辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及机制

目的:观察辣椒碱(capsaicin)对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法:设立不同浓度辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(0,25,50,75,100,150,200,250μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后的细胞活性;穿透小室(transwell)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)的肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后,对细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,辣椒碱(25,50,75,100μmol·L-1)作用24 h后均对细胞存活率未产生明显影响,从150μmol·L-1开始,随着辣椒碱浓度逐渐升高,细胞存活率逐渐下降(P0.01),且呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能显著抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭,且呈浓度依赖效应(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能明显上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白表达水平(P0.01),下调Vimentin,MMP-2,MMP-9蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭具有抑制作用,可能与其上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白的表达,下调肝癌SMMC-7721细胞中Vimentin,MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

肝癥口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响

本文就肝癌口服液人含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响进行了研究。通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测表明，肝癌口服液可以促进人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡，且对正常人的免疫系统影响不大。     

散结片对人肝癌细胞和荷瘤鼠免疫细胞影响的实验研究

目的 :探讨散结片抑瘤机制。方法 :以不同浓度的散结片醇提物和水提物分别处理人肝癌 SMMC- 772 1细胞 ,以 MTT法测提取物对其线粒体代谢活性的影响 ;腹腔注射含水提物 10 m g/ m l· d的水溶液 ,测其对小鼠移植性实体瘤的抑制作用及对小鼠 T、B淋巴细胞比率和腹腔吞噬细胞活性的影响。结果 :1散结片醇提物对人肝癌细胞的抑制作用随浓度提高而增加。 2水提物对人肝癌细胞作用不明显。但能明显抑制小鼠 S- 180实体瘤 ,并明显提高 T、B淋巴细胞比率。 3水提物可明显提高小鼠腹腔吞噬细胞活性。结论 :散结片醇提物能降低体外培养的人肝癌细胞线粒体代谢活性 ;水提物能提高小鼠 T、B淋巴细胞比率和腹腔吞噬细胞活性 ;对小鼠移植性实体瘤有很强的抑制作用。     

华蟾素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的:探讨华蟾素诱导人肝癌细胞凋亡及作用机理。方法:采用 MTT 法、AO/EB 荧光染色法、流式细胞仪及免疫组化等方法,观察华蟾素对人肝癌 SMMC-7721细胞株的作用。结果:华蟾素可显著抑制SMMC-7721细胞的生长;经药物处理后,AO/EB 染色时,肝癌细胞在显微镜下呈现出典型的凋亡形态学改变;在流式细胞仪上可见华蟾素能将细胞周期阻断在 S 期;对抗凋亡基因 bcl-2表达有一定的抑制作用。结论:华蟾素能抑制人肝癌 SMMC-7721细胞生长;能诱导人肝癌细胞凋亡;其诱导细胞凋亡的机理与其能阻断细胞周期、抑制 bcl-2基因表达有关。     

镰形棘豆抑制人肝癌细胞增殖和侵袭作用及机制研究

目的:研究镰形棘豆总黄酮对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖和侵袭的影响。方法:利用MTT检测100、250、350、500μg/m L作用细胞48 h后,镰形棘豆总黄酮对SMMC-7721细胞增殖和侵袭的影响。Transwell侵袭实验检测350μg/m L总黄酮处理SMMC-7721细胞48 h对其侵袭能力的影响。实时定量PCR,Western blot检测镰形棘豆总黄酮处理SMMC-7721细胞后MMP-9 mRNA和蛋白质表达水平的变化。结果:MTT结果表明镰形棘豆总黄酮能够显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,并表现出一定的浓度依赖性。350μg/m L镰形棘豆总黄酮处理细胞48 h后,SMMC-7721细胞侵袭能力降低,且MMP-9 mRNA和蛋白质表达水平均有所下降。结论:镰形棘豆总黄酮对SMMC-7721细胞增殖和侵袭具有抑制作用,并下调了MMP-9分子的表达水平,该分子可能参与了细胞的增殖和侵袭等生物学行为。     

南蛇藤总萜提取物对肝癌7721细胞侵袭转移能力的影响

目的 研究南蛇藤总萜提取物对肝癌7721细胞侵袭和黏附能力的影响.方法 南蛇藤总萜提取物作用肝癌7721细胞后,MTT法及细胞黏附法检测细胞毒作用及对黏附能力的影响;流式细胞仪检测基质金属蛋白酶-2(MMF-2)表达的变化;ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)分泌量的变化.结果 10、20、40、80μg/mL南蛇藤总萜提取物作用肝癌7721细胞后,其生长抑制率分别为(8.62±0.87)%、(13.42±1.07)%、(27.64±2.13)%、(47.16±3.08)%,呈剂量依赖性.南蛇藤总萜提取物可以抑制肝癌7721细胞与人脐静脉内皮细胞和基底膜成分Matrigel的侵袭、黏附能力,能明显下调MMP-2和VEGF的表达,且呈一定的量效关系.结论 南蛇藤总萜提取物可以抑制肝癌7721细胞增殖,降低细胞的侵袭、黏附能力,其机制可能与下凋VEGF和MMP-2的表达有关.     

复方斑蝥注射液对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用

目的:探讨复方斑蝥注射液(Compound Cantharis Injection,CCI)对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用.方法:分别用用MTT法和细胞生长曲线研究CCI对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用.结果:与阴性对照组比较,CCI在2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml、16mg/ml剂量时对肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为11.63%、20.54%、38.11%、62.44% (P<0.05);平均半数抑制浓度(IC50)为11.29mg/ml.生长曲线结果显示:CCI对肝癌细胞的抑制作用且呈明显的量效和时效关系.结论:CCI能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,具有一定的剂量依赖性.     

三氧化二砷对雄性大鼠性激素影响的实验研究

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对雄性大鼠血清性激素的影响。方法:将32只雄性大鼠随机分为4组,其中1组为对照组,其余3组分别给予不同剂量的As2O3腹腔注射,2周后检测血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH)含量,同时检测血清砷浓度、测定大鼠睾丸脏器系数、精子头数。结果:小剂量组血清T稍有下降,中剂量和大剂量组可使T明显减少,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。各剂量组的As2O3对FSH及LH均无影响。正常大鼠血清中有微量砷存在,随着给大鼠腹腔注射As2O3的量增加,血中砷浓度明显增加,各组与对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。不同剂量的As2O3对大鼠的睾丸脏器系数无明显影响。但大鼠精子头计数随剂量增加而有所减少,以大剂量组最为的明显,与对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01)。血清砷含量与血清T及精子头数之间呈直线负相关(r=-0.489和-0.515,均P<0.05),血清T与精子头数之间呈直线正相关(r=0.351,P<0.05)。结论:As2O3可能通过对睾丸组织的损伤而抑制大鼠体内T分泌,导致精子生成减少,产生雄性生殖毒性。     

原卟啉钠体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用

目的:研究原卟啉钠(NAPP)体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的抑制作用。方法:通过对人正常肝细胞株QSG-7701细胞的药物毒性实验筛选出NAPP对人正常肝细胞无明显毒性的最大无毒浓度(TC0)。以TC0为起始浓度,10倍梯度稀释成5个不同的NAPP浓度,作用于体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,通过MTT比色法测定NAPP对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;经倒置光学显微镜和Hoechst33258染色倒置荧光显微镜进行形态学观察,计数凋亡细胞,并计算凋亡指数(AI);采用AnnexinⅤ-FITC/PI双标流式凋亡检测试剂盒经流式细胞仪检测SMMC-7721细胞凋亡和坏死率。结果:不同浓度NAPP作用后,SMMC-7721细胞的增殖明显受到抑制,A值明显降低(P<0.05或P<0.01),且抑制率呈一定的浓度-时间依赖性;光学显微镜下见细胞个数明显减少,细胞密度明显变稀,细胞形态发生了明显变化,很多细胞间的连接消失,细胞变圆、皱缩或见细胞外形变长呈长梭形;荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变,AI显著升高(P<0.05或P<0.01);经流式细胞仪检测,可见SMMC-7721细胞凋亡和坏死率不同程度升高。结论:NAPP在体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有一定的抑制增殖、促进凋亡和坏死的作用。     

白英乙醇提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨白英乙醇提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法:用MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达。结果:与正常对照组相比,白英提取物各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3 mRNA表达显著上升(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA表达显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:白英乙醇提取物通过上调caspase-3和下调survivin基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制SMMC-7721细胞增殖。     

复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响

目的:研究复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞侵袭转移能力的影响。方法:体外培养胃癌细胞系SGC-7901,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用粘附试验、Transwell趋化运动和Matrigel侵袭实验,研究复方苦参注射液及其不同浓度下对SGC-7901细胞的粘附、运动以及侵袭能力的影响。结果:复方苦参注射液浓度在0.25、0.5、1.0、1.5 mg/ml时均有一定的抑制胃癌SGC-7901细胞增殖的作用,且呈明显的量效和时效关系。复方苦参注射液不同浓度处理SGC-7901细胞后,体外粘附、侵袭和运动能力呈剂量依赖性下降。经复方苦参注射液(1.5 mg/ml)作用后SGC-7901细胞CD44V6蛋白表达减弱,胞浆棕黄色颗粒减少。结论:复方苦参注射液可以抑制胃癌细胞生长,降低细胞粘附、侵袭和运动能力,其机制可能与抑制CD44V6蛋白表达有关。     

全国中西医结合皮肤性病学术会议在上海召开

由中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会主办,上海长征医院承办的2010全国中西医结合皮肤性病学术会议于4月7—12日在上海召开。中国中西医结合学会会长,中国科学院陈凯先院士,中国中西医结合学会副会长、上海市中西医结合学会会长王文健教授,中国中西医结合学会秘书长穆大伟,上海长征医院张安祥政委分别到会祝贺并讲话。中国中西医结合皮肤性病专业委员会主任委员温海教授担任大会主席。共有来自全国26个省市的皮肤科医生、来自美国和日本的专家以及《临床皮肤科杂志》、《中华皮肤科杂志》、《中国中西医结合皮肤性病学杂志》、《中国皮肤性病学杂志》和《实用皮肤病学杂志》的主编和编委及企业届代表1 000余人参加了本次会议。与会医生和科研人员就目前皮肤科学领域的前沿问题做了深入的探讨与交流。本次会议共收到论文近710篇,涵盖了银屑病、感染性皮肤病以及皮肤美容等各个领域的临床和基础研究。中国中西医结合学会还在会议期间举行了2009全国中西医结合医学科技奖获奖项目的颁奖典礼,显示了我国在中西医结合领域取得的重大成绩。（中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会整理）     

三氧化二砷联合华蟾素抗裸鼠人肝癌移植瘤血管新生的作用

目的 探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）联合华蟾素对裸鼠人肝癌移植瘤血管新生的作用及其相关机制。     

南蛇藤总萜对MGC-803细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨南蛇藤总萜对人胃癌MGC-803细胞侵袭和迁移能力的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:体外培养MGC-803细胞,分为南蛇藤总萜组(质量浓度分别为20,40,80 mg·L-1)、阴性对照组和阳性对照组,采用MTT法检测南蛇藤总萜对MGC-803细胞增殖的抑制作用;采用Transwell小室法检测南蛇藤总萜处理MGC-803细胞24 h后,细胞侵袭和迁移能力的改变;Western blotting法检测处理24 h后基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达情况。结果:南蛇藤总萜能抑制MGC-803细胞的增殖,呈一定的浓度及时间依赖性;南蛇藤总萜40,80 mg·L-1能显著降低MGC-803细胞的穿膜细胞数(P<0.01),并呈浓度依赖性;南蛇藤总萜能降低MGC-803细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平,并有浓度依赖性。结论:南蛇藤总萜能抑制人胃癌MGC-803细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与抑制MMP-2,MMP-9的表达有关。     

金龙胶囊对胃癌细胞MGC-803和BGC-823侵袭转移能力的影响

目的:探讨金龙胶囊对人胃癌MGC-803,BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响并对其具体机制进行探讨。方法:体外培养胃癌MGC-803,BGC-823细胞,分为金龙胶囊组(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L~(-1)),空白组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法分别检测金龙胶囊对MGC-803,BGC-823细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制率(IC50);采用细胞侵袭(transwell)小室法和划痕实验检测金龙胶囊处理MGC-803和BGC-823细胞24 h后,细胞侵袭和迁移能力发生改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测金龙胶囊处理MGC-803,BGC-823细胞24 h后E-钙黏素(E-cadherin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况。结果:金龙胶囊能明显抑制MGC-803,BGC-823细胞的增殖,呈一定的浓度及时间依赖性;与空白组比较,金龙胶囊能明细减少MGC-803,BGC-823细胞的穿膜细胞数目,可明显影响2种胃癌细胞的侵袭与迁移能力,并呈明显浓度依赖性(P0.05);金龙胶囊组的划痕距离较空白组明显降低,影响MGC-803,BGC-823细胞迁移,并呈浓度依赖性(P0.05);与空白组比较,金龙胶囊组能够提高MGC-803和BGC-823细胞中E-cadherin蛋白表达,降低MMP-2,MMP-9蛋白表达水平,且呈一定的量效关系(P0.05)。结论:金龙胶囊能够抑制人胃癌MGC-803,BGC-823细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与上调E-cadherin表达,抑制MMP-2,MMP-9表达水平有关。本研究证实了金龙胶囊对胃癌MGC-803,BGC-823细胞抗侵袭转移的部分机制。     

三氧化二砷对急性淋巴细胞白血病原代细胞的作用

探讨三氧化二砷（As2O3）对急性淋巴细胞白血病（ALL）原代白血病细胞的作用及作用机制,为As2O3在急性淋巴细胞白血病中的应用提供实验依据。方法：采用MTT法检测As7O3,对ALL原代白血病细胞生长的抑制作用;采用细胞形态学和DNA琼脂糖凝胶电泳技术,观察As2O3在体外诱导ALL原代白血病细胞的凋亡作用;采用流式细胞术检测原代白血病细胞在As2O3,处理前后的Caspase-3活性水平变化及Bcl-2表达水平。结果：①As2O3浓度为1．0—10．0μmol／L的As20,可以明显抑制ALL原代白血病细胞的生长,并呈时间与浓度依赖性。②As2O3作用于ALL原代白血病细胞出现典型细胞凋亡形态学改变、DNA出现了特征性“阶梯形”条带和细胞凋亡峰。③16例ALL患者BMMNCCaspase-3活性水平为4．11±1．93;经As2O3作用后Caspase-3活性水平为26．39±8．36,明显高于对照组11．54±2．78,P〈0．001。④本组患者治疗有效者9例,As2O3作用前后Caspase-3活性水平为4．83±0．98、29．67±7．93;无效者7例Caspase-3活性水平为3．19±2．50、20．59±4．63;As2O3作用后治疗有效组Caspase-3活性明显升高,P〈0．05。⑤16例ALL患者BMMNCBcl-2表达水平为28．08±6．35,其中治疗有效组为26．32±5．79,无效组为32．63±5．47,P〈0．05。⑦As2O3作用前后Bcl-2高表达组Caspase-3活性水平分别为4．07±1．26、22．10±5．64;而Bcl-2低表达组分别为4．14±2．41、32．63±5．47。As2O3作用后两组cas—pase-3活性水平上升程度明显不同,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Ass2O3在体外对ALL原代白血病细胞生长具有抑制作用,呈现明显的剂量及时间依赖性关系。As2O3能通过激活Caspase-3途径诱导ALL原代白血病细胞凋亡,而Bcl-2可在一定程度上抑制As2O3激活Caspase-3诱导ALL原代白血病细胞凋亡。     

软坚散结中药对子宫内膜异位症模型小鼠内膜黏附因子的影响

目的 观察软坚散结中药对子宫内膜异位症模型小鼠异位内膜黏附的影响. 方法 用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因和野生型C57BL/6J小鼠建立子宫内膜异位症模型,中药组给予软坚散结中药灌胃,空白组、模型对照组(对照组)则给予等量的生理盐水灌胃,2周后成像并比较两组小鼠荧光表达的强弱;流式细胞术检测异位病灶的凋亡情况;Western blot和实时定量PCR等技术对异位内膜的细胞间黏附分子1(ICAM-1)和透明质酸受体CD44进行检测. 结果 镜下可见模型小鼠肠管间、腹壁下、肝小叶下或脾周形成绿色团块状或星点状内膜异位病灶,中药组异位灶体积及荧光表达强度明显低于对照组(P＜0.05),中药组和对照组异位内膜细胞的凋亡率与空白组差异有统计学意义(均P＜0.01),且中药组高于对照组(P＜0.05);中药组CD44、ICAM-1蛋白和mRNA表达显著低于模型对照组(均P＜0.01).对照组、中药组的CD44和ICAM-1mRNA表达量分别是空白组的16.34、2.75和1.53、1.19倍. 结论 软坚散结中药可抑制子宫内膜异位症模型小鼠异位内膜病灶的产生,这种作用可能是通过降低黏附因子ICAM-1、CD44的表达而实现的.     

黄芩素对绒毛滋养细胞侵袭的影响

目的:通过研究黄芩素对人类早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo的增殖活力、侵袭能力的影响,探讨中药黄芩作用于滋养细胞侵袭相关疾病的可能作用机制。方法:体外培养早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞,以不同浓度(0.01,0.05,0.1,0.5,1μmol·L~(-1))黄芩素作用于细胞,设黄芩素0μmol·L~(-1)为空白组,采用细胞增殖、毒性活力实验法(cell counting kit-8,CCK-8)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞增殖活力的影响,细胞侵袭实验(Transwell)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞侵袭作用的影响。提取黄芩素处理后的细胞总RNA,蛋白,分别运用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滋养细胞侵袭相关的重要因素-基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9的mRNA,蛋白表达水平;收集细胞上清,培养基采用明胶酶谱法检测黄芩素对MMP-2,MMP-9的分泌及酶活性的影响。结果:与空白组比较,0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L~(-1)黄芩素能明显诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力(P0.05),且侵袭率对剂量呈依耐性增长。0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L~(-1)黄芩素可明显上调MMP-9蛋白和mRNA表达水平,增强其酶活性(P0.05)。结论:黄芩素能诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力,可能是通过增强MMP-9 mRNA和蛋白表达及酶活性来发挥作用。     

三氧化二砷联合姜黄素治疗大鼠移植性肝癌的实验研究

目的：观察三氧化二砷联合姜黄素对大鼠移植性肝癌的治疗作用。方法：以直接注射法制备大鼠移植性肝癌模型,120只大鼠随机分为对照组（A组）、三氧化二砷治疗组（B组）、姜黄素治疗组（C组）及三氧化二砷联合姜黄素治疗组（D组）,每组30只,于接种肝癌细胞7天后各组随机处死10只,计算瘤体大小及称肝重量;剩余大鼠经腹腔给药,连续7天。分别测量给药前及停药后14天的体重及血常规,每组选出10只用于记录生存时间,剩余10只大鼠于停药后14天处死,解剖计算瘤体大小及称肝重量。结果：D组瘤体缩小最为显著且与A组、B组及C组有统计学差异（P〈0.05）,A组瘤体变化最小且与B组、C组及D组有统计学差异（P〈0.05）,B组、C组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。生存时间B组、C组及D组长于A组（P〈0.05）,D组最长且与B组、C组有统计学差异（P〈0.05）。血常规变化情况在4组间差别无统计学意义。结论：三氧化二砷和姜黄素对大鼠移植性肝癌均有治疗作用,联合用药具有较好的协同效应。