离体兔眼试验在检测农药眼刺激性方面的初步研究

目的探讨离体兔眼（IRE）试验作为兔眼刺激性试验（Draize test）检测农药眼刺激性的替代方法的适用性。方法选取29种市售农药进行离体兔眼试验,并同步按照GB15670—1995《农药登记毒理学试验方法》进行兔眼刺激性试验,对试验结果进行相关性和一致性分析。结果 IRE试验检测农药眼刺激性分级结果与Draize试验分级结果的差别无统计学意义（McNemar-BowkerW=3.33,P〉0.05）;Gamma=0.98（P〈0.01）,Kappa=0.68（P〈0.01）,显示2种试验方法之间的一致性较好;相关系数为0.86（P〈0.01）,显示两者之间的相关性较好。结论 IRE试验检测农药眼刺激性的分级结果与Draize试验分级结果的相关性和一致性较好I,RE试验可作为筛选无/轻刺激性农药的替代方法,是一种比较有潜力的眼刺激替代试验方法。     

红细胞溶血实验替代兔眼刺激性实验检测农药眼刺激性初步研究

目的 探讨红细胞溶血实验(Red blood cell test,PBC)检测农药眼刺激性的适用分级标准和作为兔眼刺激性实验(Draize test)替代方法的适用性.方法 选取29种市售农药进行RBC实验,并同步进行Draize实验.根据2种分级标准,将RBC实验结果与Draize实验进行相关性和一致性分析.结果 按化妆品原料分级标准,区分无/轻刺激性和中度及以上眼刺激性农药的结果为:McNemar-Bowker W=9.35(P=0.22);Kappa=0.55(P=0.002);Spearman R=0.58(P=0.001);按化妆品产品分级标准,区分无/微刺激性和轻度及以上眼刺激性农药的结果为:McNemar-Bowker W=10.40(P-0.02);Kappa=0.54(P=0.001);Spearman R=0.61(P＜0.001).结论 RBC实验可参照化妆品原料分级标准检测农药眼刺激性;尚不能完全替代Draizc实验,但可作为筛检农药眼刺激性的替代方法纳入到农药眼刺激性检测策略中.     

农药常用有机溶剂的眼刺激性实验研究

目的 探讨农药常用有机溶剂对兔眼刺激性.方法 分别取受试物0.1 ml滴眼,于给药后1、24、48、72 h和4、7、14、21 d观察兔眼部刺激症状,据GB 15670-1995<农药登记毒理学试验方法>对眼损伤进行评分及分级.结果 有机溶剂对兔眼有刺激性,二甲苯、醋酸丁酯为无刺激性,苯、甲苯为轻度刺激性,乙醇、乙酸乙酯为轻度至中度刺激性,甲醇、异丙醇、正丁醇、丙酮为中度刺激性.结论 多数农药常用有机溶剂对兔眼有不同程度刺激性.     

化妆品原料眼刺激性替代方法分层筛选模型的建立

目的建立化妆品原料眼刺激性的体外替代方法分层筛选模型。方法应用鸡胚绒毛膜尿囊膜试验(HET-CAM)、鸡胚绒毛膜尿囊膜-台盼蓝染色试验(CAM-TBS)、中性红摄取试验(NRU)、红细胞溶血试验(RBCH)、荧光素漏出试验(FLT)及离体兔眼试验(IRET)6种体外替代方法对30种化妆品原料的眼刺激性进行检测,将检测结果与Draize试验结果进行比对(指标为灵敏度、特异度和ROC曲线下面积),根据6种替代方法分别在区分有无刺激性、有无腐蚀性两个级别的效能设计、建立分层筛选模型,并对模型进行评价。结果 6种方法区分有无刺激性的效能为NRUHET-CAMIRETCAM-TBSRBCH,区分有无腐蚀性的效能为IRETFLTRBCHNRUHET-CAMCAM-TBS。本研究建立并评价的4种模型中,以NRU(第一层)和FLT(第二层)组成的分层筛选模型具有最好的检测效能[Mc Nemar-Bowker检验,W=3.0(P=0.392),Gamma=0.85(P0.001),Kappa=0.76(P0.001),分级一致率为83.3%]。结论鉴于由NRU和FLT组成的分层筛选模型与Draize试验分级结果比较具有很高的相关性和分级一致性,检测效能明显优于单一替代方法,因此更适合检测化妆品原料的眼刺激性。     

眼刺激试验的替代方法及应用策略研究进展

兔的眼刺激性试验(draize test)是毒理学安全性评价的常规测试方法之一,由于其存在评分系统主观、实验室间变异性、动物外推至人的种属差异等缺点,加之近年来随着“3Rs”原则的广泛兴起,许多国家开展了有关兔眼刺激性试验的替代性研究与评价。但是目前尚没有任何一种方法可以作为替代动物眼刺激性试验的充分试验依据,为了减少试验中使用动物的数量,通过若干个离体试验的同步联合或逐步检测方法的应用有望增强替代方法检测的有效性。     

化学杀虫剂的眼刺激性试验研究

目的研究分析有机磷等杀虫剂的急性眼刺激性。方法分别取受试物0．1ml滴眼,于给药后1、24、48、72h和4、7、14、21d观察兔眼部刺激症状,依据GB15670—1995（农药登记毒理学试验方法》对眼损伤进行评分及分级。结果232个不同类型杀虫剂,除沙蚕毒素类为无刺激性外,70％以上杀虫剂样品对兔眼有不同程度刺激性;其中53％样品为中度以上刺激性,26％样品引起的眼刺激性症状观察至21d仍未恢复。结论多数化学杀虫剂对兔眼有不同程度刺激性,杀虫剂为乳油时刺激性最重,为水剂、可湿性粉剂、悬浮剂时刺激性轻。     

不同类型化妆品的急性眼刺激损害特点

目的 研究分析发用类等5类化妆品的急性眼刺激卫生安全状况.方法 于2005-2007年采用急性眼刺激性试验对发用类、眼霜类、面膜类、肤用清洁类、彩妆类共计846种化妆品样品进行测试.结果 受试各类化妆品显示出不同程度的眼刺激性.发用类(47.5%)、肤用清洁类(20%)中检出一定比例具有轻刺激性及以上刺激性的样品;除发用类中有20种样品(均为染发剂)眼损伤持续21 d以上外,其余化妆品引起的眼损伤能够在观察期限内恢复.结论 本次测试的5类化妆品眼刺激性损害特点不尽相同,发用类、肤用清洁类急性眼刺激作用较明显.     

眼刺激试验离体替代方法研究进展

因眼刺激试验评分系统主观性较强。为此相继建立了一系列以离体眼、角膜、鸡胚绒毛膜尿囊膜及培养组织细胞等为材料的离体实验方法替代眼刺激试验 ,并对这些方法进行了深入的评估分析。本文就近年眼刺激试验离体替代方法和评价准则等研究进展进行了综述     

鸡胚尿囊绒膜试验检测化妆品的刺激性

目的研究鸡胚尿囊绒膜-苔盼蓝吸收(CAM-TB)试验作为体内眼刺激试验(Draize test)的替代方法检测化妆品产品时眼刺激性的可行性.方法用该方法对17种化妆品的刺激性进行检测,与Draize test的结果进行比较,作相关性分析.结果 CAM-TB与Draize test的相关系数为0.937?5.结论 CAM-TB试验可作为Draize test眼刺激试验的一种替代方法,用于评价化妆品对眼刺激性.     

化妆品及原料眼刺激性STE法评价

目的探讨兔角膜上皮细胞体外短时暴露试验方法(STE)用于化妆品原料及化妆品产品动物眼刺激试验替代的可行性及其适用范围。方法选择经济合作与发展组织(OECD)数据库中能涵盖无刺激性到重度眼刺激性的18种代表性化学物质以及20种市售化妆品产品,同时进行STE试验和兔眼刺激试验,通过Kappa分析比较2种试验方法结果的一致性。结果对于化妆品原料,经Kappa一致性检验,k=0.826,2种试验结果几乎完全一致(0.81～1.00)。对于化妆品产品,经Kappa一致性检验,k=0.370,2种方法分级结果一致性一般(0.21～0.40)。对于清洁类产品,经Kappa一致性检验,k=–0.333,2种方法分级结果一致性极低(0.20),对于护肤类产品,k=0.796,2种方法的分级结果有高度的一致性(0.61～0.80)。结论 STE试验适合于预测化妆品原料眼刺激性的分级标识。对于化妆品产品来说,面膜、眼霜和护发素等护肤类产品,预测效果好;清洁类产品和染发剂,假阳性率高,不太适用。     

农药眼刺激强度影响因素初步探讨

目的 探讨农药眼刺激强度的影响因素.方法 选择阿维菌素、氟氯氰菊酯和啶虫脒等10种农药活性成分,乳油、微乳剂和水乳剂等12种剂型,共61个农药制剂样品进行眼刺激试验,将其眼刺激强度和损伤类型分类,比较农药活性成分、浓度和剂型对眼刺激强度与损伤类型的影响,比较不同剂型间角膜损伤率的差异.结果 阿维菌素乳油、吡虫啉悬浮剂和代森锰锌可湿性粉剂的浓度与眼刺激强度间未见明确的相关性.4种不同剂型的高效氯氰菊酯制剂的眼刺激强弱顺序大致为乳油＞水乳剂、微乳剂＞悬浮剂.乳油样品的角膜损伤率为60.0％(6/10),非乳油样品的角膜损伤率约为7.3 ％(3/41),差异有统计学意义(x2=1 1.942,P＜0.05).结论 本研究纳入的样品中,剂型对眼刺激强度的影响最大,其中尤以乳油制剂的眼刺激性最强.     

眼刺激试验方法标准化的探讨——一种新眼液的兔眼刺激试验

采用Draize法结合摄相及组织学检查,对治疗用0.4%新眼液进行兔眼刺激试验。以改进的急性眼刺激试验方法对不同浓度的滴眼溶液作眼刺激毒性评价。对各种影响因素进行了研讨。本结果为眼刺激试验方法标准化提供了科学依据。提出筛选不同浓度眼用药物配方和检查错误配方的新方法。     

溶血试验作为眼刺激试验替代方法的研究

目的：使用溶血试验作为体内眼刺激试验（Draize test)的一种替代方法。方法：用该方法对14种化学物的眼刺激性进行检测，得到指标HC50值，与Draize test两种评分标准，即最大平均值（MAS）和24h作用值的结果进行相关性比较。结果：LogHC50与MAS和24h作用值的相关系数分别是0．955和0．944，MAS与结膜评分相关显著。结论：溶血试验可用于替代Draize眼刺激试验。     

化妆品的皮肤和眼刺激性试验结果比较分析

目的:了解具有刺激性化妆品的类型分布特点,比较皮肤和眼刺激性试验的敏感性,并分析这两项试验结果的相关性。方法:应用动物试验对140份化妆品样品的皮肤和眼刺激性进行检验,比较和分析试验结果。结果:在140份样品中,对皮肤具有轻刺激性和中刺激性的样品分别占10.7%和5.7%;对眼有轻刺激性、刺激性和腐蚀性的样品分别占11.4%、4.3%和2.9%。对皮肤和眼刺激性最强的化妆品类型是洗发类,其次是沐浴类,再次是护发类、面膜类和洗面类,护肤类刺激性最弱。眼刺激性试验比皮肤刺激性试验敏感性高(Z=-6.67,P0.01),两种试验结果之间存在较弱的正相关性(r=0.414)。结论:洗发类是对皮肤和眼具有较强刺激性的化妆品类型,一般眼刺激性试验比皮肤刺激性试验敏感性高,两项试验的结果之间存在较弱的正相关性。     

淋洗类化妆品对家兔眼和皮肤刺激性检测

目的为评价淋洗类化妆品的安全性,对2007—2013年期间收集的进口淋洗类化妆品样品进行皮肤和眼刺激性测试。方法按照《化妆品卫生规范》(2007年版)中描述的皮肤刺激试验和眼刺激试验方法对190个淋洗类化妆品样品进行检测。结果 190个测试的皮肤刺激试验样品中,刺激反应强度属于无刺激性和轻刺激性的各占50%,在所有样品中均未发现刺激强度属于中刺激性或强刺激性的。在149个眼刺激试验测试样品中,无刺激性的样品约占27.5%;微刺激和轻刺激的样品分别占37.6%和30.9%。由此可见,轻刺激性及轻刺激性以下样品占绝大多数,约占测试样品总数的96.0%。结论多数测试的样品中皮肤和眼刺激性较小,符合使用安全要求。     

眼刺激性／腐蚀性试验及替代试验

眼刺激性／腐蚀性试验是毒理学安全性评价中常用的试验方法。近年来基于动物福利及科学技术进步的原因替代实验逐步受到重视。本文从传统兔眼刺激试验到新发展的替代方法的原理、优缺点等方面进行了简要的综述。比较了国内外的研究与实验标准现状，指出了当前研究工作中存在的问题和发展前景。     

10％联苯菊酯水乳剂的急性毒性研究

目的研究10%联苯菊酯水乳剂的急性毒性,为其毒理安全性评价和农药的登记提供依据。方法按《农药登记毒理学试验方法(》GB15670-1995)及《农药登记资料规定(农业部2007)》进行急性经口、经皮、吸入毒性、皮肤及眼刺激试验、皮肤致敏试验。结果 10%联苯菊酯水乳剂对雌雄性SD的大鼠急性经口LD50雌、雄性均为271mg/kg b.wt.属中等毒类;对雌雄性SD大鼠急性经皮的LD50雌、雄性均为4 300mg/kg b.wt.,属低等毒类;对雌雄性SD大鼠的急性吸入LC50(2h)雌、雄性均大于5 000mg/m3,属微毒类;对雌雄性家兔的急性眼刺激性,未冲洗时急性眼刺激积分指数为6.0,平均指数为2.5,属轻度刺激性。对雌雄性家兔的急性皮肤刺激性,积分为0.0,属无刺激性。受试物原药致豚鼠致敏率为0.0%,属弱致敏物。结论 10%联苯菊酯水乳剂经口、经皮、吸入毒性分别为中低、微毒类,轻度眼刺激性、无皮肤刺激性、弱致敏性的农药。     

荧光素漏出试验检测化妆品眼刺激性的初步验证

目的初步验证荧光素漏出试验(FLT)替代家兔眼刺激试验用于化妆品行政许可检验的可行性。方法用荧光素漏出试验对20份化妆品进行检测,以受试物处理后4h所引起荧光素漏出20%时受试物浓度(FL20H4)作为刺激分级标准,与《化妆品卫生规范》(2007年版)中家兔眼刺激试验分级标准进行相关性比较。结果 FLT能有效筛选出重度刺激物,FLT分级与规范要求做30s冲洗产品的家兔眼刺激试验分级有较好的一致性,两者间校正Spearman等级相关系数rs为0.694(P<0.05),Pearsonχ2值为16.343(P<0.01);对规范要求做4s冲洗的染发剂类产品,FLT法中仅20mg/mL FL20H4值与兔眼刺激试验结果有一定的相关性。结论荧光素漏出试验有望成为我国现行化妆品行政许可检验体外替代方法之一。     

纳米氧化铜对家兔的急性眼刺激性

目的观察纳米氧化铜(Cu O)对家兔急性眼刺激性作用以及及时冲洗措施对于缓解急性刺激症状的有效性。方法40、80和200 nm近球形纳米Cu O颗粒用于试验。纳米Cu O先以0.5%羟丙基甲基纤维素(HPMC)分散后以生理盐水稀释配制成染毒分散悬液。新西兰家兔用于试验。试验设40、80和200 nm纳米Cu O组(分别按照10、40和160 mg/L剂量分组)和0.5%HPMC组(分散剂对照),每组3只动物。试验按照染毒不冲洗和染毒后4 s冲洗两种方案进行。不冲洗试验:将纳米Cu O测试液0.1 ml分别滴入到3只家兔左眼结膜囊中,并使眼睛被动闭合1 s,右眼不处理作自身对照;4 s冲洗试验:家兔染毒后第4秒,用无菌生理盐水彻底冲洗眼部30 s。并于染毒后1、24、48、72 h、4和7 d对动物眼睛进行检查和评分。结果 40 nm粒径三个剂量组和80 nm粒径40和160 mg/L剂量组动物左眼于染毒后(不冲洗)1 h出现眼结膜明显充血,至24 h出现进行性加重。80 nm和40 nm纳米Cu O染毒组动物分别于染毒后48和72 h眼结膜充血时症状明显缓解,至观察第4天,所有动物充血症状消散。上述动物角膜和虹膜未观察到损伤改变。200 nm粒径纳米Cu O所有剂量组动物均未观察到眼部刺激症状。根据急性眼刺激性试验结果显示,40 nm和80 nm粒径纳米Cu O眼刺激性反应分级为可逆性眼损伤。在4 s冲洗试验中,40、80和200 nm组所有动物均未出现明显眼部刺激症状。试验中0.5%HPMC对所有动物不具有眼刺激性。结论小粒经的40和80 nm纳米Cu O具有结膜损伤眼刺激性。及时(4 s)采取眼部冲洗措施能有效降低纳米Cu O接触引起的急性眼刺激症状。     

育发露的急性毒性试验

[目的] 测定育发露的急性毒性.[方法] 急性经口毒性试验采用一次最大限度法,均以管饲法对小鼠染毒.试验前禁食16 h(过夜),不禁水,剂量为5 g/kg体重.灌胃后观察14 d,记录中毒症状及死亡情况;其次是兔急性眼刺激试验,将约0.1 ml受试物滴入实验动物一侧结膜囊内,并被动闭合4 s,另一侧眼作为对照.记录滴入后1 h、24 h、48 h、72 h眼的局部反应,第4、7 d观察恢复情况.观察角膜透明度、虹膜纹理改变.按<化妆品卫生规范>卫生监发[1999]第577号眼损害分级标准积分,进行眼刺激强度的评价;多次皮肤刺激试验,在试验前24 h将兔背部脊柱两侧皮肤的毛去除,去毛范围为6cm2,左边为对照,右边为实验区,涂受试物0.2 g,每日涂抹一次,连续4 d.从第二天开始,每次涂抹前去毛,用水清洗,1 h后观察皮肤刺激反应,并记录结果,按上述规范的表1评分.[结果] 急性经口毒性试验结果:在观察期间动物无异常反应,无死亡,尸检未见异常改变.雌、雄小鼠的LD50均＞5 g/kg体重;滴入受试物1 h后,4只兔眼结膜均出现不同程度的充血,24 h后开始出现水肿和分泌物,角膜、虹膜未见异常.4只兔眼结膜于4 d后恢复正常.多次皮肤刺激试验:在试验中4只兔实验区皮肤于涂抹全过程未见任何异常,平均每天每只动物积分均值为0.[结论] 本品对小鼠急性经口LD50雌雄小鼠均＞5 g/kg;对家兔眼睛急性刺激性试验为轻度刺激性;对兔皮肤多次皮肤刺激试验为无刺激性.