促红细胞生成素酶联免疫吸附测定法的研究

目的:建立血清促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)的酶联免疫检测(ELISA)方法,观察其临床应用价值.方法:制备EPO多克隆抗体,异丙醇洗涤处理酶标板以增强其吸附能力,利用交叉反应法选择出抗原、抗体及酶标抗体的最佳的配对工作浓度.反应后,观察本方法的灵敏度、回收率、特异度、稳定性等指标,观察效果.以正常血清为对照组,测定缺铁性贫血组、乳腺癌组,并与放射免疫检测对比.结果:酶标板结合蛋白能力增强.抗体、酶标抗体、抗原最佳工作浓度分别为1∶1 000,1∶6 000,1∶800.灵敏度为0.46 U/L,与生长激素、铁蛋白交叉反应率低;高浓度、低浓度样品平均回收率分别为96.3%、97.3%,批内和批间变异分别为8.31%、7.82%,稳定性好.乳腺癌组、缺铁性贫血组EPO水平均明显高于正常对照组.放射免疫检测及酶联免疫检测检出结果差别无统计学意义.结论:本血清EPO双抗体夹心ELISA法的建立在诊断相关疾病方面有一定的临床应用价值.     

~(59)Fe摄入法和ELISA法测定重组人红细胞生成素活性的比较

对重组人红细胞生成素（rhEPO）活性测定的两种方法进行了比较。认为标准方法（~(59)Fe摄入法）结果准确,但操作复杂。而ELISA法必须与其它纯度检查法如SDS-PAGE、IEF、HPLC等相结合才能得出准确结果。对于高纯度结构完整的rhEPO分子,两种方法结果应一致。     

重组人红细胞生成素体内外活性检测方法的比较

目的对重组人红细胞生成素 (rhEPO)体内外活性测定结果进行比较 ,说明体内外活性测定对rhEPO质量控制的意义。方法采用59Fe摄入法、网织红细胞法和ELISA法测定rhEPO制品的体内外生物学活性。结果59Fe摄入法和网织红细胞法测定结果一致 ,与rhEPO唾液酸含量具有相关性。当rhEPO唾液酸含量较低时 ,ELISA法与体内活性测定结果有较大差异。结论rhEPO体内外活性测定方法可以相互补充 ,均是保证rhEPO质量不可缺少的质控手段。     

重组人红细胞生成素体内生物活性检测

建立了测定重组人红细胞生成素（rhEPO）体内生物活性的多血小鼠法。实验表明:rhE-PO在0.05～0.8 iu/鼠剂量范围内.对数剂量与反应（~(59)Fe 摄入量）呈直线关系。经多批rhEPO产品的体内生物活性测定,证明该法结果准确,重现性好.     

多剂量皮下注射重组人促红细胞生成素在健康人体的药代动力学

目的　观察不同剂量国产重组人促红细胞生成素(rhEPO)皮下注射在健康人体的药代动力学。方法　12名健康志愿者随机分为2个剂量组(50和150IU·kg-1 ),每组6例。分别皮下注射rhEPO,共7次。用酶联免疫吸附实验法测定血清rhEPO浓度。结果　给药前12名健康志愿者血清EPO基础水平波动于3. 75~13. 75mU·ml-1。2组谷浓度(Cmin)在给药4~6次后,达稳态水平。高剂量组首次和末次给药后的AUC(0-96h)分别是低剂量组的2. 8倍和3. 0倍,Cmax分别是3. 1倍和3. 6倍。第1次给药后,每个受试者的tmax和t1 /2等药代动力学参数与末次给药后比较无明显差异。结论　剂量在50~150IU·kg-1,多次皮下注射rhEPO,血药浓度水平与给药剂量呈正相关;药物吸收和清除基本上无时间依赖性;在给药7次内,未观察到体内蓄积倾向。     

酶联免疫吸附检测进展

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）技术是1971年由Engvall和Perlman建立的一种生物活性物质微量测定新技术,以其灵敏度高、特异性好等优点,在生命科学各领域得到广泛应用。近年来,该技术不断改进,形成了多种分析方法．并且在检测的灵敏度、特异性、操作简单化、高效性等方面都有很大提高。     

SDS-PAGE法测定重组人红细胞生成素糖基化程度

目的建立重组人红细胞生成素 (rhEPO)糖基化程度的测定方法。方法利用聚糖酶部分酶解rhEPO ,通过SDS PAGE电泳分离酶解片段 ,鉴定rhEPO的的糖基化程度。结果rhEPON 聚糖酶部分酶解的电泳图谱 ,可以明确指示N 连接糖基化程度。结论此法可以用于rhEPO的常规质量控制     

心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体间接酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立以重组心肌肌钙蛋白I-C(cTnI-C)融合蛋白为包被抗原的间接酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测人血循环中的抗cTnI自身抗体,为判断心肌损伤的预后提供依据。方法采用自行构建表达的cTnI-C融合蛋白作为包被抗原,以棋盘法优化实验条件,建立检测人血清cTnI自身抗体的间接ELISA方法。采用建立的间接ELISA法在121例急性心肌梗死(AMI)中筛查抗cTnI自身抗体,并用蛋白印迹法(WB)进行确证。结果 121例AMI血清抗cTnI抗体的阳性率为10.74%,ELISA试验的灵敏度100%,特异性95.37%,Kappa值为0.815。结论以cTnI-C融合蛋白作为包被蛋白建立的间接ELISA法具有良好的敏感度、特异性,可用于人血清抗cTnI自身抗体的筛查。     

抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli L-天冬酰胺酶及药代动力学研究

目的建立大鼠血浆中重组E.coli L-天冬酰胺酶的抗体夹心酶联免疫吸附测定法,并进行药代动力学研究.方法应用重组E.coli L-天冬酰胺酶免疫家兔,分离IgG,用DEAE-纤维素柱色谱纯化,辣根过氧化物酶标记抗体,建立抗体夹心酶联免疫吸附法,测定大鼠血浆中重组E.coli L-天冬酰胺酶浓度.结果方法的线性范围为1～64 U*L-1,血药浓度与时间的关系符合二房室模型,初期和末端的T1/2分别为0.50～0.57 h和2.45～3.02 h,AUC与剂量成正比.结论建立的抗体夹心酶联免疫吸附法在灵敏度、特异性、线性范围、精密度和回收率等方面,满足药代动力学研究要求.实验方法和重组E.coli L-天冬酰胺酶在大鼠中的药代动力学参数为临床研究提供了手段和依据.     

Comparison of Neurite Outgrowth Induced by Erythropoietin (EPO) and Carbamylated Erythropoietin (CEPO) in Hippocampal Neural Progenitor Cells

A previous animal study has shown the effects of erythropoietin (EPO) and its non-erythropoietic carbamylated derivative (CEPO) on neurogenesis in the dentate gyrus. In the present study, we sought to investigate the effect of EPO on adult hippocampal neurogenesis, and to compare the ability of EPO and CEPO promoting dendrite elongation in cultured hippocampal neural progenitor cells. Two-month-old male BALB/c mice were given daily injections of EPO (5 U/g) for seven days and were sacrificed 12 hours after the final injection. Proliferation assays demonstrated that EPO treatment increased the density of bromodeoxyuridine (BrdU)-labeled cells in the subgranular zone (SGZ) compared to that in vehicle-treated controls. Functional differentiation studies using dissociated hippocampal cultures revealed that EPO treatment also increased the number of double-labeled BrdU/microtubule-associated protein 2 (MAP2) neurons compared to those in vehicle-treated controls. Both EPO and CEPO treatment significantly increased the length of neurites and spine density in MAP2(+) cells. In summary, these results provide evidences that EPO and CEPO promote adult hippocampal neurogenesis and neuronal differentiation. These suggest that EPO and CEPO could be a good candidate for treating neuropsychiatric disorders such as depression and anxiety associated with neuronal atrophy and reduced hippocampal neurogenesis.     

胶体金法与酶联免疫法联合检测HBsAg的结果比较

目的探讨基层医院HBsAg的有效检测方法。方法采用胶体金法（GIA）与酶联免疫法（EIA）对18638例血清标本同时进行HBsAg检测,并且对结果进行对比分析。结果 18638例标本中有1例HBsAgEIA阴性而GIA阳性;13例HBsAgEIA阳性或OD值为临界值的样本,GIA结果为阴性;其余的标本EIA和GIA对于HBsAg阴性及阳性的标本检测结果一致。结论两种方法对HBsAg检测的特异性相近。两种方法若联合检测应用于临床,可提高检测结果的准确性。     

双抗体夹心酶联免疫法检测不同样品中的蓖麻毒素

目的应用酶联免疫吸附分析方法（ELISA）检测待测样品中的蓖麻毒素。方法用蛋白G亲和层析柱纯化蓖麻毒素单克隆抗体（4C13,3D74,5E4和5H6）,以3D74及辣根过氧化物酶（HRP）标记的4C13建立的双抗体夹心ELISA对含有蓖麻毒素的多种样品进行检测。结果抗蓖麻毒素的单克隆抗体经亲和层析纯化后具有较高的蛋白纯度,应用HRP标记的4C13与3D74建立双抗体夹心ELISA,对于溶解于磷酸缓冲液中的蓖麻毒素标准品的检测灵敏度可达2．5μg·L^-1;对于土壤、面粉、牛奶、咸菜汁、雪碧、可乐和腐乳汁．中的蓖麻毒素样品检测的灵敏度为2．5-5．0μg·L^-1;与磷酸缓冲液样品相比较,含有相同浓度蓖麻毒素的小鼠和人血清样品ELISA的阳性结果明显减弱．结论双抗体奕心酶联免疫法能够有效用于含有蓖麻毒素样品的检测分析。     

ELISA法对神经生长因子在大鼠体内药代动力学的研究

目的研究神经生长因子（ＮＧＦ）在大鼠体内的药代动力学。方法制备兔抗ＮＧＦ抗体,用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法测定大鼠血浆ＮＧＦ浓度。结果大鼠ｉｖ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度 时间曲线符合二室开放模型,Ｔ１／２α为０３３０ｈ,Ｔ１／２β为１５ｈ。大鼠ＮＧＦｉｍ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度 时间曲线符合一室一级吸收,血浆ＮＧＦ浓度达峰时间为３７１ｈ,Ｔ１／２（Ｋｅ）为４３０ｈ,２４ｈ吸收百分率为６９１％。结论ＮＧＦ肌注吸收良好,血浆ＮＧＦ浓度可在较长时间内维持在有效浓度以上。     

ELISA法对神经生长因子在大鼠体内药代动力学的研究

目的研究神经生长因子（ＮＧＦ）在大鼠体内的药代动力学。方法制备兔抗ＮＧＦ抗体,用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法测定大鼠血浆ＮＧＦ浓度。结果大鼠ｉｖ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度时间曲线符合二室开放模型,Ｔ１／２α为０３３０ｈ,Ｔ１／２β为１５ｈ。大鼠ＮＧＦｉｍ３２μｇ·ｋｇ－１后血药浓度时间曲线符合一室一级吸收,血浆ＮＧＦ浓度达峰时间为３７１ｈ,Ｔ１／２（Ｋｅ）为４３０ｈ,２４ｈ吸收百分率为６９１％。结论ＮＧＦ肌注吸收良好,血浆ＮＧＦ浓度可在较长时间内维持在有效浓度以上。     

丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂中酶结合物稀释液对酶结合物稳定性影响的研究

目的通过对不同酶结合物稀释液的丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫诊断试剂的稳定性对比试验,优选出最佳的酶结合物稀释液用于HCV抗体诊断试剂的生产。方法用不同酶结合物稀释液的HCV抗体酶联免疫诊断试剂,对丙型肝炎质控血清进行检测,检测出4℃试剂盒实验结果各样品S/CO值和37℃3d试剂盒实验结果各样品S/CO值,将实验结果进行对比。结果以中性PBST(加有Tween-20的磷酸盐缓冲液)为缓冲液,以BSA(牛血清白蛋白)和Casein(酪蛋白)无关蛋白作稳定剂的酶结合物稀释液的试剂的实验结果明显优于其余试剂。结论以PBST为缓冲液,以BSA和Casein无关蛋白作稳定剂组成酶结合物稀释液适用于HCV抗体酶联免疫诊断试剂的生产。     

高效液相色谱法测定胰岛素及其制剂中胰岛素的效价

目的建立用高效液相色谱法测定胰岛素及其制剂的效价,并将之与已有的小鼠血糖法比较。方法色谱柱:C18柱(岛津VP-ODS,4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:0.2 mol/L硫酸盐缓冲液(用乙醇胺调pH至2.3)-乙腈(73∶27);检测波长:214 nm;流速:1 mL/min。结果胰岛素在10~50 u/mL范围内线性关系良好,回归方程为:Y=0.001 4X+0.222 7,r=0.999 8;精密度、重现性良好。结论此法灵敏度高、专属性强、准确、可靠,较生物测定法方便,适于胰岛素及其制剂中胰岛素的效价测定。     

反相间接血凝法测定EPO中小牛血清残留量

重组人红细胞生成素（EPO）细胞培养中加入小牛血清以利于工程细胞生长，但若在提取和纯化工艺中残留小牛血清将影响人体免疫系统，因此，我们用反相间接血凝法严格控制小牛血清残留量以保证患者的人体健康。     

促红细胞生成素（EPO）联合化疗治疗癌症相关性贫血

目的 :恶性肿瘤化疗的同时联合应用促红细胞生成素 (EPO) ,观察对癌症相关性贫血 (MTA)临床症状的改善效果。方法 :观察组在化疗前 1周开始给予EPO ,对照组只进行化疗不用EPO ,其他辅助治疗两组相同 (包括营养支持、粒细胞刺激因子应用、出血者止血药物的应用、重要脏器的保护等 )。结果与结论 :化疗联合用EPO能预防和治疗MTA。对靠输血提升血红蛋白后化疗的患者可明显减少输血量 ,甚至可停止输血。EPO对MTA的治疗和与化疗所致贫血的预防有肯定的疗效     

金标快速法与ELISA法检测HBV的对比分析

目的：探讨金标快速法与酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测HBV的效果,为临床选择一种经济、快速准确、敏感检测HBV的新方法。方法：将2008年9月本院门诊体检的东莞市一所中学5980例新生,并随机分为金标快速法组（210例）和ELISA法组（210例）,对两种检测方法进行测定,并对测定结果分别进行比较分析。结果：用金标快速测试法与ELISA法平行检测乙肝HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc,差异尢统计学意义（Χ^2=0．25、0．10、0．13,P〉0．05;∑Χ^2=0．48,v=5,P〉0．05）;两种方法检测结果HBV五项指标的总符合率分别为98．57％、99．52％、98．10％、95．23％、96．19％以ELISA法为常规法验证金标快速测试法,则金标法的敏感性分别为99．50％、100．00％、98．95％、94.20％、95．65％．特异性为85．17％、99．51％、97．48％、96．03％、96．64％。用金标快速测试条进行乙肝五项指标重复检测,两次检测结果具有较高的一致性。结论：两种方法比较,金标快速测试法较酶联免疫试验法具有简单便捷、快速准确的特点,是一种较好的乙肝病毒五项指标快速测定方法．值得在基层医院大力推广。