白藜芦醇对高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡和损伤的保护作用

目的观察白藜芦醇对高糖诱导的乳鼠心肌细胞凋亡及损伤的影响,探讨硫氧还蛋白（Trx）系统在此过程中的作用。方法使用培养的乳鼠心肌细胞,随机分为三组：正常对照组（葡萄糖5．5mmol／L）、高糖组（葡萄糖25mmol／L）和高糖＋白藜芦醇组（葡萄糖25．0mmol／L,白藜芦醇30．0umol／L）。白藜芦醇组给予白藜芦醇30umol／L预处理45min,对照组和高糖组均给予等量相应溶剂处理。各组细胞于正常糖浓度DMEM或高糖DMEM中继续培养48h后,收集上清液和细胞裂解液进行后续研究。结果与正常对照组相比,高糖组细胞乳酸脱氢酶漏出和细胞凋亡明显增加。进一步分析发现,高糖组细胞p38激酶活性、细胞内活性氧生成量,丙二醛（MDA）含量和3一硝基酪氨酸生成量明显升高,Trx活性降低,但其表达未见明显改变,其内源性抑制蛋白硫氧还蛋白相关蛋白（TXNIP）表达增加。白藜芦醇预处理显著减轻了高糖诱导的细胞凋亡及损伤,m活性得到改善,高糖引起的TXNIP表达明显下调,细胞p38激酶活性、细胞内活性氧生成、MDA含量、3一硝基酪氨酸生成量明显降低。结论白藜芦醇对高糖诱导的乳鼠心肌细胞凋亡和损伤具有明显保护作用,其机制与白藜芦醇减少Trx的硝基化,抑制高糖诱导的TXNIP表达上调,从而保护Trx的功能,减少自由基损伤和凋亡的发生有关。     

高糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞GLP-1受体表达影响及机制研究

目的 探索高糖对缺氧/复氧（H/R）乳鼠心肌细胞胰高血糖样肽-1受体（GLP-1R）表达的影响及其分子机制。 方法 培养乳鼠心肌细胞建立高糖H/R损伤模型,随机将心肌细胞分为对照（正常血糖）组、正常血糖＋H/R组、正常血糖＋GLP-1激动剂（Exentin-4）处理组、高糖组、高糖＋H/R组、高糖＋H/R＋Exentin-4处理组。Western blot观察高糖H/R后GLP-1R表达变化情况。RT-PCR和Western blot观察各组细胞H/R损伤的氧化应激标志物NOX4、p22phox表达变化;Western blot检测高糖条件下蛋白激酶C（PKC）表达,并观察PKC激动剂PMA和或PKC抑制剂Go 6983处理后GLP-1R表达及NOX4、p22phox表达变化。 结果 正常血糖条件下,H/R后心肌细胞氧化应激加重（P<0.05）,Exendin-4降低氧化应激损伤（P<0.05）;与正常血糖H/R组相比,高糖H/R组氧化应激损伤加重（P<0.05）,而Exendin-4对高糖条件下抗氧化应激作用无明显改善。与正常血糖组相比,高糖组PKC表达升高（P<0.05）,参与心肌细胞GLP-1R表达下降,抑制PKC活性可部分恢复Exendin-4高糖条件下抗氧化应激作用（P<0.05）。 结论 高糖条件下GLP-1R表达下降,PKC参与其表达下降,抑制PKC活性可部分恢复Exendin-4高糖条件下抗氧化应激作用。     

胰高血糖素样肽-1对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响

目的:研究胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响及其可能的机制。方法:将体外培养乳鼠心肌细胞分为3组,即正常对照组、H/R组和GLP-1+H/R组。H/R损伤后,分别通过比色法、流式细胞术、荧光检测法测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性、心肌细胞的凋亡率及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)的活性。结果:与正常对照组比较,H/R组LDH的活性、心肌细胞的凋亡率及caspase-3的活性均明显增高(P0.01);而与H/R组相比,GLP-1+H/R组LDH的活性、心肌细胞的凋亡率及caspase-3的活性则明显降低(P0.01)。结论:GLP-1可直接作用于心肌细胞,对H/R诱导的心肌细胞损伤产生一定的拮抗作用,其作用机制可能主要是通过抑制心肌细胞的凋亡所致;而GLP-1对心肌细胞凋亡的抑制作用,可能与其对caspase-3相关的凋亡或抗凋亡途径的调节有关。     

辛伐他汀对高糖诱导乳鼠心肌细胞过氧化损伤的保护作用

目的探讨辛伐他汀对高糖所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法分离SD乳鼠心肌细胞原代培养72h后,随机分为5组并加入相应的处理药物,即对照组（control组）;高浓度葡萄糖刺激组（GS组）;不同浓度的辛伐他汀干预组,分别为GS＋10^-7MSim组、GS＋10^-6MSim组和GS＋10^-5MSim组。测定各组心肌细胞活力及心肌细胞培养基中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力及细胞内总谷胱甘肽（GSH）含量。结果辛伐他汀呈剂量依赖性地提高高糖损伤乳鼠心肌细胞的细胞活力（P〈O．01）;培养基中MDA的生成减少（P〈0．05）,而SOD活力及GSH含量明显增高（P〈0．05）。结论辛伐他汀可能通过稳定细胞膜、抗脂质过氧化反应及提高清除氧自由基,对高糖所致的心肌细胞过氧化损伤发挥剂量依赖性的保护作用。     

胰升糖素样肽1对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护机制

观察胰升糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)对原代培养的心肌细胞在缺氧/复氧条件下损伤的影响及机制.结果显示,缺氧/复氧使乳酸脱氢酶活性[(210.0±11.5)对(101.4±6.5)U/L]、细胞凋亡率[(8.138±1.512)对(0.575±0.168)%]和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性[(44.52±5.69)对(19.98±1.97),均P<0.01]均升高,GLP-1能直接作用心肌细胞,并对其在缺氧/复氧的损伤具有抑制作用[乳酸脱氢酶活性(190.2±9.0)U/L,细胞凋亡率(2.688±0.580)%,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性30.34±4.18],该作用可能与磷脂酰肌醇3激酶(PBK)/Akt介导的抗细胞凋亡作用有关.     

血红素氧合酶-1在胰岛素对乳鼠心肌细胞保护机制中的作用

目的探讨血红素氧合酶（HO）1在胰岛素对缺氧/复氧心肌细胞保护机制中的作用。方法体外培养SD乳鼠心肌细胞,分为7组常氧对照组,缺氧/复氧对照组,不同剂量胰岛素组（160、320、640、960mU/L）,胰岛素加原卟啉锌组（胰岛素640mU/L、原卟啉锌10μmol/L）。除常氧对照组外,其余各组均给于缺氧3h,再复氧1h处理。检测心肌细胞HO1蛋白表达、HO活性、细胞生存率及乳酸脱氢酶（LDH）值。结果与缺氧/复氧对照组比较,各胰岛素组心肌细胞HO1蛋白表达显著增加,HO活性、细胞生存率显著增高,LDH显著降低。原卟啉锌能显著抑制HO活性,阻止胰岛素对心肌细胞的保护作用。结论胰岛素能够增加缺氧/复氧心肌细胞HO1的表达,增高HO活性,从而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

Ghrelin对高糖诱导心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨Ghrelin对高糖诱导心肌细胞凋亡的影响.方法 将原代培养的心肌细胞随机分为:①正常对照组(N组);②高糖组(H组);③高糖+Ghrelin组(G组).应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测各组心肌细胞凋亡,分光光度法检测心肌细胞内caspase-3活性的变化.结果 与N组比较,H组心肌细胞凋亡明显增加,caspase-3活性显著升高;与H组比较,G组心肌细胞凋亡数量明显减少,caspase-3活性明显降低(均P＜0.05).结论 Ghrelin可能通过降低caspase-3活性抑制高糖诱导的心肌细胞凋亡.     

胰高血糖素样肽1对乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的 研究胰高血糖素样肽1(GLP-1)对缺氧复氧诱导的乳鼠心肌细胞损伤的影响及其可能机制.方法 通过给原代培养的乳鼠心室肌细胞缺氧16 h、复氧4 h,建立缺氧复氧(H/R)心室肌细胞损伤模型.于缺氧前随机分为正常对照组,H/R组,GLP-1+H/R组,GLP-1+H/R+U0126组,GLP-1+H/R+LY294002组,H/R+U0126组和H/R+LY294002组.H/R损伤后测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞凋亡率和半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性.结果 H/R组LDH活性、细胞凋亡率和Caspase-3活性均明显高于正常对照组(P均<0.01).而GLP-1+H/R组LDH活性[(128.47±7.96)U/L比(223.96±22.10)U/L,P<0.01]、细胞凋亡率[(2.84±2.56)%比(12.58±6.69)%,P<0.01]和Caspase-3活性[(36 809±4750)RLU比(57 602±9161)RLU,P<0.01]则明显低于H/R组,但上述指标变化可分别被LY294002(PI3K抑制剂)和UO126(MAPK抑制剂)抑制.结论 GLP-1可以直接作用于心肌细胞,对H/R诱导的心肌细胞损伤产生一定的保护作用,保护作用可能主要是通过抑制心肌细胞的凋亡实现的,并且GLP-1对凋亡的抑制作用可能与PI3K/Akt和MAPK所介导的抗细胞凋亡作用有关.     

缺氧对乳鼠心肌细胞凋亡的诱导作用

目的　观察缺氧对心肌细胞凋亡的诱导作用。方法　体外培养的Wistar乳鼠心肌细胞分别缺氧 2小时、1 2小时、2 4小时 ,采用流式细胞术、TdT介导的dUTP末端标记法 (TUNEL)以及形态学方法检测心肌细胞凋亡。结果　各缺氧组心肌细胞凋亡数量均显著高于对照组 ,随着缺氧时间延长凋亡细胞数量逐渐增加 ,对照组、缺氧 2小时、1 2小时、2 4小时组凋亡细胞数量分别为 9 3 3± 0 62 % ,1 7 2 9± 0 95% ,3 3 59± 2 0 9% ,76 0 1± 4 60 % (P <0 0 1 )。缺氧 2 4小时心肌细胞TUNEL染色阳性 ,HE染色及透射电镜观察心肌细胞表现出凋亡的形态特征。结论　缺氧可以诱导乳鼠心肌细胞凋亡。     

辛伐他汀对高糖诱导乳鼠心肌细胞损伤的干预作用及其机制研究

目的 （1）观察乳鼠心肌细胞对高浓度葡萄糖刺激的反应,探讨其可能的机制。（2）观察辛伐他汀对高浓度葡萄糖刺激下心肌细胞损伤的干预作用,并探讨其可能机制。方法 （1）取SD乳鼠心肌细胞做原代培养。（2）空白对照组（control组）:不加任何刺激药物,仅用含有20%胎牛血清的DMEM培养基继续培养72小时。（3）高糖刺激组（high glucose,GS组）:含有20%胎牛血清的DMEM培养基中加入终浓度为25 mmol/L的葡萄糖培养72小时。（4）辛伐他汀（simvastatin,Sim）干预组:含有20%胎牛血清的高糖（葡萄糖终浓度为25 mmol/L）DMEM培养基中,加入终浓度分别为10^-7、10^-6、10^-5 mol/L（M）的辛伐他汀培养72小时,分别为GS+10^-7MSim组、GS+10^-6MSim组、GS+10^-5MSim组。（5）甲羟戊酸对照组（GS+MVA组）:含有20%胎牛血清的高糖（葡萄糖终浓度为25 mmol/L）DMEM培养基中,加入终浓度为0.2 mmol/L（mM）甲羟戊酸培养72小时。（6）甲羟戊酸干预组(GS+10^-5MSim+MVA组):含有20%胎牛血清的高糖（葡萄糖浓度为25 mmol/L）DMEM培养基中加入终浓度10^-5M辛伐他汀及0.2 mmol/L甲羟戊酸培养72小时。（7）用MTT比色法测细胞活力,按照各自检测试剂盒说明测定培养基中LDH活力、MDA含量、NO含量、SOD活力、Caspase-3表达、细胞内GSH的含量和ROS浓度,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定细胞内NADPH氧化酶p22phox、p47phox亚基mRNA的表达水平,Western blot测定细胞内p38MAPK蛋白的表达。结果 （1）与空白对照组比较,高糖刺激组细胞活力明显降低（P<0.01）,LDH活力、MDA水平显著增加（P<0.01）,SOD活力、GSH含量显著降低（P<0.01）,ROS产生显著增高（P<0.01）,Caspase-3表达显著升高（P<0.01）,细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA表达明显增加（P<0.01）,分别达对照组的2.26?     

胰升血糖素样肽-1改善波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能机制的研究

目的 研究胰升血糖素样肽-1 （GLP-1）对波动性高糖诱导大鼠胰岛细胞增殖功能的影响及机制. 方法 将获取的原代胰岛细胞分为5组,即正常葡萄糖（5.5 mmol/L）组、恒定高糖（30.0 mmol/L）组、波动高糖（每24 h轮换培养于5.5、30.0 mmol/L）组、恒定高糖＋GLP-1 （100 nmol/L）组和波动高糖＋GLP-1组.干预7d后检测细胞增殖活性、活性氧簇（ROS）、细胞周期及周期蛋白cyclinD1、p21、p27、Skp2的表达. 结果 GLP-1干预可降低波动性高糖诱导的细胞内ROS水平[（194.40±19.20）vs（406.78±18.40）,P＜0.05],上调促细胞周期cyclinD1、Skp2表达,下调周期抑制蛋白p21、p27表达,使停滞在G0/G1期的细胞比例减少,改善细胞增殖活性[（1.38±0.09）vs（0.44±0.10）,P＜0.05]. 结论 GLP-1可通过降低氧化应激水平及对不同细胞周期蛋白表达的调节改善波动性高糖抑制的胰岛细胞增殖活性.     

生长激素对阿霉素中毒大鼠心肌细胞的抗凋亡作用

目的 :观察不同剂量生长激素 (GH)对阿霉素中毒所致大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 :建立体外培养的大鼠心肌细胞阿霉素损伤模型 ,加入不同剂量的生长激素 ,采用流式细胞仪 (FCM)检测心肌细胞凋亡和坏死率。以 2 ,3 二苯基溴化四唑 (MTT)比色法绘制心肌细胞生长曲线。结果 :阿霉素可导致心肌细胞损伤 ,表现为心肌细胞细胞坏死和凋亡发生率增高 ;GH能促进心肌细胞增殖并降低其凋亡率 ,在 10 μg·ml- 1 至 5 0 0 μg·ml- 1 范围内 ,其抗凋亡和促增殖作用呈剂量依赖性增强。结论 :GH对阿霉素中毒所致的心肌细胞凋亡有直接的抑制作用     

高糖高脂对培养成年大鼠心肌细胞损伤观察及机制初探

目的建立成年大鼠心肌细胞培养模型,观察给予高糖、高脂刺激后是否发生心肌细胞损伤和凋亡,并分析其可能机制。方法将分离所得成年大鼠心肌细胞接种入培养皿后随机分为2组进行培养。正常对照组：以M199培养基（Media199）加入5mmol／L葡萄糖与20mmol／L甘露醇作为正常对照培养基培养细胞;高糖高脂组：以M199加入高糖（25mmol／L葡萄糖）高脂（600μmol／L软脂酸）作为培养基培养模拟糖尿病。培养48h后,分别收集培养基上清与细胞,进行心肌损伤和凋亡指标测定。结果高糖高脂组乳酸脱氢酶（LDH）,细胞凋亡蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9活性显著升高,与正常对照组比较,差异均具有统计学意义（P均〈0．01）。结论在培养的成年大鼠心肌细胞,高糖、高脂可引起心肌细胞损伤和凋亡,这种凋亡与easpase-8和caspase-9依赖的凋亡途径有关。     

GLP-1分泌的影响因素及调节机制

胰高血糖素样肽(GLP)-1能够调节胰岛素的敏感性以及胰岛素的分泌.糖尿病、高脂血症以及胰岛素抵抗相关疾病均与GLP-1的分泌受损有关.GLP-1在多种营养素以及神经内分泌的作用下分泌.不同种类营养素(碳水化合物、脂质、蛋白质、纤维素)的摄入、某些代谢紊乱疾病(如肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪性肝病)、药物的干扰、G蛋白耦联受体的水平以及饮食方式等都会对GLP-1的分泌造成一定影响.     

Nitric oxide induces caspase-dependent apoptosis and necrosis in neonatal rat cardiomyocytes

Excessive nitric oxide (NO) production has been implicated in the pathophysiology of cardiomyocyte (CMC) apoptosis and necrosis induced by ischemia/reperfusion, inflammation and NO-donating chemicals. Although caspases are known to be involved in apoptosis, the present study examined whether caspases also play a role in NO-induced CMC necrosis. Neonatal rat CMCs were labeled with Annexin-V and propidium iodide, and apoptosis and necrosis were analyzed by confocal images and fluorescence activated cell sorter analysis. CMC apoptosis and necrosis were also evaluated by determining DNA fragmentation in the cell and the supernatant fractions. Treatment of CMCs with the NO donor, diethylenetriamine NO (DETA/NO) or S-nitroso-N-acetyl-penicillamine (SNAP) at concentrations of 10 and 100 microM for 24h induced predominantly apoptosis over necrosis, but a higher concentration (1mM) of DETA/NO or SNAP provoked both apoptosis and necrosis. The lower doses of DETA/NO-induced apoptosis was associated with a gradual increase in caspase-3 activity over 24h without appreciable activation of poly ADP-ribose polymerase (PARP), while the higher dose of DETA/NO induced a marked increase in caspase-3 activity and CMC apoptosis until 2h after the treatment, and increased necrotic CMCs thereafter associated with robust activation of PARP. The caspase inhibitor Z-DEVD-FMK but not the poly ADP-ribose polymerase (PARP) inhibitor 3-aminobenzamide (3-AB) abolished caspase-3 activation and CMC apoptosis induced by 100 microM DETA/NO. However, both Z-DEVD-FMK and 3-AB abolished PARP activation and CMC necrosis induced by 1mM DETA/NO. The amount of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) and adenine nucleotides in CMCs was not significantly affected by treatment with 10 and 100 microM DETA/NO, but was significantly reduced by treatment with 1mM DETA/NO without a decline of adenylate energy charge. The depletion of NAD and adenine nucleotides was abrogated by Z-DEVD-FMK and 3-AB. These results suggest that caspase activation play a crucial role in CMC apoptosis induced by lower concentrations of NO as well as in CMC necrosis induced by a higher concentration of and a longer exposure to NO. NO-induced CMC necrosis is likely mediated by PARP activation which occurs as a consequence of caspase activation.