HBV基因分型的临床意义

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的基因型存在高度异质性,且不同基因型其HBV的传播方式、临床疾病谱、预后判断、疫苗预防及抗病毒治疗选择等都有差异。作者查阅文献从HBV分子生物学特征、HBV血清型与基因型、HBV基因型的流行病学特点、HBV基因分型与乙肝病情、HBV基因型与抗病毒治疗等方面对HBV基因分型所具有的临床意义进行了简要综述。     

河源地区乙肝病毒分型和耐药突变基因检测的应用

了解河源地区乙型肝炎(HBV)基因分型和耐药基因变异特征,探讨HBV YMDD变异与基因分型、DNA载量和HBe Ag之间的关系。应用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术对60例乙肝患者血清进行基因分型和耐药突变检测及HBV DNA定量检测。60例乙肝患者中B基因型52例(86.6%),C基因型6例(10.0%),B/C混合基因型2例(3.4%)。B基因型在乙肝患者中所占构成比最高,C基因型次之,B/C混合基因型最低,差异有显著性(P0.01)。B基因型、C基因型及B/C基因型之间HBV DNA载量及HBe Ag阳性率差异均无显著性(P0.05)。检出YMDD变异38例,变异率63.3%;各基因型间YMDD变异的差异无统计学意义(P0.05)。HBV YMDD变异的监测对乙肝患者的精准治疗和个体化抗病毒方案的知道具有重要的指导意义,HBV基因分型对病情预测和转归都有重要临床意义。     

乙型肝炎病毒基因分型的临床探讨

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因分型与临床的关系。方法采用HBVS区直接测序法对我院164例江苏、安徽籍患者进行基因分型。结果164例患者中C型97例,B型63例,BC混合型4例。HBeAg阳性116例,B型38/63例(60.31%),C型76/97例(78.35%),HBV DNA≥105124例,B型43/63例(68.25%),C型81/97例(83.51%)。差异有统计学意义(P<0.01)。6个家庭的13例HBV感染者进行HBV分型检测,子女的HBV基因型与母亲相同。14例慢性乙型肝炎患者采用苦参素治疗,以B型效果明显。结论江苏、安徽地区的HBV基因分型以C型为主,其次为B、BC混合型,未见A、D、E、F、G、H基因型。C基因型HBeAg阳性多,HBV DNA定量值高。子女的HBV基因型与其母亲相同。     

乙型肝炎病毒基因的巢式聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分型及初步应用

目的 用改进的乙型肝炎病毒(HBV)巢式聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)的基因分型方法初探广州地区HBV基因型分布状态。方法 设计巢式PCR扩增前S基因，经限制性内切酶AvaⅡ和DpnⅡ酶切鉴别HBV A—G基因型；并对140份乙型肝炎患者血清进行基因分型，其中随机挑选3份进行克隆测序，并对20份患者血清进行巢式PCR—RFLP重复分型试验，以验证此分型技术的稳定性和特异性。同时采用PCR和巢式PCR对92份乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阴性血清进行HBV DNA阳性率检测比较。结果 基因分型与测序结果一致；基因分型重复试验符合率100％；92份HBeAg阴性血清经PCR和巢式PCR扩增HBV DNA的阳性率分别为20．7％和68．5％。140份乙型肝炎患者血清中HBV基因型以C型(94份)和B型(42份)为主，偶见A型(4份)。结论 巢式PCR—RFLP HBV基因分型方法具有良好的敏感性、特异性、稳定性，且操作简便，适用于临床和流行病学调查研究。     

两种方法检测HBV基因分型比较及基因型检出率与HBV DNA定量的关系

目的分析磁珠法与煮沸法检测乙型肝炎病毒(HBV)基因分型的优势,进一步分析基因型检出率与HBV DNA定量的关系。方法选取2013年10月至2016年7月、2017年1月至2018年1月该院感染病科就诊的1 943例慢性乙型肝炎患者作为研究对象。其中2013年10月至2016年7月采用提取HBV DNA,进一步采用荧光探针聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎基因分型。2017年1月至2018年1月采用Abbot m2000提取的HBV DNA(磁珠法),进一步采用荧光探针PCR检测乙型肝炎基因分型。比较两种检测方法的结果差异。根据基因分型结果分析基因分型的检出率与HBV DNA定量水平的关系。结果磁珠法提取的HBV基因型检出率显著提高(P0.05),但是磁珠法检测C型检出率降低,B、D型检出率更高(P0.05)。HBV基因型检出率随着HBV DNA水平的升高而升高(P0.05)。结论相对于煮沸法提取的HBV DNA,磁珠法更能够提高乙型肝炎基因分型阳性率,并且能够提高非C型以及低病毒载量的患者检出率,更值得应用于临床。     

HBV基因分型的研究进展及临床意义

HBV基因型检测无论是对HBV的基础研究、临床治疗还是预防都有着重要的意义。HBV的分型方法很多,其中实时荧光聚合酶链反应方法能够简便、灵敏、快速、准确地鉴定HBV基因型。但各种方法对不同的工作领域仍是必要的。我国是HBV感染的高流行区,研究HBV的基因型,对了解那一型毒力强,致病性大,观察筛选疫苗及母婴阻断有很重要的临床价值。现将HBV基因分型的研究进展综述如下。     

乙型肝炎病毒基因分型的研究进展

自从1988年Okamoto等首次根据组间全基因序列差异≥8%对HBV进行基因分型以来,对HBV基因分型方法学上的改进、和其所存在的地域性、民族特异性、以及它的临床意义都展开了大量研究,这对从分子水平阐明不同基因型的流行势态,和对其病因学的研究,加强对HBV的防治有重要意义.基因型反映了HBV自然感染史发生的变异特点,是病毒变异进化的结果,对其分型标准的依据是全基因序列同源性≥92%或S基因序列同源性≥96%.大量HBV序列分析工作提示S基因序列稳定,不同基因型各开放读框中S基因异质性最大,而同一基因型中的各毒株S基因异质性最小,因而S基因适于基因型分型.目前HBV基因型分型方法学有4种,可将其分为A、B、C、D、E、F、G等7种.其分型方法包括1、全基因或S基因测序法,该方法是鉴定基因型的金标准,但工作量大.2、Lindh等创立的S基因的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法,可鉴定89%的基因型,国内文献[1]报道对PCR-RFLP方法进行了改进,可鉴定95%以上的标本,但PCR-PFLP分型法所需时间较长、步骤较多,且遇到混合感染或酶切不完全,就会出现复杂带型,因此目前建立的PCR-PFLP分型方法都不能鉴定100%的标本.3、多引物PCR分型方法[2],它是在对114例HBV全序列进行充分比较分析的基础上,找出每种基因型相对于其他各种基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出6对分别针对性A-F型的诊断引物,利用其仅需一次PCR可得出分型结果,理论上能鉴定100%的标本.4、单克隆抗体酶联免疫吸附法,该方法虽然简便,但要建立一套单克隆抗体则较为困难,且难以从基因水平上对HBV进行分型.HBV的基因型分布在不同地理区域有不同的特点.     

乙型肝炎病毒的基因分型

乙型肝炎病毒(HBV)基因型是HBV基因异质性的表现之一,最早于1988年提出,至今已发现的基因型有A~H共8种。研究发现HBV基因型在不同地域和人群中的流行谱有差异,这种差异将影响HBV各种检测方法在不同地区和人群中的检测准确性。同时,HBV基因型还与乙型肝炎病情的进展、预后以及对治疗的应答有一定相关关系。因此,HBV的基因分型研究对进一步明确乙型肝炎发病机制、提高检测效率、寻找治疗对策和实现流行病学控制具有重要意义。一、HBV基因分型的历史回顾1988年,Okamoto等[1]对采自日本和印度尼西亚的3名无症状HBV携带者血清型为adw…     

构建乙型肝炎病毒基因参照品判断基因分型的探讨

目的利用乙型肝炎病毒（HBV）基因参照品判断HBV基因分型。方法自行制备HBV—S区基因参照品A、B、C、D型并测序及比较同源性，利用限制性内切酶MboI、EarI酶切参照品和样品扩增产物，从而确定样品基因型。利用该方法对克拉玛依地区272例HBV—DNA阳性血清基因分型。结果测序证实，HBV基因参照品与39例GenBank序列同源性均在96％以上。272例样品成功分型241例（88．6％）。检出B、C、D型，未检测到A型。抽检12例测序同源性大于96％。结论依据基因参照品核酸碱基片段大小判断分型，简明直观，适用于大样本的筛检及临床应用。     

昆明地区HBV DNA基因型的分布特征

目的 研究云南省昆明地区乙型肝炎病毒(HBV)的基因分型特征.方法 采用荧光定量PCR及基因型特异性引物PCR方法 ,对云南省昆明地区360例HBV感染血清进行HBV DNA定量及基因分型检测,以ELISA法检测血清乙肝标志物.结果 360例 HBV感染血清中有346例(96.11%)可以直接分型,其中196例(56.65%)为C型,91例(26.30%)为B型,37例(10.69%)为C/B混合型,21例(6.07%)为D型,A型仅1例(0.29%);比较显示,C型基因分布率显著高于其他基因型(P<0.01);C基因及C、B混合基因型患者HBV-DNA定量显著高于B基因及其他基因型患者(P<0.01或P<0.05);另除B型基因在"大三阳"模式中比例显著较低(P<0.05),HBV基因型在其他各血清模式组间的分布差异无统计学意义(P>0.05);14例标本未能直接分型(3.89%),其HBV-DNA定量平均水平为4.136×103IU/mL显著低于其他检样(P<0.05).结论 昆明地区HBV基因型的分布较为丰富,存在C型、B型、C/B混合型及D型和A型,其中以C型和B型为本区域的主要HBV基因型;当C/B混合型和C型的HBV感染时,往往伴随HBV较高水平复制,且HBV感染B基因型与HBeAg的检出呈负相关;本区域内D基因型分布率介于内地低海拔区域和拉萨高原地带之间.这些可能是本区域内HBV基因型分布的流行病学特征.未能直接分型检样的HBV-DNA定量均较低,可能说明HBV基因分型应该在一定的HBV-DNA定量水平基础上进行.     

昆明地区HBV DNA基因型的分布特征

目的 研究云南省昆明地区乙型肝炎病毒(HBV)的基因分型特征.方法 采用荧光定量PCR及基因型特异性引物PCR方法 ,对云南省昆明地区360例HBV感染血清进行HBV DNA定量及基因分型检测,以ELISA法检测血清乙肝标志物.结果 360例 HBV感染血清中有346例(96.11%)可以直接分型,其中196例(56.65%)为C型,91例(26.30%)为B型,37例(10.69%)为C/B混合型,21例(6.07%)为D型,A型仅1例(0.29%);比较显示,C型基因分布率显著高于其他基因型(P<0.01);C基因及C、B混合基因型患者HBV-DNA定量显著高于B基因及其他基因型患者(P<0.01或P<0.05);另除B型基因在"大三阳"模式中比例显著较低(P<0.05),HBV基因型在其他各血清模式组间的分布差异无统计学意义(P>0.05);14例标本未能直接分型(3.89%),其HBV-DNA定量平均水平为4.136×103IU/mL显著低于其他检样(P<0.05).结论 昆明地区HBV基因型的分布较为丰富,存在C型、B型、C/B混合型及D型和A型,其中以C型和B型为本区域的主要HBV基因型;当C/B混合型和C型的HBV感染时,往往伴随HBV较高水平复制,且HBV感染B基因型与HBeAg的检出呈负相关;本区域内D基因型分布率介于内地低海拔区域和拉萨高原地带之间.这些可能是本区域内HBV基因型分布的流行病学特征.未能直接分型检样的HBV-DNA定量均较低,可能说明HBV基因分型应该在一定的HBV-DNA定量水平基础上进行.     

昆明地区HBV DNA基因型的分布特征

目的研究云南省昆明地区乙型肝炎病毒(HBV)的基因分型特征。方法采用荧光定量PCR及基因型特异性引物PCR方法,对云南省昆明地区360例HBV感染血清进行HBV DNA定量及基因分型检测,以ELISA法检测血清乙肝标志物。结果 360例HBV感染血清中有346例(96.11%)可以直接分型,其中196例(56.65%)为C型,91例(26.30%)为B型,37例(10.69%)为C/B混合型,21例(6.07%)为D型,A型仅1例(0.29%);比较显示,C型基因分布率显著高于其他基因型(P0.01);C基因及C、B混合基因型患者HBV-DNA定量显著高于B基因及其他基因型患者(P0.01或P0.05);另除B型基因在"大三阳"模式中比例显著较低(P0.05),HBV基因型在其他各血清模式组间的分布差异无统计学意义(P0.05);14例标本未能直接分型(3.89%),其HBV-DNA定量平均水平为4.136×10~3 IU/mL显著低于其他检样(P0.05)。结论昆明地区HBV基因型的分布较为丰富,存在C型、B型、C/B混合型及D型和A型,其中以C型和B型为本区域的主要HBV基因型;当C/B混合型和C型的HBV感染时,往往伴随HBV较高水平复制,且HBV感染B基因型与HBeAg的检出呈负相关;本区域内D基因型分布率介于内地低海拔区域和拉萨高原地带之间。这些可能是本区域内HBV基因型分布的流行病学特征。未能直接分型检样的HBV-DNA定量均较低,可能说明HBV基因分型应该在一定的HBV-DNA定量水平基础上进行。     

改进的反向斑点杂交方法

目的 改进反向斑点杂交的操作方法,探索更为简便快捷的实验流程.方法 优化杂交液Ⅱ的组分,使用HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型三个试剂盒验证改进的实验方法.结果 HPV基因分型、β-地中海贫血基因突变和HBV基因分型试剂盒的实验结果证实,使用优化后的杂交液Ⅱ,链霉亲和素过氧化物酶在杂交温度能够有效地...     

乙型肝炎病毒基因分型的研究进展

自1988年Okamoto等[1]首次根据组间全基因序列差异≥8%对HBV进行基因分型以来,对从分子水平阐明不同HBV基因型的流行势态和病因研究不断深入。 1 HBV基因型分型方法 目前HBV基因型分型方法学有4种,可将其分为A、B、C、D、E、F、G等7种。其分型法包括：（1）全基因或S基因测序法,该方法是鉴定基因型的金标准,但工作量大。（2）Lindh等[2]创立的S基因的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法,可鉴定89%的基因型,但需时间较长、步骤较多,且遇到混合感染或酶切不完全,就会出现复杂带型,不能鉴定100%的标本。（3）多引物PCR分型方法[3],找出每种基因型相对于其他各基因型的独特序列,并根据这些独特序列设计出6对分别针对A-F型的引物,利用其仅需一次PCR可得出分型结果,理论上能鉴定100%的标本。（4）单克隆抗体酶联免疫吸附法[4],该方法虽然简便,但要建立一套单克隆抗体则较为困难,且难以从基因水平上对HBV进行分型。     

HBsAg无症状携带者乙型肝炎病毒基因分型研究

[目的]选择健康体检人员为研究对象，探索乙肝病毒基因分型方法及其特点。[方法]以健康体检人员为目标人群，选取HBsAg阳性者，对HBVDNA载量大于500拷贝／ml者，采用实时定量PCR解链曲线分析法进行HBV基因分型，探讨了HBV不同感染模式、HBVDNA定量对HBV分型的影响，重点分析了出生地与HBV分型的关系。[结果]调查期间目标人群中共检出HBsAg阳性者433例，符合HBV基因分型的标本190例，分型检测率为43．88％，在性别和年龄别组间分布一致，分型样本的代表性良好。分型结果表明，B型、C型和B、C混合型分别占64．2％、27．4％和8．4％，未检出其它型别。HBV基因型别在性别和年龄组间的差异均无统计学意义，但出生地为广东、湖北、湖南、江西和四川5省者，B型所占比例（66．6％～78．3％）均高于C型（14．3％～24．4％）。HBVDNA载量较高组、HBsAg，HBeAg，抗-HBc同时阳性组中，C型所占的比例均较高；C型感染者的HBVDNA载量的均数大于B型。[结论]HBsAg无症状携带者中约半数可进行HBV基因分型，基因型别与出生地和HBV感染状况有关。     

乙型肝炎病毒荧光PCR基因分型方法的建立和应用

[目的]建立一种在临床上准确、快速、简便地对乙型肝炎病毒进行基因分型（BCD三型）的方法。[方法]大量分析已分型的HBV基因组序列，寻找出HBV各基因型的型特异性碱基的分布规律，设计型特异性的引物和探针，利用已知全序列HBV建立荧光PCR的基因分型方法。并与PCR-RFLP及S基因测序等分型方法作比较。[结果]荧光PCR方法对已知基因组序列的HBV分型结果与基因组分析完全一致，利用大量随机临床标本摸索的最佳反应条件为94℃，1min；94℃，10s，60℃，30s，40个循环。与PCR-RFLP相比，分型结果一致性在84．0％；与S基因测序分型相比，一致性为96．2％。[结论]利用荧光PCR能灵敏、快速、准确地进行乙型肝炎病毒基因分型，方便临床应用和流行病学调查。     

昆明、洛阳两地献血者人群HBV携带者的HBV基因型分布

目的调查昆明、洛阳两地献血者人群HBV携带者HBV基因型的分布情况。方法采用多对型特异性引物,以套式PCR的方法对两地367份献血者HBsAg筛查阳性样本分型,根据HBV前s1基因和s基因区域内的保守序列设计出10条引物(2条外引物、8条内引物),并将其中8条内引物分为Ⅰ、Ⅱ组,分别扩增A、B、C和D、E、F型HBV基因片段;将第2轮PCR产物做琼脂糖电泳,根据PCR产物片断大小判定基因型;分型结果以s基因直接测序法验证。结果昆明279份样本中成功分型214例,分型成功率76.7%,其中B型69例(32.2%),C型103例(48.1%),B、C混合型41例(19.2%);D型1例(0.5%);洛阳献血者的88份样本中成功分型72例,分型成功率81.8%,其中B型10例(13.9%),C型46例(63.9%),B、C混合型16例(22.2%)。经s基因测序法验证,该分型方法准确可靠。结论昆明、洛阳两地献血者人群中HBV携带者HBV基因型均以C型为主,并有一定比例的B型和B、C混合型,仅在昆明献血者中发现1例D型,未见A、E、F型。     

济宁地区HBV基因型分布及临床特点

目的了解济宁地区乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus,HBV）基因型分布情况,研究不同HBV基因型感染者的临床特点。方法随机选择济宁地区HBV感染者共142例,其中无症状携带者（ASC）39例,慢性乙型肝炎（CHB）51例,乙型肝炎肝硬化（HIE）27例,原发性肝细胞癌（HCC）25例。应用实时荧光PCR试剂盒进行血清HBV基因分型测定。结果对HBV—DNA阳性的137例标拳进行HBV基因分型,其中B基因型35例（25．55％）,C基因型98例（71．53％）,B＋C混合基因型4例（2.92％）,未检出非B非C型。ASC感染者中B型基因占多数,而其它三种感染者中以C型基因居多。结论济宁地区HBV基因型主要以C型为主,其次为B型。HBV基因C型与基因B型比较有显著不同的临床特点,在ASC感染者中基因C型的比例明显低于CHB、加Z及HCC患者。     

济南地区HBV基因型分布及临床意义

目的 了解济南地区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）基因型分布情况,探讨HBV基因型与临床的相关性.方法 随机选择济南地区HBV感染者共170例,其中无症状携带者（ASC）49例,慢性乙型肝炎（CHB）66例,乙型肝炎肝硬化（HLC）32例,原发性肝细胞癌（HCC）23例.应用实时荧光PCR试剂盒进行血清HBV基因分型测定.结果 对HBV-DNA阳性的158例标本进行HBV基因分型,其中B基因型39例（24.68%）,C基因型114例（72.15%）,B＋C混合基因型 5例（3.16%）,未检出非B非C型.ASC感染者中B型基因占多数,而其它三种感染者中以C型基因居多.结论 济南地区HBV基因型主要以C型为主,其次为B型.C基因型HBV感染者更易发展成肝硬化、原发性肝癌.     

乙型肝炎病毒基因分型及其临床意义

近年来,随着分子生物学技术的发展和成熟,对乙型肝炎病毒（HBV）的研究逐步深入,进展迅速.现就HBV的基因分型及其意义综述如下。