SMYD3与细胞增殖相关性及其对细胞周期的影响

目的：研究SMYD3与细胞增殖间的相关性及其对细胞周期的影响。方法：应用RT-PCR对SMYD3基因在人不同组织来源肿瘤细胞系中的表达情况进行检测。通过RT-PCR从肝癌细胞SMMC7721中扩增获得人SMYD3基因并克隆到真核表达载体pcDNA3.1（-）中,利用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞,G418筛选建立稳定表达细胞株。RT-PCR检测转染后SMYD3的mRNA表达水平;MTT法测定细胞生长曲线;流式细胞术检测细胞周期分布。结果：SMYD3在人类主要组织来源的癌细胞系中均高度表达,重组表达载体pcDNA-SMYD3构建成功。转染NIH3T3细胞后,外源SMYD3基因获得了有效的转录与稳定表达,并且S期细胞明显减少,而G2/M期细胞增多。结论：SMYD3可以通过加快细胞周期S期进程从而提高细胞增殖速度,其高度表达与细胞增殖具有广泛的相关性。     

人肽脱甲酰基酶基因真核表达载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

目的:构建人肽脱甲酰基酶(HsPDF)基因的真核表达载体并转染NIH3T3细胞,研究HsPDF基因在真核细胞中的表达及功能.方法:通过RT-PCR从人宫颈癌细胞系HeLa中扩增获得HsPDF基因,克隆到真核表达栽体pcDNA3.1(一),利用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞,G418筛选建立稳定表达细胞系;RT-PCR检测转染后HsPDF基因的mRNA转录水平;MTT法测定转染后细胞增殖能力的变化;苏木精-伊红(HE)染色观察HsPDF对NIH3T3细胞形态的影响.结果:成功构建重组表达载体peDNA3.1(一)-HsPDF.该载体被转染入NIH3T3细胞后,外源HsPDF基因获得了有效的转录与稳定表达.HsPDF显著促进NIH3T3细胞的增殖,并使细胞呈现出一定的恶变特征.结论:HsPDF基因在NIH3T3细胞中获得了稳定表达并表现出明显的生物学功能,为深入研究奠定了基础. G418筛选建立稳定表达细胞系;RT-PCR检测转染后HsPDF基因的mRNA转录水平;MTT法测定转染后细胞增殖能力的变化;苏木精-伊红(HE)染色观察HsPDF对NIH3T3细胞形态的影响.结果:成功构建重组表达裁体peDNA3.1 一)-HsPDF.该载体被转染入NIH3T3细胞后,外源HsPDF基因获得了有效的转录与稳定表达.HsPDF显著促进NIH3T3细胞的增殖,并使细胞呈现出一定的恶变特征.结论:HsPDF基因在NIH3T3细胞中获得了稳定表达并表现出明     

人Smad3的shRNA表达载体构建和鉴定

目的：构建人Smad3的shRNA表达载体，运用RNAi下调Smad3基因在肿瘤细胞系中的表达，观察对肿瘤细胞生长的影响．方法：化学合成针对人smad3基因的dsRNA，瞬时转染入Hela细胞，检测RNA干扰效果，筛选有效干扰靶位点；设计并合成针对人smad3基因的siRNA寡核苷酸链，经退火形成双链后克隆入质粒载体pSilencer^TM3．1-H1hygro，转染入Hela细胞，用hygromycinB筛选稳定单克隆细胞株，对细胞株行RT-PCR和Western Blot检测，观察siRNA对靶基因的抑制效果，进一步研究下调目的分子表达水平以后肿瘤细胞生长的变化．结果：瞬时转染筛选到了有效的RNA干扰靶位点，构建载体后，建立稳定转染的单克隆细胞株，smad3mRNA和蛋白质水平均显著下调，导致肿瘤细胞生长抑制．结论：成功构建了针对人Smad3高效、特异、作用持久的shRNA表达载体，转染细胞后可下调Smad3的表达，为进一步研究smad3的功能和肿瘤的基因治疗奠定了基础．     

牛膝多糖对小鼠肝癌H22细胞bcl-2和Fas基因表达的影响

目的：研究牛膝多糖（ABPS）对肝癌H22细胞bcl-2和Fas基因mRNA表达的影响。方法：用肝癌H22细胞进行体外培养，采用MTT法检测不同浓度ABPS对H22细胞的生长抑制作用；RT-PCR检测bcl-2和Fas基因mRNA表达的变化。结果：ABPS对肝癌H22细胞具有显著生长抑制作用，并呈量效关系；bcl-2基因mRNA表达水平随着ABPS浓度的增加而下降，Fas基因mRNA表达水平随着ABPS浓度的增加而上升。结论：ABPS可抑制H22细胞增殖并诱导其凋亡，其作用机制可能与下调bcl-2基因mRNA表达、上调Fas基因mRNA表达有关。     

LRP16基因的SAGE谱及其在正常血细胞、白血病细胞中的表达状况

目的：通过信息学和实验学的方法检测LRP16基因在肿瘤细胞以及在造血发育不同阶段的表达状况，探讨其在肿瘤发生、发展以及在血细胞成熟过程中可能的作用。方法：以NCBI提供的高通量CGAP／SAGEmap数据库为实验对象，“Virtual Northern”程序为实验工具，分析比较了LRP16基因在多种肿瘤组织、细胞系和相应正常组织中的表达谱；采用半定量RT－PCR方法检测了该基因在多种正常血细胞及白血病细胞中的表达量。结果：SAGE结果显示LRP16在人类多种肿瘤细胞中的表达量明显高于其正常对应组织。脐血中未检测到LRP16表达，正常骨髓及经G－CSF动员的PBSC（peripheral blood stem cells)中的表达量明显低于正常人外周血、原代白血病细胞及白血病细胞系（P＜0．001）。结论：LRP16在不同的血细胞中表达量不同。同时表明LRP16与急性白血病等多种肿瘤的发生、发展存在相关性；在初诊与复发白血病中，LRP16的表达差异值得进一步研究。     

Ang-2在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响

目的：探讨促血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)在胃癌组织中的表达及其与肿瘤病理分期的联系;观察反义 Ang-2基因转染对人胃癌细胞 SGC-7901的影响。方法：用 Western Blot法检测 Ang-2蛋白在 10例胃癌组织及 10例正常胃组织中的表达,用免疫组化法检测 53例不同病理分期的胃癌组织中 Ang-2蛋白的表达;应用脂质体转染法将既往实验合成[1]的 pEGFP-N1-anti Ang-2转染体外培养的人胃癌细胞 SGC-7901,以空载体(pEGFP-N1 )转染组和未转染组作对照, RT-PCR及免疫组化检测转染后 Ang-2基因及蛋白的表达, MTT法和流氏细胞术检测反义 Ang-2基因转染对细胞生长和细胞调亡的影响;分别用上述三组细胞注射于裸鼠皮下,对比观察肿瘤生成的速度和肿瘤组织中的血管生成数量。结果：Ang-2蛋白在正常胃组织中不表达,在胃癌组织中呈阳性表达,并且随病理分期进展表达呈增强趋势;RT-PCR及免疫组化显示反义Ang-2基因转染组无 Ang-2 mRNA及 Ang-2蛋白的表达,MTT法检测显示反义 Ang-2基因转染组活细胞数较其它两组均低（P＜0.05）,流氏细胞术检测显示其调亡率较其它两组明显增高（P＜0.01）;转染了反义 Ang-2基因的胃癌细胞成瘤速度较其它两组明显减慢（P＜0.05）,肿瘤组织中血管生成的数量较其它两组明显减少（P＜0.05）。结论：胃癌组织中 Ang-2的表达与胃癌血管生成及胃癌侵袭能力密切相关;反义 Ang-2基因转染可封闭人胃癌细胞 SGC-7901中 Ang-2 mRNA及 Ang-2蛋白的表达,抑制其体外生长,促进其凋亡;并对其体外成瘤性及其新生血管的生成有明显的抑制作用。     

Robo4在实体肿瘤血管新生中的表达及其意义

 目的 了解引导神经发育的Robo4基因在实体肿瘤血管新生中的表达，证实Robo4是肿瘤血管新生特异性标志物（tumor endothelial marker, TEM）。方法 采用RT-PCR技术检测多种不同细胞中Robo4 mRNA的表达情况；采用原位杂交和免疫组化染色检测多种肿瘤组织及其对应正常组织的相邻组织切片中Robo4和CD31在微血管的表达情况。结果RT-PCR显示在包括肿瘤细胞和正常细胞的9种受检细胞株中，Robo4 mRNA特异性表达于血管内皮细胞HUVEC和HMVEC中；Robo4在各种正常组织的微血管中表达极其微弱，而在肿瘤组织的微血管上显著表达；CD31在正常和肿瘤组织的微血管上均显著表达。结论Robo4仅特异性表达于肿瘤血管新生的部位，是肿瘤血管新生标志物。     

胃癌组织和肿瘤细胞系中AGO基因突变和表达的研究

目的：筛查胃癌组织中AGO基因突变，检测不同肿瘤细胞系中AGO基因的表达情况。方法：采用聚合酶链反应及变性高效液相色谱法，对22例胃癌组织标本中AGO基因β型全部外显子进行突变筛查；应用逆转录-聚合酶链反应法检测多种不同肿瘤细胞系中AGO基因α和β型转录本的表达情况。结果：在所检全部胃癌组织中均未见AGO基因突变；AGO基因α和β型转录本在所有不同肿瘤细胞系中均有不同程度的表达。结论：AGO基因可能与胃癌的发生和发展无关。AGO基因表达缺失在肿瘤细胞中少见。     

恶性黑素瘤FHIT基因蛋白的表达与肿瘤细胞增殖、凋亡关系的研究

为研究恶性黑素瘤（MM）脆性组氨酸三联体（FHIT）基因的表达与肿瘤细胞增殖、凋亡的关系，用免疫组化SP法检测57例原发性MM和20例正常人皮肤中FHIT蛋白和增殖细胞核抗原的表达水平，用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEI。）检测其细胞凋亡指数。结果显示：①MM中，FHIT蛋白的表达水平明显低于正常人皮肤（P〈0．01），增殖细胞核抗原的表达水平和细胞凋亡指数显著高于正常人皮肤（P〈0．01）；     

Survivin基因在脑星形细胞肿瘤中的表达及其病理意义

目的：研究脑星形细胞肿瘤中Survivin基因mRNA表达的临床、病理和预后的关系。方法：应用RT-PCR方法检测26例脑星形细胞肿瘤组织中Survivin基因mRNA的表达,并通过电泳凝胶图像系统检测Survivin的相对表达量。结果：Survivin只表达于脑星形细胞肿瘤中的肿瘤细胞,对正常脑组织中胶质细胞无表达。在脑星形细胞肿瘤中RT-PCR的检出率为65%（17/26）。Survivin基因mRNA的相对表达量与脑星形细胞肿瘤的病理分级密切相关,在高级别肿瘤中Survivin基因mRNA相对表达量和表达强度均高于低级别肿瘤（P〈0.05）。结论：随着星形细胞肿瘤分化程度的降低,Survivin相对表达量显著增强;其高表达预示着预后不良,可成为有价值的评估该肿瘤预后指标。