带有HBsAg表位内影像的单克隆抗独特型抗体的建立和鉴定

本文采用鼠单克隆抗-HBs(Ab_1)作抗原免疫同系鼠,取免疫鼠的脾细胞与SP_2/0骨髓瘤细胞融合,经过反复筛选、克隆化获得两株(B_3,C_2)持续分泌单克隆的抗独特型抗体其(Ab_2)。对其中之一B_3作了深入鉴定。B_3的Ig类型为IgG,亚类为IgG_2a。核型分析结果染色体数为106条。通过ELISA抑制试验对B_3进行鉴定,发现B_3一方面能与纯化HBsAg发生阳性的竞争性抑制,另一方面又能与不同来源的抗-HBs发生结合,出现阳性的中和抑制。无论竞争性抑制还是中和抑制,都呈现剂量依赖关系。将B_3Ig免疫同系鼠,经一次免疫后就能诱导出具有抗-HBs活性的抗-抗-独特型抗体(Ab_3)。以上结果表明:B_3株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗独特型抗体是带有HBsAg表位内影像的单克隆抗体。并对B_3Ig的可能应用意义进行了讨论。     

小鼠抗—HBs的单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立及鉴定

用纯化的小鼠单克隆抗-HBs(Ab1)免疫同系BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓细胞融合,获得两株(MA1、MA3)持续分泌抗-HBs的单克隆抗独特型抗体(抗-1d,Ab2)杂交瘤细胞系。对MA3做了较全面的鉴定。MA3的Ig类型为IgM,核型分析结果染色体数为106条。通过ELISA竞争抑制和中和抑制试验表明,MA3所分泌的Ab2既能被不同来源的抗-HBs所中和,又能被HBsAg所竞争,且都呈现剂量依赖关系。将纯化的MA3 IgM免疫同系小鼠,诱导出具有抗-HBs活性的抗-抗-独特型抗体(Ab3)。因此认为MA3所分泌单克隆抗体(McAb),可模似HBsAg,具有类似HBsAg的免疫原性,是一种带有HBsAg表位内影像的抗-HBs的单克隆抗-1d。     

一次融合同时获得抗独特型和抗抗独特型单克隆抗体的杂交瘤

本文在研制带有HBsAg表位内影象的单克隆抗独特型抗体的过程中,用抗-HBs单克隆抗体(Ab_1)免疫同系鼠,除筛选分泌Ab_2β的杂交瘤细胞外,还同时设计了筛选分泌Ab_3的杂交瘤。结果在一次免疫,一只免疫鼠的脾脏细胞,一次融合实验中,同时获得了分泌Ab_2β及Ab_3抗体的杂交瘤细胞株。本文报告筛选Ab_3的方法及对Ab_3所作的免疫化学鉴定。结果获得一株分泌Ab_3单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为M4。证明Ab_3具有Ab_1的特异性。这一结果不仅提示独特型网络的确在同一个体内客观存在,而且也为研制单克隆抗独特型抗体杂交瘤提供了一条简单、经济、事半功倍的经验。     

抗独特型抗体与生物受体

一、免疫网络与抗独特型抗体免疫网络学说是Jerne在1974年提出的。该学说指出,任何抗体分子或淋巴细胞表面的抗原受体的可变区,都存在着独特型(idiotype,简称Id或Ab_1),该Id可被自身的另一些淋巴细胞识别而诱导产生抗独特型抗体(anti-idiotype antibody,简称anti-Id或Ab_2),而Ab_2又可引起另一抗独特型抗体(简称anti-anti-Id或Ab_3)的产生。如此循环往复,在体内构成了一个复杂的Id、anti-Id网络,并通过反馈机制形成了一系列的链锁反应。而机体的免疫应答     

抗聚合人血清白蛋白的抗独特型抗体

一种针对兔抗聚合人血清白蛋白抗体(anti-PHSA,Ab_1)的抗独特型抗体(anti-anti-PHSA,Ab_2),已通过免疫同种动物制成。该Ab_2具有以下特性:(1)它既可与兔anti-PHSA反应,也可与鼠的单克隆的anti-PHSA反应。(2)它与鼠的单克隆的anti-PHSA的反应,可受到PHSA和乙型肝炎病毒(HBV)上的聚合人血清白蛋白受体(PHSA-R)的抑制。(3)它可在异种动物体内诱导产生具有anti-PHSA活性的抗-抗独特型抗体(anti-anti-anti-PHSA,Ab_3),而且在收获的Ab_2血清中也查见了Ab_3。本研究不仅表明了针对PHSA的免疫应答中独特型网络调节的客观存在,而且在其抗独特型抗体(anti-Id)中,的确存在具有PHSA内映像的成分。     

乙型肝炎表面抗体的抗独特型研究

用 HBsAg/a 决定簇的7A_4单克隆抗体(McAb_1)复合物,免疫同系 BALB/C 小鼠,制备了高效价抗独特型(Ab_2)血清和两株抗独特型 McAb(McAb_2).Ab_2血清和 McAb_2都能识别7A_4McAb_1的互补位独特型.Ab_2血清中有与异种(豚鼠、驴、兔和羊)抗—HBs 结合的抗体,两株 McAb 不能与异种抗-HBs结合的抗体,两株 McAb 不能与异种抗-HBs 结合,属非内影像 Ab_2γ.研究表明,HBsAg/a 决定簇的 McAb_1有不同的互补位,McAb_2可作为一种生物探针,用于区别 McAb_1的互补位.     

用高价人抗HBs在人体内诱导产生抗HBs

本文探讨用外源性人抗HBs在人体通过免疫网络诱导产生自身的抗HBs的可能性。志愿者经多次注射人高价抗HBs(Ab_1)后,体内产生了Ab_2,进而产生出特异性与Ab_1相同的Ab_3;当Ab_3水平升高时,Ab_2水平下降。此结果证实了人体内独特型网络的存在及其活跃的调节功能,表明用于被动免疫的人抗HBs在人体也能通过激活独特型网络产生主动免疫保护作用。此外,本文的结果还提示,注射人抗HBs后,人体内产生的Ab_2可模拟HBsAg,使常规的HBsAg检查出现假阳性结果。     

具有抗—HBs结合活性的单克隆抗—抗独特型抗体的制备和鉴定

B_3为我室建立的带有HBsAg表位内影像的单克隆抗独特型抗体(mAb_2)。本文采用脾脏内和尾静脉内注射途径,用B_3免疫BALB/c鼠,获得了具有抗-HBs结合活性的同系单克隆抗-抗独特型抗体(mAb_3)3B_8株。这一结论基于以下两点观察:(1)3B_8能与纯化的HBsAg结合。纯化的HBsAg或抗-HBs均能以剂量依赖形式抑制这一结合;(2)3B_8能以剂量依赖形式抑制抗-HBs与B_3的结合。小鼠在从未接触HBsAg的情况下,单独用B_3免疫,获得了具有抗-HBs结合活性的单克隆抗-抗独特型抗体3B_8,进一步证明我室过去建立的mAb_2B_3株,确实带有HBsAg表位内影像。     

用抗-(抗HBc)抗体在同系小鼠中诱导抗-抗Id抗体

用单克隆抗-(抗HBc)抗体(抗-Id)免疫BALB/c鼠,诱生出具有与抗-HBc相同反应性的抗-抗Id抗体(Ab_3)。这种抗体在ELISA试验中可与HBc-Ag特异性反应,并能抑制单克隆抗-HBc与HBcAg的结合。表明我们建立的抗-H-Bc的抗Id能模拟HBcAg刺激小鼠产生免疫反应。     

抗乙型肝炎核心抗体独特型抗体[抗(抗-HBc)Id]的研究——Ⅰ.兔抗鼠单克隆抗-HBc独特型的研究

本文用小鼠单克隆抗HBcIgG及其Fab片段免疫家兔制备出了特异性的抗独特型抗体(抗Id),抗Id针对的部位与抗体的抗原结合位点密切相关。应用这种抗Id在同种小鼠的抗-HBc中检出了交叉反应独特型(Idx),而在人、猴、马、豚鼠和鸡,鸽的抗-HBc血清中未能检出相应的Idx。我们的研究还表明用IgG Fab片段来免疫制备抗Id较用IgG全分子效果好。此外,我们建立了两种特异检测抗Id的ELISA方法,应用它们可以排除抗同种型和同种异型抗体的干扰,对免疫过程中动物产生抗Id的水平进行观察。     

用人抗HBs在体内诱导的远期免疫应答

作者对三年前曾经过高价人抗ＨＢｓ的１１名健康志愿者复查血清内的ＨＢｓＡｇ，抗独特型抗体和抗－抗－独特型抗体水平，发现ＨＢｓＡｇ皆为阴性，Ａｂ３水平高于Ａｂ２，说明在这三年期间，无人感染乙肝病毒。     

Comparison of two techniques for detecting antibody to HBsAg during a hepatitis B vaccine study

Two assays for the detection of antibody against hepatitis B surface antigen (anti-HBs) were compared. The first was a direct sandwich radioimmunoassay (RIA) which detects, in principle, antibody against any epitope of hepatitis B surface antigen (HBsAg). The second assay was an inhibition enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In this assay a fixed amount of HBsAg which can be blocked by anti-HBs is measured in a direct sandwich test. Prevaccination screening sera (n = 191) and follow-up sera obtained from high risk groups (n₁ = 85; n₂ = 41) during two hepatitis B vaccine studies were compared in RIA and ELISA. In prevaccination sera either HBsAg or anti-HBs were detected by ELISA. Full agreement between the results of RIA and ELISA for anti-HBs was obtained in sera containing more than 10 IU/1 anti-HBs. Both tests showed variable results at low titres. Experiments with monoclonal anti-HBs indicated that ELISA is less sensitive for subtype specific antibodies (anti-d, anti-y), which may explain that there were consistent differences between RIA and ELISA in a minority of cases.     

单克隆的抗-HBs在同系鼠体内诱导抗-HBs的观察

作者采用BALB/c鼠的抗-HBs单克隆抗体(Ab_1)作为抗原,免疫同系BALB/c小鼠,使其在自身体内产生Ab_2,观察了由Ab_2诱导的Ab_3的消长情况。经测定其血清,免疫小鼠在第7天出现Ab_2,随后第9天、第19天出现Ab_2的显著增高。Ab_3的出现是在第9天,随后在第11天,第17天和第21天出现增高现象。Ab_2与Ab_3的量的变化,呈周期性消长。一般说来,当Ab_2增高时,Ab_3减低;若Ab_2降低,则Ab_3增高。实验过程中,还发现Ab_3能与外界进入体内的HBsAg结合。上述实验中出现的Ab_2和Ab_3之间的相互刺激和相互中和的现象,表明是小鼠体内自身的抗个体型抗体的调节作用的结果,因而出现了上述周期性的动态变化,支持体内存在着一个个体型——抗个体型免疫网络的理论,本文依据实验事实,认为传统的被动免疫方法,在一定条件下,也能诱导出主动免疫。     

14株抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体与变异表面抗原的反应模式及应用

目的制备抗乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的单克隆抗体,检测单克隆抗体与15种变异HBsAg的反应模式。用筛选出的单抗建立快速检测变异HBsAg的ELISA实验方法,并做初步评价。方法用中国乙型肝炎病毒感染者血清中分离的HBsAg免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗-HBs单克隆抗体。检测不同单克隆抗体与野生及变异HBsAg的反应性。筛选出两种可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体McAb2和McAb3,建立两种抗体ELISA检测HBsAg的方法。结果制备了14株抗-HBs单抗。经过初筛,有4种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。优化了McAb2和McAb3检测HBsAg的条件,检测HBsAg的灵敏度较好,检测变异HBsAg的能力优于2种现行国产HBsAg检测试剂盒。结论用本实验制备的单抗可以很好地识别包括G145R在内的大多数变异HBsAg。     

Transgenic tobacco cells producing the human monoclonal antibody to hepatitis B virus surface antigen

The recombinant human monoclonal antibody (MAb) against hepatitis B virus (HBV) surface antigen (HBsAg) was expressed in tobacco suspension cultures. The parental CL4MAb was produced by the Epstein-Barr virus (EBV) transformed human cell line TAPC301-CL4. The CL4MAb cDNA was introduced into tobacco suspension cells by Agrobacterium mediated transformation. The monoclonal antibodies (MAbs), B294 and B303, which were derived from CL4 and subsequently produced in plant cells were selected for study. After purification on Protein A columns, B294 and B303 MAbs had anti-HBs relative affinity constants similar to the parental CL4MAb. B303 MAb interacted with cell surface HBsAgs and showed complement-dependent cytotoxicity in a manner that was similar to anti-HBs human immunoglobulins (HBIg) that are used clinically. The results of this study point to the feasibility of producing MAbs to HBsAg in plants as an alternative to HBIg.     

一个抗CEA McAb独特型抗体建立,纯化和初步鉴定

通过癌胚抗原单克隆抗体免疫家兔获得ＣＥＡ ＭｃＡｂ抗独特型抗体，Ａｂ２不但能竞争抑制ＣＥＡ ＭｃＡｂ与大肠癌细胞ＨＴ－２９的结合，而且诱导小鼠对大肠癌细胞ＨＴ－２９的迟发性过敏反应。