四氯化碳中毒大鼠肝脏Ca~(2 )-ATP酶和磷酸化酶a活性的研究

本实验采用雄性S.D.大鼠,经日一次灌注2.2ml/kg 四氯化碳,于染毒后12、24、48小时测定肝微粒体Ca~2 -ATP 酶和肝细胞液磷酸化酶a 活性变化。结果发现,染毒后大鼠肝微粒体Ca~2 -ATP 酶活性显著降低,以染毒后24小时为甚;肝细胞液磷酸化酶a 活性显著增高,以染毒后24小时为最高。说明四氯化碳致肝损伤时,肝内质网隔离钙的能力降低,胞液中钙浓度升高。本实验对于阐明四氯化碳中毒性肝病发病机理有一定的意义。     

大鼠维生素E营养状况与TNT急性染毒后肝脏巯基和钙稳态的关系

分别给摄食普通饲料和维生素E缺乏饲料40天的两组雄性Wistar大鼠用TNT(1000mg/kg)花生油溶液灌胃染毒,观察8小时和16小时后肝匀浆GSH、磷酸化酶a、线粒体和微粒体蛋白巯基及~(45)Ca摄取的变化。结果表明,TNT急性染毒对肝巯基和钙稳态的影响取决于维生素E的营养状况。食用普通饲料的动物在染毒后8小时除线粒体~(45)Ca摄取和肝匀浆GSH有明显下降外,其余指标均只有轻微变化,染毒后16小时各项指标均恢复至接近对照组水平。但在食用维生素E缺乏饲料的动物,上述变化更为显著,且随着染毒时间的延长至16小时,不仅未见恢复趋势,而且继续加剧。     

汞对大鼠肾皮质线粒体ATP酶和膜电位的影响

目的 通过线粒体孵育液染汞并用N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预研究汞对大鼠肾皮质线粒体损伤的影响.方法 提取Wistar大鼠肾皮质线粒体液并分设为阴性对照组,5、50、500 μmol/L氯化汞(HgCl2)直接染毒组及线粒体液NAC预处理后50 μmol/L HgCl2染毒组5组.各组于培养箱内37℃孵育1 h后,测定Na+-K+-三磷酸腺苷(ATP)酶活力、Ca2+-ATP酶活力、线粒体膜电位及孵育液中细胞色素C含量.结果 与阴性对照组比较,50、500 μmol/L HgCl2染毒组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力及线粒体膜电位显著降低(P<0.05),细胞色素C含量显著升高(P<0.05);与50 μmol/L HgCl2染毒组比较,NAC预处理后Na+-K+-ATP酶活力及线粒体膜电位显著升高,细胞色素C含量显著降低(P<0.05).结论 汞可以剂量依赖性地诱导大鼠肾皮质线粒体损伤,NAC预处理在某种程度上能有效地预防汞所致大鼠肾皮质线粒体损伤.     

交通相关细颗粒物对人外周血淋巴细胞免疫毒性和钙信号机制研究

目的探讨交通相关的细颗粒物(PM2.5)对人外周血淋巴细胞的免疫毒性,从钙信号途径揭示免疫抑制机制。方法采用0、5、20、80、320、800μg/ml PM2.5染毒T淋巴细胞24、48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定T淋巴细胞的增殖功能。采用0、50、100、200μg/ml PM2.5染毒T淋巴细胞244、8 h,采用流式细胞仪测定T淋巴细胞的免疫功能(CD3+/CD4+/CD8+亚群和CD4+/CD8+)。采用荧光分光光度计测定T淋巴细胞的钙离子浓度([Ca2+]i)。用试剂盒测定T淋巴细胞的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力。结果 320、800μg/ml PM2.5可抑制细胞增殖功能,且与对照组比较有统计学意义(P0.05);50、200μg/ml PM2.5染毒细胞24 h,染毒组T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+百分含量、CD4+/CD8+比值)与对照组比较变化不明显;50、100、200μg/ml PM2.5染毒细胞48 h后,染毒组T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+百分含量、CD4+/CD8+比值)均低于对照组,且各剂量组CD3+和200μg/ml CD4+百分含量与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。200μg/mlPM2.5染毒细胞1、3、61、2、24 h后[,Ca2+]i均高于对照组,除24 h外,与对照比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。在3 h时胞内[Ca2+]i最高,随时间延长[,Ca2+]i逐渐降低。100、200μg/ml PM2.5染毒细胞3 h时,[Ca2+]i高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);随染毒浓度的升高,Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力有降低趋势,且Na+-K+-ATP酶活力在200μg/mlPM2.5组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论交通相关的PM2.5可引起人外周血淋巴细胞免疫抑制,其可能与钙稳态失衡有关。     

邻苯二甲酸二甲酯对小鼠肝脏Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶的影响

目的探讨邻苯二甲酸二甲酯(DMP)对小鼠肝脏Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶活力的影响。方法将80只雌雄各半的健康清洁级C57BL/6J小鼠随机分为对照(纯玉米油)组和0.5、1.0、2.0 g/kg DMP染毒组,每组20只,雌雄各半。采用灌胃的方式进行染毒,灌胃体积为10 ml/kg,每天灌胃1次。分别在灌胃20、40 d后,每组选择10只小鼠(雌雄各半)测定肝脏Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶的活力。结果灌胃20 d时,与对照组比较,各剂量DMP染毒组雄性小鼠肝脏的Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活力以及1.0、2.0 g/kg DMP染毒组雄性小鼠肝脏的Na~+-K~+-ATP酶活力均较低,差异有统计学意义(P0.05);0.5、2.0 g/kg DMP染毒组雌性小鼠肝脏的Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活力以及2.0 g/kg DMP染毒组雌性小鼠肝脏的Na~+-K~+-ATP酶活力均较高,差异有统计学意义(P0.05)。灌胃40 d时,与对照组比较,各剂量DMP染毒组雄性小鼠肝脏Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活力无明显变化,0.5 g/kg DMP染毒组雄性小鼠肝脏的Na~+-K~+-ATP酶活力较高,差异有统计学意义(P0.05);各剂量DMP染毒组雌性小鼠肝脏的Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶活力均较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 DMP经口染毒对小鼠肝脏的Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶活力具有干扰作用,雌性小鼠比雄性小鼠更敏感。     

中药防治硫酸镍对Ca2+-ATP酶及钙调素活性抑制的实验研究

目的：扶正解毒汤（FJD）防治硫酸镍（NiSO4）对大鼠肝线粒体Ca^2 -ATP酶及钙调素（CaM）活性的抑制作用。方法：Wistar大鼠NiSO4腹腔染毒,FJD灌胃防治,14d后测定线粒体Ca^2 -ATP酶及CaM的活性进行评价。结果：NiSO4致肝脏Ca^2 -ATP酶及CaM活性降低,FJD各防治组均有明显恢复。结论：FJD具防治NiSO4致大鼠肝Ca^2 -ATP酶及CaM活性抑制的作用。     

除虫菊酯类农药对大鼠肝线粒体、微粒体~(45)Ca摄取的影响

为探讨除虫菊酯类农药对钙离子转运的影响，采用体外放射性同位素４５Ｃａ测定技术，观察了溴氰菊酯、氯氰菊酯对雄性ＳＤ大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ主动摄取的影响，以及对线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力的影响。结果表明：溴氰菊酯、氯氰菊酯均能明显降低大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ主动摄取的能力，抑制肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力，与对照组相比，差异均有显著或非常显著意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），且随剂量增加，线粒体、微粒体４５Ｃａ摄取率及Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力有显著下降的趋势。提示：溴氰菊酯、氯氰菊酯对肝脏钙稳态影响的作用部位主要是线粒体和内质网钙隔离和调节系统，使其钙封闭作用失调、钙离子转运障碍、细胞正常生理生化功能紊乱。     

2,3,7,8-四氯二苯并二噁英急性染毒对小鼠脑组织中Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力的影响

目的 研究2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(TCDD)对小鼠脑组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力的影响.方法 将48只雌雄各半的昆明种小鼠按性别随机分为高、中、低剂量TCDD染毒组和对照组,每组雌雄各6只,TCDD染毒剂量分别为100、10、1 μg/kg,用腹腔注射的方式一次染毒,48 h后,测定脑组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ArrP酶活力.结果 雌性低剂量、中剂量染毒组和雄性高剂量染毒组小鼠脑组织中Na+-K+-ATP酶活力[分别为(17.35±3.07)、(16.13±2.42)、(20.25±2.72)μmolPi·mg pro-1·h-1]明显升高,与对照组[分别为(13.60±1.72)、(15.97±1.90) μmol Pi·mg pro-1·h-1相比,差异均有统计学意义(P<0.05).各染毒组小鼠Ca2+-ATP酶活力有增加的趋势,但与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 TCDD急性染毒能提高小鼠脑组织中Na+-K+-ATP酶的活力,且存在性别差异.     

N—乙酰半胱氨酸对二甲基甲酰胺所致急性肝损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对二甲基甲酰胺(DMF)所致急性肝损害的保护作用。方法 给小鼠腹腔注射一次1800mg/kg DMF后用NAC灌胃。测定血清山梨醇脱氢酶(SDH)、丙氨酰氨基转移酶(ALT)、甘胆酸(CG)、肝脏谷胱甘肽(GSH)、Na~ K~ -ATP酶、Ca~(2 )-ATP酶,观察肝脏病理改变。结果 与单纯染毒组比较,染毒后连续口服NAC组血清SDH、ALT、CG明显降低(P<0.05),肝脏GSH含量升高,Na~ K~ -ATP酶、Ca~(2 )-ATP酶活性增高(P<0.05),肝脏病理改变减轻。结论 NAC对DMF所致急性肝损伤有一定保护作用。     

丙烯酰胺亚急性中毒大鼠脑微粒体~(45)Ca~(2+)摄取和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的变化

按10和50mg/kg体重给大鼠腹腔注射丙烯酰胺(Acrylamide),1次/日,连续12天。结果表明,脑微粒体Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性高剂量组明显高于对照组(P<0.01),而对~(45)Ca~(2+)的摄取能力高、低两个剂量组却明显降低(P<0.05和<0.01),这可能与丙烯酰胺中毒引起脑微粒体结构发生改变以致使对细胞内钙的隔离作用失效有关。     

二甲基甲酰胺对肝脏钙稳态影响的实验研究

采用二甲基甲酰胺短期染毒实验方法观察了它对肝脏钙稳态的影响。结果表明，二甲基甲酰胺可明显降低线粒体、微粒体对钙离子的转运能力，抑制Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活力，使胞浆中钙离子浓度升高。病理及超微结构观察示它可致肝细胞损伤甚至坏死，其损伤的主要部位在线粒体及内质网。     

一次性大剂量乙醇摄入对小鼠肝脏损伤作用的研究

目的 研究一次性大剂量乙醇摄入对小鼠肝脏功能的损害作用.方法 将健康SPF级雄性昆明小鼠24只随机分为对照组(蒸馏水)和乙醇(50%,V/V)组,每组12只.采用一次性灌胃方式进行染毒,染毒剂量为12ml/kg.染毒16h后,称重,观察并记录各组小鼠的一般情况.迅速取出肝脏,称重,计算肝脏系数.测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、葡萄糖(Glu)、总蛋白(TP)含量,通过检测肝脏中甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)的含量和病理学观察来反映肝脏中脂肪的蓄积,通过测定钙离子诱导的线粒体渗透性转变(MPT)来检测线粒体的功能,通过测定肝组织和线粒体中的丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量反映肝脏的脂质过氧化水平,测定肝微粒体细胞色素P450(CYP)2E1、1A2和3A的活性和蛋白表达量.结果 一次性大剂量乙醇摄入后,小鼠逐渐出现反应迟钝、步态不稳、翻正反射消失等醉酒症状;约3 h后,翻正反射恢复.与对照组相比,乙醇组小鼠肝脏系数较高,血清ALT、AST活力较高,Glu和TP含量较低,肝脏中TG和FFA含量较高,肝组织匀浆和肝细胞线粒体中MDA的含量较高,肝组织匀浆中GSH含量较低,肝脏微粒体CYP2E1活性和蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);而CYP1A2和3A未见明显改变(P＞0.05).乙醇组小鼠线粒体加入Ca~(2+)后A值高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).乙醇组小鼠肝脏可见大量的肝细胞发生脂肪变性.结论 一次性大剂量乙醇摄入可导致小鼠肝脏脂质代谢障碍、线粒体功能紊乱、肝组织和线粒体中脂质过氧化反应的增强和CYP2E1的激活.

Abstract：

Objective To investigate the liver damage caused by single high-dose intake of ethanol in mice. Methods Twenty-four male Kunming mice were randomized into 2 groups. The mice in ethanol group were treated with single dose of ethanol (50%, V/V, 12 ml/kg),while the control mice received distilled water. The serum biochemical indices were determined 16 h after ethanol exposure. The hepatic triglyceride (TG) and free fatty acid (FFA) levels and the histological changes were examined to evaluate the fat accumulation, while the Ca~(2+)-induced mitochondrial permeability transition (MPT) was detected for the mitochondrial function assay. The liver and mitochondrial malondialdehyde (MDA) and glutathione (CSH) levels were determined to assess the lipid peroxidation level. The activities and the protein expression of the CYP2E1,1A2,3A were determined. Results Slow response,ataxia and righting reflex disappearance were gradually emerged,which disappeared at about 3 h later. Compared with the control group,the liver index,the serum ALT and AST activities,the hepatic TG,FFA,and MDA levels,and the activity and protein level of the CYP2E1 significantly increased,while the liver GSH level significantly decreased (P<0.05 or P<0.01). The protein expression and activities of CYP1A2 and 3A were not significantly altered (P>0.05). In addition, A_(540) of ethanol group was higher than that of control group (P<0.05 or P<0.01). Furthermore, severe hepatosteatosis was observed by histological examination. Conclusion Single high dose of ethanol consumption can induce liver fat accumulation,mitochondrial dysfunction,enhancement of lipid peroxidition in liver and mitochondria, and the activation of the CYP2E1.     

氯氰菊酯对大鼠肝线粒体,微粒体钙离子转运的影响

采用放射性同位素４５Ｃａ体外测定技术，观察了除虫菊酯类农药氯氰菊酯对大鼠肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋转运的影响。结果表明，氯氰菊酯能明显降低大鼠肝线粒体、微粒体对４５Ｃａ主动摄取的能力，且具有明显的剂量一效应关系。同时，它还能显著增加４５Ｃａ从线粒体和微粒体内被动流出，也具有明显的剂量一效应关系和时间一效应关系。     

溴氰菊酯对大鼠肝线粒体、微粒体钙离子转运的影响

采用体外放射性同位素测定技术，观察了溴氰菊酯对雄性大鼠肝线粒体、微粒体钙离子转运的影响，结果表明溴氰菊酯能明显降低大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ主动摄取的能力，与对照组相比均具有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１），且存在明显的剂量效应关系。而溴氰菊酯对大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ被动释放的动力学表明，它可显著增加４５Ｃａ从线粒体、微粒体内的被动流出，与对照组相比差异均显著（Ｐ＜０．０５或ｐ＜０．０１），且有明显的剂量效应关系。另外，溴氰菊酯还能明显抑制大鼠肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力，与对照组相比差异均显著（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），也存在明显的剂量效应关系。     

高锌摄入对正常小鼠脏器抗氧化功能及一氧化氮含量的影响

本研究结果表明，高锌可使小鼠心、脾、肾、胰腺、眼球及肝线粒体脂质过氧化产物ＭＤＡ含量明显升高，谷胱甘肽过氧化物酶活性明显下降，对脑、肝微粒体及肝胞浆无显著影响。对超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性的影响因脏器不同而不同。高锌可使小鼠心脏上述两种抗氧化酶的活性升高，对其它脏器酶活性或下降或无明显影响。提示高锌对诸多脏器抗氧化功能的危害。此外，高锌可使小鼠心、肾一氧化氮含量显著下降，而使脑、脾、胰、肝脏等脏器一氧化氮含量明显升高，提示一氧化氮可能参与了高锌所致某些生理功能障碍的发生、发展过程。     

丹参酮ⅡA对异烟肼和利福平小鼠肝毒性保护作用的实验研究

目的 观察丹参酮ⅡA对异烟肼和利福平肝毒性的保护作用及其机制探讨.方法 分别测定肝损害组和丹参酮ⅡA大、中、小剂量组小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶( ALT)、肝指数、肝匀浆丙二醛(MDA)含量、肝微粒体细胞色素P450和线粒体Ca2+-ATP酶活性,并与对照组比较.结果 丹参酮ⅡA可对抗异烟肼和利福平引起的MDA、ALT...     

溴氰菊酯对大鼠肝脏钙稳态影响的体外实验研究

采用体外测定方法，研究了溴氰菊酯对雄性ＳＤ大鼠肝线粒体、微粒体钙稳态的影响。结果表明，溴氰菊酯能明显抑制大鼠肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力；显著降低大鼠肝线粒体、微粒体对４５Ｃａ主动摄取的能力；并显著增加４５Ｃａ从线粒体、微粒体内的被动流出，三者与对照组相比差异均有显著性意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），都存在明显的剂量、效应关系．     

黄磷中毒性肝损害的机理探讨

本研究表明,肝微粒体混合功能氧化酶参与了黄磷在体内的活化代谢,促进了肝毒作用。肝谷胱甘肽及其酶系参与了黄磷的解毒代谢,当其耗损或失代偿时,可为脂质过氧化或钙泵障碍提供发生条件,所得数据较充分证明:脂质过氧化是黄磷中毒性肝损害十分重要的机理,但不能认为是唯一的机理,它与钙泵障碍的相互关系,值得进一步研究。电镜及组化的研究发现,线粒体和粗面内质网是黄磷的靶细胞器,其功能和结构改变,是各种病理改变的基础。     

黄磷与四氯化碳亚急性肝损害的机理

本文研究黄磷与CCl_4引起亚急性肝损害时,肝脏发生脂质过氧化的情况、部位及其与肝损害之间的关系。黄磷与CCl_4对大鼠亚急性中毒时,肝MDA 含量显著升高,Schiff 碱荧光强度明显增强;肝线粒体与微粒体MDA含量显著升高,且各自标志酶SDHase 活性与G-6-Pase 活性均显著降低;肝损害指标:肝TG 含量升高对两种毒物均敏感;而肝GSH 含量降低与血清SGPT 酶活性升高对两种毒物的敏感性有一定的差异。