DNA甲基转移酶与心脏纤维化的研究进展

心脏纤维化在心血管疾病的发生、发展中起到重要作用,长期的心脏纤维化可引起心肌僵硬、心功能障碍,预后不良.DNA甲基转移酶是DNA甲基化过程中的关键酶,参与调控基因的转录过程.已有的研究发现部分基因的DNA异常高甲基化在心脏纤维化中发挥重要作用.本文主要对DNA甲基转移酶对心脏纤维化的影响以及DNA甲基转移酶作为治疗心脏...     

PAa细胞内O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶与放射敏感性的关系

目的:探讨PAa细胞内O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-MT)与放射敏感性的关系.方法:建立裸鼠人肺腺癌PAa模型,分为4组,从接种日始,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组裸鼠每天灌服0.2 ml无菌生理盐水,35 dⅡ、Ⅳ组腹腔注射2 mg链脲菌素(STZ),36 d予Ⅲ、Ⅳ组瘤体10 GyX线照射,测瘤体直径、O6-MT含量、MGMT染色及细胞病理学镜检.结果:4组中O6-MT含量Ⅰ组最高,Ⅳ组最少,Ⅳ组与Ⅰ、Ⅱ组相比差异显著,Ⅳ组与Ⅲ组相比差异也显著(P＜0.05);MGMT染色强度变化与O6-MT含量一致.瘤体生长Ⅰ、Ⅱ组瘤体放疗后4 d后明显增大,Ⅲ组6 d后明显增大,与Ⅰ、Ⅱ组相比增长减慢,Ⅳ组瘤体在4 d后明显减少;病理学镜检Ⅲ组见小的散在坏死灶,Ⅳ组坏死区域增加.通过对O6-MT活性、MGMT染色强度与病理学镜检、瘤体大小对比,细胞内O6-MT含量与放射敏感性密切相关,O6-MT含量低组别放疗效果好.结论:O6-MT含量决定其放射敏感性,据O6-MT活性高低预测其放射敏感性,STZ可提高放疗疗效.     

DNA甲基转移酶及DNA去甲基化酶在心血管疾病中的作用

<正>随着我国人口老龄化趋势发展,动脉粥样硬化、高血压、心力衰竭等心血管疾病的发病率呈上升的趋势,近年来心血管疾病发生、发展的表观遗传学机制受到了关注。表观遗传学是指与基因表达调控系统有关的现象,但不涉及DNA序列的变化或拷贝数的变化。表观遗传学现象包括DNA甲基化、翻译后组蛋白修饰以及非编码RNA(NcRNA),其中DNA甲基化是最重要而稳定的表观遗传修饰。     

DNA甲基转移酶3B在异常发育中作用的研究进展

正常的DNA甲基化模式对于哺乳动物细胞的生长和发育至关重要,其通过基因沉默、印迹清除和重建、X染色体失活等作用于胚胎发育期在细胞内建立特异的DNA甲基化模式,这种模式在胚胎发育和细胞增殖过程中能稳定传递,影响个体整个生长、发育过程。DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransfe     

DNA甲基转移酶1和CD11a基因在SLE患者中的表达

目的检测SLE患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中DNA甲基转移酶1(DNA methylatransferase1,DNMT1)和CD11a基因的表达水平,探讨DNMT1表达异常在SLE发病中的作用。方法提取8例SLE患者及12例正常人外周血单核细胞,以RT-PCR法检测DNMT1和CD11a基因的转录水平,采用两样本均数t检验比较分析SLE患者与正常人之间DNMT1与CD11a基因表达的差异;统计分析两种基因表达的相关性。结果正常人PBMC中DNMT1表达的均值为0.289±0.092,CD11a基因表达的均值为0.430±0.143;SLE患者PBMC中DNMT1表达均值为0.167±0.046,CD11a表达均值为0.875±0.331。SLE患者PBMC中DN-MT1表达水平明显低于正常人(T=3.479,P=0.003);CD11a基因表达水平明显高于正常人(T=4.196,P=0.001)。在正常人PBMC中,DNMT1与CD11a基因的表达没有相关性;在SLE患者PBMC中DNMT1与CD11a基因表达呈负相关性(r=-0.714 53,P=0.046 4),DNMT1表达下降与CD11a表达增加有相关性。结论SLE患者PBMC中DNMT1表达降低可能是造成DNA低甲基化的一个重要原因,因而与CD11a基因的过度表达有重要关系,进而导致SLE的发病。因此可以推测DNMT1可能是SLE发病机制中一个重要的内源性因素。     

宫颈癌组织中DNA甲基转移酶1、3A和3B mRNA的表达

目的探讨DNA甲基转移酶1、3A和3B在宫颈癌发生发展中的作用。方法应用real-time PCR技术检测10例宫颈癌、10例宫颈上皮内瘤变和10例正常宫颈组织DNMT1、3A和3BmRNA的表达。结果宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 1mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.30±0.1、0.26±0.12和0.10±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 1表达有显著差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT3A mRNA对GAPDH mRNA的相对丰度值分别是0.94±0.27、0.51±0.24和0.13±0.04,三组相比较有显著性差异（P〈0.05）;宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中DNMT 3B mRNA对GAPDH mR-NA的相对丰度值分别是0.30±0.09、0.28±0.11和0.11±0.04,宫颈癌组织组织中与正常宫颈中DNMT 3B表达有显著差异（P〈0.05）。结论 DNMT1、3A和3B参与了宫颈癌的发生,并在宫颈上皮内瘤变时就已经起了一定作用。     

宫颈癌组织中DNA甲基转移酶1 mRNA的表达

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMTI)在宫颈癌发生发展中的作用.方法:应用原位杂交技术检测52例宫颈癌、60例宫颈上皮内瘤变和20例正常宫颈组织DNMT1 mRNA的表达;分析DNMT1 mRNA的表达和宫颈癌患者临床病理指标的关系.结果:正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中DNMT1 mRNA的阳性率分别为10.0%(2/20)、63.3%(38/60)和78.8%(41/52),呈升高趋势(χ2=29.057,P<0.05),宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织DNMT1 mRNA的阳性率高于正常组织.不同宫颈癌的病理类型、临床分期、组织学分级及有无淋巴结转移组间DNMT1 mRNA阳性率差异无统计学意义.结论:DNMT1参与了宫颈癌的发生,并在宫颈上皮内瘤变时就已经起了重要作用.     

腺瘤性大肠息肉中DNA甲基转移酶mRNA的表达改变

目的研究三种DNA甲基转移酶(DNA methyltranferase,DNMT)在腺瘤性大肠息肉发生发展中的作用。方法从7例腺瘤性大肠息肉和7例正常大肠粘膜组织中提取RNA后反转录成cDNA,beta-actin作为内参,利用real-time PCR技术对三种DNMT的表达情况进行。结果腺瘤性大肠息肉和正常粘膜组织中DNMT1 mRNA对β-actin mRNA的相对丰度值分别是1.02×10-3±4.87×10-4和8.67×10-4±2.18×10-4,大肠息肉组织中与正常粘膜组织中DNMT1表达无有显著性差异(P>0.05);腺瘤性大肠息肉和正常粘膜组织中DNMT3A mRNA对β-actin mRNA的相对丰度值分别是3.26×10-2±4.96×10-3和3.00×10-2±5.20×10-4,它们之间无显著性差异(P>0.05);腺瘤性大肠息肉和正常粘膜组织中DNMT3B mRNA对β-actin mRNA的相对丰度值分别是2.95×10-1±0.60×10-2和8.78×10-2±0.13×10-2,大肠息肉组织中与正常粘膜组织中DNMT3B表达有显著差异(P<0.05)。结论 DNMT3B可能在腺瘤性大肠息肉的发生中起到了重要作用。     

DNA甲基转移酶3b基因在肝外胆管癌组织中的表达

目的：研究DNA甲基转移酶3b( DNMT3b)在人肝外胆管癌组织中的表达情况,并分析DNMT3b的表达与胆管癌临床病理因素之间的关系,探讨其在胆管癌发生发展过程中的作用。方法：用免疫组织化学法检测DNMT3b在24例人肝外胆管癌组织和20例慢性胆管炎组织中的阳性细胞表达率,将二者进行对比并分析其与胆管癌临床病理之间的...     

DNA甲基转移酶与早期胚胎发育

哺乳动物胚胎中存在两种类型的DNA 甲基转移酶(DnmT):一种是维持型的DnmT1,用于保持子代细胞与母细胞相同的DNA特异性甲基化模式;另一种是新发型的Dnmt3,主要负责建立胚胎发育分化过程中的组织特异性甲基化模式,在卵母细胞中母本印记基因的建立等方面也起一定作用.DnmT对胚胎的正常发育至关重要,其表达缺失或异常表达均可导致胚胎、胎儿的发育异常.     

常染色质组蛋白甲基转移酶-1的研究进展

常染色质组蛋白甲基转移酶-1（euchromatic histone methyltransferase 1,EHMT1）可以同G9a形成异源二聚体,使常染色质组蛋白H3的第9位赖氨酸（H3K9）甲基化,进而参与到细胞周期调控等生理过程中。另有研究表明,该酶还与Kleefstra综合征、肿瘤等疾病的发生密切相关。在未来的研究中,对EHMT1的了解将越来越深入。     

多氯联苯对神经干细胞DNA甲基转移酶活性的影响

目的探讨多氯联苯（PCBs）对神经干细胞（NSCs）DNA甲基转移酶（DNMTs）的影响,研究PCBs导致神经发育损伤的机制。方法分离培养原代NSCs,用免疫荧光技术检测NSCs上Nestin的表达,并诱导分化。NSCs与不同剂量的多氯联苯A1254作用72h,用比色法测定NSCsDNMTs活性,并用流式细胞仪检测NSCs凋亡情况。结果所培养细胞Nestin表达阳性,能多向分化。A1254能降低DNMTl和DNMT3b的活性,并具有剂量依赖性．同时诱导NSCs凋亡增加。结论多氯联苯可下调DNMTs活性,进而可能影响基因甲基化状态,而导致胎儿神经系统的发育损伤。     

白花丹醌对白血病细胞DNA甲基转移酶的作用

目的 探讨中草药提取物白花丹醌对人白血病细胞系HL-60甲基化的影响,并对其相关机制做初步研究。方法MTS法确定不影响细胞生长的白花丹醌研究浓度;白花丹醌研究浓度作用于HL-60细胞不同时间,ELISA法测定其甲基化水平和DNA甲基转移酶(DNMT)活性;实时荧光定量PCR,评估DNMT酶类基因mRNA表达水平。结果 选定白花丹醌0.8μmol/L作为研究浓度,作用18h后,和对照组比较出现甲基化水平显著下降（P<0.05）, 经活性氧（ROS）阻滞剂的预处理,白花丹醌去甲基化作用被明显抑制,使得预处理组与对照组甲基化水平无明显统计学差异[(2.11±0.16)ng 对比(2.27±0.21)ng（P>0.05）];白花丹醌作用HL-60细胞12h后,出现DNMT酶总体活性的下降[（0.91±0.11）OD/h/μg对比对照组（1.24±0.91）OD/h/μg （P<0.05）],作用24h后下降更明显（P<0.01）;白花丹醌对DNMT1,DNMT3b基因的表达具有明显抑制作用（P<0.05）,对DNMT3a基因表达的作用无统计学意义。结论 低浓度白花丹醌以ROS为重要介质,能够诱导白血病细胞去甲基化,这种作用与抑制DNMT活性,抑制DNMT1和DNMT3b基因的表达有关。     

DNA甲基转移酶1在小鼠皮肤衰老中的作用

目的：探讨DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)在小鼠皮肤衰老中的作用。方法：获取表 皮条件性K14-Cre介导的DNMT1基因敲除鼠(Mut组,n=4)及等月龄同窝正常小鼠(WT组,n=4),观察皮肤表型的变 化;HE染色检测皮肤组织学变化;Gomori醛复红染色检测两组小鼠真皮弹力纤维数目及形态变化;免疫组织化学染 色法检测5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,Brdu)标记的表皮短暂扩充细胞(transit amplifying cells,TAC)含 量;免疫组织荧光染色法检测氯去氧尿苷(chlorodeoxyuridine,CldU)标记的表皮中标记滞留细胞(label-retaining cells, LRC)的含量。结果：与等月龄的同窝WT组相比,Mut组皮肤出现过早衰老的症状;HE染色显示表皮增厚、真皮胶 原纤维减少等老化现象;真皮内弹力纤维断裂变形增多;表皮中TAC的数量明显增多(P<0.05);LRC的数量明显减少 (P<0.05)。结论：与WT组相比,Mut组出现了皮肤早衰的表型,其机制可能是由于DNMT1敲除后表皮干细胞耗竭所致。     

宫颈癌组织中DNA甲基转移酶表达及其与HPV感染、肿瘤恶性程度的关系

目的:研究宫颈癌组织中DNA甲基转移酶(DNMTs)表达及其与HPV感染、肿瘤恶性程度的关系。方法:收集在我院妇产科手术切除的宫颈癌组织和正常宫颈组织,采用荧光定量PCR法测定组织中DNMTs的mRNA表达量,采用酶联免疫吸附试剂盒测定组织中DNMTs分子以及促凋亡分子的蛋白表达量。结果:宫颈癌组织中DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b、DNMT3l的mRNA表达量以及蛋白表达量显著高于正常宫颈组织,Fas、FasL、Bax、Caspase-3的蛋白表达量均显著低于正常宫颈组织;高危型HPV感染(+)的宫颈癌组织中,DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b、DNMT3l的蛋白表达量均显著高于高危型HPV感染(-)的宫颈癌组织;Fas、FasL、Bax、Caspase-3蛋白表达量与DNMT1、DNMT2、DNMT3a、DNMT3b、DNMT3l蛋白表达量呈负相关关系。结论:宫颈癌组织中DNMTs表达升高与高危型HPV感染有关,高表达的DNMTs对促凋亡分子的表达具有抑制作用。     

DNA甲基化与卵巢肿瘤的研究进展

DNA甲基化是目前肿瘤领域研究中研究最多的表现遗传学机制之一.特殊基因的DNA异常甲基化对于卵巢肿瘤的发生、发展、治疗、预后及肿瘤耐药性都有重要影响.随着DNA甲基化检测水平的提高,DNA甲基化的检测可望成为卵巢肿瘤早期诊断、病情进展、患病风险评估及预后评估的重要的分子生物学诊断方法.     

组蛋白甲基转移酶EZH2在常见肿瘤中的研究进展

组蛋白甲基转移酶EZH2是多梳家族蛋白的重要组成部分,其主要通过组蛋白H3甲基化修饰来发挥作用,广泛参与肿瘤、疼痛、风湿等疾病的发生发展过程.恶性肿瘤严重影响患者的生活质量,且给家庭和社会带来极大的经济负担.因其早期难以检测、晚期又出现侵袭性转移,给诊断和治疗造成巨大阻碍.EZH2参与多个信号通路的调控进而参与癌细胞的...     

DNA甲基转移酶3A siRNA真核表达载体的构建和鉴定

目的：构建DNA甲基转移酶3A（DNA methyltransferases 3A,DNMT3A）siRNA重组质粒稳定表达载体,为进一步探讨DNMT3A在多种生物学过程及肿瘤发生发展中的机制提供工具。方法：依据DNMT3A基因的cDNA序列,利用siDESIGN软件获得RNAi靶位点后设计出对应的siRNA寡核苷酸模板,体外合成寡核苷酸片段经退火形成短双链,克隆到真核表达载体pSUPER-EGFP1中,构建DNMT3A siRNA重组质粒载体,经酶切鉴定后转染人肝癌细胞系SMMC-7721,荧光实时定量PCR初步分析DNMT3A经RNA干涉后的沉默效应。结果：成功构建了靶向DNMT3A基因的siRNA重组稳定表达载体,此载体有效地降低了肝癌细胞系中DNMT3A基因的表达水平。结论：通过该方法初步确定了沉默DNMT3A基因的较佳靶点。     

DNA甲基转移酶3A siRNA 真核表达载体的构建和鉴定

目的:构建DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferases 3A,DNMT3A)siRNA重组质粒稳定表达载体,为进一步探讨DNMT3A在多种生物学过程及肿瘤发生发展中的机制提供工具.方法:依据DNMT3A基因的cDNA序列,利用siDESIGN软件获得RNAi靶位点后设计出对应的siRNA寡核苷酸模板,体外合成寡核苷酸片段经退火形成短双链,克隆到真核表达载体pSUPER-EGFP1中,构建DNMT3A siRNA重组质粒载体,经酶切鉴定后转染人肝癌细胞系SMMC-7721,荧光实时定量PCR初步分析DNMT3A经RNA干涉后的沉默效应.结果:成功构建了靶向DNMT3A基因的siRNA重组稳定表达载体,此载体有效地降低了肝癌细胞系中DNMT3A基因的表达水平.结论:通过该方法初步确定了沉默DNMT3A基因的较佳靶点.