鼻咽癌患者全血硒和GSH-PX含量的变化

目的　探讨鼻咽癌（ＮＰＣ）患者全血硒和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）水平与健康人的差别,以及与肿瘤临床分期之间的关系。　方法　对１２２ 例ＮＰＣ患者采用２．３－二氨基萘（ＤＮ）荧光法测定血硒,采用２－硝基苯甲酸直接显色法测定血ＧＳＨ－ＰＸ水平,并设健康人对照;数据采用ｔ检验及方差分析进行统计学处理。　结果　（１）放疗前ＮＰＣ患者血硒和ＧＳＨ－ＰＸ水平均低于对照组（Ｐ＜ ０．０１）。（２）随着临床分期的增加,血硒和ＧＳＨ－ＰＸ水平逐渐下降,（Ｐ＜ ０．０１）。（３）放疗后患者血硒和ＧＳＨ－ＰＸ水平比放疗前升高,但仍比对照组低（Ｐ＞ ０．０５）。　结论　（１）ＮＰＣ患者血硒和ＧＳＨ－ＰＸ均处于低水平状态。（２）血硒和ＧＳＨ－ＰＸ水平与ＮＰＣ的发生、发展可能有关。     

妊娠期糖尿病与血硒水平及谷胱甘肽过氧化酶活性的研究

目的：研究血硒水平及谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）与妊娠期糖尿病（GDM）发生的关系。方法选择2011年1月至2012年12月就诊于该院的孕妇共1360例,其中68例为 GDM 患者（观察组）,另随机抽取非 GDM 孕妇113例作为对照组,对比两组患者血清中的血硒水平及 GSH-Px 活性。结果对照组血硒水平及 GSH-Px 活性均高于观察组,对照组与观察组血硒水平分别为（3．07±0．51）、（2．06±0．41）mmol／L,GSH-Px 活性分别为（197．23±18．73）、（151．35±19．67）U,两组比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论血硒水平及抗过氧化酶活性降低可能是 GDM 的发病原因之一。     

铅致心肌细胞死亡率、自发收缩的改变与硒对其改变影响的研究

采用体外心肌细胞培养技术，研究了铅致心肌细胞死亡率、自发收缩的改变与硒对其改变影响的作用。结果表明：１～１００μｍｏｌ／Ｌ铅对心肌细胞的死亡率无明显影响。但在相同剂量范围内，可见铅对心肌细胞的自发收缩有明显影响。表现为自发收缩在１０μｍｏｌ／Ｌ铅组达峰值，随后即开始降低，至１００μｍｏｌ／Ｌ铅组时则显著低于对照组。加５μｍｏｌ／Ｌ硒后，可使１０μｍｏｌ／Ｌ铅组的收缩次数向对照水平恢复。从而提示：铅可直接影响心肌细胞的自发收缩，预防给硒在一定程度上可拮抗铅致的心电异常     

急性心肌梗死后快速延迟整流K~+通道基因表达的变化

目的探讨猪心肌梗死(MI)后梗死边缘区快速延迟整流K+通道KCNH2和KCNE2基因表达水平的改变及意义。方法通过结扎猪左前降支远端1/3～1/2处2h建立急性心肌梗死(AMI)模型,手术后存活猪进入MI组,术后24h取左心室梗死边缘区内层(Endo)、中层(Mid)和外层(Epi)心肌,应用半定量RT-PCR方法检测KCNH2和KCNE2mRNA含量。同时,设立相应的假手术组(SH组),SH组取与MI组对应区域的心肌组织。结果 KCNH2和KCNE2基因的表达在SH组左心室En-do、Mid和Epi心肌间没有差异,与SH组比较,AMI后梗死边缘区3层心肌KCNH2mRNA表达均明显下降(P<0.05),而且3层心肌间的基因表达呈不均一性(P<0.05),KCNE2mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AMI后梗死边缘区3层心肌KCNH2基因表达的不均一性下调,可能在MI后早期室性心律失常的发生中起重要作用。     

人CYB5R2基因真核表达载体的构建

目的构建人CYB5R2基因真核表达载体,并观察其在人鼻咽癌细胞HONE1中的表达。方法根据表达载体pCMV-Tag3A上的多克隆位点和CYB5R2基因CDS序列设计引物,应用RT-PCR从人睾丸cDNA中克隆出CYB5R2的CDS,并进行TA克隆。对经PER、双酶切和双向测序验证正确的质粒,进行CDS目的片段的回收,将其连接于pCMV-Tag3A载体的多克隆位点内构建真核载体,然后进行PCR、双酶切和双向测序验证。脂质体法转染鼻咽癌细胞HONE1细胞,荧光显微镜观察和RT—PCR验证该基因的表达。结果PCR、双酶切和双向测序结果显示pCMV-Tag3-CYB5R2-CDS真核表达载体构建成功,荧光显微镜和RT—PER的结果显示该重组质粒在HONE1细胞中正确表达。结论成功构建了pCMV-Tag3-CYB5R2-CDS真核表达载体,并在鼻咽癌细胞HONE1中表达,为进一步验证其抑癌作用及探索其抑癌机制做准备。     

硫化氢预处理延迟相对大鼠心肌缺血再灌注时谷胱甘肽S转移酶表达的影响

目的:探讨硫化氢预处理延迟相对大鼠心肌缺血再灌注时谷胱甘肽S转移酶表达的影响.方法:健康成年Sprague-Dawley雄性大鼠40只,随机分成4组:假手术组(S组)仅开胸、分离冠状动脉左前降支,不阻断血流150 min;缺血再灌注组(IR组)行冠状动脉左前降支阻断30 min,再灌注120 min;硫化氢预处理延迟相组(H组)静脉注射硫化氢(0.05 mg/kg),给药后24h同IR组处理;硫化氢预处理延迟相+线粒体KATP通道阻断剂(5-羟葵酸,5-HD)组(D组)缺血前15min静脉注射5-HD 5 mg/kg,其它同H组处理.再灌注结束后测心肌谷胱甘肽S转移酶(GST)的表达和心梗面积,观察心肌细胞超微结构.结果:与IR组(38.27±5.64)%比,H组(25.40±3.54)%心肌梗死面积减小(P＜0.05),D组(40.53±5.24)%无明显差异(P＞0.05).与S组比,IR组、H组和D组GST均升高(P＜0.05),与IR组比,H组GST增高(P＜0.05),D组无明显差异(P＞0.05).与IR组比,电镜下H组心肌细胞损伤程度减轻,D组无明显差异.结论:硫化氢预处理延迟相对大鼠心肌的保护作用可能与上调心肌谷胱甘肽S转移酶表达有关.     

硒镉对培养心肌细胞生物电活动的影响

目的进一步研究微量元素硒(Se)镉(Cd)对心肌细胞的协同性影响。方法用细胞内微电极技术，分别测定了正常对照、高Cd、高Se伴高Cd条件下培养的大鼠心肌细胞生物电活动的改变。结果高CA状态下培养的心肌细胞，其静息电位(RP)减小、动作电位幅度(APA)降低、动作电位复极50％时的时程(APDs0)缩短，而高cd伴高Se条件下培养的心肌细胞，RIP、APA、APD％与对照组相比差异无显著性意义。提示：高Cd对培养的心肌细胞有损害作用；补Se可以对抗高cd对心肌细胞产生的损害。     

心肌缺血再灌注期间硒拮抗自由基损伤机理的临床研究

目的 通过临床对硒制剂的使用观察,从基因表达水平探讨心肌缺血再灌注期臆微量元素硒拮抗自由基损伤的分子机理。方法 将患有单纯房间隔或室间隔缺损的病人分为对照组（２３例）和服硒组（２３例）,服硒组于心脏手术前口服硒制剂共７天。利用生化、原子吸收、逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）、基因测序等技术,对以上两组病人于心肌缺血前和再灌注３０分钟时的心肌脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ     

S-生物丙烯菊酯处理后人淋巴细胞基因表达谱的变化

目的运用基因芯片技术研究S-生物丙烯菊酯对正常人淋巴细胞基因表达谱的变化。方法取正常人外周血淋巴细胞，加入S-生物丙烯菊酯刺激，提取总RNA与Agilent Human 1B寡核苷酸基因芯片杂交，研究基因表达谱变化。结果正常淋巴细胞在S-生物丙烯菊酯刺激后共有346个基因表达发生变化，其中16个免疫和防御相关基因均表达下调，6个凋亡相关基因表达上调，1个凋亡相关基因表达下调。结论S-生物丙烯菊酯处理后淋巴细胞基因表达谱的总体变化趋势是部分免疫应答基因表达下调，促进凋亡，抑制增殖。     

Effect of Sodium Nitrite on Myocardial Glutathione Peroxidase and Protective Action of Vitamin E and Selenium

Under the condition of acute NaNO_2 poisoning, the changes of myocardial GSH-Px activity of rats fed a diet composed of grains grown in the endemic region of Keshan disease and the same diet with supplementation of vitamin E or selenium were investigated. By gavage of toxic doses of NaNO_2, the myocardial GSH-Px was significantly reduced (P<0.05). Vitamin E or selenium supplementation protected the enzyme activity from reducing. It is suggested that the simultaneous action of an increase in selenium and vitamin E intake and a decrease in nitrite intake might greatly prevent the occurrence of Keshan disease.     

硒和维生素E对克山病病区粮喂饲大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察适时适量补充硒(Se)和维生素E(VE)对心肌纤维化和心肌重构的影响,探讨克山病病区的低Se和低VE膳食是否在心肌损伤后的修复过程中持续发挥作用.方法:30只Wistar 大鼠随机分为:正常对照组(Control,混合饲料喂养)、病区粮饲料组(EG,病区粮喂养)、病区粮饲料加Se组(EG+Se)、病区粮饲料加...     

IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达

目的：构建含人IL-2 cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc，并在真核细胞中表达，以期用于乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗的研究。方法：应用重叠延伸剪切技术(SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL-2／Fc，回收后克隆到中间pGEM—T：Easy TA克隆载体，得到合适的酶切位点后，用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3．1中，得到真核重组载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc。然后用脂质体法转染SP2／0细胞。结果：对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析，证明连接正确；经ELISA检测证实，该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。结论：成功构建了真核表达载体pcDNA 3．1 IL-2／Fc，并在SP2／0细胞中有效表达。     

亚硒酸钠对枸杞幼苗磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶活性和硒含量的影响

目的探讨亚硒酸钠(Na2SeO3)对宁夏枸杞幼苗磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHG-PX)活性和硒(Se)含量的影响。方法将75株宁夏枸杞幼苗随机分为对照组、Na2SeO30.5 mg.kg-1组(每千克土壤施用Na2SeO30.5 mg)和Na2SeO32.0 mg.kg-1组(每千克土壤施用Na2SeO32.0 mg),每组25株。分别于处理后24 h、48 h、72 h及96 h测定PHG-PX活性和Se含量。Se含量采用国际标准GB12399-90进行测定,PHG-PX活性以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的减少速度来表示。结果Na2SeO30.5 mg.kg-1组处理幼苗48 h和Na2SeO32.0 mg.kg-1组处理24 h后,PHG-PX活性高于对照组(P<0.05)。Na2SeO32.0 mg.kg-1组处理后各时间点PHG-PX活性均高于Na2SeO30.5 mg.kg-1组,48 h后达到显著水平(P<0.05),96 h后达到极显著水平(P<0.01)。0.5 mg.kg-1和2.0 mg.kg-1Na2SeO3处理后各时间点枸杞幼苗Se元素的含量均高于对照组(P<0.01)。Na2SeO32.0 mg.kg-1组处理后各时间点枸杞幼苗的Se含量均高于Na2SeO30.5 mg.kg-1组(P<0.01)。结论外源Se的摄入能够提高枸杞幼苗体内Se元素的含量和PHG-PX活性,从而提高枸杞幼苗的营养价值和保健价值。     

针刺内关穴对急性心肌缺血大鼠缺血心肌基因表达谱的影响

[目的] 研究针刺对急性心肌缺血大鼠缺血心肌基因表达谱的影响.[方法] 建立左前降支冠状动脉结扎大鼠心肌缺血模型,分组干预后分离提取缺血心肌总RNA,与大鼠全基因表达谱芯片杂交后进行检测,对筛选得到的针刺治疗过程中的差异表达基因,利用基因功能分类体系寻找和分析显着富集差异表达基因的复合功能分类,从基因功能水平探索针刺对急性心肌缺血模型大鼠缺血心肌基因表达谱的影响.[结果] 发现心肌缺血24 h后表达上调的398条基因中,经过间断针刺内关穴3次,24 h后其中298条基因(占表达上调基因的74.87%)的表达出现不同程度的下调趋势;心肌缺血24 h后表达下调的338条基因中,经过间断针刺内关穴3次,24 h后其中188条基因(占总下调基因的55.62%)的表达出现不同程度的上调趋势,表明针刺内关穴对缺血心肌差异表达基因有良性调节趋势.针对筛选出来的差异表达基因蛋白磷酸酶1B(Ppm1b)、琥珀酸辅酶A连接酶(Suclg1)、谷氨酸草酰乙酸转氨酶2(Got2)、苹果酸脱氢酶(Mdhl)、丙酮酸脱氢酶磷酸酶同工酶(PDP1)、延胡索酸水合酶(Fh)、羟肽酶b2(Cpb2)、酪氨酸单氧化酶激活蛋白酶(Ywhaz)、S100钙结合蛋白a9(S100A9)、Na+/K+转运ATP酶B1亚基(Atp1b1)、肌钙蛋白I(TnI)、肌球蛋白轻链激酶3(Myl3)、肌集钙蛋白2(Casq2)、肌红蛋白(Mb),其功能模块主要涉及氧化磷酸化、线粒体电子传递、电子传递偶联三磷酸腺苷(ATP)合成、能量代谢、磷酸盐代谢过程、单价无机阳离子转运、辅酶代谢过程等.[结论] 针刺内关穴可能是通过影响上述基因,从而对急性心肌缺血发挥保护作用.     

高危人乳头瘤病毒58型E6基因的克隆及表达

目的：获得含人乳头瘤病毒(HPV)58型E6基因的克隆及表达重组体并体外表达E6蛋白．方法：聚合酶链方法从1例宫颈腺癌患者癌组织DNA中获得HPV58 E6基因,并将其与克隆载体pGEM—T Easy连接,获得重组体HPV58-E6-pGEM—T,继之以双酶切将E6基因与同样双酶切的线性化的pRSET-A表达载体连接,得到E6表达重组体pRSET-58E6,转化E．coliBL21(DE3),用LPTG诱导表达．结果：从1例宫颈癌患者中成功获得了少见HPV58型的E6基因并构建了其重组表达载体．经IPTG诱导后可表达M24000的6His HPV58E6融合蛋白,表达量占菌体蛋白的10％．结论：成功获得了少见HPV58高危型的E6基因,并可在E．coli中高效表达．     

凋亡抑制蛋白-survivin基因的克隆和表达

目的:克隆survivin基因、原核表达并鉴定. 方法:从培养的人喉癌Hep-2细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得survivin基因. 将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,测序、鉴定. 将测序正确的survivin基因亚克隆到pRSET-c载体中,构建survivin表达载体,IPTG诱导表达4～5 h,做SDS-PAGE分析,鉴定survivin蛋白的表达. 结果:DNA测序证明,获得了survivin基因,其序列与GeneBank中报道序列完全一致. SDS-PAGE分析表明,survivin蛋白获得高效表达,其相对分子质量为16.5×103,表达量约占菌体总蛋白的30%. 结论:Survivin基因的克隆和表达均获得了成功. 为进一步探讨survivin基因在肿瘤诊治中应用奠定了基础.     

肺癌相关基因的表达谱研究

目的：通过研究人肺癌组织和正常组织中差异表达的基因,寻找肺癌相关基因以用于肺癌的诊断和治疗。方法：以包含４０９６个ｃＤＮＡ基因表达谱芯片研究一组肺癌组织样本的基因表达谱。结果：共筛选出差异表达的基因３７０条,包含已知基因１４６条,未知基因２２４条,其中１０７条表达增加,２６３条表达降低。结论：基于ｃＤＮＡ微矩阵技术的肿瘤基因表达谱分析能够高通量筛选与肺癌发生密切相关的基因。     

催乳素对人B淋巴细胞IgG基因表达影响的实验研究

目的:研究人催乳素(PRL)对B淋巴母细胞系IM-9细胞IgG基因表达的影响。方法:应用人PRL(10ng/ml)刺激IM-9细胞,培养48h后用试剂盒提取细胞总RNA,反转录为cDNA,RT-PCR扩增IgGcDNA,琼脂糖凝胶电泳观察扩增情况。结果:该cDNA片段的大小为98bp,LPS、PRL与LPS-PRL组cDNA条带在第24循环时出现,LPS-Br与LPS-PRL-Br组cDNA条带在第28循环时出现,并随循环数的增加亮度逐渐增强,LPS-PRL组该cDNA条带亮度最强。结论:PRL能够上调B淋巴细胞中IgG基因的表达,但该功能能够被Br拮抗。     

维生素A对SD大鼠脑组织MC4R､POMC基因表达的影响

目的:探讨维生素A对SD大鼠食欲和黑皮素4受体(MC4R)?阿片黑素促皮质激素原(POMC)基因表达的影响,初步探讨维生素A影响大鼠食欲的机制?方法:将雄性SD大鼠随机分为A组(维生素A缺乏组)和B组(对照组)?喂养74 d,实验的第75天A组随机取出16只,分为A1组(维生素A缺乏组)和A2组(维生素A皮下补充组);B组随机取出8只,为B1组(对照组)?实验第79天,将这3组大鼠全部处死,取血和组织进行相关指标测定?A组剩余的动物按体重随机分为A3组(维生素A缺乏组)和A4组(维生素A食物补充组)?B组剩余的8只动物为B2组(对照组)?30 d后将其全部处死,取组织进行相关指标测定?结果:维生素A缺乏组进食量显著低于正常对照组,给予缺乏组大鼠维生素A皮下和食物补充后,大鼠进食量显著增多?维生素A缺乏组MC4R和POMC的mRNA表达升高,补充维生素 A后大鼠POMC mRNA的表达水平明显降低?结论:维生素A影响大鼠食欲的可能机制是改变了下丘脑有关控制食欲的基因表达?     

人谷胱甘肽硫转移酶P1基因真核表达体系的构建及在A549细胞中的表达

目的:构建人谷胱甘肽硫转移酶P1(GSTP1)基因的真核表达载体,转染A549细胞,实现其真核表达.方法:以本室保存的重组质粒(pMAL-C2x-GSTP1)为模板;根据GSTP1全基因组序列设计GSTP1 PCR引物,扩增GSTP1片段;限制性内切酶酶切PCR产物和pcDNA3.0空质粒,T4 DNA连接酶连接酶切产物,重组质粒转化E.coli DH5α;提取质粒经酶切、PCR和序列测定后,用Primer Premier 5.0进行序列分析.测序正确的重组质粒和空质粒用脂质体转染法分别转染A549细胞,经G418筛选,获得阳性克隆,运用RT-PCR、Western Blot等技术进行鉴定,同时观察细胞的生长变化.结果:质粒酶切电泳和特异PCR均可见0.63 kb的目的基因片段,测序结果与GenBank中人GSTP1序列一致,基因登录号:BC010915.成功转染A549细胞,实现表达,获得GSTP1蛋白.结论:成功构建pcDNA3.0-GSTP1真核表达细胞系,为进一步研究其在解毒致癌原、预防肺癌发生及其与职业性肺癌的关系奠定了基础.