酒精对HBV转基因小鼠肝脏的损伤作用及其机制

目的探讨在肝损伤早期酒精和HBV协同作用的分子机制。方法20只HBV转基因小鼠和20只普通小鼠随机分为4组:转基因小鼠酒精组(alcohol-fed Tg mice)和普通小鼠酒精组(alcohol-fed Wt mice),以白酒灌胃;转基因小鼠对照组(control Tg mice)和普通小鼠对照组(control Wtmice),以生理盐水灌胃。连续处理10wk后检测各组小鼠血清ALT、AST水平,肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平及TGF-β1、CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果酒精可升高转基因小鼠血清ALT、AST水平,诱发其肝脏病理损伤,但纤维化不明显;肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7、CTGF mRNA及TGF-β1、CTGF、α-SMA蛋白表达增加。结论酒精和HBV对肝损伤协同作用的机制可能与TGF-β1、Smad3、CTGF、α-SMA表达增加以及TGF-β1/Smads通路信号分子表达比例失调有关。     

小剂量饮酒对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的影响

目的研究小剂量饮酒对四氯化碳（CCl4）诱导的小鼠肝纤维化的影响。方法40只雄性昆明小鼠随机分为4组,空白对照组小鼠自由饮水,予植物油皮下注射;四氯化碳模型组小鼠自由饮水,予以CCl4皮下注射;酒精模型组小鼠予酒精代水饮,并皮下注射植物油;酒精＋四氯化碳组小鼠予以酒精代水饮,并皮下注射CCl4。通过检测小鼠血清ALT、AST水平,肝脏的病理组织学改变及肝组织转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA和I型胶原（collagenI）mRNA的表达水平以观察小剂量饮酒对CCl4诱导的小鼠肝纤维化的影响。结果酒精＋四氯化碳组小鼠与其他3组小鼠相比,血清ALT、AST水平,肝细胞坏死程度和肝纤维化程度以及TGF-β1、collagenImRNA的表达水平均为最高。结论小剂量饮酒加重了CCL诱导的小鼠肝纤维化和肝功能损伤程度。     

苦参素对肝纤维化大鼠肝脏TGF-β1的调节作用

目的观察苦参素(OM)对肝纤维化大鼠的防治作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。于实验的第12周末采血,检测ALT、AST、Ⅰ型胶原和TGF-β1。肝脏病理学检测HE染色后观察肝组织改变,Masson胶原纤维染色,每组样本随机观察8个视野的肝纤维化程度,RT-PCR检测TGF-β1mRNA表达。结果苦参素组能明显降低肝纤维化大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、Ⅰ型胶原和TGF-β1水平,同时病理组织学显示苦参素能明显改善CCl4诱导的肝纤维化大鼠的肝组织结构和肝纤维化;TGF-β1基因表达量较模型组明显减少。结论苦参素可明显降低实验大鼠胶原沉积,对CCl4诱导的肝纤维化大鼠有良好的保护作用,对TGF-β1表达的影响可能是其作用机制之一。     

茶条槭总黄酮提取物抗小鼠肝纤维化作用及其机制研究

目的研究茶条槭总黄酮提取物(AF)对四氯化碳(CCl 4)致小鼠肝纤维化的保护作用及其作用机制。方法将60只小鼠随机分为模型组、空白对照组、茶条槭总黄酮提取物(AF)高、中、低剂量组(给药剂量分别为400,200和100 mg·kg^-1)和秋水仙碱组(4 mg·kg^-1)。除空白对照组外,其余5组用0.4 g·mL^-1的CCl 4腹壁皮下注射复制小鼠肝纤维化模型,用HE及Masson染色观察肝组织病理变化,用生化试剂盒检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和层黏连蛋白(LN)的含量以及Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的表达水平;用Elisa法检测血清白细胞介素-8(IL-8)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平;用免疫组化染色检测小鼠肝脏α-肌动蛋白(α-SMA)的表达水平;用Real-time PCR检测肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和信号转导分子-2(SMAD2)mRNA的表达情况;用Western blot技术检测肝组织TGF-β1和SMAD-2的蛋白表达水平。结果与模型组比较,AF高、中剂量组血清ALT、AST、LN含量及Col-Ⅳ、IL-8和IL-6水平均明显降低(P<0.05),肝组织α-SMA表达水平显著下降,CCl 4引起的小鼠肝损伤及纤维化程度明显减轻,肝组织TGF-β1、SMAD2 mRNA及蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论AF可减轻实验性小鼠肝损伤并改善肝纤维化程度,其作用机制可能与抑制TGF-β1/SMAD通路的激活有密切关系。     

桦褐孔菌提取物介导LXRs信号通路调控肝纤维化

目的 探究桦褐孔菌提取物(Inonotus obliquus extract, IOE)介导肝X受体(liver X receptors, LXRs)信号通路调控肝纤维化。方法 采用腹腔注射硫代乙酰胺(thioacetamide, TAA)建立小鼠肝纤维化模型。同时,通过口服灌胃给予不同浓度IOE及水飞蓟素连续干预4周。末次给药后,小鼠安乐死收集肝脏和血清。检测不同浓度IOE对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)存活率的影响。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)10μg·L^-1刺激HSCs 2 h,给予IOE(0、5、10、25μmol·L^-1)处理6 h。测定小鼠血清谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,观察肝脏组织病理学改变,并通过Western blot和RT-PCR法检测小鼠肝脏和活化HSCs中α-SMA、collagenⅠ、炎症因子以及LXRα/β的蛋白和mRNA表达。结果 IOE可以明显降低TAA诱导的肝纤维化小鼠血清转氨酶水...     

瘦素及转化生长因子-β1与四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型逆转恢复的相关性研究

目的研究瘦素(Leptin)及转化生长因子-β1(TGF-β1)与四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化逆转恢复的相关性。方法采用CCl4大鼠肝纤维化模型,分别于逆转恢复0、2、4、6、8周处死大鼠,取血清检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Leptin和TGF-β1含量;取肝组织进行Masson染色,羟脯氨酸(Hyp)含量检测,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Leptin、TGF-β1、瘦素功能型受体(OB-Rb)和转化生长因子-β1型受体(TGF-βRⅠ)mRNA表达,Western blot法检测核转录因子-κb(NF-κb)蛋白表达。结果 CCl4致大鼠肝纤维化在停止注射后发生逆转恢复;血清ALT、AST、HA、CⅣ、Leptin和TGF-β1含量以及肝组织Hyp含量在逆转恢复过程中逐渐降低;同时肝组织Leptin、TGF-β1、OB-Rb和TGF-βRⅠmRNA以及NF-κb蛋白表达亦出现不同程度下降;血清Leptin及TGF-β1水平与HA、CⅣ、Hyp变化呈正相关(P<0.01)。结论 CCl4致大鼠肝纤维化的逆转恢复与Leptin及TGF-β1下降关系密切;可能通过受体表达下调降低促纤维化因子作用,进而影响肝纤维化逆转恢复过程。     

雷公藤红素对二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用及机制

目的观察雷公藤红素(Celastrol,Cel)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝纤维化的治疗作用及机制。方法采用DEN诱导大鼠肝纤维化模型,分为正常对照组、模型组、Cel给药组(2、4、8 mg.kg-1)和秋水仙碱组(Col,0.1 mg.kg-1)。紫外分光光度法检测各组大鼠血清中AST、ALT、肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及肝组织中丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)的含量;ELISA检测大鼠血清中透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCIII)、Ⅳ型前胶原(CIV)、TGF-β1的含量;Western blot检测肝脏α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)和TGF-β1蛋白的表达;HE染色观察肝组织病理形态学变化;Masson染色观察肝组织中胶原沉积变化。结果与模型组比较,Cel能明显降低肝纤维化大鼠血清中升高的TGF-β1、ALT、AST、HA、LN、PCIII含量,降低肝组织中升高的HYP和MDA的含量,明显升高肝组织中SOD和GSH-Px酶活性,减少肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA、Col I和TGF-β1的表达,改善其肝脏病理损伤程度,减少肝脏中胶原沉积。结论 Cel对肝纤维化大鼠有很好的治疗作用,其作用机制可能与Cel的抗氧化作用,降低TGF-β1的表达,抑制HSC活化,抑制胶原合成有关。     

黄芪甲苷对肝纤维化模型大鼠的改善作用机制研究

目的 观察黄芪甲苷对CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠的改善作用及可能机制。方法 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟宾组(30 mg·kg^–1)、黄芪甲苷组(14 mg·kg^–1)。采用50% CCl4橄榄油溶液(1.5 mL·kg^–1)腹腔注射建立肝纤维化模型,每周2次,持续8周。然后各组大鼠按照每天10 mL·kg^–1灌胃相应药物,共4周。检测大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;计算肝脏指数;苏木素-伊红(HE)及Masson染色观察肝组织病理变化;Western blotting检测转化生长因子(TGF-β1)、上皮间质转化标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测TGF-β1和E-cadherin的mRNA表达水平。结果 与正常组相比,模型组大鼠肝脏指数显著升高(P<0.01),血清中ALT、AST含量明显上升(P<0.01),胶原容积分数明显增加(P<0.01),肝组织内E-cadherin蛋白表达明显下降(P<0.01),α-SMA、N-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.01),TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平明显上升(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,黄芪甲苷组肝脏指数大幅下降(P<0.01),血清中ALT和AST含量明显降低(P<0.01),胶原容积分数明显下降(P<0.01),肝组织内E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),α-SMA、N-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01),TGF-β1蛋白和mRNA表达下降(P<0.01或P<0.05)。结论 黄芪甲苷对CCl4诱导肝纤维化模型大鼠具有改善作用,其机制可能与下调N-cadherin、α-SMA、TGF-β1蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达有关。     

豹皮樟总黄酮调控瘦素、TGF-β1对肝纤维化大鼠的预防作用研究

目的研究豹皮樟总黄酮(TFLC)调控瘦素(leptin)和转化生长因子-β1(TGF-β1)对肝纤维化大鼠的预防作用。方法采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,TFLC灌胃给药第12周末,检测ALT、AST及HA、LN、PⅢNP、CⅣ含量;检测Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、瘦素、TGF-β1的含量;检测Hyp及组织病理变化;检测瘦素受体(OB-Rb)、TGFβ1Ⅰ型受体(TGFβR1)、Smad3 mRNA及蛋白表达。结果 TFLC(200、400 g.L-1)能明显降低肝纤维化大鼠肝纤维化指标及血清Ⅰ型胶原、瘦素、TGF-β1水平;降低Ob-Rb、TGFβR1、Smad3的mRNA及蛋白表达。结论 TFLC能有效预防CCl4诱导的大鼠肝纤维化,可能与下调肝内瘦素及其受体,抑制TGF-β1/Smad通路有关。     

三羟基异黄酮对肝纤维化大鼠血清和肝组织中TGF-β1表达的影响

目的观察4,5,7-三羟基异黄酮（Genistein）对四氯化碳（CCl4）诱导的肝纤维化大鼠的防治作用及对转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法采用CCl4造成大鼠肝纤维化模型,在实验的第10周末采血和取肝组织,检测血清中ALT、AST、TGF-β1和Ⅰ型胶原,HE染色法观察肝组织改变,免疫组织化学法检测肝组织TGF-β1表达。结果血清学检测显示Genistein能明显降低肝纤维化大鼠ALT、AST、TGF-β1和Ⅰ型胶原水平,病理组织学观察发现Genistein能明显改善肝纤维化大鼠肝组织结构和肝纤维化,免疫组织化学检测表明肝组织TGF-β1表达量与模型组比较显著降低。结论 Genistein对CCl4诱导的肝纤维化大鼠有较好的保护作用,对TGF-β1表达的影响可能是其作用机制之一。     

青蒿琥酯抗大鼠免疫性肝纤维化的作用及机制研究

目的研究青蒿琥酯抗实验性肝纤维化的作用及其可能机制。方法制备牛血清白蛋白免疫性大鼠肝纤维化模型。动物随机分为6组:正常对照组、模型对照组、Art组(5、15、45 mg.kg-1)、阳性对照Col组(0.1 mg.kg-1)。Masson染色观察肝组织病理变化,Jamall法测定肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,RT-PCR技术检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1),α-肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),用TGF-β1(5μg.L-1)刺激,与Art(终浓度6.25、25、50 mg.L-1)共培养后,检测HSC-T6中Ⅰ型前胶原(procollagenⅠ)mRNA及Ⅰ型胶原(collagenⅠ)蛋白的表达。结果与模型组相比,Art各组能减轻肝组织纤维增生的程度,降低肝组织Hyp含量,使肝组织α-SMA、TGF-β1 mRNA和HSC-T6中procollagenⅠmRNA和collagenⅠ蛋白的表达水平下降。结论 Art有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制HSC活化,降低TGF-β1 mR-NA及collagenⅠ蛋白的表达有关。     

夏枯草硫酸多糖对四氯化碳致大鼠肝纤维化的干预作用

摘要： 目的 探讨夏枯草硫酸多糖 （PVSP） 对四氯化碳 （CCl4 ） 致大鼠纤维化的干预作用。方法 采用 CCl4-橄榄油腹腔注射诱导建立 SD 大鼠肝纤维化模型, 将造模成功的大鼠随机分成 3 组, 每组 10 只, 分别为模型组 （Model 组）、 PVSP 高剂量组 （PVSP-H 组： 400 mg/kg） 和 PVSP 低剂量组 （PVSP-L 组： 100 mg/kg）。并设空白对照组 （Blank 组） 和溶剂对照组 （Solvent 组）。采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶 （ALT） 和天冬氨酸转氨酶 （AST） 的含量, HE 和天狼猩红染色比较炎症及肝纤维化程度; 采用 qRT-PCR 和免疫组织化学分析肝组织中Ⅰ型胶原 （Col- Ⅰ）、 平滑肌肌动蛋白 （α-SMA） mRNA 和蛋白的表达量。结果 Solvent 组大鼠血清中 ALT、 AST 及肝组织中 Col-Ⅰ、 α-SMA mRNA 和蛋白与 Blank 组相比差异均无统计学意义; 与 Model 组相比, PVSP 能显著降低血清 ALT 和 AST （P＜0.05）; HE 和天狼猩红染色结果显示 PVSP 能减轻炎症及纤维化程度; qRT-PCR 和免疫组织化学结果显示 PVSP 明显降低大鼠肝脏内 Col-Ⅰ、 α-SMA mRNA 和蛋白表达 （P＜0.05）。结论 PVSP 具有减轻大鼠肝纤维化作用, 其机制可能与抑制Col-Ⅰ、 α-SMA 表达, 减少细胞外基质的生成并促进细胞外基质的降解有关。     

鬼针草总黄酮对肝纤维化大鼠细胞因子的影响

目的观察鬼针草总黄酮(totalflavones of Bidenspilo-saL,TFB)对肝纤维化大鼠细胞因子的影响。方法将大鼠随机分成正常组、对照组、TFB160、80、40mg·kg-1组和秋水仙碱(Col)0.1mg·kg-1阳性药对照组。除正常组外,其余各组采用四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化模型。于造模wk9起,给药组分别灌胃相应的受试药物,正常组和对照组灌胃等容量的生理盐水,疗程10wk。实验结束后,股动脉采血,放免法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,同时取固定部位肝脏组织,免疫组化技术测定TFB对肝组织中TGF-β1和NF-κB蛋白表达的影响,RT-PCR技术测定TFB对肝组织中TGF-β1 mRNA表达的影响。结果TFB160、80mg·kg-1能明显降低肝纤维化大鼠血清TNF-α、IL-1β含量,抑制肝纤维化大鼠肝组织中NF-κB、TGF-β1蛋白和TGF-β1 mRNA表达。结论TFB通过降低肝纤维化大鼠炎症细胞因子而抗肝纤维化。