低频重复经颅磁刺激预处理对毛果芸香碱致痫大鼠海马GAD65、NMDAR1表达的影响

目的探讨低频重复经颅磁刺激(rTMS)对毛果芸香碱致痫作用的影响及其机制。方法将大鼠随机分为rTMS刺激组、假刺激组和对照组,分别进行连续2周的相应预处理后,制作氯化锂-毛果芸香碱急性癫痫(EP)模型,观察造模后90min内痫性发作潜伏期和痫性发作行为表现。应用免疫组化方法观察各组大鼠海马区谷氨酸脱羧酶65(GAD65)、N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)的表达。结果rTMS刺激组大鼠痫性发作潜伏期较假刺激组和对照组延长,发作程度减轻(均P<0.05);rTMS刺激组大鼠海马区神经元GAD65的表达量明显高于对照组,NMDAR1表达量明显低于对照组(均P<0.05),但假刺激组与对照组二者表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论低频rTMS预处理有明显抗痫作用,可能通过调节海马区GAD65和NMDAR1表达而起作用。     

低频重复经颅磁刺激的抗作用及其对癫大鼠海马CA3区膜连蛋白A7表达的影响

目的:观察低频重复经颅磁刺激(rTMS)对大鼠性发作行为及海马CA3区膜连蛋白A7表达的影响。方法:取85只健康雄性SD大鼠,按预处理方式将其分成rTMS组(rTMS刺激+毛果芸香碱致)、对照组(假刺激+毛果芸香碱致)及生理盐水对照组(假刺激+生理盐水)。各组大鼠经相应处理后,rTMS组和对照组(各n=30)大鼠制作氯化锂-毛果芸香碱癫持续状态(SE)模型;生理盐水对照组(n=25)则腹腔注射生理盐水。观察各组大鼠行为表现及SE潜伏期,应用免疫组化法观察膜连蛋白A7表达的动态变化(6 h、24 h、1周、3周、6周)。结果:①rTMS组SE潜伏期为(41.37±5.45)min,与对照组(23.86±4.42)min比较明显延长(P<0.01);②海马CA3区膜连蛋白A7阳性细胞数在各时间点均为对照组最多,rTMS组次之,生理盐水对照组最少(均P<0.05)。但是膜连蛋白A7的表达随时间变化的趋势rTMS组与对照组明显不同。结论:低频rTMS有一定抗作用;低频rTMS可影响大鼠海马CA3区膜连蛋白A7表达并呈现独特的动态变化特点。     

低频经颅磁刺激对锂-匹罗卡品致大鼠性发作的影响

目的探讨低频经颅磁刺激对癫痂大鼠痫性发作的影响。方法根据不同刺激频率将大鼠随机分为刺激频率0Hz组（假刺激组）、0．3Hz组（0．3Hz组）、0．5Hz组0．5Hz（组）、0．8Hz组（0．8Hz组）、1．0Hz组（1．0Hz组）,分组进行预处理后,制作氯化锂-匹罗卡品癫痫模型,观察各组造模后70min内痫性发作的潜伏期和疴性发作行为表现。结果0．3Hz组、0．5Hz组、0．8Hz组、1．0Hz组的痫性发作潜伏期均比假刺激组延长,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈20．01）,其中0．5Hz组最长,0．5Hz组大鼠出现的痫性行为表现点头／甩尾、须动／头面抽动、前肢／后肢抽动、全身抽动、窜动的次数均比0．3Hz组、0．8Hz组、1．0Hz组少,整体发作程度轻,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论适量的低频经颅磁刺激可延缓癫痫发作潜伏期,减少癫痫发作次数,减轻癫痫发作程度,具有抗疴作用。     

氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠海马髓鞘及少突胶质细胞系变化初步研究

目的 研究氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠不同时期海马髓鞘损伤及少突胶质细胞系变化.方法 健康成年雄性SD大鼠建立氯化锂-毛果芸香碱慢性癫(痫)模型,分为对照组、急性期组(致(痫)后24 h内)、潜伏期组(致(痫)后2周内)、慢性期组(致(痫)后2个月),各组(均n=4).采用伊文思蓝法检测各组大鼠海马血脑屏障(BBB)通透性改变;免疫荧光染色法检测海马神经元数目、髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平、2',3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶(CNPase)阳性成熟少突胶质细胞数目、未成熟少突胶质细胞标记物(04)表达水平、硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)阳性少突胶质祖细胞数目.结果 大鼠致(痫)后,急性期组、潜伏期组和慢性期组大鼠海马各区域BBB通透性均较对照组增加(P＜0.05),以急性期组增加最为显著.各组大鼠海马不同区域NeuN阳性神经元数目均较对照组显著下降(P＜0.05).潜伏期组和慢性期组海马各区域MBP表达水平及CNPase阳性细胞数目均显著低于对照组(P＜0.05);各组海马CA1、Hilus区O4表达水平及NG2阳性细胞数目均较对照组显著增加(P＜0.05),以潜伏期组增加最为明显.结论 氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠海马区BBB通透性增加,未成熟少突胶质细胞和少突胶质祖细胞免疫荧光表达上调,髓鞘及成熟少突胶质细胞存在一定程度损伤.     

全蝎醇提物对氯化锂-毛果芸香碱诱导癫痫持续状态模型大鼠海马神经细胞caspase-3表达的影响

目的：探讨全蝎醇提物（EES）对氯化锂-毛果芸香碱诱导癫痫持续状态模型鼠的疗效及对癫痫持续状态后海马神经细胞caspase-3表达的影响。方法：156只成年雄性大鼠除6只设为正常对照组外,其余均建立氯化锂-毛果芸香碱癫痫持续状态大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、丙戊酸钠干预组和EES低（EESL组）、中（EESM组）、高（EESH组）剂量干预组（均n=30）,观察各组大鼠癫痫持续状态发作情况,用免疫组化方法观察各组大鼠癫痫持续状态后6、24、48、72h和7d各时点海马神经细胞caspase-3表达的变化。结果：癫痫持续状态模型鼠的造模成功率为95．2％。经EESM、EESH和丙戊酸钠冶疗后,大鼠发作癫痫持续状态级别及持续时间较模型组显著改善（P〈0．01）。各观察时点CA1区和CA3区caspase-3阳性细胞数较模型组显著减少（P〈0．05）,其中以EESH和丙戊酸钠疗效最好（两者疗效相当,P〉0．05）;EESL疗效不明显,与模型组比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：一定剂量的EES能显著对抗癫痫持续状态发作,疗效与caspase-3细胞的减少相对应,说明EES具有抗凋亡作用。对caspase-3表达的抑制可能是其发挥抗凋亡作用的机制之一。     

点燃癫痫模型中颞区脑组织GAD基因表达的研究

目的：探索癫痫发生与谷氨酸脱羧酶（GAD）基因表达的关系。方法：采用印防己毒（PTX）腹腔注射致SD鼠慢性点燃模型，将SD鼠分为对照组、癫痫发作组、发作间期组和苯巴比妥钠干预组。RT－PCR半定量方法检测颞区脑组织GAD67和GAD65 mRNAs表达水平。结果：癫痫发作期和发作间期颞区脑组织GAD67和GAD65 mRNAs表达水平较对照组均明显升高（P＜0．05），以GAD65 mRNAs表达水平在发作期升高最明显（P＜0．01），而药物干预组颞区脑组织GAD mRNA表达水平无明显变化。结论：在该模型中，GAD基因表达水平改变与癫痫发作密切相关，提示GABA能神经元的抑制功能增强是顶体重要的内源性抗癫痫机制。苯巴比妥钠可以预防癫痫的发生，从而阻止脑组织GAD基因表达代偿性增强。     

癫痫状态大鼠海马HSP70mRNA及GAD67mRNA表达水平的研究

目的 研究癫痫演变过程中特定脑区选择性神经元损伤与修复机制。方法 采用分子杂交方法动态观察了马桑内酯（coriaria Lactone,CL)诱导的癫痫状态大鼠海马区早期神经元损伤标志物热休克蛋白（heat shock protein,HSP)70mRNA及谷氨酸脱羧酶（glutamin acid decarboxylase,GAD)67mRNA表达水平的变化,同时也观察了大鼠行为学及脑电图改变。结果 侧脑室注射CL后20分钟,大鼠出现连续发作的四肢抽搐伴有EEG持续性的棘慢波及尖波发放。注射CL后2小时组大鼠海马GAD67 mRNA表达水平有所降低,但HSP70mRNA变化不明显,注射CL后8小时组大鼠海马GAD67mRNA表达水平有所降低,但HSP70mRNA表达变化不明显,注射CL后8小时组大鼠海马GAD67mRNA表达水平明显低于对照组（P＜0．01）,HSP70mRNA表达水平较对照组明显增高（P＜0．01）。结论 癫痫状态期间大鼠海马区可能存在神经元损伤与修复过程,而且GABA能神经元受到不同程度的损伤。     

腺苷A2A受体拮抗剂对大鼠氯化锂-毛果芸香碱所致癫痫模型的影响

目的研究腺苷A2A受体阻断剂对大鼠氯化锂-毛果芸香碱癫痫持续状态(SE)模型的影响。方法选取50只WD大鼠随机分为对照组、模型组及A2A受体阻断剂组。模型组采用氯化锂-毛果芸香碱腹腔注射复制癫痫模型,A2 A受体阻断剂组在氯化锂-毛果芸香碱注射前15 min予腹腔给药(SCH58261 0.05 mg/kg),对照组给予同等剂量生理盐水。在成功诱导癫痫发作40 min后予地西泮及水合氯醛终止发作,并于发作终止后24 h留取标本。尼氏染色法检测三组中海马神经元损伤情况,Westernblot法检测MAPKs(JNK/p-JNK、P38/p-P38和ERK/p-ERK)表达变化。结果对照组、模型组及A2A受体阻断剂组双侧海马CA3区正常形态神经元计数分别为158.6±8.4、59.8±7.4和123.4±5.0,模型组神经元计数显著低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05),A2A受体阻断剂组神经元计数显著高于模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。Westernblot法检测显示p-JNK、p-P38和p-ERK在模型组中表达明显增多,在A2A受体阻断剂组中p-JNK和p-P38表达减少。结论氯化锂-毛果芸香碱模型中,腺苷A2A受体阻断剂可能通过抑制p-JNK他p-P38的表达对神经元损伤起到保护作用。     

白藜芦醇对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响

目的研究白藜芦醇（Res）对戊四氮致痫大鼠脑脊液、血清S100B蛋白的影响。方法采用戊四氮（PTZ）腹腔注射建立慢性癫痫模型,造模成功后予以Res（15mg／kg·d）灌胃干预10d;采用酶联免疫吸附法测定脑脊液、血清S100B蛋白含量,海马标本行Nissl染色。结果经28d连续给药,18只大鼠符合Racine点燃标准,Res干预组大鼠痫性发作潜伏期明显延长,且发作时间明显低于癫痫模型组、二甲基亚砜组（P〈0．05）。海马Nissl染色提示Res干预对大鼠海马CAl、CA3区神经元有保护作用（P〈0．05）,而对齿状回保护作用不明显（P〉0．05）。Res干预组大鼠脑脊液、血清S100B蛋白含量低于癫痫模型组、二甲基亚砜组（P〈0．05）。结论Res降低PTZ致痫大鼠脑脊液、血清SIOOB蛋白含量,或许减缓癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用。     

Semaphorin-3A与苔藓纤维出芽在毛果芸香碱致痫大鼠中的改变及意义

目的探讨海马Semaphorin-3A(Sema3A)与苔藓纤维出芽(MFS)在癫痫发病机制中的作用。方法通过小剂量多次腹腔注射氯化锂-毛果芸香碱建立癫痫大鼠模型,随机将大鼠分为生理盐水对照组和痫性发作组。痫性发作组分别于药物注射后1、5、7d及3、4周时间点,应用Western blotting法检测大鼠海马Sema3A的表达,同时采用neo-Timm银染观察海马MFS情况。结果生理盐水对照组Sema3A仅有少量表达,痫性发作组1、5d无表达,7d表达明显,3周后亦无表达;痫性发作组1、5d未见MFS,7d可见MFS至齿状回内分子层,3周后明显可见MFS至齿状回分子层。痫性发作组Timm评分与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论海马区Sema3A表达变化伴有MFS可能是癫痫发病机制的重要因素之一。     

红景天苷和脑源性神经营养因子与神经干细胞共移植对致鼠神经干细胞定向分化的研究

目的：探讨红景天苷和脑源性神经营养因子（BDNF）、神经干细胞（NSCs）共移植对致鼠NSCs定向分化影响。方法：将戊四氮致大鼠分为模型组、NSCs组、NSCs＋BDNF组和NSCs＋BDNF＋红景天苷组。取新生大鼠海马组织,将培养的NSCs与BDNF＋红景天苷＋BDNF和基础培养基分别移植至致鼠海马组织中,苏木精-伊红染色及免疫组化检测不同时间点5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）、谷氨酸脱羧酶（GAD65）阳性细胞数,并观察大鼠行为学改变。结果：NSCs＋BDNF＋红景天苷共移植组与其他组比较,各时间点BrdU、GAD65阳性细胞数均增多（P〈0.05）。第3周开始,大鼠癫发作次数最少（P〈0.05）。结论：BDNF与红景天苷联合有利于神经干细胞向γ-氨基丁酸能神经元分化。两者联合移植至致鼠后能减少大鼠的癫发作次数。     

重复经颅磁刺激治疗MPTP帕金森病模型小鼠的疗效观察

目的观察重复经颅磁刺激对MPTP帕金森病模型小鼠的治疗效果。方法于雄性C57BL／6J小鼠皮下注射MPTP制备帕金森病动物模型,24h后进行重复经颅磁刺激（刺激频率1．00Hz、刺激强度1．00T、刺激时间25s／次,共刺激5个序列,1次,d）。Rotarod实验评价小鼠身体协调能力和连续运动能力,免疫组织化学染色观察重复经颅磁刺激前后黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元数目和纹状体区酪氨酸羟化酶阳性神经纤维变化,高效液相色谱．电化学法检测重复经颅磁刺激对帕金森病小鼠纹状体多巴胺表达水平的影响。结果重复经颅磁刺激组小鼠停留于旋转杆上的圈数（85．89±3．74）、黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元数目（36．67±3．82）和纹状体多巴胺表达水平（258．70±1．06）均高于单纯帕金森病模型组（59．71±8．33,31．67±3．35,152．35±1．64;均P：0．000）。结论重复经颅磁刺激可改善帕金森病小鼠运动协调能力,保护受损黑质区酪氨酸羟化酶阳性神经元及纹状体区酪氨酸羟化酶阳性神经纤维,提高纹状体多巴胺及其代谢产物水平。     

低频重复经颅磁刺激治疗难治性癫癎大鼠模型及对脑源性神经营养因子和神经肽Y表达的影响

目的研究低频重复经颅磁刺激对难治性颞叶癫癎大鼠的治疗作用,以及对海马脑源性神经营养因子（BDNF）和神经肽Y（NPY）表达水平的影响,以探讨低频重复经颅磁刺激治疗癫癎的可能机制。方法于海马CA3区注射海仁酸制备难治性颞叶癫癎大鼠模型,以低频重复经颅磁刺激方法共治疗10d（连续治疗5d、间隔2d,治疗2周）。分别观察不同处理组大鼠治疗前后海马区脑电图变化及尖波数目;免疫组织化学染色检测手术后第3周时海马CA3区BDNF和NPY表达变化。结果与治疗前尖波数目（T3：16．16±1．17,T4：14．94±0．98）比较,低频重复经颅磁刺激治疗后难治性颞叶癫癎大鼠脑电图尖波数目（T3：9．09±0．67,T4：8．93±0．91）明显减少（均P=0．000）;海马CA3区BDNF（治疗前后IOD值：49571．40±2344．02比29602．07±1932．82）、酪氨酸蛋白激酶B（TrkB,治疗前后IOD值：2946．77±1142．79比18104．34±934．58）和NPY（治疗前后IOD值：33823．05±843．45比15037．14±772．95）阳性细胞数目明显减少（均P=O．000）。结论低频重复经颅磁刺激可以通过降低难治性颞叶癫痫大鼠癎样放电,以及下调海马BDNF、TrkB和NPY表达水平而发挥抗癫癎作用。     

GAD67/GAD65在颞叶癫痫大鼠海马内源性促痫机制中的作用

目的探讨GAD67/GAD65在颞叶癫痫发生后大鼠海马内源性促痫机制中的作用.方法112只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=70)与对照组(n=42),实验组大鼠选用海人酸腹腔注射法建立颞叶癫痫模型,对照组大鼠腹腔注射无菌生理盐水.选取腹腔注射后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、7 d、30 d为研究的时间点,颞叶海马的CA1区、CA3区、齿状回为研究部位.腹腔给药后每天观察大鼠的行为学变化,大鼠处死前进行EEG描记.免疫组织化学法检测GAD65、GAD67蛋白的表达.结果海人酸致痫后6 h,实验组大鼠海马CA1区、CA3区GAD67/GAD65的比率较对照组升高(P＜0.01);海人酸致痫后30 d,实验组大鼠海马齿状回GAD67/GAD65的比率较对照组降低(P＜0.05).结论颞叶癫痫急性期CA1区、CA3区GAD67/GAD65比率的增高及慢性期齿状回GAD67/GAD65比率的降低与颞叶癫痫发生及癫痫发生后机体的内源性抗痫机制密切相关.     

Altered profile of basket cell afferent synapses in hyper-excitable dentate gyrus revealed by optogenetic and two-pathway stimulations

Cholecystokinin (CCK-) positive basket cells form a distinct class of inhibitory GABAergic interneurons, proposed to act as fine-tuning devices of hippocampal gamma-frequency (30-90 Hz) oscillations, which can convert into higher frequency seizure activity. Therefore, CCK-basket cells may play an important role in regulation of hyper-excitability and seizures in the hippocampus. In normal conditions, the endogenous excitability regulator neuropeptide Y (NPY) has been shown to modulate afferent inputs onto dentate gyrus CCK-basket cells, providing a possible novel mechanism for excitability control in the hippocampus. Using GAD65-GFP mice for CCK-basket cell identification, and whole-cell patch-clamp recordings, we explored whether the effect of NPY on afferent synapses to CCK-basket cells is modified in the hyper-excitable dentate gyrus. To induce a hyper-excitable state, recurrent seizures were evoked by electrical stimulation of the hippocampus using the well-characterized rapid kindling protocol. The frequency of spontaneous and miniature excitatory and inhibitory post-synaptic currents recorded in CCK-basket cells was decreased by NPY. The excitatory post-synaptic currents evoked in CCK-basket cells by optogenetic activation of principal neurons were also decreased in amplitude. Interestingly, we observed an increased proportion of spontaneous inhibitory post-synaptic currents with slower rise times, indicating that NPY may inhibit gamma aminobutyric acid release preferentially in peri-somatic synapses. These findings indicate that increased levels and release of NPY observed after seizures can modulate afferent inputs to CCK-basket cells, and therefore alter their impact on the oscillatory network activity and excitability in the hippocampus.     

重复经颅磁刺激治疗精神分裂症阴性症状的随机双盲研究

目的探讨重复经颅磁刺激（rTMS）治疗精神分裂症阴性症状的疗效。方法 30例精神分裂症患者被随机分为rTMS真刺激组（治疗组,15例）和rTMS伪刺激组（对照组,15例）,采用θ短阵快速脉冲刺激（TBS）模式刺激左侧前额叶背外侧皮质（DLPFC）,每周5次,共干预20次。于基线、治疗2周及治疗4周时应用阳性与阴性症状量表（PANSS）的阴性因子分和阴性症状量表（SANS）进行疗效评定。结果共有27例患者完成研究,对照组有3例脱落。经rTMS干预4周后,治疗组与对照组的PANSS阴性因子分减分值分别为（4.67±2.47）分和（2.33±1.87）分,两组比较有统计学差异（z=-2.41,P=0.016）;SANS总分减分值分别为（11.87±8.04）分和（5.92±6.47）分,两组比较有统计学差异（z=2.08,P=0.038）。根据PANSS阴性因子分评定,治疗组的有效率达到46.7%,对照组的有效率为16.7%;根据SANS总分评定治疗组的有效率达到46.7%,而对照组的有效率为8.3%;阴性症状的组间疗效差异有统计学意义（P〈0.05）。除了轻微的一过性头痛和入睡困难,未见有其他严重不良反应。结论 TBS模式可改善精神分裂症患者的阴性症状。     

Effect of different frequencies of repetitive transcranial magnetic stimulation on acquisition of chemical kindled seizures in rats

In the current study we investigated the effect of repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS) at different frequencies on chemical kindling in rats. Chemical kindling was induced by injection of pentylenetetrazol (PTZ; 45 mg/kg) at the intervals of 48 h between the injections. In the first experiment, effect of 0.25, 1 and 5 Hz rTMS (four trains of 4 s at motor threshold intensity) on kindling acquisition was investigated. In the second experiment, the stability of rTMS effects was checked in animals of the first experiment during a follow-up period of 2 weeks. Animals received a single dose of PTZ at 7th and 14th day after the last PTZ injection (12th injection) and their seizure parameters were recorded. Obtained results showed that application of rTMS at the frequencies of 0.25 and 1 Hz had anticonvulsant effect and decreased the PTZ kindling acquisition. However, when applied at the frequency of 5 Hz, it had an increasing effect on PTZ kindling rate. During the follow-up study, the seizure severity increased in animals treated with 0.25 Hz rTMS (and somehow in animals treated with 1 Hz rTMS), but did not change in animals treated with 5 Hz rTMS compared to the 12th PTZ injection. Our results showed that rTMS application may have an anticonvulsant effect during chemical kindling acquisition at very low frequency (0.25 Hz) and can increase the seizure severity at high frequency (5 Hz). However, during follow-up, the anticonvulsant effects of rTMS may be converted to proconvulsive effects.