转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白基因的同供体大鼠树突状细胞对胰岛移植物存活的影响

目的　探讨转染细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(转染CTLA4Ig基因)的同供体大鼠DC细胞对同种大鼠胰岛移植的影响。方法　链尿菌素(STZ) 60mg/kg体重腹腔内注射制作SD大鼠糖尿病模型,胶原酶法分离、Ficoll 40 0密度梯度离心法纯化胰岛,GM CSF +IL 4诱生培育的方法,获得高纯度的DC ,含目的基因CTLA4Ig重组腺病毒AdvCTLA4Ig ,转染同供体DC细胞,与胰岛细胞同时移植于糖尿病受体大鼠肾包膜下,免疫组织化学、Dot ELISA、逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测CTLA4Ig基因在实验组和对照组DC细胞中的表达,并检测受体大鼠的血糖浓度变化,同时观察受体存活情况。结果　实验组DC细胞有CTLA4Ig表达,而对照组DC细胞没有CTLA4Ig表达,实验组正常血糖维持时间(17.3±2 .4)d较对照组(10 .1±1.5 )d、空白对照组(8.3±1.2 )d显著延长,实验组、对照组和空白对照组受体大鼠存活天数分别为(3 4.5±3 .4)d、(14 .7±2 .3 )d和(11.2±1.4)d ,实验组高于对照组(P <0 .0 1)。结论　表达CTLA4Ig基因的DC细胞可能诱异胰岛移植免疫耐受,延长胰岛移植物的存活时间     

甲状旁腺细胞与睾丸Sertoli细胞共同移植产生免疫赦免的研究

目的　研究甲状旁腺细胞与睾丸细胞共同移植是否产生免疫赦免。方法　随机将SD大鼠分为以下四组 :1组为单纯甲状旁腺细胞移植组 ;2组为甲状旁腺细胞 1× 10 6个睾丸Sertoli细胞移植组 ;3组为甲状旁腺细胞 2× 10 6个睾丸Sertoli细胞移植组 ;4组为甲状旁腺细胞 4× 10 6个睾丸Sertoli细胞移植组。观察移植物的存活情况 ;体外检测移植物内细胞成分及淋巴细胞凋亡情况。结果　 1组平均存活期为 (17.2 2± 3.6 3)d ;2、3、4组存活时间延长 ,分别为 (19.4 4± 4 .6 4 )d、(32 .2 2± 6 .6 7)d和 (48.80± 3.33)d。 4组在 5 0d观察期内 ,多数鼠的血清钙及甲状旁腺激素 (PTH)值维持在正常范围内 (P <0 .0 1)。移植物内可见表达FasL的睾丸细胞、甲状旁腺细胞及凋亡的淋巴细胞。FasL的表达及凋亡指数随着移植的Sertoli细胞数增加而增加。结论　睾丸Sertoli细胞FasL的表达诱导了浸润的活化淋巴细胞凋亡 ,使共同移植的甲状旁腺细胞存活期延长。     

环孢素对共刺激阻断剂延长移植肾存活效应的影响

目的:探讨环孢素(CsA)对共刺激阻断剂CTLA4Ig延长移植肾存活效应的影响。方法:肾移植大鼠分为对照组(第1组)、CTLA4Ig组(第2组)、CsA CTLA4Ig组(第3组)、CTLA4Ig IL-2组(第4组)和CsA CTLA4Ig IL-2组(第5组),观察术后血肌酐(Scr)、移植肾病理改变、移植肾存活时间。结果:与第1组、第4组相比,第2组、第3组、第5组移植肾存活时间显著延长(P<0.01),其中,第3组移植肾存活时间最长(66.1±10.6)d;术后15天,第2组Scr显著低于第3组、第5组(P<0.05);术后30天,第3组、第5组Scr显著低于第2组(P<0.01);术后30天,第3组、第5组移植肾淋巴细胞浸润明显少于第2组。结论:CsA可增强CTLA4Ig延长移植肾存活的效应,对外源性IL-2逆转CTLA4Ig的效应具有抵抗作用。     

CTLA4-Ig融合蛋白诱导猕猴同种异体肝移植免疫耐受的实验研究

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4-Ig)融合蛋白对同种异体肝脏移植免疫耐受的诱导作用及机理。方法利用大型哺乳动物猕猴作为研究对象,建立同种异体原位肝脏移植模型。同种异体原位肝脏移植对照组及CTLA4-Ig组各5只。观察术后生存时间,检测肝功能、IL-2、IL-10、排斥反应的病理学分级和术后肝脏细胞凋亡指数。结果对照组平均存活时间为6.57 d,CTLA4-Ig组平均存活时间为14.92 d(P0.05)。肝功能变化:对照组术后ALT明显升高,Alb则明显降低;CTLA4-Ig组ALT及Alb均维持于正常稳定水平。细胞因子变化:术后3 d起,对照组循环血中IL-2表达水平相对较高,而CTLA4-Ig组IL-10的表达水平较对照组高。移植物病理排斥反应分级:在移植术后CTLA4-Ig组排斥反应程度明显比对照组轻。对照组术后3 d起肝脏细胞凋亡指数较CTLA4-Ig组明显升高。结论CTLA4-Ig融合蛋白可诱导移植后免疫耐受,延长受体生存时间。细胞因子IL-2或者IL-10可作为监测移植排斥反应或者免疫耐受的实验室指标之一。     

共刺激信号阻断剂基因局部转染对大鼠移植肾存活的影响

目的　观察CTLA 4Ig基因局部转染延长移植肾存活的效能。 方法　以CTLA 4Ig基因重组腺病毒为载体 ,将CTLA 4Ig基因转入BN大鼠肾脏。以BN大鼠为供者 ,Lewis大鼠为受者 ,行同种肾移植术。用经CTLA 4Ig基因转染的供肾移植给受者为转染组 ;用未转染CTLA 4Ig基因的供肾移植给受者为对照组。观察移植肾存活时间和术后肾功能变化。结果　转染组移植肾存活 (32± 8.0 )d ,对照组移植肾存活 (8.5± 1.4 )d ,转染组存活时间明显延长 ;转染组术后血清肌酐较同期对照组明显为低。结论　CTLA 4Ig基因局部转染供肾可明显延长移植肾的存活时间。     

新生猪Sertoli细胞与大鼠胰岛细胞联合移植延长大鼠移植胰岛的存活时间

目的 探讨新生猪Sertoli细胞(NPSCs)与大鼠胰岛细胞联合移植对延长大鼠同种异体胰岛移植物存活时间的作用及其主要的机制.方法 将糖尿病Wistar大鼠随机分为3组.(1)单纯移植组(n=6):单纯移植1500个胰岛当量(IEQ)的SD大鼠胰岛细胞至糖尿病大鼠的左肾包膜下;(2)分侧移植组(n=4):将1500个IEQ的SD大鼠胰岛细胞移植到糖尿病大鼠的左肾包膜下,同时将1×10~7个NPSCs移植到糖尿病大鼠的右肾包膜下;(3)混合移植组(n=6):将1500个IEQ的SD大鼠胰岛细胞和1×10~7个NPSCs混合移植到糖尿病大鼠的左肾包膜下.移植后每天监测各组的血糖水平,以了解移植物的存活时间;移植后发生排斥反应时获取移植物标本,行HE和免疫组织化学染色,观察移植物中CD3~+T淋巴细胞浸润情况及细胞凋亡调控基因(Bcl-2)和血红素氧合酶1(HO-1)基因的表达水平.结果 单纯移植组、分侧移植组和混合移植组胰岛移植物存活时间分别为(5.7±1.0)d、(5.3±0.5)d和(16.3±1.4)d,混合移植组存活时间较其他两组显著延长(P<0.05).单纯移植组移植区可见大量淋巴细胞浸润,主要为CD3+T淋巴细胞;混合移植组移植区Bcl-2基因呈高表达;各组移植区HO-1基因均有表达,差异不明显.结论 NPSCs与大鼠胰岛细胞联合移植可以延长大鼠同种异体胰岛移植物的存活时间,其机制可能与NPSCs抑制移植物淋巴细胞浸润、促进Bcl-2基因高表达的局部免疫调节作用有关.     

CTLA4Ig基因和CD40Ig基因转染供肾对异种大鼠移植肾存活的影响

目的 探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4Ig)基因和CD40Ig基因转染供肾对异种大鼠移植肾存活的影响.方法 以PcDNA3.1质粒为载体,通过脂质体2000将CTLA4Ig基因和CD40Ig基因转染豚鼠肾脏,再移植(异位肾移植)给SD大鼠.实验分4组进行:第1组供肾以PcDNA3.1空载体脂质体复合物转染(空载体组);第2组供肾转染CD40Ig基因(CD40Ig转染组);第3组供肾转染CTLA4Ig基因(CTLA4Ig转染组);第4组供肾同时转染CTLA4Ig基因和CD40Ig基因(双基因转染组).术后观察各组血清肌酐、移植肾组织病理改变以及移植肾存活时间.结果 空载体组、CD40Ig转染组、CTLA4Ig转染组和双基因转染组受者的存活时间分别为(6.8±1.9)d、(40.7±10.9)d、(49.3±9.5)d和(75.7±8.0)d,3个转染组明显长于空载体组(P＜0.01),其中双基因转染组移植肾存活时间最长,与其他3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).各组术后血清肌酐水平呈上升趋势,但升高幅度以双基因转染组为最低(P＜0.01).术后第30天,CD40Ig转染组和CTLA4Ig转染组存活大鼠的移植肾组织中可见大量淋巴细胞浸润,而双基因转染组的移植肾组织中仅见少量淋巴细胞浸润.结论 供肾局部同时转染CTLA4Ig基因和CD40Ig基因可明显延长其异种移植后的存活时间.     

负载Ad-CTLA4Ig的未成熟树突状细胞延长大鼠移植肾存活时间的探讨

目的 探讨负载细胞毒性淋巴细胞抗原4免疫球蛋白基因重组腺病毒(Ad-CTLA4Ig)的受者未成熟树突状细胞(DC)对大鼠移植肾存活时间的影响.方法 选择雄性SD大鼠为供者,雄性Wistar大鼠为受者,建立大鼠肾移植模型.将受者随机分为4组,每组12只.制备Ad-CTLA4Ig及受者未成熟DC悬液,37℃混合孵育6 h,于移植前7 d,实验组经腹腔内注射负载Ad-CTLA4Ig的DC悬液;Ad-CTLA4Ig对照组、重组腺病毒空载体(Ad-VG)对照组和生理盐水(NS)对照组分别经腹腔内注射1 ml Ad-CTLA4Ig、Ad-VG和NS.观察各组移植肾的存活时间、组织形态学改变、受者血液中腺病毒中和抗体滴度、血清CTLA4Ig水平及混合淋巴细胞反应(MLR)的变化.结果 实验组移植肾存活时间为(94.6±9.0)d,较各对照组显著延长:[Ad-CTLA4Ig对照组为(39.6±10.6)d,Ad-VG对照组为(8.6±2.8)d,NS对照组为(8.4±2.6)d],差异均有统计学意义(P＜0.01),实验组移植肾组织损伤程度较轻,血液中腺病毒中和抗体滴度及混合淋巴细胞反应指数均较各对照组显著减少;实验组血清CTLA4Ig水平较Ad-CTFLA4Ig对照组显著升高.结论 负载Ad-CTLA4Ig的受者未成熟DC可减少腺病毒中和抗体,维持CTLA4Ig的稳定表达,从而延长大鼠移植肾的存活时间.     

CTLA4Ig基因对大鼠胰岛移植后排斥反应的治疗作用

目的　研究CTLA4Ig基因在糖尿病大鼠体内表达及其产物对胰岛移植物存活的作用。方法　利用Lipofectin载体包裹CTLA4IgcDNA质粒后转染鼠胰岛和肌肉细胞 ,检测移植后CT LA4Ig表达和T淋巴细胞转化率。结果　胰岛移植术后 7dT淋巴细胞转化试验 ,实验组 (A组 )和对照组 (B组 )每分钟脉冲数 (cpm)分别为175 .7± 98.2 ,2 5 4.4± 116 .3 ,两组比较差异显著 (P <0 .0 5 )。A组胰岛移植第 7d ,2只大鼠血清CTLA4Ig呈阳性 (阳性率 2 0 % )。A、B两组胰岛移植后血糖维持正常时间分别为 (14.8± 12 .3)d和 (3 .6± 5 .1)d ,两组比较差异显著 (P <0 .0 5 )。A、B两组大鼠平均存活时间分别为 (2 4.0± 10 .8)d和 (10 .8± 4.8)d ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1)。结论　脂质体包裹的CTLA4IgcDNA转染肌细胞和胰岛细胞 ,可以在受体大鼠胰岛细胞或肌肉组织中表达 ,其表达产物可使胰岛移植物和受体鼠存活时间明显延长 ,抑制细胞免疫活性 ,发挥其治疗排斥反应的作用     

外用环孢素A联合CTLA4Ig延长异体移植鼠耳存活的研究

目的　探讨局部外用环孢素 A(Cs A)联合细胞毒性淋巴细胞相关抗原 4融合蛋白 (CTL A4 Ig)对异体复合组织移植的免疫抑制及诱导免疫耐受的作用。方法　建立吻合血管的同种异体大鼠耳廓移植模型 ,术后在移植耳皮肤表面外涂 Cs A并联合 CTL A4 Ig腹腔注射治疗 ,观察移植物的排斥反应及存活时间 ,检测移植后受体血清白细胞介素 - 2 (IL- 2 )含量变化。结果　对照组平均存活时间为 (7.8± 1.7)天 ;单纯用 Cs A治疗组为 (15 .2± 1.9)天 ,单纯CTL A4 Ig治疗组为 (16 .6± 2 .1)天 ;Cs A +CTL A4 Ig联合治疗组为 (2 8.8± 3.5 )天 ,与其它各组相比均有统计学意义 (P<0 .0 1) ;且联合治疗组的受体血清 IL - 2含量最低 ,尤以第 5、7天为著 ,与其它各组相比有统计学意义 (P<0 .0 1)。结论　局部外用 Cs A联合 CTL A4 Ig能有效抑制异体复合组织移植排斥反应 ,显著延长移植物存活时间。     

CTLA4Ig和西罗莫司短期联合使用延长异种胰岛移植物的存活

目的 观察细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4Ig)与西罗莫司(SRL)联用阻断共刺激通路对异种胰岛移植物存活的影响.方法 取C57BL/6小鼠,腹腔注射链佐星,制成糖尿病模型.采用随机单位组设计分组法将糖尿病小鼠分为7组,各组均于小鼠左肾包膜下移植SD大鼠胰岛300胰岛当量.CTLA4Ig组分别于移植当天及移植后第2、4、6天腹腔注射CTLA4Ig 0.5 mg/d;SRL组分别于移植当天及移植后第1、2天给予SRL灌胃,0.2 mg·kg-1·d-1,其后隔天用药1次,共用2周;MRI组分别于移植当天及移植后第2、4天腹腔注射仓鼠抗小鼠CD154单克隆抗体(MR1)0.5 mg/d;CTLA4Ig和SRL联用组(SRL联用组)、CTLA4Ig和MRl联用组(MR1联用组)以及CTLA4Ig、MR1和SRL联用组(三药联用组)各药物的剂量与用法同上述各组;对照组仅行胰岛移植,不予以药物.观察至移植后200 d,通过监测受者血糖水平来判断排斥反应的发生情况.记录各组移植物的存活(即无排斥反应)时间.发生排斥反应者,或未发生排斥反应、移植物存活时间＞200 d者,取移植胰岛,行HE染色及免疫荧光染色,进行组织学观察.结果 对照组移植物存活时间中位数为17 d,该组最终均发生排斥反应.SRL组、MRl组和CTLA4Ig组移植物存活时间中位数分别为34 d、98 d和77 d.均明显长于对照组(P＜0.05),三组中分别有90%(9/10)、62.5%(5/8)和83.3%(5/6)的小鼠发生排斥反应.SRL联用组移植物存活时间中位数为130 d,明显长于上述4组(P＜0.01),有50%(3/6)的小鼠发生排斥反应.MR1联用组以及三药联用组移植物存活时间中位数均＞200 d,分别有42.9%(3/7)和25%(2/8)的小鼠发生排斥反应.组织学检查结果显示,对照组发生排斥反应时,其移植胰岛破坏严重,可见大量CD4+和CD8+淋巴细胞及巨噬细胞浸润,并可见IgG、IgM和补体C3沉积.其它组发生排斥反应者的组织学改变与对照组相似.SRL联用组存活200 d的小鼠,其移植胰岛组织中未见或仅有少量炎症细胞浸润,胰岛素和胰高血糖素染色阳性,未见IgG、IgM和补体C3沉积.结论 短期联合使用CTLA4Ig和SRL能显著延长小鼠体内大鼠来源的胰岛的存活时间.     

小剂量环孢素A联用细胞毒T淋巴细胞A4-Ig治疗器官移植排斥反应

目的　研究小剂量环孢素A(CsA)联用细胞毒T淋巴细胞A4 Ig(CTLA4 Ig)治疗器官移植排斥反应的效果。　方法　采用Ono′s方法建立大鼠心脏移植排斥反应动物模型 ,将实验动物分为 4组。A组 :对照组 ,未给予任何治疗 ;B组 :腹腔内注射CsA ,10mg·kg-1·d-1,连续 7d ;C组 :术后第 2天 1次性注射CTLA4 Ig 10 0 μg ;D组 :术后 1～ 7d连续腹腔内注射CsA ,2mg .kg-1.d-1,术后第 2天加用CTLA4 Ig 5 0 μg。观察移植心脏存活天数及术后IL 2含量和组织学变化。　 结果　A、B、C、D 4组大鼠移植心脏存活时间分别为 ( 7 2± 0 7)、( 19 4± 2 1)、( 3 1 6± 1 8)和 ( 2 4 6± 2 1)d ,与对照组相比 ,各治疗组大鼠心脏存活时间明显延长 ,差异有显著性意义 (q =3 2 7 83 ,P <0 0 5 ) ,D组与C组相比差异无显著性意义 (q =1 86,P >0 0 5 ) ;各治疗组术后IL 2含量明显减低 ,与对照组相比差异有非常显著性意义 (q=9 82 ,P <0 0 1) ;A、B、C和D组排斥反应分级分别为Ⅳ、Ⅲ、Ⅰ和Ⅰ级。　结论　CTLA4 Ig抗排斥反应能力比CsA强 ,小剂量CsA联合使用CTLA4 Ig能增强治疗排斥反应疗效 ,两者具有正协同作用。     

Fas配体阳性睾丸细胞和环孢素A对移植胰岛细胞存活起协同保护作用

目的　探讨Fas配体 (FasL)阳性睾丸细胞与胰岛细胞共移植后联用环孢素A(CsA)对移植胰岛细胞存活的协同保护作用。　方法　将同种大鼠胰岛细胞与睾丸Sertoli细胞同侧或异侧共移植于 4 1只糖尿病SD大鼠受体肾包膜下。实验大鼠分 7组 ,术后酌用CsA ,观察各组大鼠移植物存活情况。　结果　单纯胰岛细胞移植 (对照组 )后胰岛细胞的平均存活期为 (4 6± 1 1)d ,加用CsA存活期明显延长至 (2 1 8± 4 7)d(P <0 0 1)。与 1× 10 7个睾丸细胞同侧共移植的胰岛细胞平均存活期超过 (5 7 5± 4 0 )d ,但如移植前先封闭睾丸细胞表达的FasL后 ,移植的胰岛细胞平均存活期缩短为(5 8± 2 6 )d。胰岛细胞与 1× 10 5个睾丸细胞分别共移植于两侧肾包膜下 ,术后联用CsA ,胰岛细胞的平均存活期超过 (5 5 0± 6 5 )d ,与 1× 10 7个睾丸细胞同侧共移植的存活期相近 ,但比对照组或CsA组则显著延长 (P <0 0 1)。当胰岛细胞与 1× 10 6个睾丸细胞分别共移植且不用CsA时 ,胰岛细胞存活期平均仅为 (11 5± 3 1)d ,但仍较对照组延长 (P <0 0 5 )。　结论　表达FasL的睾丸细胞与CsA联用后可通过不同机制抑制胰岛细胞移植排斥反应而起到全身的协保护作用。     

重组腺病毒载体局部介导CTLA4Ig延长小鼠异体移植皮肤的存活

目的 寻求一种简单可行的延长异体移植皮肤存活的方法。方法 将CTLA4Ig cDNA插入重组腺病毒载体柯氏质粒中,再通过同源重组构建CTLA如一重组腺病毒载体;观察该表达载体对体外培养的皮肤组织块的转染情况;并应用该载体转染皮肤移植物及局部创面,观察其对昆明小鼠→Balb c小鼠背部创面异体移植皮肤存活期的影响。结果 CTLA4Ig重组腺病毒载体能成功转染并表达于体外培养的皮肤组织块中;局部应用CTLA4Ig重组腺病毒载体使小鼠异体移植皮肤存活期延长至21d。结论用腺病毒载体局部转染CTLA4Ig能有效延长异体移植皮肤的存活。     

重组腺相关病毒载体介导CTLA4Ig转染延长同种大鼠心脏移植存活时间

目的　研究重组腺相关病毒载体介导 CTLA4Ig(rAAV CTLA4Ig)全身转染对大鼠同种心脏移植的影响。方法　以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。实验分为两组。对照组:供、受者不给予任何处理;转染组:受者于心脏移植前30 d,通过尾静脉全身注射 1×109斑点形成单位(PFU)的 rAAV CTLA4Ig。观察移植心存活时间;ELISA法检测血清 CTLA4Ig、干扰素 γ(IFN γ)和白细胞介素 4(IL 4)水平;免疫组织化学法(SABC法)检测移植心组织中 CD4 和CD8 T细胞的浸润。对移植心存活时间明显延长的受者,用其脾细胞与供者脾细胞进行混合淋巴细胞培养,观察受者对供者的免疫反应状态。结果　转染组移植心存活时间较对照组明显延长(P<0.05);转染组血清CTLA4Ig蛋白一直维持在26.67~35.47 mg/L,移植后转染组血清 IFN γ水平下调,血清 IL 4水平上调(P<0.05);对照组出现典型的急性排斥反应表现,转染组心肌组织基本正常,间质内无炎性细胞浸润或血管外周及心肌间质内有局灶性炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4 和CD8 T细胞数量明显高于转染组(P<0.01);转染组受者对供者的脾细胞增殖反应明显低于对照组(P<0.05)。结论　重组腺相关病毒载体可以介导 CTLA4Ig基因的持续表达,通过全身途径转染受者可以明显延长     

骨髓输注联合阻断共刺激通路延长大鼠皮肤移植物的存活时间

目的 探讨骨髓输注联合阻断共刺激通路对大鼠移植皮肤存活的影响及可能机制.方法 以Lewis大鼠为受者,皮肤移植前经尾静脉输注供者(BN大鼠)骨髓细胞2×108 个,并于骨髓输注当天、输注后第2、4、6及8天腹腔注射抗CD25单克隆抗体,同时按照分组要求腹腔注射细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4Ig组)、抗CD154单克隆抗体(抗CD154单抗组)以及CTLA4Ig和抗CD154单克隆抗体(联合处理组),于骨髓输注后第8天移植BN大鼠的皮肤.另以仅行皮肤移植者为对照(对照组).观察各组移植物抗宿主病(GVHD)的发生情况、外周血中供者细胞嵌合率、T淋巴细胞凋亡率及移植皮肤的存活时间.结果 各组均未观察到GVHD的发生.骨髓输注后第7天即可在CTLA4Ig组、抗CD154单抗组及联合处理组观察到嵌合现象,至第21天时,嵌合率仍维持于一定水平,联合处理组明显高于其它三组(P＜0.01).骨髓输注后第7及21天,CTLA4Ig组、抗CD154单抗组及联合处理组间两两比较,T淋巴细胞凋亡率的差异无统计学意义,但均显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).CTLA4Ig组、抗CD154单抗组及联合处理组移植皮肤的存活时间显著长于对照组(P＜0.01),联合处理组移植皮肤存活时间为(16.7±3.1)d,明显长于CTLA4Ig组和抗CD154单抗组(P＜0.05).结论 骨髓输注联合阻断共刺激通路能够延长移植皮肤存活时间,其机理可能与诱导嵌合和T淋巴细胞凋亡有关.     

Fas配体阳性睾丸细胞对共移植的胰岛细胞存活起全身和/或局部的免疫豁免作用

目的探讨Fas配体阳性睾丸细胞对共移植的胰岛细胞存活起全身和/或局部的免疫豁免作用。方法将同种大鼠胰岛细胞与不同数量的睾丸细胞同侧或两侧共移植于糖尿病受体肾包膜下,观察移植物功能和存活情况,以及移植物内淋巴细胞凋亡。结果单纯移植胰岛组(对照组)平均存活期为(4.6±1.1)天。睾丸细胞和胰岛细胞同侧共移植时,当睾丸细胞数为1×106(A组)时,胰岛细胞平均存活期为(23.8±4.6)天;睾丸细胞数增至1×107时(B组),胰岛细胞存活期大于(57.5±4.0)天,均较对照组明显延长(P<0.01)。两侧共移植时,当睾丸细胞数为1×105(C组),胰岛细胞平均存活期为(6.0±1.4)天,与对照组相似(P>0.05);睾丸细胞数增至1×106(D组),胰岛细胞存活期(11.5±3.1)天较对照组或C组延长(P<0.01);睾丸细胞数增至1×107(E组)时,胰岛细胞存活期(31.2±15.9)天延长更加明显(P<0.01)。相同剂量的睾丸细胞与胰岛细胞分别同侧和两侧共移植时发生移植排斥反应各自的病理表现是不同的,前者移植物内有淋巴细胞浸润,部分胰岛玻璃样变,抗胰岛素抗体染色仅见少量阳性细胞,而后者胰岛细胞移植物内有大量的淋巴细胞和少量的中性粒细胞浸润,抗胰岛素抗体阳性细胞较少,未见胰岛玻璃样变。原位细胞凋亡检测发现同侧共移植后的移植物与肾实质交界处有淋巴细胞凋亡。电镜检查发现胰岛移植物存活超过60d的标本可见大量存活的胰岛细胞团和睾丸Sertoli细胞,有散在的凋亡淋巴细胞。结论睾丸细胞与同种胰岛细胞移植后不仅可诱导局部免疫豁免,而且也具有一定的全身免疫保护作用,但较局部免疫豁免作用弱;这些作用可延长移植物的存活期,并具有剂量依赖性。     

小鼠异体Sertoli细胞诱导胰岛移植免疫耐受的作用

目的 观察小鼠Sertoli细胞是否能在异体内起到诱导局部免疫耐受、保护共移植异体胰岛的作用.方法 以糖尿病C57小鼠作移植受体,随机分4组,每组6只;以正常BALB/C小鼠为胰岛供体,正常C57小鼠和正常BALB/C小鼠各作为Serloli细胞供体.A组:单纯移植异体胰岛;B组:移植来源于C57小鼠的Sertoli细胞+BALB/C小鼠来源的胰岛;C组:移植均来源于BALB/C小鼠的Sertoli细胞及胰岛;D组:假手术组.监测各组移植受体的血糖尿糖变化,观察移植物的存活时间.结果 A组移植物平均存活时间为(6.50±2.35)d;B组为(55.67±4.84)d;C组为(51.33±5.05)d;D组未观察到血糖正常.B组及C组的移植方式均可逆转糖尿病小鼠的高血糖状态,移植物存活期均较A组有明显延长,其差异有统计学意义(P<0.05);而B组与C组的移植物存活时间差异无统计学意义(P>0.05).结论 同种异体来源的睾丸Sertoli细胞在异体内可起到诱导局部免疫耐受的效果,对共移植同种异体胰岛起到保护作用,其效果与自体睾丸Sertoli细胞相当.     

移植物局部转染CTLA4Ig基因对大鼠小肠移植排斥反应的预防作用

目的探讨CTLA4Ig基因在移植小肠局部转染表达及表达产物对排斥反应的预防作用。方法大鼠小肠移植前,经肠系膜上动脉给供肠灌注脂质体包裹的CTLA4IgcDNA重组质粒,术后应用组织免疫学及逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达,并行组织病理学检查,同时设立无CTLA4Ig基因转染的对照组。结果对照组(n=8)的移植小肠在术后7～14d全部坏死;实验组(n=18)7只受鼠的移植小肠于术后56～90d坏死,11只受鼠的移植小肠于术后90d时仍存活良好。对照组移植物组织切片见单核细胞广泛浸润,肠壁肌层及黏膜出血坏死,绒毛及隐窝结构消失;实验组存活超过90d者组织切片仅见少量单核细胞浸润,黏膜轻度增厚,但无明显的肠绒毛缩短及隐窝细胞减少等改变。组织免疫学及RTPCR结果显示,在移植后28d内移植小肠中有CTLA4Ig转基因产物的表达,但第56d及90d则检测不到其表达。结论经肠系膜上动脉体外灌注脂质体包裹的CTLA4IgcDNA重组质粒可有效转染移植小肠,CTLA4Ig基因在移植小肠局部转染对术后的排斥反应具有预防作用。     

CTLA4-Ig基因对大鼠肝移植后免疫细胞浸润及细胞凋亡的影响

目的研究腺病毒介导的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4-Ig(cytolyticT-lymphocyteassociatedantigen4-Ig,CTLA4-Ig)基因对大鼠肝移植后移植物中免疫细胞浸润和细胞凋亡的影响。方法将大鼠原位肝移植模型分为排斥对照组、环孢素A(CsA)组和CTLA4-Ig组。分别于术后1,3,5,7,12d,用免疫组织化学法和缺口末端标记技术(TUNEL法)分别测定移植物中CTLA4-Ig基因的表达和巨噬细胞、CD8 T细胞浸润及细胞凋亡,并以病理形态学变化作参照。结果静脉注射重组CTLA4-Ig基因腺病毒7d后,大鼠肝脏CTLA4-Ig稳定表达,在肝移植60d后仍呈阳性;CTLA4-Ig组汇管区巨噬细胞、CD8 T细胞浸润明显较排斥对照组少;细胞凋亡指数在术后3、5和7d明显低于排斥对照组(P<0·01),汇管区巨噬细胞、CD8 T细胞浸润数和凋亡指数与排斥反应分级均显著相关。结论重组CTLA4-Ig基因腺病毒经静脉一次给药后能在大鼠肝脏稳定表达,并通过抑制移植物中免疫细胞浸润及移植物细胞凋亡,抑制移植后急性排斥反应。