PCR-RFLP分析16s-23srDNA间区序列鉴定分枝杆菌菌种

目的探讨16S～23srDNA间区序列DNAPCR扩增和限制性酶切分析在分枝杆菌分类鉴定中的价值。方法对19种分枝杆菌标准株的16S～23SrDNA间区序列DNA进行PCR扩增并对扩增产物进行限制性内切酶HaeⅢ、MSP1消化反应，分析不同菌种扩增片段及其限制性片段长度多态性的差异。结果，PCR扩增结果显示：分枝杆菌一般扩增出1～2条带，缓慢生长分枝杆菌扩增片段在340～480bP，快速生长分枝杆菌扩增片段集中在470～575bP，单从扩增产物的琼脂糖凝胶电泳只能鉴定33．3％的受试菌种，酶切结果显示：分枝杆菌的酶切图谱彼此不同。结论16S～23SrDNA间区序列DNAPCR扩增和RFLP分析是分枝杆菌分类鉴定的一种快速、有效的方法。     

气相色谱用于分枝杆菌脂肪酸组成与菌种鉴定的研究

采用非极性毛细管柱气相色谱对3株分枝杆苗细胞脂肪酸化学组成进行了研究．得到特异性指纹识别图，并对7例临床分离的分枝杆菌进行了鉴别．结果表明．结核菌硬脂酸为分枝杆菌属的特征组分，其含量与其他中长链脂肪酸的百分组成随菌种不同而异．     

分枝杆菌菌种鉴定DNA微阵列的初步研究与应用

目的制备快速鉴定分枝杆菌菌种的DNA微阵列。方法根据19种分枝杆菌标准株的16SRNA序列设计寡核苷酸探针,制备DNA微阵列,通过反向杂交技术鉴定19种分枝杆菌标准株、9种非分枝杆菌标准株和31株分枝杆菌临床分离株带荧光标记的PCR产物。结果该DNA微阵列与9种非分枝杆菌标准株不杂交,具有分枝杆菌特异性;可将19种分枝杆菌标准株鉴定到群或种,具有较高的分枝杆菌种特异性。应用PCR-SSCP分枝杆菌初步菌种鉴定方法对31株分枝杆菌临床分离株进行初步的鉴定,9株为结核分枝杆菌复合群和22株为非结核分枝杆菌。应用DNA微阵列进一步进行菌种鉴定,9株与探针a杂交阳性,为结核分枝杆菌复合群;2株与探针c杂交阳性,为胞内分枝杆菌;8株与探针d杂交阳性,为堪萨斯分枝杆菌或瘰疬分枝杆菌或猿猴分枝杆菌或胃分枝杆菌;1株与探针k杂交阳性,为戈登分枝杆菌;2株与探针p杂交阳性,为龟分枝杆菌脓肿亚种;2株与探针r杂交阳性,为偶然分枝杆菌;1株与探针s杂交阳性,为草分枝杆菌;2株与探针a和p杂交阳性,为结核分枝杆菌和龟分枝杆菌脓肿亚种复合感染株;1株与探针a和r杂交阳性,为结核分枝杆菌和偶然分枝杆菌复合感染株;3株与该芯片杂交阴性。2株临床分离株经基因测序也证实DNA微阵列鉴定的特异性。结论该DNA微阵列有可能简便、快速、准确地     

分枝杆菌的多相分类鉴定

分枝杆菌属除麻风分枝杆菌外,主要包括结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌.近年来,随着结核病(结核分枝杆菌复合群为其致病菌)的回潮,非结核分枝杆菌感染率由4%急速上升到10%,快速和准确地鉴定它们显得非常重要.在我国非结核分枝杆菌的表型鉴定一直沿用以生化实验为核心的传统鉴定方法,且欠缺数值分类的补充分析.全细胞脂肪酸气相色谱分析这种表型鉴定方法仅在有条件的省份开展.随着分子生物学的发展以及系统发育理论的提出,与之相应的基因分型方法也被用于分枝杆菌属的鉴定.本文详细阐述了系统发育的理论以及应用于非结核分枝杆菌的遗传学分类鉴定方法,即DNA-DNA杂交和16S rDNA基因序列分析.为进一步提高表型鉴定的准确性,又详细介绍了一些用于数值分类的应用软件.总之,多相分类鉴定已被广泛应用于非结核分枝杆菌的分类鉴定中.本文也介绍了一些结核分枝杆菌复合群基因分型鉴定方法及其在结核分子流行病学中的广泛应用.     

荧光定量PCR检测结核分枝杆菌Meta分析

目的通过Meta分析系统评价荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测结核分枝杆菌的诊断价值。方法按照系统评价的要求检索Pubmed、CBM、VIP、CNKI以及万方数据库等,选取18篇符合纳入标准的文献,对其进行Meta分析,并评价Meta分析结果的稳定性和发表偏倚。结果 FQ-PCR与涂片染色、培养鉴定异质性检验分别为χ2=69.60、χ2=29.64,P值均<0.1,采用随机效应模型进行Meta分析。FQ-PCR与涂片染色、培养鉴定总体效应Z值分别为20.84和11.07,P值均<0.00001,差异具有统计学意义。FQ-PCR与涂片染色、培养鉴定的合并ORPCR与涂片=4.21,95%CI[3.68,4.82]、ORPCR与培养=2.79,95%CI[2.33,3.35]。结论从现有的临床证据来看,FQ-PCR是检测结核分枝杆菌的有效方法,但需要更多高质量、大样本、多中心的研究加以验证。     

脊柱结核病灶分枝杆菌培养菌种鉴定及耐药分析

<正>当前,全球结核病发病率呈逐年上升趋势。全世界有结核病患者2000万,每年新增800～1000万,每年因结核病死亡人数约300万[1]。我国结核病例数居世界第二位。骨关节结核是常见的继发性肺外结核,其中脊柱结核占50%[2],而且耐药结核的发病率逐年增高,据2009年世界卫生组织统计耐多药结核(指对几乎所有的抗结核一线和二线药物都产生耐药性[3])患者约占全球的1/5以上。我们对脊柱结核分枝杆菌培养阳性者进行菌种鉴定及抗结核药物敏感性试验,希望能对脊柱结核的流行病原菌及耐药情况作出初步探索,为临床     

贵州省某专科医院非结核分枝杆菌的菌种鉴定及耐药检测分析

目的探讨非结核分枝杆菌( NTM)的菌种鉴定分布及耐药性,为临床诊治提供参考依据。方法搜集 2017―2020年贵州某专科医院微量肉汤稀释法药敏试验对 -硝基苯甲酸( PNB)培养基阳性的疑似 NTM菌株,经聚合酶链式反应( PCR)-荧光探针法初步鉴定为 NTM后,用基因芯片法进行菌种鉴定,采用微量肉汤稀释法进行 15种药物测试。结果贵州地区流行的 100例 NTM菌株经鉴定分为 10种菌型类别。其中,占比最高者为龟 /脓肿分枝杆菌 48%(48/100)其后依次为鸟分枝杆菌 16%(16/100),堪萨斯分枝杆菌 12%(12/100),胞内分枝杆菌 11%(11/100)。药敏结果显示 100株 NTM总,耐药率 61.8%,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高 76.4%,其后依次为微黄分枝杆菌 73.3%、偶然分枝杆菌 55.6%、鸟分枝杆菌 53.8%和戈登分枝杆菌 53.3%。男女病人比例为 63∶37,男性耐药率 56.1%;女性耐药率 71.5%。结论贵州地区有 10种 NTM菌种流行,龟/脓肿分枝杆菌是该地区 NTM优势菌种。不同菌种间耐药率差异较大,龟/脓肿分枝杆菌耐药率最高。男性病人多于女性,女性耐药率高于男性。应用快速 NTM菌种鉴定和药敏试验,可为 NTM防控项目的决策者提供参考依据,有助于促进医务人员对抗 NTM药物的科学选择。     

非结核分枝杆菌肺病的菌种分布及耐药性分析

目的 探讨非结核分枝杆菌肺病的菌种分布及药敏试验结果,为非结核分枝杆菌肺病的诊疗提供依据。方法 以山东省胸科医院2018年1月至2020年9月确诊的非结核分枝杆菌肺病患者143例患者为研究对象,其中男性87例,平均年龄（56.28±15.53）岁,女性56例,平均年龄（51.88±17.50）岁,收集患者的菌型鉴定结果及药物敏感试验结果进行分析。结果 143株肺结核分枝杆菌菌株中,9类NTM亚种被分离,胞内分枝杆菌（54.55%）最常见,其次为脓肿分枝杆菌（20.97%）,其他相对少见。药敏试验结果显示：非结核分枝杆菌耐药率高,耐药依次为亚胺培南、复方新诺明、多西环素、米诺环素、乙胺丁醇、妥布霉素、加替沙星、头孢西丁、利福平、利福布汀、阿奇霉素、克拉霉素、阿米卡星、莫西沙星、利奈唑胺。结论 非结核分支杆菌肺病菌种类型复杂多样,且耐药情况严重,应对可疑患者尽早行菌型鉴定及药物敏感性测定。     

16S rDNA序列分析法在注射剂微生物污染鉴定及溯源分析中的应用

目的 对一次注射剂无菌检查阳性结果进行溯源。方法 采用16S rDNA序列分析法对污染菌A1和污染调查中采集的16株葡萄球菌进行鉴定和同源性分析,并将分析结果用脉冲场凝胶电泳进行验证。结果 A1的鉴定结果为科氏葡萄球菌;科氏葡萄球菌科氏亚种菌株的核糖体16S亚基序列完全相同;结合PFGE分析显示A1来自无菌检查使用的隔离器污染。结论 制药企业可以使用16S rDNA序列分析法进行生产和检验中污染菌的鉴定和溯源,但对于与如科氏葡萄球菌科氏亚种一样核糖体16S亚基序列完全相同的菌株,需要结合其他同源性分析方法进行最终的判定。     

我院2019～2020年非结核分枝杆菌感染及耐药性分析

目的 了解我院2019～2020年非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM)感染及耐药情况。方法 采用NTM配套试剂,对我院2019～2020年送检的标本进行培养鉴定和药敏试验。结果 检出NTM 114株,主要包括胞内分枝杆菌、龟/脓肿分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和鸟分枝杆菌;感染年龄集中在51～70岁;仅RIB、FOX、AMK、MOX和CLR耐药率低于30.0%。结论 NTM耐药程度严重,耐药谱差异大,对传统抗结核药物已基本失效,药敏试验对临床用药具有指导意义。     

16SrDNA序列分析在鉴定30个中药品种中沙门氏菌的应用

目的 建立中药品种中沙门氏菌的16SrDNA序列分析方法,评价该方法鉴定沙门氏菌的实用性和准确性.方法 用PCR扩增各个中药品种中沙门氏菌的16SrDNA片段,将扩增后的产物纯化后,使用ABI310型基因测序仪进行测序,随后使用ABI自带菌库进行序列比对,做出相似性分析,鉴定各菌种.结果 沙门菌的分型比较多,核苷酸序列相似性达到99％以上,无法准确地对沙门菌的各个分型完全鉴定,故结果依赖于个菌库的全面性,以及进一步与血清学实验结合判定.结论 16SrDNA序列分析是一种简单,快速,特异性较强的微生物鉴定方法,但对于基因序列极其相似并且分型各不相同的沙门氏菌,还需与其他方法结合进行鉴定.     

分枝杆菌感染的特征和耐药性分析

目的:了解我院分枝杆菌的分离情况及耐药性特点.方法:采用银科医学工程有限公司提供的分枝杆菌配套试剂,对我院2019—2020年送检的痰和灌洗液等标本进行培养鉴定和药敏试验.结果:总共分离分枝杆菌869例,主要集中在41～60岁和61～80岁年龄段.结核分枝杆菌755例,耐药率较高的有链霉素(43.2％)、异烟肼(41....     

179例结核分枝杆菌耐药性分析

目的了解河南省胸科医院住院分离结核分枝杆菌的耐药情况,为临床指导用药。方法对179例患者痰、气管镜灌洗液等标本培养出的结核分枝杆菌采用绝对浓度间接法,进行13种单一抗结核药物和3种联合药物药敏试验。结果总体耐药率46.10%,乙胺丁醇和环丙沙星耐药率分别高达89.39%、87.15%,两类四联合用药的耐药率低,分别为5.59%、3.91%,耐多药结核病发生率为49.16%。结论耐药和耐多药肺结核病疫情严重,有效控制耐药结核病是当前所面临的紧迫任务,建议积极开展耐药菌监测指导临床选择治疗方案。     

48例非结核分枝杆菌肺病的临床分析

资料与方法 1.一般资料:采用Bac T/ALERT快速分支杆菌检测系统BD960行初培养,再用0.5%对硝基苯甲酸(PNB)鉴别培养基培养及药敏试验,同时再做罗氏固体培养基进行菌种培养鉴定试验。我院结核一病区2011年1月-2015年1月间住院确诊的非结核分枝杆菌(NTM)肺病患者48例为病例组,对同期入院的肺结核患者按照随机抽取120例为对照组,病史最长的20年,     

吉安市结核分枝杆菌耐药状况分析

目的 探讨吉安市结核分枝杆菌的耐药状况,为结核病疫情防控提供可靠的参考依据。方法 回顾性分析2014年至2019年吉安市365例结核分枝杆菌培养结果显示阳性并具有药敏试验结果的病例,分析结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、氧氟沙星(OFX)、卡那霉素(KM)四种抗结核药物的耐药情况。结果 365例结核分枝杆菌感染患者中,初治患者278例(76.16%),复治患者87例(23.84%),株结核分枝菌总耐药率为24.66%,耐多药率为9.59%,广泛耐药率为0.55%;复治患者的耐药率(49.43%)高于初治患者(16.91%),两者耐药差异有统计学意义(χ²=140.35,P<0.05)。耐药结核病在不同性别患者中分布的差异无统计学意义,在不同年龄患者中分布差异有统计学意义,以51～70岁年龄组耐药率最高。结论 吉安市结核分枝杆菌耐药情况比较严重,应加强抗结核药物的耐药性监测,并加强对结核病患者特别是复治患者的治疗管理,同时根据药敏结果选择科学有效的治疗方案。     

聚合酶链反应-反向斑点杂交法直接从BACTEC-960阳性培养物鉴定分枝杆菌菌种

目前，常规的分枝杆菌菌种鉴定需采用分枝杆菌培养物进行生长特性试验（生长速度、生长温度、光产色试验、多种鉴别培养基上生长试验）及生化特性试验（耐热触酶试验、硝酸盐还原试验、烟酸试验、吐温-80水解试验、尿素酶水解试验、芳香硫酸酯酶试验、铁离子吸收试验、     

结核分枝杆菌耐药特点分析

目的对西安地区结核分枝杆菌的耐药情况进行统计分析,为今后结核病防治工作提供参考依据。方法对收集疑似结核患者的标本采用美国BD公司BACTECMGIT960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪进行培养鉴定和药敏试验。结果从送检的标本共分离到结核分枝杆菌621株,310株至少对一种药物耐药,总耐药率为49.9%,其中总耐单药率为11.6%,至少同时耐2种药物的总耐药率为38.3%。而在238株同时对多种药物耐药的菌株中,至少同时耐异烟肼和利福平的菌株172株,耐多药率为27.7%。另外,结核菌对4种抗结核药物的耐药率由高到低依次为异烟肼42.7%、链霉素35.4%、利福平28.5%、乙胺丁醇21.7%。结论我市结核病耐药发生率高,并且耐药性发生更趋于对多种一线抗结核药物同时耐药,特别是趋于对异烟肼和利福平同时耐药,即耐多药结核病发生率高,应引起相关卫生部门的足够重视。     

艾滋病合并非结核分枝杆菌病28例临床分析

目的探讨艾滋病（AIDS）合并非结核分枝杆菌病（NTM）的临床特点、诊断和治疗方法。方法对28例AIDS/NTM患者的临床资料进行分析。结果AIDS/NTM以发热和咳嗽为主要表现,NTM占同期艾滋病合并分枝杆菌肺病（AIDS/PTB）的25.93%。CD4＋T淋巴细胞平均值为（47.79±32.17）×106/L,X线胸片异常17例,抗酸杆菌培养阳性28例,涂片阳性1例,治疗后死亡3例（10.71%）。结论AIDS/NTM感染率高,诊断困难。患者免疫功能差,并发症多,经过抗分枝杆菌、抗病毒等治疗后大部分患者有明显好转。