis which was treated with oral fluconazole, having a good outcome.     

Differentiation of Candida albicans and Candida dubliniensis using a single-enzyme PCR-RFLP method

Candida dubliniensis is a novel Candida spp. that is similar to Candida albicans with respect to several phenotypic characteristics. However, they differ from each other with respect to epidemiology, pathogenesis, and the rapid development of resistance to fluconazole. In the present study, we used a single-enzyme PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) technique to differentiate C. dubliniensis from C. albicans. The amplified ITS region of C. dubliniensis was digested once using the enzyme B1nI, whereas that of C. albicans remained intact. All standard strains tested were identified successfully by this method. None of 140 clinical isolates identified morphologically as C. albicans were recognized as C. dubliniensis based on their PCR-RFLP pattern. Our PCR-RFLP method easily differentiated C. dubliniensis from C. albicans, and this result was also demonstrated with standard strains.     

Candida albicans masquerading as gram-negative bacilli in the clinical laboratory

We report misidentification of Candida albicans as Gram-negative bacilli owing to colony morphology on MacConkey agar and subsequent inoculation into GN-ID/VITEK-2. ATCC and clinical Candida strains (n = 24) masqueraded as various bacterial species when experimentally inoculated into GN-ID cards. This phenomenon should be considered when peculiar taxa or susceptibility are encountered.     

71株白念珠菌临床分离株微卫星基因分型

目的 建立高效、快速、简便的白念珠菌临床分离株三重保守基因微卫星分型技术。方法 以煮沸法处理的71株白念珠菌野生株为模板，三色荧光分别标记保守基因CDC3、EF3和HIS3微卫星序列引物，PCR扩增，产物行聚丙烯酰胺凝胶电泳。由基因扫描分析软件获取片段的精确长度，Genotyper软件行基因分型。结果 71株白念珠菌野生株行CDC3、EF3和HIS3基因分型分别获得5、10、8种等位基因，7、8、9种基因型，三位点联合分析共获得14种菌株基因型。结论 白念珠菌多重保守基因微卫星分型能从基因水平快速、高效的对临床分离株进行分型，对白念珠菌的流行病学研究有重要价值。     

白色念珠菌耐药的研究进展

本文对白色念珠菌临床耐药情况及耐药机制的研究进展进行了综述,但目前有些白色念珠菌耐药机制还不清楚,并且新的耐药菌株不断出现,白色念珠菌耐药有待于进一步研究。